牦牛源细粒棘球蚴线粒体COI基因的同源性分析
细粒棘球蚴抗原EPC1基因的克隆、表达及其免疫诊断的研究
细粒棘球蚴抗原EPC1基因的克隆、表达及其免疫诊断的研究蔡辉霞;沈玉娟;韩秀敏;袁忠英;王虎;徐馀信;胡媛;卢潍媛;官亚宜;曹建平【期刊名称】《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》【年(卷),期】2011(29)3【摘要】目的克隆、表达细粒棘球蚴EPC1(EgEPC1)基因,鉴定重组抗原的反应原性,并用棘球蚴病患者血清评价其诊断价值。
方法从绵羊肝脏棘球蚴囊中分离原头节,提取其总RNA,采用RT-PCR扩增EgEPC1基因,将其克隆至pGEM-T载体,再将其与原核表达载体PET28a(+)连接构建重组质粒PET28a-EgEPC1,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)对纯化的重组抗原进行鉴定分析。
以该重组蛋白作为包被抗原建立ELISA方法,检测细粒棘球蚴病患者血清(60份)特异性IgG抗体,同时以多房棘球蚴病(37份)、囊尾蚴病(16份)、华支睾吸虫病(7份)、日本血吸虫病(4份)患者和健康人血清(33份)作为对照,评价重组抗原EgEPC1的免疫诊断效果。
结果双酶切鉴定和测序结果均显示重组质粒PET28a-EgEPC1构建成功。
SDS-PAGE和Western blotting分析显示,重组质粒PET28a-EgEPC1在E.coli BL21(DE3)中获得高效表达,产物以可溶蛋白形式存在,重组蛋白EgEPC1的相对分子质量(Mr)约为11 000,可被细粒棘球蚴病患者混合血清识别。
EgEPC1对细粒棘球蚴病患者血清的诊断敏感性和特异性分别为78.3%(47/60)和98.3%(59/60),与多房棘球蚴病患者血清交叉反应阳性率为40.5%(15/37)。
结论 EgEPC1重组抗原对细粒棘球蚴病具有较好的诊断价值。
【总页数】5页(P167-171)【关键词】细粒棘球绦虫;EPC1基因;基因表达;免疫诊断【作者】蔡辉霞;沈玉娟;韩秀敏;袁忠英;王虎;徐馀信;胡媛;卢潍媛;官亚宜;曹建平【作者单位】中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所,卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室,世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心,上海200025;青海省地方病预防控制所,西宁811602【正文语种】中文【中图分类】R383.33【相关文献】1.细粒棘球蚴95(Eg95)抗原基因的克隆及真核表达质粒的构建 [J], 丁剑冰;林仁勇;温浩;王国荃;王笑峰;魏晓丽;傅玉才2.新疆细粒棘球蚴免疫诊断抗原B亚单位3基因的克隆及序列分析 [J], 马海梅;陈洁;古力帕丽·麦曼提依明;陈璐;丁剑冰;吾拉木·马木提3.细粒棘球蚴95抗原基因的克隆及原核表达质粒的构建 [J], 丁剑冰;林仁勇;温浩;许晏;魏晓丽;王国荃4.细粒棘球绦虫六钩蚴EG95抗原基因的克隆及原核表达 [J], 韩秀敏;贾万忠;史大中5.细粒棘球蚴AgB亚单位抗原基因的克隆和表达系统的优化 [J], 江莉;冯正;许学年;薛海筹;冯宇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
细粒棘球蚴延伸因子-1基因的克隆、测序及特性分析
细粒棘球蚴延伸因子-1基因的克隆、测序及特性分析王健;赵嘉庆;王娅娜;丁淑琴;赵巍【期刊名称】《宁夏医学杂志》【年(卷),期】2005(27)8【摘要】目的对细粒棘球蚴(E.granulosus)翻译延伸因子(translation elongation factor )EF-1基因片段进行分子克隆及序列分析.方法从细粒棘球蚴原头蚴中提取RNA,采用RT-PCR技术扩增出细粒棘球蚴EF-1基因片段,与pGEM-T载体重组并转化E.Coli JM109,经筛选扩增获得重组基因克隆,再进行序列测定和分析.结果成功构建了EF-1/ pGEM-T/JM109克隆体系,测序表明该基因开放阅读框为693bp,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为99%,推导编码氨基酸序列同源性为99%.结论扩增获得的基因片段可能为细粒棘球蚴(E.granulosus)翻译延伸因子EF-1基因片段.【总页数】4页(P510-513)【作者】王健;赵嘉庆;王娅娜;丁淑琴;赵巍【作者单位】宁夏医学院,宁夏,银川,750004;宁夏医学院,宁夏,银川,750004;宁夏医学院,宁夏,银川,750004;宁夏医学院,宁夏,银川,750004;宁夏医学院,宁夏,银川,750004【正文语种】中文【中图分类】R532.32【相关文献】1.纤维母细胞生长因子10基因在角膜混浊小鼠中的克隆测序与表达研究 [J], 吴刘成;张柳柳;李瑶;王胜洁;季韧;倪尧尉;邵义祥2.人分泌型肿瘤坏死因子相关激活诱导因子基因的克隆及测序 [J], 叶传忠;张芳林;林震;陈仕平3.细粒棘球蚴重组延伸因子-1基因的表达、纯化及免疫学鉴定 [J], 卜阳;李昭宇;师志云;马锐;于晶晶;于辛酉;赵巍4.广西猪链球菌2型毒力因子CPS基因的克隆测序与同源性分析 [J], 覃芳芸;白昀;冯淑萍;胡丽萍;马琳;杨荣;熊毅5.沼泽红假单胞菌GroE基因高保守区DNA片段的克隆,测序和特性分析 [J], 朱崇日;肖敏;钱新民;郑平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中国部分牦牛品种线粒体DNA遗传多态性研究
中国部分牦牛品种线粒体DNA遗传多态性研究赖松家;王玲;刘益平;李学伟【期刊名称】《遗传学报：英文版》【年(卷),期】2005(32)5【摘要】采用DNA测序技术首次测定了中国5个牦牛品种(类群)35个个体线粒体DNA控制区(D loop)全序列,结果表明:牦牛线粒体DNA控制区全序列长度为891～895bp,T、C、A、G4种核苷酸的含量分别为28.5%、25.3%、32.5%、13.7%。
检测到55个变异位点,约占分析位点总数的6.16%,核甘酸变异类型有转换、颠换、插入/缺失4种。
确定了24种单倍型,单倍型H4和H6为中国牦牛的主体单倍型,各单倍型在品种间分布不平衡,所测定的5个牦牛品种(类群)单倍型多样度平均为0.9697±0.0180,说明我国牦牛D loop单倍型类型丰富。
牦牛品种内各序列平均核苷酸差异数为10.936,核苷酸多样度为1.231%;牦牛品种间核苷酸分歧度(Dxy)约为0.760%～2.155%,品种间双参数距离范围为0.000～0.029,表明我国牦牛遗传多态性丰富。
对D环序列变异的分子方差分析和单倍型网络关系图的结果表明:我国牦牛品种间出现显著的遗传分化,牦牛单倍型网络关系图聚为2个聚类簇,表明我国牦牛有2个母系来源,或者有2个主要的驯化地点。
【总页数】8页(P463-470)【关键词】牦牛;多态性;D-loop;单倍型【作者】赖松家;王玲;刘益平;李学伟【作者单位】四川农业大学动科院;西南农业大学荣昌校区动科院【正文语种】中文【中图分类】S813.1【相关文献】1.中国云南怒族群体线粒体DNA D环区SNP遗传多态性研究 [J], 高树辉;刘清波;桂宏胜;乔可;李生斌2.中国撒拉族线粒体DNA序列遗传多态性研究 [J], 刘新社;李生斌3.10个山羊品种线粒体DNA的遗传多态性 [J], 武艳平;关伟军;赵倩君;何晓红;浦亚斌;马月辉4.中国部分山羊品种线粒体DNA D-loop序列遗传多样性分析 [J], 刘益平;曹少先;傅泽红;徐敏;刘铁铮5.中国牦牛线粒体DNA多态性及遗传分化 [J], 涂正超;张亚平;邱怀因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶重组蛋白的表达、纯化及免疫特性分析
细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶重组蛋白的表达、纯化及免疫特性分析张静;王洁;王淑静;张焱;高岭;赵巍【期刊名称】《中国病原生物学杂志》【年(卷),期】2006(1)4【摘要】目的对细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶(Eg mMDH)重组质粒进行原核表达、纯化,并初步鉴定重组蛋白的免疫学特性。
方法对已构建的基因工程菌株mMDH/pGEM-T/JM109进行酶切,获取目的基因。
将目的基因重组到pET28a表达载体上,筛选阳性表达菌株并进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定重组mMDH蛋白质为包涵体后,超声破碎细胞,尿素溶解包涵体,镍柱亲和层析法纯化,获取重组蛋白。
以纯化的mMDH作抗原免疫小鼠,用Western blot和ELISA方法检测重组蛋白的免疫原性及免疫鼠血清抗体水平。
结果成功构建原核重组表达载体mMDH/pET28a/BL21,并纯化出浓度较高的重组蛋白。
ELISA结果显示,重组抗原免疫小鼠诱导产生了一定水平的血清抗体;Western blot显示,原头蚴、囊液等天然抗原能被重组抗原免疫的小鼠血清识别。
结论纯化后的重组蛋白mMDH具有较强的免疫原性,有望作为包虫病候选疫苗,值得进一步深入研究。
【总页数】4页(P249-252)【关键词】细粒棘球蚴;线粒体苹果酸脱氢酶(mMDH);蛋白纯化;免疫鉴定【作者】张静;王洁;王淑静;张焱;高岭;赵巍【作者单位】宁夏医学院遗传学与细胞生物学教研室;宁夏医学院中心实验室【正文语种】中文【中图分类】R383.33【相关文献】1.细粒棘球蚴(中国大陆株)抗原zw-5基因的表达、纯化及免疫学特性初步分析 [J], 于晶晶;王娅娜;于辛酉;师志云;卜阳;赵巍2.重组细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶的表达、复性及鉴定 [J], 王玉姣;王浩;赵嘉庆;何鑫;王程铖;王强;赵巍3.细粒棘球蚴中国大陆株亲肌肉抗原重组蛋白的表达、纯化及免疫学鉴定 [J], 马锐;师志云;于晶晶;王淑静;王洁;张焱;高岭;赵巍4.细粒棘球蚴中国大陆株线粒体苹果酸脱氢酶基因的克隆和序列分析 [J], 赵嘉庆;丁淑琴;王健;王娅娜;赵巍5.细粒棘球蚴重组铁蛋白和重组线粒体苹果酸脱氢酶免疫差异的初步观察 [J], 刘丽华;赵嘉庆;蒋波;陈长义;王元;王娅娜;王洁;王淑静;赵巍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
牦牛UCP1基因生物学特性及组织表达分析
2021年3月第47卷第2期西南民族大学学报（自然科学版）Journal of Southwest Minzu University (Natural Science Edition)Mar. 2021Vol. 47 No. 2doi ： 10. 11920/xnmdzk. 2021. 02. 005牦牛t/C P l基因生物学特性及组织表达分析赵丹K2’3,熊燕1’2’3,华永琳〜，岳永起“2’3,郭玉1’2’3,熊显荣字向东“2’3,殷实1’2’3,李键||2_3(1.西南民族大学畜牧兽医学院，四川成都610041:2.西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室，四川成都6丨004丨；3西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室，四川成都610041)摘要：旨在克隆牦牛解偶联蛋白1(W：P1)基因序列，并对其进行生物信息学分析，进一步研究该基因在牦牛各组织的表达规律.以牦牛为实验对象，利用R T-P C R克隆得到牦牛t/C f l基因全长序列，生物信息学分析牦牛C D S区，qPC R检测f/C P l基因在牦牛不同组织中的表达模式.结果表明，f/C P l基因全长为954 bp(GenBank No.MW345537)，其中开放阅读框（Open reading frame ,()R F)全长为942 b p，编码313个氛基酸.蛋白分子特性预测U C P1蛋白为不稳定疏水性蛋白，存在跨膜结构域以及多个磷酸化位点.二级结构和三级结构预测显示，UCP1蛋白由无规则卷曲、a螺旋和 延仲链三者交替出现.牦牛t/C P l基因的核苷酸和氨基酸序列与普通牛的相应序列相似度最高，同源性分别为97.63%和96.76%;与斑马鱼的核苷酸序列和氨基酸序列相似度最低，分别为62.58%和64.29%.组织表达分析发现[/C f l在 牦牛心、肝、脾、肺、肾、脂肪、背肌、半腱肌中均有表达，但在肾中的表达量最高，肾与其他组织之间差异显著(尸<0.05).不同品种牦牛t/C尸丨基因的差异表达分析发现，其在麦洼牦牛背最长肌、肝中的表达量均显著高于金川牦牛（P<0.05和P<0.0001).这些结果为丰富牦牛t/C P l基因的功能研究提供了参考依据.关键词：牦牛；(/C P I基因；组织表达分析；生物信息学分析中图分类号:S813;S823 文献标志码：A 文章编号:20954271 (2021 )02>0139-10Biological characteristic and tissue expression analysis of UCP\gene in yak(^os grunniens)ZHAO Dan' 23, XIONG Yan12 3, HUA Yong-Iin' 2 \YUE Y o n g-q i123, GUO Yu12 3,XIONG Xian-rong' 23, YIN Shi123, LI Jian123(1. School of Animal & Veterinary Sciences, Southwest Minzu University, Chengdu 610041 , China；2. Key Laboratory of Qinghai - Tibetan Plateau Animal Genetic Resource Reservation and Utilization of Ministry of Education, Southwest Minzu University, Chengdu 610041 , China；3. Key Laboratory of Qinghai - Tibetan Plateau Animal Genetic Resource Reservation and Utilization of Sichuan Province,SouthwestMinzu University, Chengdu 610041 , China)Abstract：The aim of this study was to clone the yak uncoupling proteins 1( UCP\ ) gene sequence, conduct bioinformatics a- nalysis,and further elucidate its expression pattern in various tissues. The full length sequence of yak UCP\gene was cloned by RT - PCR, the CDS region of UCPl gene of yak was analyzed by bioinformatics, and the expression of UCP\gene in different yak tissues was detected by qPCR. The results showed that the full length of f/CPl gene was 954 bp ( GenBank No.MW345537) , and open reading frame (O R F) of UCP\gene was 942 bp, encoding 313 amino acids. The prediction showed收稿日期：2020-12-10通信作者^熊燕（ 1987-)，女，羌族，四川茂县人，副教授，博士，研究方向：反刍动物遗传育种与繁殖.E m ail: X i〇ngyan〇910@ 126.c o m;李键（1967-)，男，藏族，四川理县人，教授，博士，研究方向：牦牛细胞生物学和发育生物学.Em ail ••jianli」967 @ 163. com基金项目：四川省科技计划项目（2019YJ0258);国家自然科学基金项目（31902154)140西南民族大学学报（自然科学版)第47卷that UCP1 was an unstable hydrophobic protein with transmeml)rane domain and multiple phosphorylation sites. The secondary structure and tertiary structure predicted that UCP1 protein included irregular curl, a - helix, and extension chain domains. The nucleotide and amino acid sequence comparison of UCP\gene showed that the similarity of nucleotide and amino acid sequence was highest between yak and cattle (97. 63%and 96. 76%, respectively). While the similarity was lowest between yak and zebrafish (62.58% of nucleotide and 64. 29%of amino acid). Interestingly, qPCR showed that UCP\expressed in yak heart, liver, spleen, lung, kidney, fat, longissimus muscle and semitendinosus muscle, but the expression level was highest in the kidney (P <0.05). The mRNAlevel of UCP\in Maiwa yak longissimus muscle and liver was significantly higher than that of Jinchuan yak (P <0. OSandP <0. 0001 ). These results provided the basic data for functional research of UCP\gene in yaks.Keywords：vak；UCP\gene；tissue expression analysis；hioinformatic analysis青藏高原（Qinghai - Tibet Plateau)被称为“世界 屋脊”和地球“第三极”，氧分压很低，年平均气温常 处于〇尤以下，七八月的平均气温也不足10丈，这种 极端环境成为高原动物面临的主要生存挑战[1].牦牛 ()作为该区域特有畜种及遗传资源，可 适应低温、低氧、强辐射、昼夜温差大的严酷环境f2]，造就了牦牛耐低氧耐寒的生理特性[3].但是目前关于 牦牛耐低氧耐寒的分子遗传机制尚不完全清楚.解偶联蛋白（Uncoupling proteins,UCPs)属于线 粒体负离子载体家族成员，位于线粒体内膜.UCPs几 乎在所有的真核细胞中被确认，包括哺乳动物、鸟类、爬行动物、鱼类、昆虫、植物、真菌等[4_5].已知的解偶 联蛋白家族成员包括UCP1、UCP2、UCP3、UCP4和UCP5，其具有不同的组织分布以及功能特征.其中，UCP2组织分布广泛，在不同的组织中有不同的作用，例如在肝以及棕色脂肪组织中主要调节产热和能量 代谢，在脑组织中会减少自由基的产生，与氧化应激 对脑细胞损伤作用有关[6].UCP4和UCP5主要在动 物的脑部高表达，在其它组织中也有分布，具有调节 能量代谢、保护神经以及调节体温的作用W.在牦牛 中，UCP3主要分布在骨骼肌中，并在胸肌和腿肌中高 表达，与能量代谢有关[8.DCP1是产热脂肪细胞的 标志基因，大多位于棕色脂肪以及白色脂肪中，参与 维持机体体温的恒定[_.牦牛具有极强的抗寒适应 性，UCP1是否参与牦牛体温调节尚不清楚.研究显示UCP1通过解偶联作用进行产热，维持 动物体温的恒定、调节体重以及能量平衡["<2].当动 物遭受寒冷刺激时，解除了正常生理状态下UCP1与 嘌呤核苷酸的结合，使UCP1质子通道打开，导致氧 化磷酸化解偶联而产热w.然而在缺乏UCP1的情况下，机体会通过肌酸循环的机制，维持体温的稳定[14:.最近的证据表明，线粒体解偶联的诱导不仅影 响线粒体呼吸，会诱导线粒体解偶联导致氧化磷酸化 减少115]，而且会调节多种细胞生物学过程，包括自 噬、活性氧产生、蛋白质的分泌等n<^7].在家畜研究 中，牛f/C P l基因的多态性研究发现（C +G)%的含 量高低与动物适应环境温度成正比，证明了 LCP1与牛抗寒性存在关联[18].在敲除小鼠t/C P l基因时，小 鼠不能在棕色脂肪中产生热量，推测非颤栗性产热依 赖于UCP1蛋白的功能以上研究推测t/C P l基 因与动物的抗寒适应性密切相关.目前W：P1基因的 功能研究主要集中在人及小鼠等模式动物，而牦牛 [/CP1基因序列未知，并且其是否参与牦牛的高原适 应性尚不清楚.因此，本实验以牦牛皮下脂肪CDNA为模板，克 隆获得牦牛t/C P l基因序列，并利用生物信息学分析 方法对UCP1蛋白的理化性质、蛋白质结构及物种间 的同源性进行了详细的分析，利用qPCR方法检测了 J/CP1在牦牛各个组织中的表达差异，丰富了牦牛 f/C P l基因的功能研究数据，并为进一步研究牦牛 f/C P l功能提供参考依据.1材料与方法1.1试验动物由四川省阿坝羌族藏族自治州金川县庆林乡牦 牛养殖场提供的4 ~5岁金川公牦牛和4 ~5岁麦洼公牦牛各3头为实验动物.将牦牛清晨空腹屠宰后，用无菌剪刀分别取其心、肝、脾、肺、肾、肌肉和皮下脂 肪组织，快速置于液氮中，运回实验室，立即置于-80尤保存备用.第2期赵丹，等：牦牛t/C P l基因生物学特性及组织表达分析1411.2主要试剂及仪器Trizol、qPCR试剂盒、DL 5000 DNA Marker、氣节 青霉素、及LA Taq酶均购自TaKaRa公司.琼脂糖、酵 母提取物、胰蛋白胨均购自Bbwest公司.胶回收及质 粒提取试剂盒、pGM -T载体与大肠杆菌DH5 a感受 态细胞全部购自成都擎科梓熙生物技术有限公司. PCR仪（C1000)以及电泳仪均购自Bio- Rad公司•1.3方法1.3.1引物的设计及合成根据NCBI数据库GenBank中牦牛f/C P l的预测 序列（GenBank注册号：XM_005895812)以及牦牛内 参基因P P M的序列（GenBank注册号：NM_178320)，利用Primer premier5.0软件进行引物设计，然后送成 都擎科梓熙生物技术有限公司合成，引物序列信息如 表1所示.表1引物信息T able 1P rim er inform ation基因引物序列退火温度/t产物长度/b p用途UCP\F：ATGGCGGTCAAGATCTTR ： TGAGGC A C A CC A TGGACTG61954基因克隆UCP\F：CTGCGTGGCTGACATAATCACR ： CATTCGCCCTGGATAGCG6081qPCRPP1A F：AGCACTGGGGAGAAAGGATTR ： AGCCACTC A GTCTTGGCAGT60248qPCR1.3.2 RNA提取及cDNA合成经典Trizol法提取牦牛心、肝、脾、肺、肾、肌肉和 皮下脂肪等组织的总RNA，利用微量核酸浓度分析仪 (Nanodrop ND - 1000美国）测定RNA浓度和纯度，其中将OD260/OD28Q比值在1. 8〜2. 0的样品按照 TaKaRa反转录试剂盒说明书合成cDNA,置于-20 T保存备用.1.3.3 PCR扩增和目的片段肢回收PCR反应体系为15 pL:PCRMix7.5 ^L，上、下 游引物各0.5 m X，c DNA1jjuL，ddH205.5 (xL.反应程 序为：94 丈5 min，94 丈30 s，61 140s,72 丈1 min,设 置35个循环,72丈延伸5 min,4 保存.配制1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，将 长度符合的目的片段切下装入新的E P管中称量，参 照胶回收试剂盒说明书进行胶回收.1.3.4 [/CP1基因T载体构建及测序将纯化后的产物与pGM - T载体连接并置于16 t过夜，后将10 |xL连接产物加入100 |xL DH5 a感 受态细胞，转化后加入300 pL LB液体培养基震荡摇 匀后培养45 min，使得菌体复苏.将复苏后的菌液涂 布于含〇. 1mg/mL氨节的LB固体培养基表面,37培养12 ~ 16 h.在长出菌落的固体培养基中挑3个单 克隆分别加入到3个装有含氨苄的液体培养基的离 心管中37 t、200 rmP、摇4 ~6k进行菌液PCR，反 应体系及反应程序同1.3. 3.用1.5%琼脂糖凝胶电 泳检测PCR产物，若得到目的条带，将阳性克隆送至 成都擎科梓熙生物技术有限公司进行双向测序，得到 C/CP1基因的序列.1.3.5 荧光定量PCR试验以P P M为内参基因，qRT -PCR的反应体 系:7. 5 |j l LSYBR©Premix Ex Taq 酶、上下游引物各 0.5 |xL(10 (j l M)、3. 5 (j l L ddH20、最后加人 3 j j l L c DNA (20 ng/>L).反应程序为:95 ^ 4 min;(95 ^10 s，60 T； 30 s，72 T； 45 s)40 个循环;72 t延伸 5 min,检 测t/C P l基因在牦牛各个组织中的表达情况.1.4生物信息学分析先在 NCBI 的 ORF Finder(https://www.ncbi. /orffinder/)寻找开放阅读框，获得氨基酸 序歹|J;ProtParam(https:///protparam/ )在线分析牦牛t/C P l基因的理化性质；Prot Scale (https://web. expasy. org/protscale/) 在线进行亲 疏水预 测；TMpred( https ://embnet. vital - it. ch/software/TM-142西南民族大学学报（自然科学版)第47卷PRED_form_litml)在线对跨膜结构进行预测；NetPhos 3.1Server (http：//www.cbs.dtu.dk/services/Net-Phos/)在线进行磷酸化位点分析；SPOMA(https:// npsaprabi.ibcp.fr/cgibin/npsa_ automat,pi? page =/ NPSA/npsa_sopma.litml)在线进行蛋白二级结构预测；SWISS - MODEL(https:/// interactive)在线进行蛋白三级结构预测；NCBI在线 BLAST进行序列比对;最后利用MEGA 5.05软件进 行进化树的构建.1.5数据统计分析荧光定量PCR数据利用2 _A A D法进行数据处理，结果采用GraphPad Prism 8分析软件中的AN0V A程序进行单因素方差分析以及多重比较.2结果与分析2. 1牦牛f/C P l基因序列分析本实验以牦牛皮下脂肪CDNA为模板，进行PCR 扩增，获得t/C P l基因目的条带为954 bP(图1A).将 菌液送往公司测序，利用NCBI ORF Finder在线获得 f/C P l序列的开放阅读框，得到（7CP1基因0R F全长 为942 bp,编码313个氨基酸，结果与预期实验相符 (图1B)，并将所获得的G CPl基因序列提交到NCBI 数据库，其GenBank登录号为MW345537.图1牦牛(7CP1基因克隆A.牦牛1/C P1基因P C Ii产物电泳图，目的片段大小为954l)p.B. (/C P1基因p G M_T载体测序图谱Fig. 1Gene clone of yak UCP\A. Electrophoresis of PCR products of yak UCP\amplification.B. The sequencing diagram of /7CPlgene cloned into pGM -T2.2牦牛f/C P l基因生物信息学分析2.2. I蛋白理化性质分析利用ProtParam在线分析f/C P l的理化参数，结 果显示t/C P l蛋白的氨基酸数目为313个，相对分子 质量为33 9W. 48,理论P丨值为8.94.由20种氨基酸 组成，带有25个负电荷残基数，18个正电荷残基数(表2).UCP1蛋白的不稳定系数为34. 62.第62位的 氨基酸的分值最高(2.311 )，疏水性最强;309位的氨 基酸分值最低（-3.033)，亲水性最强.经过计算得到 总平均亲水性系数为〇.134，则推测该蛋白为不稳定 疏水性蛋白（图2).第2期赵丹，等：牦牛基因生物学特性及组织表达分析143-450100 150 200250氨基酸位置 Ammo acid location图2牦牛U CP1蛋白亲疏水性分析Fig. 2 The prediction of hydrophobicity for UCF^l protein3002.2.2蛋白跨膜结构及磷酸化位点分析利用TMpred 软件在线分析发现UCP 1蛋白在第 14 ~32、115 ~135、214 ~23丨、271 ~291 位氨基酸之间 分别存在19、18、21、20个由膜内向膜外跨膜的氨基 酸，在第 12~34、115 ~135、214 ~234、268 ~287 位氨 基酸之间分别存在23、21、21、20个由膜外向膜内跨 膜的氨基酸（图3A ).磷酸化位点预测，UCP 1蛋白一 共有31个苏氨酸（Thr )磷酸化位点（第5、12、31、36、 49、61、64、68、98、104、105、120、121、132、153、155、 164、165、169、175、176、180、188、192、224、225、236、 247、258、300、305位），20个丝氨酸（Ser )磷酸化位点 (第 7、19、50、51、76、87、90、110、113、116、143、216、228、229、241、242、248、263、272、278 位），9 个酪氨酸 (丁丫!〇磷酸化位点（第55、75、96、152、丨56、159、193、 246、307位）.结果见图3B _2.2.3 蛋白结构与功能预测根据S 0PMA 进行预测，牦牛UCP 1蛋白的二级 结构主要由46. 33%的a 螺旋（Hh )、32. 59%的无规 卷曲（Cc )组成和15.34%延伸链（Ee )组成，而p 转角 (Tt )仅占5.75% (图4A ,4B ).UCP 1蛋白的三级结构 预测结果与二级结构预测一致，由无规则卷曲、a 螺 旋和延伸链三者交替出现，并且预测得到线粒体解偶 联蛋白1(UCP 1)寡聚状态为单体（图4C ).表2牦牛U CP1蛋白的氨基酸组成Table 2Amino acid composition of yak UCP1氨基酸组成所占百分/%氨基酸组成所占百分/%氨基酸组成所占百分/%Ala (A )7.7Gly (G )8.3Pro (P ) 4.8Arg (R ) 4.2His (H ) 1.6Ser (S ) 6.4Asn (N ) 2.6He (I ) 5.4Thr (T )9.9Asp (D ) 4.5Leu ( L)9.3Trp (W )0.6Cys (C ) 2.6Lys ( K) 6. 1Tyr (Y )2.9Gin (Q )3.2Met ( M) 2.9Val (V )8.9Glu (E )3.5Phe ( F)4.8321-1-2-33J 8s is农144西南民族大学学报（自然科学版)第47卷predicted phosphorvlation 磷酸化预测位▲序列100 150ft 基酸位置A m m o50 100 150 200 250 300 350氨基酸位置 Amino acid location图3 U C P1蛋白质跨膜结构域以及磷酸化位点分析Fig. 3 Transmembrane domain and phosphorvlation site analysis of UCP1 proteinB;〇〇sites in Sequence250locationA20001000-1000 ,-2000-3000A IB I I I50 100 150 200 250C图4 U C P1蛋白质序列二级结构及三级结构预测A - B .蓝色线表示a 螺旋、紫色线表示无规则卷曲和红色线表示延伸链.C. U C P1蛋白的三级结构 Fig. 4 The prediction of secondary and tertiary structure of UCP1 proteinA - B. a - helix,extension chainand random coil are indicated by blue, red and purple bold vertical lines,respectively.C. The tertiary structure of UCP1 protein2.3牦牛UCP 1基因在不同物种之间的同源性对比利用在线BLAST 对牦牛和其他物种的f /C P l 基 因的核苷酸和氨基酸序列进行了比对（表3)，发现牦 牛与普通牛、山羊及绵羊的核苷酸序列和氨基酸序列 相似度最高，与斑马鱼的核苷酸序列和氨基酸序列相似度较低，仅分别为62. 58%和64. 29% •基于W ：P 1 基因序列利用MEGA 5.05对牦牛与其他物种进行了 系统进化树的构建，结果与序列结果比对一致，牦牛 与普通牛的亲缘关系最近，其次是山羊和绵羊，与斑 马鱼的亲缘关系最远（图5).-R 裨旺拦S 涟铥l c c u u v l o d u o t I K I X J o q d s c q a.第2期赵丹，等：牦牛f/C P l基因生物学特性及组织表达分析145表3牦牛{/CP1基因与其他物种的核苷酸及氨基酸序列比对结果Table 3 Nucleotide and amino acid sequence alignment of yak U C P\gene with other species物种核苷酸Nucleotide氛基酸Amino acidSpecies同源性/%登录号同源性/%登录号Homology GenBank No.Homology GenBank No.普通牛fio.sfrtwrus97.63NM_001166528. 196.76NP_001160000.1绵羊97.27NM_001280694. 197.38NP_001267623.1lU 羊Capra hircus96.94XM_018061376. 197.70XP_017916865. 1小鼠 Masmi«ca/its76.69NM_009463.381.76NP_033489. 1大熊猫 Aihiropodameiarudeuca87. 13XM_002926990. 290.55XP_002927036.1家猫Feliscatus88.66XM_003984985.491.21XP_003985034.13j Equuscaballus89.46XM_001915531.288.52XP_001915566.2猴子 A/acacamw/a«a84.51XM_00I090457.483.39XP_001090457.I兔子Oryctolaguscuniculus84.70NM_001171077. 185.62NP_001164548.1斑马鱼Daniorerio62.58NM_199523.264.29NP_955817. 1A Homo sapiens82.28NM.021833.583.39NP_068605.1(—Bo s g ra n n ie s'------5a? 普通牛I or/es 绵羊~C a p ra h ircu s l_Ll¥------------------n.一A ilu ro p o d a m e la n o le u c a大熊猫F e“s c a tu s 家猫------------------------------------M u s m u scu lu s---------------O r y c to h g u s c u n ic u iu s兔子---------M a c a c a m u la tta粮子--------H o m o sa p ie n s 人D a n io re rio斑马鱼0.05图5牦牛与其他物种的f/C P l基因系统进化树Fig. 5 Phylogenetic tree of U C P\gene in yak and other species2.4牦牛[/C P I基因组织表达分析利用qRT - PCR方法检测出了 t/C P l基因在牦 牛不同组织中的相对mRNA的表达量.结果显示，f/C P l在牦牛各个组织中均有表达（图6A)，在肾中的 表达量最高，并显著高于其他组织（P<〇.〇5)，除肾之外其他组织之间没有差异显著性.由于金川牦牛与 麦洼牦牛肌内脂肪以及肉质有一定程度的差异[21],于是我们进一步研究了 W：P1基因在金川牦牛和麦 洼牦牛的肝、脂肪、半腱肌、背最长肌中的表达量（图6B)，发现f/C P l基因在金川与麦洼牦牛的脂肪、半腱146西南民族大学学报（自然科学版)第47卷肌中没有差异，在背最长肌中的表达量麦洼牦牛显著 牛肝中的表达量极显著高于金川牦牛（P <0.0001).高于金川牦牛（户<〇. 05),并且t /C P l 基w 在麦洼牦3 I LJ U a.l LJ a i lill ISi B〇-U H _I __H _I _wM _I _■!__L勢命半腱肌脂肪背最长肌肝图6牦牛W ：P 1基因的组织表达分析A .麦洼牦牛t/C P l 基因在心、脾、肺、肾、脂肪、肝脏、背最长肌和半腱肌组织中的相对m RN A 水平（n =3). B. W ：P 1基因在金 川牦牛和麦洼牦牛肝、脂肪、背最长肌和半腱肌的相对mRNA 水平（n =3).内参基因:环孢素A 受体(P P M ). *表示差异显著(P <0.05)，* * * *表示差异极显著（P <0.0001)Fig. 6 Tissue expression analysis of U CP\ gene in yakA. The mRNA level o W C P i gene in heart, spleen, lung, kidney, fat, liver, L - muscle (longissimus muscle) andS - muscle (semi- lenilinosus muscle) from yak (n = 3).B. The differential mRNA level of I C P \ gene in fat,liver, L - muscle and S - muscle from Jin- chuan yak and Maiwa yak, respectively ( n = 3). Internal reference gene ： Peptidylprolylisomerase A ( P P IA ) gene. * ： Indicate thedifference is significant ( P <0. 05) , * * * * ; Indicate the difference is extremely significant (P <0.0001 )3讨论u c p i 属于解偶联蛋白家族成员，可以激活线粒体的解偶联呼吸而产生热量（非颤栗产热），维持动物 体温的恒定122 .在模式动物中，关于基因的功 能研究较为深人，但对于&CT 1基因在牦牛上的研究 目前尚未见报道.此次试验以牦牛皮下脂肪CDNA 为 模板，利用PCR 克隆获得i /C P l 基因的全长954 b P ， 0R F 全长为942 l >P ，编码3〖3个氨基酸.生物信息学 预测得到，牦牛UCP 1蛋白为一种不稳定疏水性蛋 白，具有跨膜结构域及多个磷酸化位点.与前人研究 结果一致，i /C P l 已经证实有6个疏水区存在跨膜结 构U 35.UCP 1蛋白的二级结构主要由a 螺旋，无规卷曲 以及少数延伸链组成.同源比较发现牦牛t /C P l 基因 与普通牛的同源性最高，虽与其他物种之间也有一定 的同源性，但同源性较低，因此推测（/CP 1基因在不 同物种间可能具有特异性.之前大多数研究W ：P 1基因主要集中在脂肪组织中表达，M 近的研究发现t /C P l 在小鼠的胸腺中也 有表达：4 .孙国权等研究发现，t /C P l 基因在肉牛的 睾丸、肾、肋间肉、心、胰、背膘、肩肉、肝、网脂、肠脂、 睥、肺、背最长肌和淋巴等很多组织中均有表达，但在 背瞟中的表达高于其他组织,并认为t /C P l 与产热和 维持体温有关25 .在绵羊研究中发现t /C P l 在肾周脂 肪中的基因表达明显高于其他组织，而浅表脂肪中的 基因表达低于深层脂肪，在2月龄绵羊肾周围脂肪组 织中的mRNA 表达量最高，然后随着年龄的增加呈现 下降趋势126 .在本研究中我们发现，t /C P l 基因在牦 牛心、脾、肺、肾、脂肪、肝、背最长肌和半腱肌中均有 表达,在肾中的表达量最高，并且肾与其他组织之间 差异显著（P <〇.〇5),这可能是由于UCP 1参与肾小 管上皮细胞的氧化应激.研究报道位于肾脏的 肾小管上皮细胞，在肾间质纤维化过程中呈时间依赖 性下调.i /C P l 的缺失会增加小鼠肾脏的氧化应激,t /C P l 过表达会减少缺氧处理的肾小管上皮细胞中线 粒体活性氧（Reactive oxygen species , R 0S )的产生和I5B110-5-蒯拍撇V A O C S 灰«■sA a l V M X Su A I I n l aQ !:A%J 懈 V X H S ^:班I V X H E a A !l J 2,l >J第2期赵丹，等:牦牛[/CP1基因生物学特性及组织表达分析147凋亡，并且小鼠肾脏中过氧化物酶体增殖物激活物受 体PPAR7调节会影响t/C P l的表达％.因此推测这 种表达模式可能是因为UCP1参与肾的抗氧化功能，关于t/C P l在牦牛肾脏中的具体功能还需进一步的 探究.目前在牦牛中已有t/CP3被克隆[28;，并有研究发 现解偶联蛋白家族中的UCP2和f/CP3基因可作为家 畜胴体生长与肉质性状的候选基因[2'在牛中，t/C P l基因在骨骼肌中的表达显著低于棕色脂肪组 织，并且定位研究发现UCP1蛋白在骨骼肌中高表 达，但在骨骼肌中的肌内脂肪细胞未检测到[3°].在绵 羊的多态性检测研究中发现,W：P1基因内含子5区和外显子6区共有8个核苷酸突变，内含子5区变异 对绵羊的生长速度存在性别差异，同时对胴体性状具 有一定影响.含有等位基因C1的公羔群体较其他群 体有更高的断尾重，缺失等位基因A1的母羔群体具 有更高的初生重[31].之前有研究表明金川牦牛肉肌 肉剪切力低，肉质相对于麦洼牦牛较细嫩，并且肌内 脂肪含量较高[32]，因此我们比较研究了金川牦牛和 麦洼牦牛肌肉中f/C P l基因表达的差异，发现f/CPl 基因在麦洼牦牛背最长肌中的表达量显著高于金川 牦牛，推测t/C P l基因的表达水平可能与牦牛肌内脂 肪沉积有关.本研究发现t/C P l基因在麦洼牦牛肝中的表达 量极显著高于金川牦牛（Z3<〇.〇〇〇1).之前有研究布 氏田鼠在低温驯化过程中，肝脏在细胞水平上的呼吸 酶活性及蛋白质合成等方面均被激活，表明寒冷环境 会促使肝脏代谢活力提高[33].由于麦洼牦牛长期生 活的环境与金川牦牛相比海拔较高，温度相对更低，可以推测肝脏基因表达和代谢状态与环境温度有关. 在低温环境中，为了满足机体对ATP的需求，同时通 过产热维持体温恒定，肝脏呼吸速率显著增强[34]•研究表明脂肪酸激活t/C P l解偶联生热，肝脏对脂肪酸 的生成和代谢具有重要作用[35_36].在小鼠急性肝损 伤后，UCP1蛋白表达减少、活化能力降低，导致棕色 脂肪组织功能下降，机体产热减少，从而影响代谢的 稳态[37].这进一步说明f/C P l基因表达与肝脏的代谢 密不可分.本实验克隆了牦牛C/CP1基因并分析其生物学 特性，研究了 i/C P l基因在牦牛各个组织中的表达，推测t/C P l可能参与牦牛高原适应性的调节,但对于 {/CP1参与介导牦牛骨骼肌的能量代谢以及在冷刺激 下调控肝脏代谢的作用还需进一步的研究.4结论本试验成功克隆出牦牛t/C P l基因全长序列，全 长为 954 bp(GenBank No.MW345537)，ORF全长为 942 bp,共编码313个氨基酸.生物学信息分析得到，UCP1蛋白为一种不稳定疏水性蛋白.同源分析表明，牦牛t/C P l基因与普通牛t/C P l基因的同源性高.通 过UCP1基因在牦牛不同组织的表达分析得到，/7CP1在牦牛心、肝、脾等各个组织中均有表达，在牦 牛肾中的表达量显著高于其他组织.并且t/C P l基因 在麦洼牦牛背最长肌以及肝中的表达量显著高于金 川牦牛.以上研究结果为UCP1蛋白在牦牛的功能研 究奠定了基础.参考文献[1 ]贾功雪，丁路明，徐尚荣，等.青藏高原牦牛遗传资源保护和利用：问题与展望[J】_.生态学报,2020,40( 18) :6314 - 6323.[2]韦唯，吴奇强.浅谈牦牛资源研究与利用进展[J].农家参谋,2019(17) ：111 -112.[3]陆仲磷.中国的牦牛资源[J].中国草食动物，丨999(02) :42 -46.[4] BARBARA C, IRINA G S, TATI AN A V K, et al. 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牦牛棘球蚴病感染调查报告
Experimental research | 试验研究表2 猪生长性能变化情况指标发酵组试验组地热舍起始时的数量606060结束时的数量605860日增重557.8～634.4521～101.2607～142.3存活率（%）100961004 讨论4.1 猪舍内温度和气体含量变化情况从相关报告中可以发现，猪最合适的生产温度为15～22 ℃，但是由于当地的冬季比较寒冷，不利于猪的生产与发育，养殖户为防寒，通常会选择增加食量的方式。
或者是采用封闭式的保密措施，这样就会导致室内的湿度开始增加，氨气的浓度也会增加，在通风不良的情况下，猪的免疫力也会下降，进而引发一些呼吸道疫病。
因此，饲养人员就应该充分意识到发酵床的应用优势，当粪便和微生物结合在一起时，可以释放出大量的热能，提高猪舍温度。
同时，当外界温度较高时，饲养人员可拆除薄膜降温。
在合适的温度中，也要对空气湿度和气流速度进行调整，尽量将湿度控制为60%～70%，不要超过80%，气流则是0.1～0.2 m/s。
从这次试验中也能发现，早中晚时间段的温度和湿度差异都不是非常明显，属于可以控制的范围。
如若将猪养到105 kg时，大概需要330 kg的饲料，而发酵床需要230～250 kg饲料，生长期大概会提前10～15 d。
根据最后的分析也表明，发酵床中含有的微生物，在市场热量时，也能维护猪舍内的温度[2]。
4.2 空气质量对猪生长的影响空气是猪生存的必要条件，假设空气中污染物过多，不仅会降低他们的生产性能，严重时，还会引起一些疾病，或者是死亡。
氨气和舍内温度、饲养密度之间有一定的联系，在冬季时，部分饲养人员为节省时间，增加养殖数量，这会导致氨气浓度增加，危害到猪的健康。
而发酵垫料中的微生物，能快速溶解猪的排泄物，抑制氨气的排放。
猪舍内的氨气主要是垫草、饲料等有机化合物所分解而成的，猪舍中氨含量通常不会高于20 mg/m³。
采用通风的方式，实际上可降低舍内的温度，但是在具体应用时，效果比较弱。
青海省细粒棘球蚴线粒体cox1基因和nad1基因多态性的研究
１２５２
中国兽医科学
第 ４４ 卷
Ｇ１ｉｓｏｌａｔｅｓ，５ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｏｃｃｕｒｒｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｎａｄ１ｇｅｎｅ ｗｉｔｈ ５ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓ ａｎｄ １ｔｏ ４ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｒ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ０．４５％ ，ｗｈｅｒｅａｓ ９ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｅｘｉｓｔｅｄ ｗｉｔｈ ２７ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｍｕｔａ－ ｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓ ａｎｄ １ｔｏ １１ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｒ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ０．６８％ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｏｘ１ｇｅｎｅ．Ｍｏｓｔ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｐｐｅａｒｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ ｂａｓｅ ｏｆ ａ ｃｏｄｏｎ，ｗｈｉｃｈ ｈａｒｄｌｙ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｅｎｃｏｄｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ．Ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｆｏｒ ｃｏｘ１ｇｅｎｅ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｎａｄ１ｇｅｎｅ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｘ１ｇｅｎｅ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｎａｄ１ｇｅｎｅ ｉｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｗｉｔｈｉｎ Ｅ．ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ Ｇ１ｉｓｏｌａｔｅｓ．Ｉｎ ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ，ｔｈｅ ａｂｏｖｅ－ｍｅｎｔｉｏｎｅｄ ｒｅ－ ｓｕｌｔｓ ｐｒｏｖｉｄｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｄａｔａ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｏｓｉｓ．
新疆伊犁地区绵羊细粒棘球绦虫新G1基因型的研究
新疆伊犁地区绵羊细粒棘球绦虫新G1基因型的研究【摘要】目的细粒棘球绦虫存在着实质性的基因遗传差异，将影响对治疗药物的敏感性，抗原变异也可影响对人体包虫病的准确监测以及免疫预防，因此对新疆细粒棘球绦虫基因多态性研究、分子生物学及血清学实验诊断方法研究与包虫病的流行防治直接相关。
方法：本研究采用DNA测序法对细粒棘球绦虫mtDNACO1基因片段进行序列分析，明确检测到的细粒棘球绦虫的基因型及其株内遗传变异。
结果通过对新疆塔城50例细粒棘球绦虫分离株标本(取自被感染羊)CO1基因序列分析，发现新疆塔城地区羊株主要流行株为Gl型，其中CO1基因片段长度为789bP，并发现一株新的基因型。
结论将所检测到新疆细粒棘球绦虫基因单倍体序列与Genbank中己登录细粒棘球绦虫基因序列进行同源性比较分析，发现变异碱基对，证明新疆细粒棘球绦虫基因序列存在多态性。
【关键词】新疆塔城；细粒棘球绦虫；新G1基因型包虫病是一种严重的人畜共患性疾病，呈世界性分布。
我国西北广大农牧区是包虫病的主要流行区[1-2]，以Eg所致囊型包虫病（CE）尤为多见，世界各地的细粒棘球绦虫具有基因多态性和致病的多样性[3]。
虫株基因型不同对人的感染力、抗原结构特点、对化疗的反应以及流行病学上的特征不同，而在基因水平上进行细粒棘球绦虫虫株基因型及其差异研究，对包虫病疫苗、诊断试剂及药物的研制和开发具有重要意义[4] 。
近年来，已在基因水平上对细粒棘球绦虫流行病学、致病性、免疫学、遗传学方面的差异开展了广泛研究。
Nakao M等[5] 认为细粒棘球绦虫从基因水平分析应重新分类，分为不同的种株，目前尚需进一步研究证实。
新疆地区存在地理气候多样性和适合细粒棘球绦虫寄生的多种中间宿主，如羊、牛、骆驼、猪、鹿、马、啮齿类野鼠和人等，并与多个国家和省、自治区接壤，细粒棘球蚴又有广泛的中间宿主适应性，在长期的进化演变过程中，寄生虫在与宿主之间的互相适应中发生着变异，株间发育差异将影响以杀成虫剂阻断传播计划的效果，抗原变异也可影响对人体包虫病的准确监测以及免疫预防。
青海省羊源细粒棘球蚴EG95基因的克隆与序列分析
青海省羊源细粒棘球蚴EG95基因的克隆与序列分析韩秀敏;史大中;贾万忠;杨永海;王虎【期刊名称】《中国兽医科技》【年(卷),期】2004(34)1【摘要】从青海省羊源细粒棘球蚴中提取基因组DNA ,用EG95特异性引物进行PCR扩增 ,并克隆至 pGEM TEasy载体上 ,经PCR、EcoRⅠ酶切和测序鉴定后 ,用DNAstar软件对 3个克隆的DNA序列进行同源性分析。
结果表明 ,EG95基因的3个序列 (EG95 QH 1、EG95 QH 2和EG95 QH 3)的片段大小为 14 35～ 14 37bp ,与GenBank中的EG95基因同源性为 73.2 %～99.2 % ,差异集中在内含子区域。
其中EG95 QH 1、EG95 QH 3与GenBankEG95XJ ag、EG95 4序列的同源性较高 ;EG95 QH 2与GenBank中EG95 1、EG95 2、EG95 3序列的同源性较高。
研究结果表明 ,青海羊源细粒棘球蚴EG95基因的 3个序列为EG95基因家族的成员。
【总页数】5页(P17-21)【关键词】青海;羊;细粒棘球蚴;EG95基因;克隆;序列分析;DNA;同源性分析;包虫病;棘球蚴病【作者】韩秀敏;史大中;贾万忠;杨永海;王虎【作者单位】兰州医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所;青海省疾病预防控制中心【正文语种】中文【中图分类】S852.734;S858.265.9【相关文献】1.新疆棘球蚴Eg95基因的克隆与序列分析 [J], 朱维;简子健2.内蒙古羊源细粒棘球蚴Eg95基因原核表达及蛋白鉴定 [J], 李志伟;王志钢;湛奎;陈献威;杨军;李洁3.细粒棘球蚴eg95基因的克隆以及原核融合表达 [J], 贾如;邹媛媛;李轶女;魏兆军;沈桂芳4.羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因在杆状病毒中的串联表达 [J], 于琳琳;贾红;侯绍华;刘丹;丁敏;郭晓宇;朱鸿飞5.细粒棘球蚴内蒙株疫苗候选基因EG95克隆 [J], 李志伟;王志钢因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
青海地区牦牛棘球蚴病的调查分析
87青海地区牦牛棘球蚴病的调查分析宋永青（青海省西宁市湟中区共和镇畜牧兽医站，青海西宁 811605）摘 要：牦牛棘球蚴病又名包虫病，为棘球蚴绦虫寄生犬类动物小肠而诱发人畜共患传染性寄生虫病。
此病高发可导致牦牛组织器官功能性障碍，影响畜体的育成率，造成高死亡率。
文章介绍牦牛棘球蚴病的流行及症状，利用屠宰检疫的机会，调查青海某地牦牛棘球蚴病感染情况，就分析来看青海地区牦牛棘球蚴病有较高的感染率和较强的感染强度，作为牦牛养殖户务必要高度重视此病的防控。
关键词：牦牛；棘球蚴病；防控1 前言牦牛棘球蚴病又名包虫病，为棘球蚴绦虫寄生犬类动物小肠而诱发人畜共患传染性寄生虫病。
就寄生部位来看，棘球蚴常寄生牛羊及人的肝脏、肺脏、脾脏、脑部等组织。
由于孕节虫卵数多，往往能在脏器中形成多达几十个蚴体。
蚴体生命力强，体积大，压迫周边组织，将导致组织器官功能性障碍，影响畜体的育成率，甚至造成死亡。
此病分布广泛，尤其多见少数民族地区，造成的畜牧业经济损失甚为惨重。
2 牦牛棘球蚴病流行及症状2.1 流行虫体成虫为多头绦虫，成熟的节片呈长方形。
成虫多寄生犬类等食肉动物小肠内，发育成熟后，成虫的孕节片随粪便排出体外，形成感染性虫卵而污染周边环境，一旦被牦牛食入后，可在消化道中形成六钩蚴，钻入肠道随血液到达身体寄生部位。
犬类为虫体的终末宿主，牛羊为中间宿主。
就易感群体而言，牦牛1~2岁龄多发，幼龄1岁下牦牛最易感。
2.2 症状食欲废绝，精神萎靡，周身发热。
受此病影响，牦牛多离队，伴发明显的神经症。
据病程长短，此病有急性和慢性之分。
急性，食欲差，脉搏快，呼吸急促，磨牙，掉队，精神萎靡，伴发明显神经症。
个别耐过，将为慢性病例。
慢性，为急性转变而来。
在病变组织处，见有大量囊泡寄生。
早期囊泡体积不大，后期体积增大，囊泡数量增多。
如果寄生在脑部，伴发明显神经症状。
3 青海地区牦牛棘球蚴病调查3.1 方法为掌握本地牦牛棘球蚴病感染情况，利用屠宰检疫的机会，编号统计好屠宰检疫牛。
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牦 牛 源 细粒 棘 球 蚴 线 粒 体
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
高速冷冻离心机 � � ( 型号 N e ofge13R ) ， 干热器 ( 型号 H DB - 2N ) ， P CR 扩增仪 ( 型号" M C cl e r TM Therm al C cl er ) ， 电泳仪( 型号 DY Y - ) � 1.1.3 主要试剂 DN A 提取试剂盒 ( 购自 Q IA am p 公司 ) ， 即用型 PC R 扩增试剂盒 ( 商品编号为 B S9 29 6 ) ， DN A M a rk e r ( 商品编号为 G M 333 ) ， ( M B 6 6 9 4 20 l ) ， ( A B 1004 50g ) � 核酸染料 商品编号为 琼脂糖 商品编号为 方法 样品总 DN A 的提取
1
1.1
材料和方法
材料 1.1.1 分离株来源
收稿日期 : 2012 - 03 - 20 作者简介 : 黄福强 ( 19 87� ) ， 男， 湖南常德人 ， 青海大学在读硕士研究生 � * 通信作者
10
青海大学学报
第 31 卷
在青海省祁连县� 刚察县 � 达日县 � 贵南县� 泽库县和玉树县采集牦牛肝脏和肺脏的包囊， 0.9 % 生理 盐水清洗后， 放入塑料袋中加入 75% 酒精 ， 保存， 待检� 以一个包囊为一个分离株， 并对采集的包囊编 号� 1.1.2 主要仪器
1 黄福强 ， 付 2 永 ， 冯
CO I 基
因 的 同 源 性 分 析
1 1 凯 ， 炊文婷 ，
朵
红2 ， 沈秀英2 ， 彭
毛2 ， 李
伟 2*
810003)
( 1. 青海大学， 青海 西宁
810016 ; 2. 青海大学畜牧兽医科学院， 青海 西宁
摘要 : 为了探讨青海地区牦牛源细粒棘球绦虫株系间基因序列差异 ， 确定其基因型 � 地理分布 及优势虫株， 有效地预防牦牛包虫病的发生， 对获得的 51 株细粒棘球蚴线粒体 C O !基因进行 了测序并构建了系统发育树 �研究结果显示， 所检测的 51 个细粒棘球绦虫分离株基因序列与 Ge nB a nk中检索到的普通羊株 ( G 1 型) 全基因同源性达到 9 9 % 以上 ， 均为普通羊株 ( G 1 型) � 关键词: 青海省; 牦牛; 细粒棘球蚴 ; C O I 基因 中图分类号: S823.85 文献标志码: A 文章编号 : 1006 - 89 9 6 ( 2013 ) 03 - 0009 - 03
细粒棘球蚴为绦虫纲圆叶目带科棘球属的细粒棘球绦虫的中绦期， 主要寄生于牛� 羊� 猪� 马� 骆驼 ［1］ 等家畜及多种野生动物和人的肝 � 肺及其他器官内， 引起动物和人的细粒棘球蚴病 �该病又称为囊 型包虫病， 是世界性分布的重要人兽共患寄生虫病 � 研究表明［2］， 我国 9 8% 的包虫病是由细粒棘球绦 虫引起的 ， 主要分布在内蒙古� 四川� 西藏� 甘肃 � 青海 � 宁夏� 新疆等 7 个省 ( 自治区 ) 的牧区和半农半牧 区， 受威胁人口为 6 6 00 万 ， 全国 23 个省� 市� 自治区 有家畜原发病 例的报道 ， 病畜高达 3 000 万 头 ( 只) ， 每年新发病畜 700 余万头( 只 ) ， 棘球蚴病每年给我国畜牧业和畜产品造成近 10 亿元的直接经济 ［3 - 5］ �为了解青海牦牛源细粒棘球绦虫基因型 ， 损失 本文收集了 51 个棘球蚴分离株 ， 运用线粒体 DN A 的 CO I 基因， 检测了牦牛细粒棘球蚴的种内变异 ， 并对进一步掌握动物棘球绦虫的基因突变提供依据 �
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( 1.Q ingha i U ni ersit， X ining 810016 ， China; � � 2.A cadem ofA nim a la nd V et e r inar M e dicine of Q ingha i U ni ersit， X ining 810003 ， China) � A � : The � aim � oft he c rr e ntstd a st o in est iga t et he genotp e of E chinococc s gr a n l os s obt � a ined f r om ak s in Q ingha i p ro ince ，a nd p ro ide t he f o nda t iona lda t af or p re e nt ion a nd cont r ol of � E � � � of ak s. The ge net ic p ol m orp hism of 51 isol a t es of E chinococc s gran l os s ere � ana l e d.It as dem ons t ra t ed t hatt he gene t ic hom ol og of t he se isol at e s it h t he com p l et e m it och on� � drialG 1 ge nom e ref erence d in G e nB a nk ( A F29 76 17 ) a s o er 9 9 % ， t h s，al lt hese isol a t es a r e ident if ied a s com m on shee p st rain. K : Q inghai; ak ; E ; CO I ge ne