2014HBV-DNA室内质控品说明书
PCR实验室乙型肝炎病毒核酸定量室内质控图
中医院PCR实验室
乙型肝炎病毒核酸定量室内质控图年月
仪器型号：质控项目：HBV-DNA 单位：IU/ml 质控日期：质控批号：
靶值：质控范围:
标准差： CV(%):
本月小结：
制表人：质量主管：
注：1、X线为靶线，X±2SD为警告线，X±3SD为失控线。
2.如果检测结果在X±3SD线以外，则为失控，应立即报告有关责任人，迅速查找原因。
必要时复查标本，然后方可发出报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。
3、如果检测结果在X±2SD线以外，或连续6点以上在一侧等规律变化，均应及时向有关责任人反映，并积极查找原因。
但当天的检验结果一般可以发出。
HBV-DNA定量检测的室内质控分析
率可达 ９０ ％ 】 ．９ Ｊ 。长期 以来 ， 乙肝的实验室诊断大 多靠抗 原抗 体反 应 来 进 行 定 性 ， 来 又发 展 到更 为 后
展， 乙肝 诊断 已 由原 来 的定 性 飞跃 到可 以利 用 Ｐ Ｒ Ｃ
１ 材 料 与方法 １１ 标本来源 ． 所 有标 本 均 取 自昆 明医 学 院
李 关兰 ， 旭 胡 莹。 杨 ， （． １ 大理 学院 附属 医院检验科 ， 南 大理 云
２ 昆 医附二 院检 验科 ， 南 昆 明 ． 云
【 摘要 】 目的
６ １０ ； ７ ０ ０
６００ ） ５ １ １
采用
探讨实时荧光定量技术在 Ｈ Ｖ— Ｎ Ｂ Ｄ Ａ定量检测 过程 中的室 内质控 问题 。方法
准确 、 敏度 更 高 的酶 法 。 随 着 捡 验 技 术 的 迅猛 发 第 二附属 医院 的门诊 和住 院病人 。 灵
１２ 试 剂 ．
Ｐ Ｒ试 剂盒 由深 圳 匹基 公 司提供 ， Ｃ
技术 检 测 病 毒 载 量 ， 与传 统 的 Ｐ Ｒ技术 相 比 ， 时 荧光 Ｐ Ｒ检 测仪 为 Ｍ ｏｔ ｏ ｎｔ 。 Ｃ 实 Ｃ ｊｐｉ ｎＭｏ ｉ ｒ ｃ ｏ 荧光 定 量技术 具 有 特异 性 高 ， 能有 效解 决 Ｐ Ｒ产物 Ｃ １３ 方法 严格按试剂盒 的操作说明 ， ． 待检血 污染 问题 ， 而且 自动化程度较高 等特点Ｃ ｓ ２ － 。为了 Ｊ 清 与试 剂盒 中的质粒标 准 品在 同一条 件下 进行 Ｄ Ａ Ｎ
参 考 文 献
［ ］ 宓庆 梅 ， 巍字 ， 婉莹， Ｅ Ｔ １ 施 郝 等． Ｄ Ａ依赖性假性血小板 减少症 １
例［ ］ 中华检验 医学杂志 ， ０ ， （０ ： １ ． Ｊ． ２ ４ ２ １ ）７ ９ ０ ７ ［ ］ 叶应妩 ， ２ 王毓三 ． 国临床检验操作规程 ［ ． 全 Ｍ］ ２版． 南京 ： 东南
HBV—DNA定量检测的室内质量控制
７０ ３ ） ３ ０ ０
探 讨 ＨＢ — ＮＡ 定 量检 测 的 室 内质 量控 制 措 施 ， 定 可 行 的 室 内质 量 控 制 方 法 。方 法 自制 乙肝 病 毒 栽 量 ＶＤ 制 临
为 １ 的 室 内质 控 物 ， 临 床 标 本 的 同步 处理 检 测进 行 １ ０次试 验 ， 不 同批 号 试 剂 求 出试 剂 盒 携 带 对 照 样 本 、 准 曲 线 Ｏ 与 ０ 按 标
有 效 的 室 内质 量 控 制 措 施 。
关键 词 ： 内质 量控 制 ； 室 标准差 ； 变异 系数
中图分类 号 ： ４ ． ９ 文献 标志码 ： Ｒ４ ６ ６ Ａ
文章编 号 ：６ １７ １ （０ ０ ０ — ５ ＂３ １ ７— ４ ４ ２ １ ） ３１ ２０
ｄ ｉ １ ． ９ ９ ｊ ｉｓ ． ６ １ ７ １ ． ０ ０ ０ ． ５ ｏ ： ０ ３ ６ ／ ．ｓｎ １ ７ — ４ ４ ２ １ ． ３ ０ ６
Ａｂ ｔａ ｔ Ｏｂ ｅｔｖ Ｔｏｓｕ ｙｔ ｅｍｅ ｓ ｒ ｆｉｔｒ ａ ｕ ｎ ｉｙｃ ｎ ｒ ｌ（ＱＣ）ｏ ｅ Ｖ— ｓｒ ｃ ． ｊｃｉｅ ｔ ｄ ｈ ａ ｕ ｅｏ ｅｎ ｌ ａ ｔｔ ｏ ｔｏ Ｉ ｎ ｑ ｖ ｒＨＢ ＤＮＡ ｕ ｎ ｉａｉｅｄ ｔｃｉｎｔ ｅ ｑ ａ ｔｔｔ ｅｅｔｏ ｏｄ — ｖ
在 ０ ０ ６６ Ｏ １ ４ ６ ２ ２ ～ ５ １ ， ． １ ～ １ １ ５ ． ７ ～ ． ７ 和 ． ４ ． ７ ０８ ９ ４ ． １ ８和 １ ７ ～ ３ Ｏ 。 内质 控 物 在 不 同批 号试 剂 同 的标 准差 和 ．９ ．６ 室
变异 ＿ 范 围 分 别 在 ０ １ ５２ ． ３ 系数 ． ９ ～Ｏ ４ ６５和 ３ １ ～７ ６ ， 批 次 正 常 累加 计 算标 准 差 和 变异 系数 为 ０ ３７和 ６ ５ 。 ．２ ．２ 五 ．８ ．５ 结 论 对 Ｈ Ｖ－ Ｂ ＤＮＡ 定 量 检 测 实行 试 剂 盒 的 有 效性 、 准 曲线 的有 效性 和 室 内质 控 物 是 否 在 控 三个 层 次 的 质 量控 制 是 最 标
乙肝抗原、抗体免疫测定室内质控品的制备及使用
乙肝抗原、抗体免疫测定室内质控品的制备及使用摘要】目的：探讨分析乙肝抗原、抗体免疫测定室内质控品的制备和使用情况。
方法：将我院2014年1月至2015年期间接受乙肝抗原、抗体免疫测定的149例患者作为研究对象，用全自动酶免疫分析仪测定其标本，分析总结测定结果。
结果：自制乙肝抗原质控品最佳批内CV和均值，并观察其稳定性均较为良好。
结论：在进行乙肝抗原、抗体免疫测定室内质控品使用和制备上，可采用低值质控，此对正确掌握和判定可疑结果上存在有利作用，临床推广应用价值较为明显。
【关键词】免疫；制备；室内；质控品；抗体；乙肝抗原【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）33-0366-02目前，临床进行免疫测定的准确性已得到明显性提升，同时对临床进行疾病预后评估和诊疗考核等均有促进作用，在确保免疫检验结果更加可靠上面较为重要。
为此，本文采用全自动酶免疫分析仪Rayto进行分析，因所采用的酶联免疫乙肝试剂盒中无低值血清，所以，在制备室内质控品时需从临检中心进行购买，因此单一质控品、批号过期、购买不及时等状况均会导致室内质控品出现成本较高、使用不方便等状况[1]。
本研究按照实验室检测实际状况，将两个复合自制免疫质控品应用到全自动酶免疫分析过程中内，使用时间为六个月，效果较为满意。
具体报告如下。
1.资料及方法1.1 一般资料将我院2014年1月至2015年期间接受乙肝抗原、抗体免疫测定的149例患者作为研究对象，其中包含男性共89例，女性共60例，最小年龄为26岁，最大年龄为65.5岁，平均年龄为（45.1±2.7）岁。
1.2 方法确定cut-off指数方式为标本对阴性比值方式，此试剂对照阴性A指数<0.05，按照此试剂相关说明操作流程，阴性对照组<0.05，依据0.05进行计算，COV指数为0.105。
制备质控品方式：（1）乙肝抗原免疫测定质控品制备：临床检验过程中选取乙型肝炎核心抗体、肝炎e抗原、表面抗原阳性的标本，也就是大三阳标本，给予相应分量的阴性乙肝五项血清降其调节为浓度一定的成分，56度环境下，灭活10小时，离心处理，将沉淀物去除，一年用量为总量，加叠氮钠0.5%进行防腐处理。
乙肝DNA定量检测室内质控品的制备与评价
• 对于标准差，使用的数据量越大，其 标准差估计值将更好。
WESTGARD质控规则
• 13S：失控规则，提示有一水平质控值超出 ±3S，提示随机误差或系统误差增大造成的 失控。
• 22S：失控规则，是系统误差，有二种表现 ①同一个水平的质控品连续2次控制值同方向 超出+2S或-2S限值；②在1批检测中，2个 水平的质控值同方向超出+2S或-2S限值。
研究现状
• 目前国内具有HBV –DNA质控品甚少， 价格昂贵，保质期短，运输要求条件高。
技术方法和路线
• 1. 收集正常血清 • 2. 选择病人标本 • 3. 配置质控血清 • 4.分装 • 5.保存 • 6.稳定性及瓶间差评价
• 1. 收集正常血清
• 收集经HBV -DNA检测无扩增的样本血 清（无脂血、无溶血）。放入经过高温消 毒离心管内、3000rpm离心10分钟。取 上清备用。
• 2.选择病人标本
• 选择DNA含量在1.0E+07 IU/mL4.0E+07 IU/mL的血清标本，充分混匀， 3000rpm离心10分钟。取上清备用。
• 3.配置质控血清：
• 将阳性血清用正常血清稀释10倍、1000 倍振荡混匀。
• 4.分装
• 5.保存：
• 将两个浓度质控品离心管随机分为4组， 分别放入室温（A组）、—20±5℃（B 组）、—40±5℃（C组）、—80±5℃ （D组）的低温冰箱保存备用，进行稳定 性的监测。
• 6. 稳定性及瓶间差评价
• 评价其不同温度条件下的稳定性。各组质 控品应用HBV—DNA荧光实时定量PCR 检测试剂盒分别检测20次；分别计算各 组均值的对数值、标准差和变异系数。
乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书
乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书-模板1.目的采用PCR技术、实时荧光探针技术，用于临床血清或血浆标本中的乙型肝炎病毒核酸的定量检测，或用于乙型肝炎的辅助诊断和抗病毒药物治疗中的疗效观察。
2.范围适用于乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）定量检测（PCR-荧光探针法）。
3.职责3.1操作人员：负责标本制备检测、仪器操作、报告发送。
3.2专业组组长：负责本组耗材的请购，监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作。
3.3实验室主任：负责监督和指导实验室各方面工作。
4.原理采用荧光PCR技术，以HBV基因组中相对保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光探针，在样品核酸纯化之后，通过荧光定量PCR对HBV DNA进行扩增，并检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，根据阈循环值（CT）实现对未知样品的检测。
另外，本试剂盒带有内标物质，用于对核酸提取的整个过程进行监控，减少假阴性结果的出现。
5.样品要求5.1适用样品类型：血清或血浆。
5.2样品采集：5.2.1血清用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2:^，注入无菌的真空采血管中（未加抗凝剂），室温（22-25℃）放置30-60min血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。
5.2.2血浆用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入含EDTA （乙二胺四乙酸二钠）抗凝剂的真空采血管，立即轻轻颠倒混匀5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后分离血浆于无菌的1.5ml 灭菌离心管。
5.3样品保存和运送使用专用样品0c冰壶送检，温度约维持在4℃左右。
分离后的血清或血浆可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月。
5.4拒收样品：拒绝重度溶血样品、肝素抗凝的血浆。
6.仪器和试剂6.1仪器AB7500核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。
乙型肝炎病毒DNA定量检测临界室内质控品的制备与初步应用
乙型肝炎病毒DNA定量检测临界室内质控品的制备与初步应用曹季军;吕心路;许爱萍;杨剑虹;李晓红;王金湖【摘要】目的制备乙型肝炎病毒(HBV)-DNA定量检测的临界室内质控品并评价其在日常工作中的应用价值.方法留取健康体检者血清作为基质,稀释阳性标准品,与临床标本采用实时荧光定量聚合酶链反应一起检测,根据结果计算出x、s、CV 值并在L-J室内质控图上作图,应用Westgard多规则质控判断方法.结果x=3.55×104 copy/mL,s=0.24(对数值),CV=5.27%.结论自制HBV DNA临界质控品结果稳定,具有一定实用价值.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2011(008)022【总页数】2页(P2771-2772)【关键词】乙型肝炎病毒4;荧光定量聚合酶链反应;室内质控品【作者】曹季军;吕心路;许爱萍;杨剑虹;李晓红;王金湖【作者单位】江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400;江苏省太仓市第一人民医院检验科,215400【正文语种】中文长期以来，我国人群一直呈乙型肝炎病毒（HBV）高感染率，约有1.3亿人感染[1]，因此乙型肝炎的诊断和治疗显得格外重要。
随着科学技术的发展和基因检测技术的成熟，HBV DNA的检测在乙型肝炎的诊断、治疗和疗效观察方面发挥了不可替代的作用，尤其是实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术。
但是为了保证检测的质量，必须要有严格室内质量控制措施。
因PCR检测结果为指数增长，目前尚无统一的室内质控品。
本实验室根据自身条件，自行制备了HBV DNA室内质控血清，并进行了初步应用和评价，现报道如下。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 血清健康体检者血清，要求无黄疸、无溶血、无脂血，丙氨酸氨基转移酶小于40 U/m L，HBV表面抗原阴性，HBV DNA无扩增趋势。
自制质控品在实时荧光法HBV-DNA定量室内质控中的应用
自制质控品在实时荧光法HBV-DNA定量室内质控中的应用摘要】目的研究实时荧光定量(RT-PCR)检测乙肝病毒核酸(HBV—DNA)时，自制质控品的扩增循环阈值(CT)作为靶值在室内质控中应用的可行性。
方法留取已知HBV—DNA浓度的患者血清和甲、乙、丙、戊肝和HIV血清学标志物全阴性的患者血清，通过一定比例稀释得到预期浓度的质控物，分装并-70℃保存。
分别计算出靶值，标准差和变异系数(OCV％、RCV％)，以CT值在±2S为质控警告线±3S为质控失控线，绘制Levey—Jennings质控图。
分析结果质控物最佳条件下的、S和OCV分别为27.5、0.65和2.36％；常规条件下的、S和RCV分别为28.7、0.73和2.54％。
RCV值<2 OCV值，此RCV可以接受。
结论自制质控品的CT值作为靶值应用于RT-PCR法HB—VDNA定量的室内质控中，制图方便，结果准确可靠，可以推广。
【关键词】HBV-DNA 扩增循环阈值室内质控【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）51-0159-02实时荧光定量PCR具有特异性强，能有效解决PCR产物污染、自动化程度高等特点。
在临床PCR检验中，通常使用质控样本扩增后的“拷贝数／ml”或“U／ml”来进行质控数据的统计分析[1]，但应用起来很不方便，本研究试用自制血清质控品的扩增循环阈值(CT)绘制质控图，研究其在HBV-DNA检测室内质控中的应用价值。
1 材料和方法1.1材料1.1.1质控品来源：质控血清来自抚顺市中心医院门诊和住院患者血清，经乙肝五项和甲、丙、戊肝血清学标志物全阴性的患者血清20人份；已知HBV-DNA检测结果为5.67×106IU／ml的血清样本一份。
以上血清均无肉眼可见的脂血、溶血和黄疸，将其进行56℃30min灭活处理。
1.1.2仪器设备：德国凯杰Rotor-GeneQ实时荧光定量PCR分析仪。
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HBV-DNA室内质控品说明书
(编号:1401)
【简介】
HBV DNA室内质控品为HBV DNA阳性血浆的稀释品，是具有生物活性的样品并具传染性，使用时请务必按传染性样品对待。
【组成】
HBV-DNA室内质控品水平1低浓度（黄盖）0.35ml/支
HBV-DNA室内质控品水平2高浓度（红盖）0.35ml/支
【保存方法和有效期】
—20℃避光保存，有效期18个月。
复溶使用后放—20℃保存。
复溶后避免反复冻融3次以上。
【使用方法】
该质控品为液体血浆，使用时室温（15-25℃）放置15分钟使其充分复融，颠倒或旋涡振荡混匀后，低速离心数秒后使用。
【制备、溯源】
本质控品源于一份HBV DNA阳性血浆，经卫生部临床检验中心的HBV DNA国家标准品标定，结果2×108IU/ml。
用阴性血浆分别于1：40和1：4000
注意：此结果仅供实验室参考。
【质控统计要求】
实验室应根据统计学质控方法建立检测项目的控制限（不能直接使用质控品说明书提供的参考值作为靶值）。
在本中心的质控软件中累积≥20次的室内质控调查品测定数据，完成质控数据的初始化，每月通过计算机网络向本中心上报结果。
上海市临床检验中心
2013.12。