沙门氏菌操作记录(质控)
GB 4789.4-2010食品微生物学检验 沙门氏菌检验
食品微生物学检验 沙门氏菌检验GB GB 4789.44789.44789.4-20-20-201010北京陆桥技术有限责任北京陆桥技术有限责任公司公司技术服务电话：010-******** 销售服务电话：010-********技术部邮箱：luqiaotech@www. beijinglandbridge .com北京陆桥技术有限责任公司目 录�沙门氏菌简介�2010版国标主要修订内容�沙门氏菌的检验步骤及注意事项�沙门氏菌检验过程中的常见问题www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司沙门氏菌简介�沙门氏菌属沙门氏菌属：肠杆菌科：肠杆菌科�沙门氏菌能引起胃肠炎、伤寒、败血症等人类疾病，严重时能导致死亡。
�种类繁多，抗原结构复杂，种类繁多，抗原结构复杂，在在《ANTIGENIC FORMULAE OF THE SALMONELLA SEROVARS FORMULAE OF THE SALMONELLA SEROVARS》》(2007 9th edition)(2007 9th edition)中已公布了中已公布了2579个血清型个血清型。
�食物是人类感染沙门氏菌的主要途径。
www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司�形态特征：形态特征：革兰氏阴性革兰氏阴性革兰氏阴性、、两端钝圆短杆菌两端钝圆短杆菌，，无芽孢无芽孢，，一般无荚膜，除鸡沙门氏菌一般无荚膜，除鸡沙门氏菌和和雏沙门氏菌外，都有周身鞭毛，运动力强�培养特性：需氧或兼性厌氧，10℃~42℃都可生长，最适生长温度为37℃，最适pH 为6.8~7.8�革兰氏阴性、需氧或兼性厌氧无芽孢杆菌沙门氏菌简介：生物学特征www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司�修改了标准的中英文名称�修改了标准的范围�修改了培养基和试剂；�修改了设备和材料；�修改了附录修改了附录A A （规范性附录）培养基和试剂2010版国标主要修订内容www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司——关于培养基和试剂的修订说明�修改了修改了HE HE HE琼脂和三糖铁琼脂的配方。
检测沙门氏菌的注意事项
检测沙门氏菌的注意事项沙门氏菌是一种革兰氏阴性杆菌，常引起人和动物的食物中毒。
如何正确地进行沙门氏菌的检测非常关键，下面是一些注意事项：1.实验室条件：执行沙门氏菌的检测需要一个干净、整洁、无菌的实验室环境。
实验室应具备适当的设备，如培养箱、显微镜、离心机等，并保持适宜的温度和湿度。
2.培养基的选择：沙门氏菌的生长需要适宜的培养基。
常用的培养基包括牛肉提取物琼脂（B G A）、X L D琼脂、S S琼脂等。
在选择培养基时，应根据需要检测的样品类型和具体实验要求进行选择。
3.样品处理：在进行沙门氏菌检测前，需要对样品进行适当的处理。
不同样品的处理方法有所不同，如食品样品通常需要经过样品预处理、富集培养和菌落鉴定等步骤。
要注意避免交叉污染，使用无菌操作器具，避免使用过期的培养基和试剂。
4.培养条件：沙门氏菌的最适温度为37℃，在此温度下生长最佳。
因此，在进行培养时需要控制适宜的温度。
同时，还需要提供适当的氧气条件，如使用倾斜培养法，避免菌落重叠。
5.鉴定方法：沙门氏菌的鉴定通常包括生理生化试验和分子检测方法。
常用的生理生化试验如糖发酵试验、产气试验、硫代硫酸盐试验等。
分子检测方法如聚合酶链式反应（P C R）、荧光原位杂交（F I S H）等。
为了提高准确性和可靠性，建议在实验过程中使用多种方法进行鉴定。
6.质量控制：为了保证检测结果的准确性，需要进行质量控制。
质控样品可以是已确认为阳性或阴性的样品，用于验证检测方法的灵敏度和特异性。
同时，在实验过程中还需要进行一些质量控制措施，如检测前对培养基进行无菌性验证，对实验操作进行记录和审核等。
7.数据分析和解读：在完成实验后，需要对结果进行适当的数据分析和解读。
对于阳性结果，应注意区分真阳性和假阳性。
可以使用统计学方法对阳性结果进行分析，评估其显著性和可靠性。
总之，正确进行沙门氏菌的检测非常重要，需要注意实验室条件、培养基的选择、样品处理、培养条件、鉴定方法、质量控制以及数据分析和解读等方面。
沙门氏菌检验
沙门氏菌检验程序
36 ℃±1 ℃，18 h～24 h XLD（或HE、科玛嘉显色培养基） 36 ℃±1 ℃，18 h～24 h
挑取可疑菌落
TSI，赖氨酸，NA， 靛基质， 尿素 (pH 7.2)， KCN H2S+靛基质- 尿素KCN- 赖氨酸+ H2S+ 靛基质 + 尿 素- KCN-赖氨酸+ H2S-靛基质-尿素 -KCN- 赖氨酸+/-
食品卫生微生物学检验（GB/T4789.4）
吉林省疾病预防控制中心
刘桂华
1 前增菌； 2选择性增菌；
3 分离；
4 生化鉴定；
5. 血清学鉴定；
6.报告。
1 2 3 4 5
前增菌 选择性增菌 分离 鉴定 报告
检样 25g（mL）样品+225 mLBPW 36 ℃±1 ℃，8 h～18h 1 mL+TTB 10 mL 42 ℃±1 ℃，18 h～24 h BS 36 ℃±1 ℃，40 h～48 h 1 mL+SC10 mL
河生肠杆菌20E鉴定结果
应用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片进行测试，卡片含 有干燥的抗菌药物和生化基质。先制备一定浓度的欲鉴定菌
株的菌悬液，然后将菌悬液接种到各种细菌的小卡上，将其
放入具有读数功能的孵箱内，每隔一定时间，仪器会自动检 测培养基的发酵情况，并换算成能被计算机所接受的生物编
码。最后由计算机判定，打印出鉴定结果。
I-BS
C-HE
I-HE
I-XLD
C-XLD（变形菌落-错误）
样品+BPW+SC+BS
I-BS
C-BS
C-BS
I-BS
I-BS
C-BS
沙门氏菌原始记录表
第 页，共 页沙门氏菌检验原始记录表检测员： 校核人： 审核人：年 月 日 年 月 日 年 月 日样品编号检测类别环境条件温度： ℃ 湿度： ％检测标准 医疗水污染物排放标准 医疗机构污水和污泥中沙门氏菌的检验方法 GB18466-2005 附录B设备名称设备编号增菌□ 污水 移取200mL 污水，用灭菌滤膜抽滤，用100mL 二倍浓度SF 增菌液将滤膜上的杂质洗脱到灭菌三角烧瓶中，摇匀。
37℃下培养12~24h□ 污泥 称取20g 污泥，加200mL 灭菌水，制成1:10混悬液，移取100mL 混悬液，加入到装有100mL 二倍浓度SF 增菌液的已灭菌三角烧瓶中，摇匀。
37℃下培养24h检验项目现象初判断分离 培养SS 培养基平板 37℃培养， h （24~48h ）BS 培养基平板 37℃培养， h （24~48h ）生化试验表1 在TSI 试验培养基内的反应结果TSI 培养基 37℃培养， h （18~24h ）初步判断斜面 底层 产气 硫化氢注：K ：产碱，A ：产酸；+：阳性，—阴性：初步判断：可疑沙门氏菌或非沙门氏菌。
表2 生化反应初步鉴定表葡萄糖甘露醇 麦芽糖乳糖 蔗糖 靛基质 硫化氢 动力 尿素酶注：＋阳性；－阴性；＋/－阳性或阴性表3 补做试验（选做）侧金盏花醇水杨素 氰化钾结果判断注：＋：阳性，－：阴性；结果判断：沙门氏菌或非沙门氏菌。
血清学鉴定盐水 ，多价抗O 型抗血清（ A-F ） 。
结果 mL 样品中 沙门氏菌 备注。
沙门氏菌检测原始记录
德州市德城区疾病预防控制中心
检测原始记录之一
共页第页检品编号物态/颜色
检测项目沙门氏菌检验检测依据GB 4789.4-2010 食品微生物学检验沙门氏菌检验
设备名称隔水式电热恒温培养箱设备编号
1 检验方法：
1.1 前增菌：加225mL BPW增菌液均质混匀，℃培养小时，日时至日时。
1.2 增菌：轻轻摇动培养物，取1mL接种于10 mL TTB内，℃培养小时，日时至日时。
同时另取1mL接种于10mL SC内，℃培养小时，日时至日时。
1.3 分离：分别用接种环取增菌液1环划线接种BS琼脂平板一个，℃培养小时，日时至日时。
同时另取增菌液1环划线接种沙门氏菌显色培养基平板一个，℃培养小时，日时至日时。
观察菌落生长状况：可疑菌落生长。
1.4 初步生化：若有可疑菌落生长，挑取各选择性平板上2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于℃培养小时，日时至日时，也可同时接种蛋白胨水（供作靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN），于℃培养小时，日时至日时，必要时进行系统生化鉴定及血清学凝集。
初步生化结果：
葡萄糖乳糖蔗糖H2S 产气动力靛基质pH7.2尿素氰化钾赖氨酸脱羧酶
1.5系统生化鉴定：API 20E 生化条：
1.6 血清学凝集：
2 检验结果：根据GB 4789.4-2010食品微生物学检验沙门氏菌检验，在中沙门氏菌。
检测起止时间：年月日时至年月日时
检测人：审核人：
检测原始记录、检测报告存根、检测申请及受理单等合并归档保存。
DCQJY/JLBG 127。
食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验
沙门氏菌检验程序
1 取消样品分类，前增菌液统一为“缓冲蛋白胨 水” 原国标：BPW FDA、AOAC：多种前增菌液 ISO：BPW
2 对所有样品均进行8-18h前增菌 原国标只对冻肉、乳品、蛋品等加工食品进 行前增菌，FDA、AOAC、ISO、Canada MFHPB、CCFRA等组织或国家对所有样品都 进行前增菌。
65.3 81.0 52.0 83.2 80.0 83.0 86.2 106.6 77.7 68.4 98.4 71.6 100.0
I： 进口 C：国产
SS琼脂 上面的志 贺氏菌和 沙门氏菌
C-BS
I-BS
C-HE
I-HE
I-XLD
C-XLD（变形菌落-错误）
I-XLD
样品+BPW+SC+BS
DUPONT Qualicon BAX System 应用DNA分子核酸探针或基因探针技 术制造的全自动PCR分析仪。将已知核 苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法 标记，加入已变性的被检DNA样品中， 在一定条件下即可与该样品中有同源序 列的DNA区段形成杂交双链，从而达到 鉴定样品中DNA的目的。
AOAC 967.25－967.28
处理样品 35℃ 1mL+10mLSC 35℃ 24±2h XLD & HE & BS 35℃ TSI 35℃ 纯培养物 尿素酶＋ 非沙门菌 尿素酶－ 24±2h（BS 24h&48h） & LIA 24±2h 不纯培养物 MAC or XLD or HE 纯培养物 非 沙 门 菌 非 沙 门 菌 24±2h 1mL+10mLTT
35± 1℃ 18~24h & 48h TSI & LIA 血清学试验
沙门氏菌检测原始记录
菌落形态
分离培养
BS琼脂
培养条件
HE琼脂
培养条件
生化试验
培养条件
现象
初步判定
三糖铁琼脂
赖氨酸脱羧酶试验培养基
营养琼脂平板
生化反应初步阴性对照
多价菌体抗原（O）
多价鞭毛抗原（H）
检验结果
□25g(mL)样品中未检出沙门氏菌
□25g(mL)样品中检出沙门氏菌
备注
样品编号
样品名称
检验依据
GB4789.4-2010沙门氏菌检验
检验环境
温度： ℃ 湿度： %RH
检验日期
检验地点
□无菌室1 □无菌室2 □阳性对照室 □微生物限度室
仪器设备名称及编号
电子天平:有计量合格标识，并在检定/校准有效期内.
恒温培养箱:有计量合格标识，并在检定/校准有效期内.
电热恒温水浴锅：有计量合格标识，并在检定/校准有效期内.
样品制备
□固体和半固体样品：称取25g样品225mLBPW中，均质1min-2min
□液体样品：吸取25ml样品至盛有225mLBPW的无菌锥形瓶中,振荡混匀
前增菌
将上述样品混匀液于36℃培养8h-18h
增菌
轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1 mL，转种于 10 mL TTB 内，于 ℃培养h。同时，另取 1 mL，转种于 10 mL SC 内，于 ℃培养 h；
K：产碱，A：产酸；＋：阳性，－：阴性；＋（－）：多数阳性，少数阴性；＋/－：阳性或阴性。
沙门氏菌鉴定检验原始记录
检验：审核：报告日期：20年月日
XXXX食品有限Βιβλιοθήκη 司沙门氏菌鉴定检验原始记录
编号：ANST/JL/14
产品名称
生产日期及批号
批量
检验依据
GB4789.4-2010《食品国家安全标准食品中卫生微生物学检验沙门氏菌检验》
检验日期
20年月日
取样地点
1.前增菌：
取检样加入含BPW225mL的无菌均质袋中，拍打min，转入锥形瓶℃培养h；
2.增菌：
轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL，转种于10 mL TTB内，于℃培养h。同时，另取1 mL，转种于10 mL SC内，于℃培养h；
观察结果：□透亮，颜色无变化
□浑浊，颜色异常
3.分离：
分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板。于℃分别培养h（XLD琼脂平板）h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落,
表1在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果
三糖铁琼脂
赖氨酸脱羧酶试验
培养基
初步判断
斜面
底层
产气
硫化氢
注：K：产碱，A：产酸；＋：阳性，－：阴性；初步判断：可疑沙门氏菌属或非沙门氏菌。
表2生化反应初步鉴别表
硫化氢（H2S）
靛基质
pH7.2尿素
氰化钾（KCN）
赖氨酸脱羧酶
反应序号（判断）
注：＋阳性；－阴性；＋/－阳性或阴性；反应序号（判断）：A1、A2、A3或非沙门氏菌。
BS上可疑菌落形态：※菌落颜色：□黑色有金属光泽□棕褐色□灰色□灰绿色
※周围培养基：□呈黑色或棕色□不变□※□其它：
XLD上可疑菌落形态：□粉红色□黄色□黑色中心□全部黑色的菌落□其它：
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
XXX中心
沙门氏菌鉴定原始记录
报告单号：共页第页样品名称: 样品数量：
生产厂家：样品性状及包装：
样品来源：检测地点：
采或送样单位：采或送样人：
检验依据：编号或批号：
收样日期：检验日期：
检验项目：分离鉴定致病菌
一、危险性评估：
二、样品前处理
共页第页
血清学凝集试验：
菌种处理：
终末消毒：
四、使用设备、标准菌株和主要试剂：
1、使用设备
恒温培养箱：
恒温培养箱：
显微镜：
高压蒸汽灭菌器：
生物安全柜：
2、标准菌种来源、菌号及代数
沙门氏菌标准菌株：
3、主要试剂、批号及配制记录
SC增菌液：
TTB增菌液：
BS琼脂平板：
科玛嘉沙门氏显色培养基：
三糖铁琼脂：
沙门氏菌诊断血清：
生化鉴定管：
五、检验结果
检毕时间年月日检测者：复核者：
XXX中心
沙门氏菌鉴定原始记录
报告单号：共页第页样品名称: 样品数量：
样品性状及包装：检测地点:
收样日期：检验日期：
检验依据： GB4789.4-2010
检验项目：分离鉴定沙门氏菌
一、样品前处理
用0.45um滤膜过滤500ml水样，将滤膜无菌手续剪碎，分别取适量滤膜进行如下操作。
共页第页
血清学凝集试验：
盐水对照：
沙门氏菌A-F多价O血清：
O4:
O5:
H多价2：
Hf：
三、检验结果
检毕时间年月日检测者：复核者：。