序贯法测定半数致死量
第十章半致死剂量
2、根据回归方= 20.9376 + 8.1526 x y
时的x值 （1）计算当 ）计算当y=5时的 值 时的
y=5
x = ( 5 a ) / b = 3.1815
值的反对数， （2）取x值的反对数，得LD50 ） 值的反对数
LD50 = 1518.7773
累计 存活数 32 22 13 6 3 1 0
累计 死亡率%
0 4.3478 23.5294 64.7059 50% 86.3636 96.5517 100
100050 3.000 1200 3.079 3.079 1400 3.146 1400 3.146 1600 1800 2000 3.204 3.255 3.301
132465剂量对数累计死亡率307923529314664706兽医生物统计第十章animalscience3累计法测定ld50优缺点简便快速粗略不精确兽医生物统计第十章animalscience三序贯法测定ld50剂量组按等比级数分46组实验从最可能接近ld50的剂量组开始一只一只动物进行阳性反应下一只动物用低一级剂量阴性反应下一只动物用高一级剂量统计各组动物数取加权平均数的反对数得到ld50兽医生物统计第十章animalscience序贯法测定ed50实例50测定剂量按等比级数分组r1586冯海华等2002中国兽医科技321剂量mgkg剂量对数3763057555968077589465097611501211764238091376710111213141516171819序贯法测定ed50实验记录表兽医生物统计第十章animalscience序贯法测定ed50实例序贯法测定ed50实验结果分析表05755077580976111764137673763596894651501223809剂量mgkg阳性动物数阴性动物数合计动物数nnx310328784970584阳性反应率剂量对数x44441001019189465ed50lged5050兽医生物统计第十章animalscience序贯法测定ed50实例lged5009971取反对数得到
实验2 LD50的测定
半数致死量的意义
测定药物的LD50是药物急性毒性实验的重 要内容。 LD50是恒量药物急性毒性的重要指标。
LD50的测定
一、测定LD50的常用方法：
1. 改良冠氏法：方法简单，计算简便。 2. 序贯法（上下法）：使用动物少，费时多， 不适于作用慢的药物 3. Biss法：设计严谨，结果可靠，是目前公认 的最佳方法，但计算复杂，一般需借助于计 算机或计算器才能进行计算。
100个自然数的随机排列
1 0 10 20 30 40 50 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Back
60
70 80 90
26 23 49 51 04 00 58 15 70 64
03 08 34 52 53 27 83 90 63 88
86 20 97 47 98 40 78 57 67 59
37 36 66 83 43 29 23 95 32 64
19 54 65 28 63 05 04 20 89 00
62 81 78 59 48 17 52 68 15 79
47 30 84 92 94 26 71 99 02 08
10 55 61 13 85 33 88 69 87 97
16 86 53 56 80 06 74 67 90 22
86 19 34 69 13 54 26 99 30 22
09 94 96 60 77 01 47 50 55 23
48 73 15 98 06 40 18 88 21 16
53 92 95 85 11 29 58 25 78 83
63 59 28 02 91 42 41 71 56 33
66 00 85 67 76 17 90 14 51 46
半数致死量的测定及其测定原理
半数致死量的测定半数致死量（LD50）是药物、毒物及病原微生物等毒力水平的一个标志。
它表示能使全部实验对象死亡半数的剂量或浓度。
由于生物间存在个体差异性，因此 LD50需用一批相当数量的实验对象进行实验方能测得，并且每种药物不同实验对象的 LD50值不相同。
测定 LD50的方法很多，如目测机率单位法、直线回归法、累计法及序贯法等。
由于寇氏法较常用，并有计算简便，结果较准确等特点，故专门介绍之。
【目的】用寇氏法测定敌百虫对小白鼠的经腹腔注射的 LD50和95%可信限。
【方法】寇氏法（ Karber法）【条件】1.剂量必须按等比级数（剂量对数按等级数）分组。
2.各组动物数应相等。
3.“反应”应大致呈正态分布。
最小剂量组的死亡率（Pn）应为0%，最大剂量组的死亡率（Pm）应为100%；如果 Pn<20%或Pm>80%需用校正公式计算；如Pn>20%或Pm<80%则不能用此法计算。
【步骤】1.预备实验（1）摸索上下限：即用少量动物逐步摸索出使全部动物死亡的最小剂量（Dm）和一个动物也不死亡的最大剂量（Dn）。
方法是据经验或文献定出一个估计量，观察 2～3只动物的死亡情况。
如全死，则降低剂量；如全不死，则加大剂量再行摸索，直到找出Pm=100%和Pn=0%的剂量，此两量分别为上下限。
（2）确定组数，组距及各组剂量①组数：一般5～8组，可根据适宜的组距确定组数，如先确定5组，若组距过大，可再增加组数以缩小组距。
有时也可根据动物死亡情况来决定增减组数。
②组距：指相邻两组剂量对数之差，常用“d”来表示。
D不宜过大，因过大可使标准误增大；也不宜过小，因过小则组数增多，各组间死亡率重叠造成实验动物的浪费。
组距大小主要取决于实验动物对被试因素的敏感性。
敏感性大者，死亡率随剂量增加（或减少）而增加（或减少）的幅度大，组距可小些；反之，敏感性小者，死亡率随剂量变化的幅度小，则组距应大些。
上下限之间的距离可作为敏感性大小的标志。
半数致死量的测定..
也可以直接按照前面的校正公式计算
计算步骤
2、求lgLD50的反对数LD50 3、求lgLD50的标准误SlgLD50 Pi(1 Pi) SlgLD50=d ni 4、求lgLD50的95%的置信区间 Ig-1（lgLD50 ± 1.96SlgLD50）
测定结果
某试剂的LD50值测定结果
对数剂量
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
+ + + + + + + + + -
20
21
22 23
1.95 1.90 1.85 1.80 1.75
+ + + x
整理与计算
对数剂量x 1.95 1.90 1.85 1.80 1.75 死亡 1 2 6 3 0 存活 0 1 2 5 3 合计n 1 3 8 8 3
寇氏法在实际工作中较常用，计算简便，结果 较准确。
【条件】 1.剂量必须按等比级数（剂量对数按等级数）分组。 2.各组动物数应相等。 3.“反应”应大致呈正态分布。最小剂量组的死亡率 （Pn）应为0%，最大剂量组的死亡率（Pm）应为 100%；如果Pn<20%或Pm>80%用校正公式计算； 如Pn>20%或Pm<80% 用此法计算结果不太准确。 3 Pm Pn 校正公式：lg LD50＝XK－d ( P 4 )
特别注意
后一动物剂量上升或下降由由前一动物的死 亡或存活决定，从第一只改变算起到最后一 只止，最后的终止号也作为一次实验结果。 若最后一只动物死亡，下降一格画“x”， 以存活计数；若最后用一只动物存活，上升 一格画“x”，以死亡计数。
LD50序贯法
LD50的意义：
LD50为半数致死浓度或半数致死量，是指以死亡为阳性药效反应、能使半数细胞或者动物死亡的浓度或者剂量。
作为反映毒力的定量指标，按理说应以该药能使细胞或者动物刚好致死的剂量的平均值最有代表性。
已有大样本动物实验证实，LD50相当于最小致死量。
由此可知，LD50以下的浓度或剂量为试验用药的安全浓度或安全剂量
药物浓度实验设计
我认为最实用的是“序贯法” 将细胞等量分组序贯地进行预实验，这时不用非要按照等比序列稀释药物。
选定大致致死量时，常配成10倍稀释或2倍稀释的一系列药液。
先用某一剂量，如不能致死动物则下一次用高一级剂量；如使动物死亡，则用低一级剂量。
如此序贯进行，当分组较细时，可以测得LD50，此法适用于短期内能判断死活的实验，个人认为比较适合测定药物细胞毒性。
在新药测定LD50时可用序贯法找寻致死量的大致范围。
当然，也可以先按照10倍稀释寻找大致范围，然后进一步按照2倍稀释来确定最终的LD50，这也就是所谓的“两步法”寻找药物致死的范围。
孙瑞元点斜法公式：这个计算方法是最简单实用的一种。
LD50=log-1【Xm-i（∑p-0.5）+i/4*(1-Pm-Pn)】
如果含有0%及100%死亡率时
LD50= log-1Xm-i（∑p-0.5）
备注：Xm为最大对数剂量；i为组距，组距要相等，即剂量或浓度成等比数列，例如：等比数列的比值为1：0.7，则i=log(1/0.7)=0.155; Pm为最高死亡率；Pn为最低死亡率。
序贯法测定原位凝胶材料OALA的LD50
鋈 母
．
序贯法测定原位凝胶材料 Ｏ Ｌ Ａ Ａ的 Ｌ Ｄ
顾 娜 ， 旭 邓联 东 。梁艳 琴 。王伟 伟 胡 人杰 李 ， ， ， ，
学院， 天津 ３ ０ ７ ） ０ ０ ３
摘要 目的： 测定小鼠静脉注射给予原位凝胶材料 Ｏ Ｌ Ａ Ａ的半数致死量（ Ｄ ）从而对该材料 的生物毒性进行评价 。方法 ： Ｌ ， 采用 Ｋ Ｍ种雄性 小鼠， 用急性毒性 实验 中的序贯法分别测定原位凝胶材料 ０ Ｌ 运 Ａ Ａ不同浓度相 同给药体积和相 同浓度不 同给药体积 的 Ｌ Ｄ） 。结果 ： 根据实验方 法提供 的计算公式得 出不 同浓度相 同给药体积的 Ｌ ｓ （ ． ￣ ．７ ） ｌ Ｌ （ Ｄｏ ７ ３ ０ ６ ｍｇ ＝ ５ ５ ｍ 给药体积为 ０ Ｌ２ ． ／０ ４ｍ ｇ 体重 ， 当于 １０ ￣ｋ ） 同浓度下不 同给药体积的 Ｌ ５ （ ．１０１ ３ ｍ （ 相 ５ ．ｍ ｇ， ６ 相 Ｄ０ ０３± ．１ ） Ｌ 浓度为 ７５ ｇｍ ， ＂于 ｌ６７ｍ ／ｇ ； ＝ ．３ ／ Ｌ 相 － ｍ ３ １． ｇ ）组织病 ｋ
（． 津 医科 大 学研 究 生 院 ， １ 天 天津 ３０ ７ ；． 津市 医 药科 学研 究 所 ， ０ ００ ２天 天津 ３０ ２ ；． 大学 化 学性毒性 ； Ａ Ａ； 序贯 法； 小鼠
Ｒ ６． ９ ５３ 文献 标 识 码 Ａ
理 学检 查显 示 死 亡 动物 肺 脏各 级 静 脉 中 Ｏ Ｌ Ａ Ａ凝 胶 材 料 广 泛 分 布 ， 致 血 管 阻塞 。结 论 ： Ａ Ａ静 脉 注射 Ｋ 小 鼠 。 同浓 度 相 导 Ｏ Ｌ Ｍ 不
同给 药体 积 的 Ｉ 为 １Ｏ６ ／ ， 同 浓度 不 同给 药体 积 的 Ｌ 为 １６ ｇ 。其 死 亡原 因主要 是 弥散 性肺 栓 塞 。 。 Ｄ ５ ．ｍｇ ｇ 相 ｋ Ｄｏ ｌ ． ＆ｇ ７ｍ
药理学-半数致死量(LD50)测定
半数致死量(LD50)
特点：1、是药物的剂量反应曲线上最敏感的 一点。
死亡率
50%
剂量
LD50
2、 测量简单，准确性高，误差小，易重复。
2020/7/28
实验目的
测定药物的LD50 了解常用的测定和计算方法
2020/7/28
实验方法
改良寇氏法 可直接用实验动物的死亡率进行计算，方法简 单，计算简便。
2 一组小鼠编号1-25，另一组小鼠编号26-50。 标签上排写编号，下排写体重，体重取整数。
3 根据Excell软件取随机数字,排序随机数字。 4 按随机数字取小鼠于另一鼠笼20/7/28
实验结果
解磷定LD50的实验结果
组别
1# 2# 3# 4# 5#
小白鼠 浓度
(只) （mg/ml）
10
1.5％
10
1.2％
10
0.96％
10
0.77％
10
0.61％
剂量 (mg/kg)
300 240 192 154 123
对数剂量
2.48 2.38 2.28 2.18 2.08
动物死亡数 死亡率
(只)
(％)
注：动物死亡数只统计给药后2小时内的死亡数
2020/7/28
3
1.5％
300
3
2#
3
0.75％
150
1
3#
3
0.375％
75
0
4#
3
0.188％ 35.5
0
2020/7/28
实验步骤
小鼠50只，称重，随即分为5组
1＃组10只
腹腔注射 1.5%的解 磷定溶液
药物半数致死量(LD50)的测定
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实验 药物半数致死量（LD50） 的测定——序贯法
实验目的
1. 掌握测定药物LD50的药理学意义、序贯法 的实验方法和计算方法；
2.熟悉盐酸普鲁卡因的毒性作用。
实验动物与实验器材
4. 实验结mg/kg C＝∑（R·logD）
R＝剂量组的动物只数
logD＝剂量D的对数值；
N＝实验动物总数＝∑R
注意事项
1. 对实验动物进行随机化分组； 2.各组药物浓度不能混淆； 3.给药剂量及部位要准确,进针的深浅一致；
1. 实验动物： 小白鼠（18-22g），雌雄各半 2.实验器材：
仪器：注射器、鼠笼、函数型计算器 药品：2％普鲁卡因、苦味酸溶液
实验步骤
1. 实验前按表3-6拟定实验的药物剂量，相邻两剂 量按等比安排。相邻两剂量对数差为0.046。
2.每实验组取取小鼠10只，雌雄各半，称重后用 苦味酸标记；
浓度
剂量D （mg/kg）
r＝ 0.046
2.22 ％
2％
1.8 ％
1.62 ％
1.45 ％
合计
表3-6 小鼠半数致死量实验结果
LogD
实验结果
R
R·log D
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
2.347
2.301
2.255
2.209
2.163
3. 先取小鼠1只，腹腔注射第一个剂量即2.2％普鲁 卡因0.1ml/10g，若第一只小鼠用药后未出现死亡， 下一只动物则用高一剂量，如出现死亡，下一只 动物应用低一剂量。在表中记录时，动物死亡用 “＋”表示，未死亡用“－”表示。若在同一剂量中 连续出现“－”两次，则下一次实验结束，最后一 只动物不做实验，但在表格中占一个，用E表示。
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3. 观察注射不同剂量的药品时小 白鼠所产生的急性毒性反应、
出现反应的时间以及死亡情况。
实验材料
2.实验仪器
实验原理
序贯法：选择一系列按等比级数排列的药物 剂量，将动物一只一只序贯地进行试验。
先选择一个近50%反应率的剂量，当动物出 现阴性反应时就选用较高一级的剂量给予下 一只动物； 当出现阴性反应时，就选用较低一级的剂量 给予下一只动物。
序贯法测定半数致死量（������������������������）
目录
1. 实验目的
2. 实验材料
3. 实 结果讨论与分析
1.基本掌握半数致死量 (������������50)的测定方法
4.加深理解 ������������50的意义。
实验目的
2.学习小鼠 的基本实验 技术
Copyright © 白亮亮 2017
实验方法
随机取鼠
腹腔注射 0.2mL/10g
观察 10min
阳性：降低一级药 物浓度注射下一只
阴性：增加一级药 物浓度注射下一只
记录数据
计算
实验结果
结果讨论
1.随着药物剂量的增加，小鼠的反应如何？ 2.本实验测出的LD50与书本上的是否相同？ 为什么？有哪些因素影响了实验结果？ 3.LD50的测定有何意义？