盐酸头孢甲肟溶血及血管刺激性实验
药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则 (2014-05-13)分析
附件4药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则一、概述刺激性、过敏性、溶血性是指药物制剂经皮肤、粘膜、腔道、血管等非口服途径给药，对用药局部产生的毒性（如刺激性和局部过敏性等）和/或对全身产生的毒性（如全身过敏性和溶血性等），为临床前安全性评价的组成部分。
药物的原形及其代谢物、辅料、有关物质及理化性质（如pH值、渗透压等）均有可能引起刺激性和/或过敏性和/或溶血性的发生，因此药物在临床应用前应研究其制剂在给药部位使用后引起的局部和/或全身毒性，以提示临床应用时可能出现的毒性反应、毒性靶器官、安全范围。
本指导原则适用于中药、天然药物、化学药物。
二、基本原则（一）试验管理根据《药品注册管理办法》，药物刺激性、过敏性和溶血性研究必须执行《药物非临床研究质量管理规范》（GLP）。
（二）随机、对照、重复试验设计应遵循随机、对照、重复的原则。
（三）整体性、综合性原则应根据受试物特点，充分考虑和结合药学、药效学、其他毒理学及拟临床应用情况等综合评价，体现整体性、综合性的原则。
（四）具体问题具体分析应在遵循安全性评价普遍规律的基础上，具体问题具体分析，结合受试物的特点，在阐明其研究方法或技术科学、合理的前提下进行规范性试验，对试验结果进行全面分析评价。
三、基本内容（一）受试物和实验动物1．受试物中药、天然药物：受试物应能充分代表临床试验样品或上市药品。
应采用工艺路线及关键工艺参数确定后的工艺制备，一般应为中试或中试以上规模的样品，否则应有充分的理由。
应注明受试物的名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件及配制方法等，由于中药的特殊性，建议现用现配，否则应提供数据支持配制后受试物的质量稳定性及均匀性。
试验中所用溶媒和/或辅料应标明名称、标准、批号、规格及生产单位。
化学药物：受试物应采用工艺相对稳定、纯度和杂质含量能反映临床试验拟用样品和/或上市样品质量和安全性的样品。
受试物应注明名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件及配制方法等，并附有研制单位的自检报告。
HPLC法测定注射用盐酸头孢甲肟含量的研究
HPLC法测定注射用盐酸头孢甲肟含量的研究
刘雅华
【期刊名称】《安徽医药》
【年(卷),期】2003(007)003
【摘要】目的探讨注射用盐酸头孢甲肟含量测定方法.方法采用高效液相色谱法(HPLC法),用ODS柱,以水-乙腈-冰醋酸(60∶10∶0.5)为流动相,检测波长254 nm.结果头孢甲肟浓度在48～96 g*L-1间,线性关系良好,r=0.999 9.平均回收率为99.9%.结论用HPLC方法测定注射用盐酸头孢甲肟的含量,方法简捷,结果准确,经济且专属性强.
【总页数】3页(P210-212)
【作者】刘雅华
【作者单位】贵州省药品检验所,贵阳,550001
【正文语种】中文
【中图分类】R927
【相关文献】
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盐酸头孢甲肟IF文件
＊：静注用製剤のみ
−1−
Ⅱ：名称に関する項目
1 ．販 売 名 1−1 和 名 ベストコール® 静注用 0.5g ベストコール® 静注用 1g ベストコール® 筋注用 0.5g 1−2 洋 名 BESTCALL® INTRAVENOUS 0.5Gm. BESTCALL® INTRAVENOUS 1Gm. BESTCALL® INTRAMUSCULAR 0.5Gm. 1−3 名称の由来
Ⅸ：非臨床試験に関する項目
1 ．一般薬理 2 ．毒性試験 2 − 1 単回投与毒性試験 2 − 2 反復投与毒性試験 2 − 3 生殖発生毒性試験 2 − 4 その他の特殊毒性 52 52 52 53 52
Ⅹ：取扱い上の注意等に関する項目
1 ．有効期間又は使用期限 2 ．貯法・保存条件 3 ．薬剤取扱い上の注意点 4 ．承認条件 5 ．包 装 6 ．同一成分・同効薬 7 ．国際誕生年月日 8 ．製造販売承認年月日及び承認番号 9 ．薬価基準収載年月日 10 ．効能・効果追加、用法・用量変更追加等の年月日及びその内容 11 ．再審査結果、再評価結果公表年月日及びその内容 12 ．再審査期間 13 ．長期投与の可否 14 ．厚生労働省薬価基準収載医薬品コード 15 ．保険給付上の注意 54 54 54 54 54 54 54 55 55 55 55 56 56 56 56
目 次 Ⅰ ：概要に関する項目
1 ．開発の経緯 2 ．製品の特徴及び有用性 1 1
Ⅱ：名称に関する項目
1 ．販 売 名 1 − 1 和 名 1 − 2 洋 名 1 − 3 名称の由来 2 ．一 般 名 2 − 1 和 名（命名法） 2 − 2 洋 名（命名法） 3 ．構造式又は示性式 4 ．分子式及び分子量 5 ．化学名（命名法） 6 ．慣用名、別名、略号、記号番号 7 ．CAS 登録番号 2 2 2 2 3 3 3 2 2 2
溶血性试验方法《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》
（三）溶血性试验方法《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》1、常规的体外试管法（肉眼观察法）1.1 血细胞悬液的配制取兔血（或羊血）数毫升，放入含玻璃珠的三角烧瓶中振摇10分钟，或用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液。
加入0.9%氯化钠溶液约10倍量，摇匀，1000-1500离心15分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤2-3次，至上清液不显红色为止。
将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液配成2％的混悬液，供试验用。
1.2 受试物的制备除另有规定外，临床用于非血管内途径给药的注射剂，以各药品使用说明书规定的临床使用浓度，用0.9%氯化钠溶液1∶3稀释后作为供试品溶液；用于血管内给药的注射剂以使用说明书规定的临床使用浓度作为供试品溶液。
1.3 试验方法取洁净试管7只，进行编号，1-5号管为供试品管，6号管为阴性对照管，7号管为阳性对照管。
按下表所示依次加入2%红细胞悬液、0.9%氯化钠溶液或蒸馏水，混匀后，立即置37℃±0.5℃的恒温箱中进行温育，开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，一般观察3小时。
按下列顺序加入各种溶液：1.4 结果观察若试验中的溶液呈澄明红色，管底无细胞残留或有少量红细胞残留，表明有溶血发生；如红细胞全部下沉，上清液体无色澄明，表明无溶血发生。
若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散，表明有红细胞凝聚发生。
如有红细胞凝聚的现象，可按下法进一步判定是真凝聚还是假凝聚。
若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散，或将凝聚物放在载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴0.9%氯化钠溶液，置显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝聚。
1.5 结果判断当阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生时，若受试物管中的溶液在3小时内不发生溶血和凝聚，则受试物可以注射使用；若受试物管中的溶液在3小时内发生溶血和（或）凝聚，则受试物不宜注射使用。
刺激性、过敏性和溶血性试验的方案设计与实施
过敏性实验
实验目的：观察动物接触受试物后是否产生全身或局 部过敏反应，为临床用药提供安全性依据。
实验分类：经皮给药过敏性实验：豚鼠最大化实验 （GPMT）和Buehler实验（BT） 注射给药过敏性实验：被动皮肤过敏实验 （PCA）和全身主动过敏实验（ASA）
被动皮肤过敏实验
实验动物：常用的动物是大鼠，亦用小鼠、豚鼠。 实验分组：阴性对照组：同体积的溶媒；
它是临床前安全性评价的组成部分。
刺激性实验
实验目的：观察动物的血管、肌肉、皮肤、粘膜等 部位接触受试物后是否引起红肿、充血、渗出、变 性或坏死等局部反应，为临床用药提供安全性依据。
实验分类：皮肤刺激性实验； 注射给药部位的刺激性实验； 眼刺激性实验； 皮肤光毒性（光刺激性）实验
刺激性实验
实验设计：
阳性对照组：卵白蛋白1-5mg/只； 受试物低剂量组：临床最大剂量(/kg或m2)； 受试物高剂量组：低剂量的数倍量。 每组动物数至少6只。
被动皮肤过敏实验
实验方法：
➢ 致敏：
抗体的制备 ：选择容易产生抗体的给药方法，如静脉、腹腔或皮 下注射等，隔日一次，共3-5次。末次致敏后10-14天左右采血， 2000转/分离心10分钟，分离血清，-20℃保存，2周内备用。
表 2.皮肤刺激强度评价标准
注射给药部位刺激性实验
适用范围：注射剂应考虑进行注射给药部位刺激性实验。 实验动物：首选家兔，每组动物数不少于3只。 实验方法：
⑴应设生理盐水对照,采用同体左右侧自身对法； ⑵用药部位根据药物的给药途径确定，可选用耳缘静脉、 耳中心动脉、股和背部肌肉、静脉旁组织等； ⑶一般按临床给药方案给予受试物，多次给药一般不超过7 天；
➢ 结果观察： 无溶血：红细胞全部下沉，上清液体无色澄明； 溶血：溶液呈澄明红色，管底无细胞残留或有少量红细胞残留； 凝聚：溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散。
药物毒理学实验-溶血实验2012-5-25
原理（二）
有些药物由于含有溶血成分或物理、化学及生物等方面的原因，在直接注 入血管后可产生溶血作用；有些药物注入血管后可产生血细胞凝聚，引起 血液循环功能障碍等不良反应。例如多种中草药(党参、桔梗、夹竹桃、
实验方法（一）
(1) 2%红细胞悬液的制备 取新鲜兔血10~20 ml →用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白原，使成脱纤 血液。 →加入NS100 ml，摇匀，3000 r/min离心10分钟， 除去上清液，沉淀的红细胞再用NS按上述方法洗 涤2-3次，至上清液不显红色为止。 →将所得红细胞用NS配成2％的混悬液(红细胞2 ml， 加生理盐水至100 ml)，供试验用。
溶血试验
混匀后，立即置37℃±0.5℃的恒温水浴中进 行温育，观察记录各管的溶血情况。开始每隔15分 钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，一般 观察3小时。
溶血试验结果判断标准
当阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生 时，若受试物管中的溶液在3小时内不发生溶血和凝聚，则受 试物可以注射使用；若受试物管中的溶液在3小时内发生溶血
远志、三七等)含有皂苷，皂苷是一类表面活性剂，有很强的乳化力，具
有溶血作用； 另外大量输入低渗溶液以及含有某些自体化合物的注射液也可以引起溶血。 因此，凡是注射剂和可能引起免疫性溶血或非免疫性溶血反应的其他药物 制剂均应进行溶血性试验。在溶血性试验中还可观察供试品有无红细胞凝
聚作用。
实验用品
【器材】 烧杯、玻璃棒(去纤维蛋白用)、10 ml 试管、试管架、滴管、吸管、离心机、恒温水浴 锅。 【药品】 受试药物、生理盐水、蒸馏水。 【动物】 家兔1只，体重2.5~3.0 kg，雌雄不限 (供采血之用)。
头孢唑肟致急性溶血1例
患者 ， 男性 ， ８ ０岁 ， 因“ 反 复咳嗽咯痰 １ ０余 年 ， 气 急 ４年 ， 再 发 ３天 ” 入 院 。入 院查 体 ： 体温 ３ ６ ． ６ ｏ Ｃ，
脉搏 １ ０ ０次／ 分， 呼吸 ２ ０次／ 分， 血压 ９ ９ ／ ６ ０ ｍｍ Ｈｇ。
２ 讨论
天， 患 者 突 然 出现 腰 痛 、 血尿 ， 伴 轻 微 咳 嗽 咳痰 、 气 急， 无 恶 寒发 热 、 无 胸 闷 ｔ ｂ 悸 。查 体 ： 贫血 貌 ， 肾 区叩 击痛（ 一 ） ， 左 肺 可 闻及少 许 湿 哕音 。急查 尿 常 规 ： 葡
萄糖 ４ ＋ ， 隐血 ３ ＋， 蛋 白质 ２ ＋ ， 红 细胞 （ 镜检） ： １ ／ Ｈ Ｐ。 血常规 ： 红 细胞 计 数 ０ ． ７ ５ １ ０ ／ Ｌ血 红 蛋 白 ６ ６ （ ｇ ／ Ｌ ）。肝 肾功 能 ： 血红蛋 白 ６ ６ ｇ ／ Ｌ 、 血清 溶 血指 数２ ＋、
次 ）、 二 甲双 胍控 制血 糖 沐舒坦 、 吉 诺通 口服化 痰 等 对症 支持 治疗 。经治疗 后 ， 患者 咳 嗽 咳痰 、 气 急逐 渐 好转 ， 相关 血 液 学 检 查 也 趋 于正 常 。但 入 院 后 第 ６
计数 ３ ． ６ ０ ％， 胆 红 素指 标 总 胆 红 素 、 直接胆红素 、 间 接 胆红 素均 正常 。
摘要 ： 文 章 回顾 分 析 ２ ０ １ ５年 本 科 室 １ 例 慢 性 阻塞 性 肺 病 使 用 头 孢 唑 肟 针 治 疗 过 程 中并 发 急 性 溶 血 的 病 例 ， 以 期 提 高 临 床 医师 对 头 孢类 抗 生 素 副 反 应 尤 其 是 急 性 溶 血 的认 识 ， 避 免 误 诊 漏 诊 。临 床 上 使 用 头 孢 唑 肟 时 有 急 性 溶 血 的 风险， 虽 在 临床 医疗 过程 中少 见 ， 但需要警惕 ； 出现 时 经 激 素 等 相 关 治 疗 后 ， 多可得到有效缓解 。 关键词 ： 头孢唑肟 ； 激素 ； 急性 溶 血 ； 个 案 报 道
头孢甲肟中乙醇溶剂的测定实验分析
头孢甲肟中乙醇溶剂的测定实验分析【摘要】目的：测定盐酸头孢甲肟中乙醇的含量；方法：以甲醇为内标，DB-624 毛细管柱为色谱柱；进样口温度：200℃；检测器温度：250℃；柱温：100℃；分流比：1：30；对盐酸头孢甲肟中乙醇溶液进行测定；结果：3批样品中乙醇的含最分别为0.43%，0.22%，0.089%。
结论：本研究方法准确、灵敏度高，适合用于盐酸头孢甲肟中乙醇残留溶剂的测定。
【关键词】盐酸头孢甲肟是第3代头孢菌素类广谱抗生素，主要用于各种敏感菌所致的呼吸系、肝胆系统、泌尿生殖系、腹膜等部位的感染，并可用于败血症和烧伤、手术后感染，属于细胞壁合成抑制剂，通过抑制细胞壁的生物合成而达到杀菌作用，对大多数革兰氏阳性和阴性菌具有广谱的抗菌作用，并且对细菌产生的β-内酰胺酶稳定，能广泛用于因细菌感染引起的各种炎症的治疗。
盐酸头孢甲肟在合成过程中使用了乙醇溶剂，乙醇属于第3类溶剂。
本研究建立了气相色谱内标法测定盐酸头孢甲肟中乙醇溶剂残留量的方法，该法灵敏、准确、快捷，可用于盐酸头孢甲肟中乙醇有机溶剂的定量分析。
1. 仪器与试剂气相色谱仪 Agilent 7890，FID 检测器，顶空进样仪 Agilent G1888，；XWC-100AB型自动平衡记录仪；微量注射器。
甲醇，乙醇，DMF均为分析纯。
2. 方法与结果2.1色谱条件色谱柱：DB-624 毛细管柱为色谱柱；进样口温度：200℃；检测器温度：250℃；柱温：100℃；分流比：1：30；载气：氮气（99.999%）；顶空进样器参数：平衡温度 80℃，平衡时间 30分钟；进样量：1.0ml；流速：1.0 ml/min。
2.2溶液配制2.2.1内标精密量取适量甲醇，用DMF配制成质量浓度为25.0g?L-1的内标溶液。
2.2.2对照品精密量取适量乙醇，加人适量内标溶液，用DMF配制成甲醇和乙醇质量浓度均为500.0mg?L-1的对照品溶液。
2.2.3供试品溶液准确称量0.50g供试品，加人100μL内标溶液，用DMF溶解、稀释、定容至5mL。
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实验报告注射用盐酸头孢甲肟对家兔的血管刺激性试验及对家兔红细胞体外溶血试验研究机构名称：试验负责人：试验及报告者：试验起止日期：研究机构地址：研究机构电话：委托单位名称：委托单位地址：委托单位联系电话：目录依从性声明 (1)QAU陈述 (2)摘要 (3)1注射用盐酸头孢甲肟对家兔的血管刺激性试验 (4)1.1 样品制备 (4)1.2 动物准备 (4)1.3 实验步骤 (4)1.4 结果 (4)1.5 结果判断 (6)2注射用盐酸头孢甲肟对家兔红细胞体外溶血试验 (8)2.1 样品准备 (8)2.2 动物准备 (8)2.3 实验步骤 (8)2.4 结果 (9)2.5 结果判断 (9)参考文献 (9)依从性声明试验名称：注射用盐酸头孢甲肟对家兔的血管刺激性试验及对家兔红细胞体外溶血试验试验编号：本试验是按照中华人民共和国国家食品药品监督管理局《药物非临床研究质量管理规范》（国家食品药品监督管理局局令第2号，2003年9月1日生效）完成。
试验过程遵照试验方案及本机构相关标准操作规程，无影响试验结果和结论可靠性的偏移或其它异常情况。
本报告如实地反映了试验材料、试验方法和试验结果。
试验负责人：签名：日期：年月日QAU陈述试验名称：注射用盐酸头孢甲肟对家兔的血管刺激性试验及对家兔红细胞体外溶血试验试验编号：试验负责人：为确保试验能够严格执行试验方案的内容，并按照本机构SOP操作，QAU 对试验方案、试验实施过程和试验记录等进行了检查，并审查了原始数据、试验报告，报告中所述的操作程序、试验方法和试验结果如实地反映了试验原始资料的内容。
QAU检查项目、检查日期及报告日期如下：检查项目检查日期报告试验负责人日期报告机构负责人日期试验方案2011.11.02 2011.11.04 2011.11.04标准操作规程(SOP) 2011.11.07 2011.11.09 2011.11.09 试验过程2011.11.14 2011.11.16 2011.11.16试验记录2011.12.06 2011.12.08 2011.12.08原始数据2011.12.07 2011.12.09 2011.12.09试验过程2012.01.06 2012.01.08 2012.01.08试验记录2012.01.09 2012.01.11 2012.01.11原始数据2012.01.09 2012.01.11 2012.01.11试验报告2012.01.13 2012.01.16 2012.01.16试验QA：签名：日期：年月日QAU负责人：签名：日期：年月日摘要本试验包括注射用盐酸头孢甲肟（规格：1 g/瓶）对家兔的血管刺激性试验及对家兔红细胞体外溶血试验。
注射用盐酸头孢甲肟，1 g/瓶，重庆圣华曦药业股份有限公司生产，批号100801。
本品主要成分为盐酸头孢甲肟，为白色至微黄色结晶性粉末。
用法与用量：1.成人：轻度感染：一日1-2g，分2次静脉滴注；中、重度感染：可增至一日4g，分2-4次静脉滴注。
也可根据临床情况进行剂量调整。
2.小儿：轻度感染：一日每公斤体重40-80mg，分3-4次静脉滴注；中、重度感染：可增至一日每公斤体重160mg，分3-4次静脉滴注；脑脊膜炎：可增量至一日每公斤体重200mg，分3-4次静脉滴注。
在对家兔的血管刺激性试验中，使用家兔9只，采用同体左右侧自身对照。
于家兔的左耳静脉注射给予生理盐水（9mg/ml），相同给药容量供试品或上市品（20mg/ml）于家兔的右耳静脉注射给予。
每天给药一次，连续给药7天。
于每天给药前以及最后一次给药后48小时进行临床观察和给药局部观察，于给药完成后48小时进行病理组织学检查，按血管刺激实验标准分级。
试验过程中，注射用盐酸头孢甲肟按临床成人最大用药浓度给药，每日1次兔耳缘静脉注射，每次20mg/ml，连续7天，肉眼及组织学检查相较生理盐水组均未见异常，无刺激性。
两侧对比无明显差异。
结果表明，注射用盐酸头孢甲肟采用20mg/ml浓度静脉注射对家兔耳缘静脉无刺激作用。
家兔红细胞体外溶血试验中，设置5个供试品组及阳性和阴性对照组。
开始时每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，观察3小时，观察红细胞溶解及凝聚情况。
试验过程中，阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生，供试品组管中的溶液在3小时内未发生溶血和凝聚，红细胞形态正常。
结果表明，注射用盐酸头孢甲肟在本试验条件下不产生溶血或红细胞聚集作用。
本试验根据《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》的要求，进行了注射用盐酸头孢甲肟特殊安全性试验，供临床参考。
1注射用盐酸头孢甲肟对家兔的血管刺激性试验1.1 样品制备供试品为重庆圣华曦药业股份有限公司生产的注射用盐酸头孢甲肟（批号100801），对照上市品为Takeda Phamaceutical Company Lmited, Hikan Plant.生产(批号：HK566；进口药品注册号：H20090190)。
分别用0.9%氯化钠注射液配制成20 mg/mL的溶液。
阴性对照品0.9%氯化钠注射液，由西南药业有限公司生产（批号11111019）。
1.2 动物准备日本大耳白兔，体重2-2.5 kg，购于第三军医大学实验动物中心，饲养于第三军医大学实验动物中心动物房。
生产许可证号：SCXK（军）2007-015，使用许可证号：SYXK（军）2007-037。
试验前于动物房饲养1周以适应环境。
1.3 实验步骤给药：供试品组使用家兔6只，于家兔的左耳静脉注射给予生理盐水，相同给药容量供试品（20mg/ml）于家兔的右耳静脉注射给予。
上市品组使用家兔3只，给药剂量同供试品组。
供试品及上市品组给药容积均为5mL /kg。
用6号头皮针于耳缘静脉注射给药，针尖穿刺血管的方向为由远心端至近心端，给药速度为2-3mL/分钟。
每天给药一次，连续给药7天。
观察：于每天给药前以及最后一次给药后48h对动物和注射部位进行肉眼观察，于给药完成后48小时行病理组织学检查，按血管刺激实验标准分级。
评分标准见表1。
1.4 结果各组每次给药前以及末次给药后48 h，肉眼观察注射部位，实验侧（右侧）仅见血管轻度扩张，无明显充血、淤血，纹路清晰，周围组织无水肿，与生理盐水侧（左侧）比较无差别，记分为零。
换算成相应的反应级分值见表2。
单次观察累计得分为0，无刺激性（图1）。
表1. 血管刺激试验记分观察方法血管刺激性评分标准血管刺激性判断标准观察指标评分标准得分累计得分判断标准肉眼血管正常0＜0.5 无刺激性血管轻度充血发红，纹路清晰 1血管充血发红，纹路不清晰 2＜2.5 轻度刺激性血管重度充血，呈紫红色 3周围组织无水肿0＜4.5 中度刺激性轻微水肿 1明显水肿 2＞4.5 重度刺激性重度水肿 3光镜血管内皮及血管壁完整0＜0.5 无刺激性内皮损伤 1血管栓塞 2＜2.5 轻度刺激性血管破裂 3周围组织正常0＜4.5 中度刺激性水肿 1出血 2＞4.5 重度刺激性炎症细胞浸润 3表2 血管刺激试验肉眼观察记分表分组兔号1st2nd3rd4th5th6th7th7th后48h 右左右左右左右左右左右左右左右左供试品组血管1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 02 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 03 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 04 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 05 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 06 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 周围组织1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 02 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 03 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 04 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 05 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 06 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0上市品组血管1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 02 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 03 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 周围组织1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 02 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 03 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0（右侧为实验侧，左侧为生理盐水）图1. 7th后48h兔耳照片（均为供试品组）注射7天结束后48h，试供品组取三只兔，左右耳各取1cm长一段血管连同周围组织行病理检查；上市品组取两只兔，左右耳各取1cm长一段血管连同周围组织行病理检查。
其余兔继续饲养14天后取血管连同周围组织行病理检查。
观察结果：供试品组：实验侧与对照侧组均显示血管无充血，血管内皮完整，无血栓形成，无炎性细胞浸润，血管周围组织无明显改变（图2）；上市品组：实验侧与对照侧组均显示血管无充血，血管内皮完整，无血栓形成，无炎性细胞浸润，血管周围组织无明显改变（图3）；换算成相应的反应级分值（见表3），供试品组与上市品累计得分均为0，无刺激性。
1.5 结果判断注射用盐酸头孢甲肟（批号100801）按临床成人最大用药剂量给药，每日1次兔耳缘静脉注射，每次5ml/kg ( 20mg/ml )，连续7天，肉眼及组织学检查相较生理盐水组均未见异常，无刺激性。
两侧对比无明显差异。
表明注射用盐酸头孢甲肟采用20mg/ml浓度静脉注射对家兔耳缘静脉无刺激作用。
图2 兔耳缘静脉血管刺激试验组织学切片左为供试品，右为生理盐水图3 兔耳缘静脉血管刺激试验组织学切片左为上市品，右为生理盐水表3 血管刺激试验病理观察记分表分组兔号右（实验侧）左（生理盐水侧）供试品组血管1 0 02 0 03 0 04 0 05 0 06 0 0周围组织1 0 02 0 03 0 04 0 05 0 06 0 0上市品组血管1 0 02 0 03 0 0 周围组织1 0 02 0 03 0 02注射用盐酸头孢甲肟对家兔红细胞体外溶血试验2.1 样品准备供试品为重庆圣华曦药业股份有限公司生产的注射用盐酸头孢甲肟（批号100801），对照上市品为Takeda Phamaceutical Company Lmited, Hikan Plant.生产(批号：HK566；进口药品注册号：H20090190)。
供试品与上市品分别用0.9%氯化钠注射液配制成20 mg/mL的溶液。