单增李斯特氏菌显色培养基使用说明书
单增李斯特氏菌显色培养基使用说明书CRM013 单增李斯特显色培养基
单增李斯特ATCC19115
(Chromogenic Listeria monocytogenes Agar )
【包装规格】
环凯货号CRM013（干粉）；SR0590(配套试剂) ；（平板）
包装形式47.3g/瓶；10支/盒；20套（φ9cm) /盒【产品用途】
用于分离和初步鉴别单增李斯特菌。
【检验原理】
蛋白胨、酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;色素与单增李斯特氏菌具有的酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在平板上，单增李斯特氏菌呈现绿~蓝绿色的光滑规则的小菌落;抑制剂和配套试剂可抑制杂菌的生长。
【培养基配方成分】
配方（每升）含量
蛋白胨15.0g
酵母膏粉 5.0g
琼脂15.0g
氯化钠 5.0g
色素 2.3g
抑制剂 5.0g
去离子水（平板）1000ml
最终pH 7.1±0.2（25℃）
【使用方法】
1.称取显色培养基干粉47.3g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，充分溶解，121℃高压灭菌15min，冷至50℃左右。
2.取10支配套试剂分别加入1mL无菌水，使之完全溶解。
3.将配套试剂加入到已冷至48℃左右基础培养基中，充分混匀后倾注无菌平皿。
4.按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液，进行增菌培养后，用接种环取1环增菌液，划线接种于显色平板上，置于36±1℃培养24-48小时。
5.观察结果。
致病性李斯特24h后开始出现蓝绿色，至36～48h蓝绿色明显。
挑取显色平板上呈蓝绿色光滑规则，直径约1～2mm的可疑单菌落进行进一步的试验。
6.对疑似单增李斯特氏菌菌落可使用HK-MID Listeria或API20E或生化管进行下一步的鉴定。
注：如产品类型为干粉，按上述1-6进行操作;若为即用型平板，按4-6进行操作即可。
单核细胞增生李斯特氏菌检验操作规程
单核细胞增生李斯特氏菌测定1 提示1.1 注意无菌操作。
2目的用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）的测定3检测依据《食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌测定（GB 4789.30-2016）》。
4适用范围本法适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的测定。
5试验材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：5.1冰箱。
5.2 恒温培养箱。
5.3 均质器。
5.4 显微镜。
5.5 电子天平。
5.6 锥形瓶。
5.7 无菌吸管、微量移液器及吸头。
5.8 无菌平皿。
5.9 无菌试管。
5.10 离心管。
5.11 无菌注射器。
5.12 单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)ATCC19111或CMCC54004,或其他等效标准菌株。
5.13 英诺克李斯特氏菌(Listeriainnocua)ATCC33090,或其他等效标准菌株。
5.14 伊氏李斯特氏菌(Listeriaivanovii)ATCC19119,或其他等效标准菌株。
5.15 斯氏李斯特氏菌(Listeriaseeligeri)ATCC35967,或其他等效标准菌株。
5.16 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)ATCC25923或其他产β-溶血环金5.17 马红球菌(Rhodococcusequi)ATCC6939或NCTC1621,或其他等效标准菌株。
5.18 小白鼠:ICR体重18g～22g。
5.19 全自动微生物生化鉴定系统。
6.培养基和试剂6.1 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤(TSB-YE):。
6.2 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂(TSA-YE):。
6.3 李氏增菌肉汤LB(LB1,LB2):。
6.4 1%盐酸吖啶黄(acriflavineHCl)溶液:。
6.5 1%萘啶酮酸钠盐(naladixicacid)溶液:。
(十)-单核细胞增生李斯特氏菌检验标准操作程序
DBS22 DBS22/019—2012吉林省食品安全地方标准食品中单核细胞增生李斯特菌的定量检测2013年发布 2013年实施吉林省卫生厅发布前言本标准根据GB/T1。
1—2000《标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写规则》的要求编写.本标准分为两种检测方法：第一法:单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法；第二法：MPN计数法。
其中第一法适用于污染较严重的食品，第二法适用于单核细胞增生李斯特氏菌含量较低而杂菌含量较高的食品。
本标准负责起草单位：吉林省疾病预防控制中心、长春市疾病预防控制中心.本标准负责起草人:刘桂华、龚云伟、李月婷、赵薇吉林省食品安全地方标准食品中单核细胞增生李斯特菌的定量检测1 范围本操作程序规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)的定量检验方法.本操作程序适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定量检验。
2 设备和材料除微生物实验室常规无菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2。
1 冰箱：2℃～5℃和—18℃.2.2 恒温培养箱：30℃±1℃、36℃±1℃.2.3 均质器。
2.4 显微镜:10×～100×.2。
5 电子天平:感量0。
1 g。
2.6 锥形瓶:100 mL、500 mL。
2。
7 无菌吸管:1 mL（具0。
01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）。
2.8 无菌平皿:直径90 mm。
2。
9 无菌试管：16 mm×160 mm.。
2。
10 离心管:30 mm×100 mm.2。
11 无菌注射器:1 mL。
2。
12 金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）。
2.13 马红球菌（Rhodococcus equi）。
2。
14 全自动微生物生化鉴定系统。
3 培养基和试剂3。
1 含0。
6％酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤（TSB-YE)：见附录A中A。
1.3。
2 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂（TSA-YE）：见附录A中A.2。
单增李斯特菌使用说明
面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数
的增加，细菌的活力会逐渐下降。
2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆
菌落进行后续操作。
冷 冻 管 开 封 ：
用浸过 75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌 株 复 溶 ：
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取 1ml 左右复溶液，加入到冷冻
管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培
养。细菌在 30-‐35℃培养箱中培养 24-‐48h，真菌在 23-‐28℃培养箱中培养 24-‐72h
储存温度：-‐80℃
基 因 组 ：
单增李斯特菌
简 介 ：
斯特菌（学名：Listeria monocytogenes），又名单核球增多性李斯特
菌、李氏菌，是一种兼性厌氧细菌，为李斯特菌症的病原体。李斯特菌是
革兰氏阳性菌，属厚壁菌门。它主要以食物为传染媒介，是最致命的食源
性 病 原 体 之 一 。
操 作 说 明 ：
1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表
（必要时，可适当延长培养时间）。
菌 株 传 代 ：
将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量
增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50μl 新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓
慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。
单增李斯特菌
编号
名称
北京华越洋生物 NRR00470
单增李斯特菌
单增李斯特氏菌说明书安全操作及保养规程
单增李斯特氏菌说明书安全操作及保养规程一、引言单增李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一种常见的食品中毒病原菌，可引起人类严重的感染。
为了确保操作过程的安全性和实验结果的准确性，本文档将介绍单增李斯特氏菌的安全操作和保养规程。
二、实验前准备1.工作区域：选择干净整洁、通风良好的实验室，并确保无人员流动和非实验人员进入实验区域。
2.实验器材：准备好需要使用的培养皿、试管、移液器、离心机等实验器具，并进行消毒处理。
3.个人防护措施：穿戴实验服、手套、护目镜等个人防护装备，避免直接接触菌株。
三、操作步骤1.培养基准备：根据实验需求，制备适当培养基，并严格按照配方进行配置、混合和消毒。
2.菌株接种：取一支保存有单增李斯特氏菌的细菌种子液，并使用无菌的移液器将其接种到培养基中。
3.培养条件：将接种好的培养基置于恒温培养箱中，以适当的温度和湿度进行培养。
根据具体需要，可以选择不同的培养条件。
4.培养时间：根据菌株的生长特性和实验目的，设定适当的培养时间。
在培养过程中，定期观察培养基的变化情况。
四、实验后处理1.菌株保存：实验结束后，将培养好的菌株进行分装并保存。
使用无菌的容器和保护液，防止菌株失活或变异。
2.器材清洗：实验器材需要彻底清洗，以防止交叉污染。
使用适当的消毒剂和清洁剂，对实验教具进行彻底清洁和消毒处理。
3.工作区清理：清理工作区域，包括实验台面、废弃物和其他杂物的清理。
确保实验室的环境整洁，以减少潜在的污染风险。
五、安全注意事项1.个人防护：在实验操作过程中，要正确佩戴实验服、手套、护目镜等个人防护装备，避免直接接触菌株。
2.实验环境：选择合适的实验环境，保持实验室的通风良好，并避免非实验人员进入实验区域。
3.消毒处理：在实验前后对实验器材、工作区域进行彻底的消毒处理，以减少交叉污染的风险。
4.废弃物处理：将实验中产生的废弃物，如培养基、菌株等，正确处理和清理，并根据实验室的要求进行垃圾分类处理。
单增李斯特氏菌检测详解
鉴定
血清学检验 菌悬液于80℃水域中加热1h，离心弃上清， 剩余液与沉淀混匀制成菌悬液，进行血清 学玻片凝集试验。
单核细胞增生李斯特氏菌：1/2A，1/2B， 1/2C，3A，3B，3C，4A，4AB，4B，4C， 4D，4E，7
质量控制
每次检验均需用标准阳性菌株和阴性菌株 进行质量控制。 样品制备的同时，在空白对照FB1增菌液中 加入新鲜配制的每毫升含有10个～100个单 核细胞增生李斯特氏菌的稀释液1mL和阴性 培养物，按检验程序进行同步检验。
鉴定
溶血试验
刺种7％羊血琼脂平板，并刺种阳性对照菌（单核
细胞增生李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌）和阴性
对照菌（英诺克李斯特氏菌），30℃培养24h～ 48h。
单核细胞增生李斯特氏菌 窄小的β溶血环
西尔李斯特氏菌
窄小的β溶血环
绵羊李斯特氏菌
大的β溶血环
其他
不溶血
鉴定
动力试验 穿刺SIM半固体培养基，于室温（20℃～25℃）
显色培养基
CHROMagarTM Listeria上单细胞增生李斯特 氏菌菌落特征
225mL FB1 30℃±1℃培养25h±1h，吸取 1mL，加入10mL FB2增菌液中30℃±1℃二 次增菌25h±1h。
VIDAS快速筛选（可选）
FB2增菌液进行VIDAS快速筛选。 筛选为阴性的结果可直接报告未检出。 筛选为阳性的结果继续分离培养和鉴定。
分离培养
取增菌液一环，划线分离于选择性培养基 OXA、PALCAM上，35℃±1℃培养24h～48h。
报告结果
协同溶血试验、血清学试验可根据需要进 行，常规检验可不进行这些试验。
报告阳性结果：检出单核细胞增生李斯特 氏菌。
HBIS单增李斯特氏菌生化鉴定条说明书(HBIS03)
单增李斯特氏菌生化鉴定条使用说明书（HBIS03）
1、实验准备：从包装盒中取出一条生化鉴定条，打开盖子，用打孔器开孔或直接把膜撕掉。
如果染
菌或变色，则不能使用，重新拿一条。
注：打孔器用75%酒精擦拭后使用。
2、接种方法：
取TSA-YE平板上的蓝色菌落进行过氧化氢酶试验并接种于TSB-YE肉汤于35C培养24h，用TSB-YE肉汤培养物分别接种SIM生化管、硝酸盐肉汤、MR-VP、葡萄糖、麦芽糖、七叶苷、甘露醇、鼠李糖、木糖、尿素酶。
本鉴定条不含三糖铁琼脂。
请参照SN/T0184. 1-2005标准判断结果。
菌悬液法：取一内盛2ml无菌水或无菌生理盐水试管，用接种环挑取TSB-YE肉汤培养物于无菌水中制成0.5麦氏浊度的均一细菌悬液，每孔加入100ul菌悬液。
其中SIM生化管（安瓿瓶）采用穿剌接种。
3、接种完后做好标记，盖上盖子，放入底托中，放置35C （SIM生化管20-25C ）培养。
4、本套成套生化管不含V-P试剂盒和甲基红试剂盒，需另购。
5、培养结束后，放在记录卡上观察。
单核细胞增生李斯特氏菌检验培养基和试剂(一)
单核细胞增生李斯特氏菌检验培养基和试剂(一)单核细胞增生李斯特氏菌（LM）是一种由李斯特氏菌属（Listeria）引起的感染性疾病，该疾病主要感染免疫功能低下人群，通常会导致败血症和脑膜炎等严重并发症，严重威胁人类健康。
因此，开发出一种快速、敏感、高效的LM检验培养基和试剂至关重要，这可以加速LM 的检测和诊断，有效地减少疾病的传播。
一. 检验培养基1. 构成成分：单核细胞增生李斯特氏菌检验培养基是由肉汤、肉汤胰蛋白胨、乳糖、黄曲霉素、普鲁兰甲酸和酵母提取物等组成的。
2. 作用：肉汤是一种富含氮源和其他必需营养成分的培养基，在培养微生物中发挥着重要的作用。
肉汤胰蛋白胨是一种蛋白质水解物，可为细菌提供营养和生长因子，促进其繁殖。
乳糖则是一种碳源，能够促进细胞的代谢和繁殖。
黄曲霉素作为一种广谱抗生素，可以有效地抑制杂菌的生长。
普鲁兰甲酸和酵母提取物则可以用来增加LM在培养基上的特异性和灵敏度。
3. 优点：单核细胞增生李斯特氏菌检验培养基在培养LM时具有快速、敏感、特异性好等优点，可以大大缩短LM的检测时间，确保病菌的检测率。
二. 检验试剂1. 依赖性及非依赖性试剂：检验试剂可分为依赖和非依赖试剂。
依赖试剂需要依赖细菌代谢产物或生长结果的变化来作出结果，如葡萄糖酶试剂。
而非依赖试剂则不需要依赖于细菌代谢的结果，如反应纸片试剂。
2. LM检测常用试剂：LM检测常用试剂包括气体生成剂试剂和反应纸片试剂。
前者是一种单元试剂，含有半胱氨酸脱氨酶和甲酸氢化酶等催化剂，当培养基内细菌产生气体时，该试剂会发生颜色变化，表示LM检测阳性。
而反应纸片试剂则能够迅速地检测LM生长的结果，并呈现出明显的颜色变化。
这种试剂具有使用方便、结果稳定等优点。
3. 优点：LM检验试剂具有便于使用、结果稳定和灵敏度高等特点，可以有效地加速LM的检测和诊断，从而避免其传播和蔓延。
结论：单核细胞增生李斯特氏菌检验培养基和试剂是一对极为重要的检测手段，在LM的检测过程中发挥着至关重要的作用。
单核细胞增生李斯特氏菌套装生化鉴定管10种使用说明
单核细胞增生李斯特氏菌套装生化鉴定管10种使用说明规格：10支/套产品用途：用于李斯特氏菌的生化鉴定保存：2 25℃避光保存，有效期1年。
使用方法：1、从纯化平板上挑取待检菌落于生理盐水中，稀释制备成0.5麦氏浊度的菌悬液；2、使用配套砂轮划割安瓿瓶蓝点正下方瓶颈处，背向蓝点掰开安瓿瓶（戴手套操作），摆放至安瓿瓶盒中；3、移液器移取50~100ul菌悬液加至安瓿瓶中（斜面生化管需沿斜面滴加菌悬液、半固体需穿刺接种）；4、盖上安瓿瓶盒盖，培养。
套装组成及判断方法：编号产品名称数量培养（36℃）阳性结果阴性结果21406SIM动力试验管124-48小时见注意事项1见注意事项1 207063%过氧化氢溶液1见注意事项2见注意事项2 20604缓冲葡萄糖蛋白胨水22-5天红色（见注意事项3）黄色、棕色或不变色20311甘露醇发酵管124-48小时黄色绿色或蓝色20606鼠李糖发酵管124-48小时黄色绿色或蓝色21203葡萄糖发酵管124-48小时黄色绿色或蓝色21404麦芽糖发酵管124-48小时黄色绿色或蓝色21405木糖发酵管124-48小时黄色绿色或蓝色20407七叶苷发酵管124-48小时黑色不变色所需配套产品：1、20605甲基红试剂2、20513V-P试剂3、50303安瓿瓶试验盒注意事项：1、SIM动力试验管为穿刺接种（使用接种针挑取单菌落直立刺入半固体琼脂2/3处，并且沿穿刺线直立抽出，避免倾斜）。
凡是同时满足有动力（穿刺线处生长向四周扩散生长）、变黑（产硫化氢）等条件的菌落均判定为阳性；其它情况为阴性。
2、过氧化氢酶试验：接种针挑取单菌落于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2ml，30s内产生气泡为阳性，不产生气泡为阴性。
3、20604缓冲蛋白胨水2支，分别用于MR试验和VP试验。
MR试验：培养后，滴加2~3滴甲基红试剂（20605），轻轻震荡，阳性菌变红，阴性菌变黄、不变色或其它颜色。
单增李斯特菌的检验方法
单增李斯特菌的检验方法
一. 增菌：
1. EB肉汤
2. LB 肉汤（根据我的实验结果和请教其他老师的说法，LB 增菌效
果优于EB）
LB分为LB和LR,两者基础培养基相同，区别在于添加辅助试剂丫啶黄、萘啶酮酸的量（基础培养基-- 杭州天河生物试剂公司；丫、萘—上海疾控中心。
上海的辅助试剂已按一定浓度配置成溶液, 使用起来比较方便）
25g样品加入到225mlLB增菌液中，30C培养24h，吸O.lmlLB i
增菌液到LR增菌液中，30C培养24h。
二.选择分离
挑一环LB2增菌液划线接种到科玛嘉选择性培养基上，37 C培养24h,观察现象，可疑菌落在此培养基上为兰色，周围有白晕的菌落。
（国标上使用的选择性培养基是MM,A 但是其选择性不强,科玛嘉选择性培养基是法国制造，选择性比MMA强的多，而且现象明显，许多发达国家使用。
此培养基是国标编委白萍女士向我推荐的）
三.生化实验
挑可疑菌落穿刺接种到SIM, 25C培养3---5d ,观察伞状生长情况、TSI （三糖铁）斜面30C培养24h—48h,观察，单增李斯特菌在TSI上应该是底面、斜面均产酸，不产H2S不产气的培养物•
这是单增李斯特菌落在SIM动力培养基上的伞状情形再挑取TSI上培养物接种其他生化管。
单核增生李斯特氏菌检测
在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整 齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。 在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色， 刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。 在0ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)琼脂上， 用45°角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察， 菌落呈兰色、灰色或兰灰色。
单核增生李斯特氏菌 检测概述
李斯特氏菌属
李斯特氏菌属（Listeria ）普遍存在于环境中，最新的分类 学研究表明，其分为六个种： 单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes） 绵羊（伊氏）李斯特氏菌（Listeria ivanovii） 英诺克（无害）李斯特氏菌（Listeria innocua） 斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeri） 威氏李斯特氏菌（Listeria welshimeri） 格氏李斯特氏菌（Listeria grayi） 在李斯特氏菌属的六个种中，只有两种致病菌：单核增生 李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌可以引起老鼠和其他动物发 病。但是，其中通常只有单核增生李斯特氏菌和人类的李 斯特氏菌症（listeriosis）相关。因此，李斯特氏菌中最有检 测意义的是单核增生李斯特氏菌。
LB和BLB
只有选择性没有区别性
LEB是在TSB-YE的基础上加入盐酸吖啶黄、 萘啶酮酸和放线菌酮等选择性因子；加入 的丙酮酸钠，有助于受损细胞的恢复；不 含七叶灵和柠檬酸铁铵，无颜色反应 BLB是在LB基础上加入缓冲体系：磷酸二 氢钾和磷酸氢二钠
检测程序---分离
分离培养基有：OXA、PALCOM、LPM、MOX 等。分离原理主要是基于李斯特氏菌具有β－D－ 葡萄糖苷酶的活性，能水解培养基中的七叶灵， 产生七叶苷，与铁离子产生颜色反应而使菌落为 棕褐色，并带有褐色晕圈，而致病性和非致病性 李斯特氏菌病都能发生这种反应