电泳的分类

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电泳技术

电泳技术

常用的纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳等。
(2) 非连续pH电泳:缓冲液和电泳支持物间有不同 的pH的电泳,如聚丙烯酰胺凝胶盘状 电泳,等电聚焦电泳等。
(二)应用:
1、分离各种有机物:如蛋白质、酶、核酸等 2、分析某种物质的纯度及分子量 3、电泳技术与层析法结合可用于物质的结构分析4、 免疫电泳可提高对蛋白质的鉴别能力
(四)染色:
1、取出膜条,浸入氨基黑10B染色液中, 染色2-5分钟。 2、取出薄膜,立即浸入漂洗液中,漂洗 3-4次至背景无色为止。
血清脂蛋白琼脂糖电泳
[原理]
血清脂蛋白经苏丹黑B染色后,以琼脂糖为载 体,在pH8.6巴比妥缓冲液中进行电泳,可将脂蛋 白分成不同的区带。按电泳移动的速度不同,正 常人血清脂蛋白可出现三条区带,从阴极到阳极 依次为β-脂蛋白(最深)、前β-脂蛋白(最浅),α -脂蛋白(比前β-脂蛋白略深些)。
本实验以乙酸纤薄膜为支持物,利用血清中蛋 白质颗粒的等电点大部分低于7,在pH8.6的缓冲液
中带负电荷,在电场中向正极移动,电泳后根据血
清蛋白移动快慢,可依次分为清蛋白、球蛋白的α1、
α2、β、γ五个区带,染色后显出清晰色带。
乙酸纤维薄膜电泳的优点: 简便、快速、样品用量少、应用范围广、分离 清晰、没有吸附现象等。 乙酸纤维薄膜电泳的应用: 目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白 和同功酶的分离及用在免疫电泳中。
[操作] (一)准备: 1、取缓冲液中浸泡的薄膜1张。 2、用滤纸吸干多余水分。 3、识别出无光泽面。 4、在角上用铅笔做上记号。
(二)点样: 用点样器蘸上一层血清,于膜的无 光泽面(距膜边端1.5厘米处点样),使 血清全部渗入膜内。1.5cm Nhomakorabea+)

常用电泳技术和电泳方法简介

常用电泳技术和电泳方法简介

二、电泳方法简介
2.等电聚焦电泳的特点 ①使用两性载体电解质,在电极之间
形成稳定、连续、线性的pH梯度;②由于 “聚焦效应”,即使很小的样品也能获得清 晰、鲜明的区带界面;③电泳速度快;④分 辨率高;⑤加入样品的位置可任意选择;⑥ 可用于测定蛋白质类物质的等电点;⑦适用 于中、大分子量(如蛋白质、肽类、同工酶 等)生物组分的分离分析。
它具有机械强度好、弹性大、 透明、化学稳定性高、无电渗 作用、设备简单、样品量小 (1~100μg)、分辨率高等优点。
二、电泳方法简介
(一)等电聚焦电泳
1. 等电聚焦电泳过程 一种利用有pH值 梯度的介质,分离等电点不同的蛋白质的 电泳技术。将等电点不同的蛋白质混合物 加入有pH值梯度的凝胶介质中,在电场内 经过一段时间后,各组分将分别聚焦在各 自等电点相应的pH值位置上,最后,样品 的各组分在各自的等电点聚焦成一条清晰 而稳定的窄带。
二、电泳方法简介
(二)醋酸纤维素薄膜电泳 电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、
染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。 此电泳的特点是分离速度快、
电泳时间短、样品 用量少。因此三)凝胶电泳
由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳 的方式,被称为凝胶电泳。普通的凝胶电泳在板上进行,以 凝胶作为介质(多孔性,类似分子筛的作用)。电泳中常用 的凝胶为葡聚糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖。
(一)根据支持物的特点又可分为: ①无阻滞支持物电泳。②高密度的凝胶 电泳。
一、常用电泳技术分类
(二)根据电源控制的不同,一般可分为以下 3类:1. 恒压电泳; 2. 恒流电泳; 3. 恒功 率电泳 。
(一)根据自动化程度的不同,可分为半自动 和全自动型。
一、常用电泳技术分类

电泳技术

电泳技术

• 嵌入染料 :荧光染料溴化乙锭(EB)用于检测琼脂糖凝 胶中的DNA,染料嵌入到堆积的碱基对间并拉长线状和带 缺口的环状DNA,使其刚性更强,还会使线状迁移率降低15% 。
• 电泳温度 :DNA在琼脂糖凝胶电泳中的电泳行为受电泳时 的温度影响不明显,不同大小的DNA片段其相对迁移速率 在4℃与30℃之间不发生明显改变,但浓度低于0.5%的凝 胶或低熔点凝胶较为脆弱,最好在4℃条件下电泳
第十一小组
制 作
最常用实验技术
“电泳技术”
组员:艾力特别尔 陈南福 陆岩冰 马星星 唐佳坤 王琦 阳明华
目录
➢电泳概述 ➢影响电泳的主要因素 ➢琼脂糖凝胶电泳 ➢常规聚丙烯酰胺凝胶电 ➢SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 ➢等电聚焦电泳 ➢毛细管电泳 ➢连续流动电泳
电泳技术
电泳是指带电粒子在电场的作用下,在一定介质 (溶剂)中所发生的向异性电极定向移动的现象。
利用电泳现象对混合物进行分离、分析的技术叫 做电泳技术。
电泳技术特点
➢ 几乎适用于所有带电物质的分离,并可进行定性或
定量分析;
➢ 样品用量极少; ➢ 设备简单 ➢ 可在常温进行 ➢ 操作简便省时 ➢ 分辨率高。
电泳的分类方法
区带电泳 1.根据有无支持物
纸电泳 醋酸纤维素薄膜电泳 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳
点样:点样量随凝胶板的厚度以及加样孔宽度、染色方法的不同存在 差异。
电泳条件:常在上样之前进行预电泳(冰浴,200v,10min),之后点 样,进行电泳(冰浴,200v,3至5h)
电泳缓冲液:Tris-甘氨酸缓冲液(pH8.8)
不连续电泳
Tris-Hcl(pH8.8)缓冲液或1×TBE缓冲液 连续电泳
琼脂糖由D-半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖组成。

电泳涂装工艺介绍及及与其他表面处理的比较

电泳涂装工艺介绍及及与其他表面处理的比较
不强,易脱落
强,很难脱落
防府性
不耐腐蚀
耐腐蚀
装饰性
表面粗糙,平滑度低
平展光滑
环保性
污染严重
合符环保要求
电泳涂装工艺介绍及及与其他表面处理的比较
4、冷水洗。流动中冷水洗1min。
5、磷化。用中温磷化(60℃时磷化10min)。
6、钝化。用与磷化液配套的药品,室温下1~2min即可。
7、阳极电泳。电解液成分:H08-1黑色电泳漆,固体分质量分数9%~12%,蒸馏水质量分数88%~91%。电压:(70±10)V;时间:2~2.5min;漆液温度:15~35℃;漆液PH 值:8~8.5。注意工件出入槽要断电。电泳过程中电流随漆膜增厚会逐步下降。
三、工艺流程(Technological process)
电泳一般工艺流程如下:
工件前处理(除油→热水洗→除锈→冷水洗→磷化→热水洗→钝化)→电泳→清水洗→烘干
1、除油。溶液一般为热碱性化学除油液,温度为60℃(蒸汽加热),时间为20min左右。
2、热水洗。温度60℃(蒸汽加热),时间2min。
3、除锈。用H2SO4或HCl,例如用盐酸除锈液,HCl总酸度≥43点;游离酸度>41点;加清洗剂1.5%;室温下洗10~20min。
一、电泳工艺分类(Electrophoresis process classification)
电泳工艺分为阳极电泳和阴极电泳。若涂料粒子带负电,工件为阳极,涂料粒子在电场力作用下在工件沉积成膜称为阳极电泳;反之,若涂料粒子带正电,工件为阴极,涂料粒子在工件上沉积成膜称为阴极电泳。
二、特点(Characteristic)
阳极电泳的特点是:原料价格便宜(一般比阴极电泳便宜50%);设备较简单,投资少(一般比阴极电泳便宜30%);技术要求较低;涂层耐蚀性能较阴极电泳差(约为阴极电泳寿命之1/4)。

按电泳的原理分类

按电泳的原理分类

按电泳的原理分类
1. 直流电泳:电极间接通直流电流,样品在电场力的作用下向电极移动,分离各组分。

适用于蛋白质、核酸等大分子的分离。

2. 凝胶电泳:将样品与凝胶混合,通过电场力将组分分离在凝胶矩阵中。

凝胶电泳又可分为多种类型,如聚丙烯酰胺凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳等。

3. 毛细管电泳:将样品注入毛细管,然后通过电场力使样品分离。

毛细管电泳又可分为多种类型,如毛细管凝胶电泳、毛细管区带电泳等。

4. 高效液相色谱电泳:将样品分离在高效液相色谱柱中,然后通过电场力推动分离后的组分通过柱。

适用于分离蛋白质、多肽等小分子。

第三章第三节电泳技术

第三章第三节电泳技术

操作步骤
▪ 3、点样(电泳的关键步骤) 用镊子把膜条从缓冲液中取出,夹在
两层滤纸中间,吸去多余的液体,然后平 铺在玻璃板上(粗面朝上),将点样器先 在培养皿的血浆中沾一下,再在膜条点样 线处轻轻地水平落下并随即提起,这样即 在膜条上点上了细条状的血浆样品。
点样线尽量点得细窄而均匀。宁少勿 多。
操作步骤
▪ 支持介质放在两个支架上,其两端与 电泳液接通而形成盐桥。通电后,电 流只能在支持介质体上通过,电泳物 质在其上泳动。绝缘盖起防止缓冲液 蒸发以及防触电的保护作用。有些电 泳槽有冷却装置以保证电泳介质的温 度不至过高。
▪ 电泳操作一般有支持介质的制备或饱 和,加样,电泳分离样品、染色及洗
第四节 几种常用电泳技术
血清蛋白电泳
光密度扫描
(五)应用
▪ 醋酸纤维素薄膜电泳已广泛用于各种 生物分子的分离分析中,如血红蛋白、 血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋 白、同工酶及类固醇等的分离和测定。

正常人血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳示意图
二、琼脂糖凝胶电泳
▪ 琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis,AGE)是以琼脂糖凝胶 作为支持物的一种区带电泳技术。琼脂糖 凝胶电泳的吸附作用和电渗作用均较小, 分辨率和重现性较好,电泳图谱清晰,电 泳速度快,区带易染色、洗脱和定量,常 用于生物大分子如:血浆脂蛋白、免疫球 蛋白、同工酶和DNA酶切片段的分离。
▪ 2.不连续pH电泳 支持介质各处的 pH不同,聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电 聚焦电泳等。
三、电泳技术的特点
▪ 1.凡是带电物质均可应用某一电泳技术进 行分离,并可进行定性或定量分析。
▪ 2.分辨率高。 ▪ 3.可在常温下进行。 ▪ 4.样品用量少。 ▪ 5.操作省时简便。 ▪ 6.设备简单。

电泳法

电泳法
电 泳 技 术
带电粒子在电场中移动的现象称为电泳。
电泳技术即是利用样品中各种带电粒子的
带电性质、分子大小、形状等的差异,在电场
中的迁移速度不同,从而对样品分子进行分离、
鉴定、纯化和制备。在生物学领域,该技术多 一般要求薄板用的活性为Ⅱ ~ Ⅲ级
用于分离,纯化、鉴定蛋白质、核酸等大分子
物质。
电泳的分类
纸电泳
醋酸纤维素电泳
淀粉凝胶电泳
琼脂糖电泳
聚丙烯酰胺凝胶电泳
3.影响电泳迁移率的因素:
1、影响电泳迁移率的外界因素: 电场强度 溶液的pH值 溶液的离子强度 电渗现象 2.影响电泳迁移率的内在因素: 质点所带净电荷的量 质点的大小和形状
迷你垂双垂直电泳槽
3、操作步骤
1. 准备
醋酸纤维素薄膜的预处理:将薄膜小心放入盛有 缓冲液的培养皿内,使其漂浮在液面;用镊子轻压, 使其全部浸入缓冲液内。待膜完全浸透(约半小时) 后取出,夹在清洁的滤纸中间,轻轻吸去多余的缓 冲液,同时分辨出光滑面和粗糙面。 标记:在粗糙面上用铅笔距薄膜条一端 1.5cm 处 划线即为点样线并作好标记,同时标上学号和正负 极。
3.4 毛细管电泳技术
毛细管电泳:使电泳过程在散热效率极高的毛细 管内进行,使焦耳热效应减小,能使用高电压, 全面改善分离质量和提高分析速度。
uap uos uef
阴离子
uap uos
中性分子
uap uos uef
阳离子
4、 CE 的检测器
CE对检测器的要求: 既能作灵敏检测,又不使谱带展宽。(死体积小) 一般采用柱上检测。 CE 检 测 器 方 法
实验室常见的电泳装置
( 核水 酸平 电电 泳泳 ) ( 蛋 白垂 质直 电 电泳 泳 )

5-1电泳

5-1电泳

2.实验试剂
(1) 30%丙烯酰胺(Acr):称Acr30g,甲叉双丙烯酰胺 (Bis)0.8g,加蒸馏水至100ml,过滤后置棕色瓶中, 4℃贮存可用1-2月。 (2)10%SDS(十二烷基磺酸钠) (3)1.5mol/L pH8.8 Tris-HCl缓冲液:称取Tris18.2g, 加入50ml水,用1mol/L盐酸调pH8.8, 最后用蒸馏 水定容至100ml。 (4)1.0mol/LpH6.8Tris-HCl缓冲液:称取Tris12.1g,加 入50ml水,用1mol/L盐酸调pH6.8, 最后用蒸馏水 定容至100ml。 (5)0.05mol/LpH8.0Tris-HCl缓冲液:称取Tris0.6g,加 入50ml水,用1mol/L盐酸调pH8.0,最后用蒸馏水定 容至100ml。
4.倒出水(乙醇)并用滤纸把剩余的水分吸干,按 比例配好浓缩胶,连续平稳加入浓缩胶至离边缘5mm 处,迅速插入样梳,静置40分钟. ※样梳需一次平稳插入,梳口处不得有气泡,梳底 需水平.
5.拔出样梳后,在上槽内加入缓冲液,没过锯齿。 ※要使锯齿孔内的气泡全部排出,否则会影响加样效 果.
6、加样三个。 (1)取10µl标准蛋白溶解液于EP管 内,再加入10µl 样品缓冲液,上样量为20µl。 (2)取10µl样品溶液,再加入10µl 样品缓冲液, 上样量分别为5µl 和10µl。
电泳法
生物大分子分离与表征 shaoyunwang@
电泳:
是带电颗粒在电场作用下,向着 与其电荷相反的电极泳动的现象。
电泳原理示意图
(一)电泳分类和沿革
按装置类型分类:
1. 自由界面电泳:蛋白质溶于缓冲液中进行电泳。 2. 区带电泳:将蛋白质溶液点在浸了缓冲液的支持物上 进行电泳,不同组分形成带状区域。 (1)纸上电泳:用滤纸作支持物。
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按支持物的装置形式不同分类 支持物水平放置,是最常用 (1)平板式电泳 支持物水平放置 是最常用 )平板式电泳:支持物水平放置 的电泳方式 (2)垂直板电泳:如聚丙烯酰胺凝胶垂直 )垂直板电泳: 板状电泳 (3)柱状(管状)电泳:聚丙烯酰胺凝胶 )柱状(管状)电泳: 可灌入适当的电泳管做成管状电泳
区带电泳的分类
1.按支持物的物理性质分类: 按支持物的物理性质分类: 按支持物的物理性质分类 (1)纸电泳:以滤纸为支持物 )纸电泳: (2)粉末电泳:如纤维素粉、淀粉、玻璃 )粉末电泳:如纤维素粉、淀粉、 粉电泳 (3)凝胶电泳:如琼脂、琼脂糖、硅胶、 )凝胶电泳:如琼脂、琼脂糖、硅胶、 淀粉胶、 淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳 (4)缘线电泳:如尼龙丝、人造丝电泳 )缘线电泳:如尼龙丝、
水 平 电 泳 槽
水 平 电 泳 槽
垂 直 电 泳 槽
垂 直 电 泳 槽
柱 状 电 泳
柱 状 电 泳
3.按pH的连续性不同分类 按 的连续性不同分类 电泳: (1)连续 电泳:如纸电泳、醋酸纤维素 )连续pH电泳 如纸电泳、 薄膜电泳 电泳: (2)不连续 电泳:如聚丙烯酰胺凝胶盘 )不连续pH电泳 电泳
电泳的分类
2011级临床2班第二小组
电泳的分类
(一)自由电泳:不需要支持物的电泳 自由电泳:
(二)区带电泳:需要支持物的电泳 区带电泳:
电泳技术的分类
自由电泳 区带电泳
1.Tiselius或微量电 或微量电 泳 2.显微电泳 显微电泳 3.等电点聚焦电泳技 等电点聚焦电泳技 术 4.等速电泳技术 等速电泳技术 5.密度梯度电泳 密度梯度电泳
1.纸上电泳 纸上电泳 2.醋酸纤维薄膜电泳 醋酸纤维薄膜电泳 3.薄层电泳 薄层电泳 4.非凝胶性支持体区带电 非凝胶性支持体区带电 支持体有:淀粉, 泳 (支持体有:淀粉,纤 维素粉,玻璃粉,硅胶等) 维素粉,玻璃粉,硅胶等 5.凝胶支持体区带电泳 凝胶支持体区带电泳 ①淀粉液 ②聚丙烯酰胺凝 琼脂( 胶 ③琼脂(糖)凝胶
4.按用途不同分类 按用途不同分类 (1)分析电泳 ) (2)制备电泳 ) (3)定量免疫电泳 ) (4)连续制备电泳 )
5.按所用电压不同分类 按所用电压不同分类 (1)低压电泳:100~500V,电泳时间较长, )低压电泳: ,电泳时间较长, 适于分离蛋白质等生物大分子 (2)高压电泳:1000~5000V,电泳时间短, )高压电泳: ,电泳时间短, 有时只需几分钟,多用于氨基酸、多肽、 有时只需几分钟,多用于氨基酸、多肽、 核苷酸和糖类等小分子物质的分离
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