真菌镜检的实验室操作课件
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微生物检验常用技术与方法—临床真菌检验技术与方法(微生物检验课件)
临床真菌检验 技术与方法
掌握真菌的检验方法。 熟悉真菌标本采集及注意事项； 熟悉真菌的鉴定程序；真菌药物 敏感试验方法。
第一节 真菌形态检验技术
一、标本的采集和处理
1. 标本的采集—— 根据真菌感染部位采集不同的标本。 浅部真菌感染 取毛发、皮屑、指（趾）甲等标本
深部真菌感染
取痰液、脓汁、血液、脑脊液等标本
培养基用途 真菌的常规培养 真菌的常规培养 观察白假丝酵母菌的厚膜孢子 观察真菌菌落色素，用于鉴别 生化反应鉴别培养（红色癣菌和石膏样癣菌） 深部真菌培养 真菌的培养与鉴定
第二节 真菌培养技术
显色鉴定培养基
代谢基质 产色基团
原
真菌的酶
理
分解代谢基质
真菌特异性酶的 底物（无色）
产色基团游离 （显色）
4. 病理组织检查 用于深部真菌感染的诊断。
5. 核酸检测
用于真菌的分型鉴定。
有ELISA、生物学方法、薄层层析法、高效液相
6. 真菌毒素的检测 色谱法等多种方法。
7. G试验
用于念珠菌、曲霉菌等深部真菌感染的早期诊断。
返回章内容
第四节 真菌检验G试验、GM试验
应用背景
• 侵袭性真菌病临床表现不典型，确 诊通常需要侵入性的组织标本，因 此有较高的漏诊率。目前国内大多 数医院都在开展非侵袭性实验室技 术如G试验和GM试验，成为真菌 感染的诊断标准之一，以提高真菌 感染的阳性率。
同化氮源试验
• 检测真菌对氮源利用能力的试验，主 要用于鉴定酵母菌。
明胶液化试验
• 某些真菌具有明胶酶，可分解明胶蛋 白，使其失去凝胶性质而不能凝固。
尿素分解试验
• 某些真菌具有尿素酶，可分解尿素。
第三节 真菌的鉴定方法
掌握真菌的检验方法。 熟悉真菌标本采集及注意事项； 熟悉真菌的鉴定程序；真菌药物 敏感试验方法。
第一节 真菌形态检验技术
一、标本的采集和处理
1. 标本的采集—— 根据真菌感染部位采集不同的标本。 浅部真菌感染 取毛发、皮屑、指（趾）甲等标本
深部真菌感染
取痰液、脓汁、血液、脑脊液等标本
培养基用途 真菌的常规培养 真菌的常规培养 观察白假丝酵母菌的厚膜孢子 观察真菌菌落色素，用于鉴别 生化反应鉴别培养（红色癣菌和石膏样癣菌） 深部真菌培养 真菌的培养与鉴定
第二节 真菌培养技术
显色鉴定培养基
代谢基质 产色基团
原
真菌的酶
理
分解代谢基质
真菌特异性酶的 底物（无色）
产色基团游离 （显色）
4. 病理组织检查 用于深部真菌感染的诊断。
5. 核酸检测
用于真菌的分型鉴定。
有ELISA、生物学方法、薄层层析法、高效液相
6. 真菌毒素的检测 色谱法等多种方法。
7. G试验
用于念珠菌、曲霉菌等深部真菌感染的早期诊断。
返回章内容
第四节 真菌检验G试验、GM试验
应用背景
• 侵袭性真菌病临床表现不典型，确 诊通常需要侵入性的组织标本，因 此有较高的漏诊率。目前国内大多 数医院都在开展非侵袭性实验室技 术如G试验和GM试验，成为真菌 感染的诊断标准之一，以提高真菌 感染的阳性率。
同化氮源试验
• 检测真菌对氮源利用能力的试验，主 要用于鉴定酵母菌。
明胶液化试验
• 某些真菌具有明胶酶，可分解明胶蛋 白，使其失去凝胶性质而不能凝固。
尿素分解试验
• 某些真菌具有尿素酶，可分解尿素。
第三节 真菌的鉴定方法
真菌感染实验室检测讲解PPT共62页
真菌感染实验室检测讲解
36、如果我们国家的法律中只有某种 神灵， 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法， 总体上 来说， 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日，便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持，法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例，它们 迅速累 聚，进这是不 容忽视 的。— —爱献 生
66、节制使快乐增加并使享受加强。 ——德 谟克利 特 67、今天应做的事没有做，明天再早也 是耽误 了。——裴斯 泰洛齐 68、决定一个人的一生，以及整个命运 的，只 是一瞬 之间。 ——歌 德 69、懒人无法享受休息之乐。——拉布 克 70、浪费时间是一桩大罪过。——卢梭
36、如果我们国家的法律中只有某种 神灵， 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法， 总体上 来说， 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日，便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持，法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例，它们 迅速累 聚，进这是不 容忽视 的。— —爱献 生
66、节制使快乐增加并使享受加强。 ——德 谟克利 特 67、今天应做的事没有做，明天再早也 是耽误 了。——裴斯 泰洛齐 68、决定一个人的一生，以及整个命运 的，只 是一瞬 之间。 ——歌 德 69、懒人无法享受休息之乐。——拉布 克 70、浪费时间是一桩大罪过。——卢梭
真菌学检验ppt课件
外阴炎。男性念珠菌龟头炎、包皮炎。
❖ 体弱婴儿鹅口疮；
❖ 假丝酵母菌性肠炎、肺炎等。
❖ AIDS最常见并发症之一。
白假丝酵母菌皮肤黏膜感染 （鹅口疮）
67
微生物特性：
： 典 型❖类圆酵形母或型 卵菌 落园，形表；面 光 滑 ， 呈
奶油色，有酵母气味。
， 可 看❖到出表芽层方为 式卵 圆繁形殖芽，生在细组胞织， 底 假 菌 丝 。内可见芽生孢子、假菌
观察真菌菌落的色素、鉴别深 部真菌，使二相型真菌呈酵母 型
刺激真菌孢子形成
血琼脂
多数病原性真菌
皮肤真菌实验培养基（DTM） 分离皮肤真菌
38
❖ 平皿培养：只能培养生长繁殖较快的真菌; ❖ 大试管培养:用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存; ❖ 玻片培养(微量、小培养):可用于真菌菌种的鉴定。
39
观察菌落形态应注意：
起（如灰指甲可由毛癣菌或表皮癣菌引起）
51
红色毛癣菌
52
53
甲癣
54
微生物学检验
1、标本采集：70%乙醇消毒
55
2、直接镜检：
10%KOH（皮屑）； 25%KOH或 NaOH + 5%甘油（指甲）；
透明、有隔、有分支的菌丝及成链的关节孢子 发外型感染或发内型感染
56
57
断发毛癣菌引起的 发内型感染的头发
丝；
68
❖ 假菌丝 (pseudohypha): 指酵母菌菌种进行一 连串的芽殖后，长大的子细胞仍不脱落分离， 并继续出芽，细胞成串排列，在分隔处缢缩, 这种菌丝状的细胞串就称为假菌丝。
微❖ 在生玉物米特粉性培养：基中可产生假菌丝和厚膜孢子。
70
厚膜孢子形成试验
微生物检验
❖ 体弱婴儿鹅口疮；
❖ 假丝酵母菌性肠炎、肺炎等。
❖ AIDS最常见并发症之一。
白假丝酵母菌皮肤黏膜感染 （鹅口疮）
67
微生物特性：
： 典 型❖类圆酵形母或型 卵菌 落园，形表；面 光 滑 ， 呈
奶油色，有酵母气味。
， 可 看❖到出表芽层方为 式卵 圆繁形殖芽，生在细组胞织， 底 假 菌 丝 。内可见芽生孢子、假菌
观察真菌菌落的色素、鉴别深 部真菌，使二相型真菌呈酵母 型
刺激真菌孢子形成
血琼脂
多数病原性真菌
皮肤真菌实验培养基（DTM） 分离皮肤真菌
38
❖ 平皿培养：只能培养生长繁殖较快的真菌; ❖ 大试管培养:用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存; ❖ 玻片培养(微量、小培养):可用于真菌菌种的鉴定。
39
观察菌落形态应注意：
起（如灰指甲可由毛癣菌或表皮癣菌引起）
51
红色毛癣菌
52
53
甲癣
54
微生物学检验
1、标本采集：70%乙醇消毒
55
2、直接镜检：
10%KOH（皮屑）； 25%KOH或 NaOH + 5%甘油（指甲）；
透明、有隔、有分支的菌丝及成链的关节孢子 发外型感染或发内型感染
56
57
断发毛癣菌引起的 发内型感染的头发
丝；
68
❖ 假菌丝 (pseudohypha): 指酵母菌菌种进行一 连串的芽殖后，长大的子细胞仍不脱落分离， 并继续出芽，细胞成串排列，在分隔处缢缩, 这种菌丝状的细胞串就称为假菌丝。
微❖ 在生玉物米特粉性培养：基中可产生假菌丝和厚膜孢子。
70
厚膜孢子形成试验
微生物检验
真菌实验室技术课件
方块法
小钢圈法
平皿培养
试管培养
方块小培养法
钢圈小培养法
真菌病病理检查法
标本切片的制作 标本组织染色法 真菌在组织中的形态
真菌病血清学检查法
真菌抗原检测
隐球菌乳胶凝集试验（隐球菌荚膜多糖抗原） G试验（β-1,3-葡聚糖试验）
主要检测念珠菌、曲霉侵袭性感染，及一些少见真菌（如镰 刀菌、毛孢子菌等）感染。
菌的检测困难
真菌药敏试验的方法
微量液体稀释法
是多量液体稀释法的改良，将试管改为96孔 微孔板，标本及试剂体积减少至0.2ml，培养时间 也缩短至24小时，并以肉眼或分光光度计判断终 点。
优点：简单易行，省时，损耗少 缺点：终点难以确定，标准化问题， 对丝状真菌的检测困难。
微量液体稀释法
琼脂扩散法
ROSCO纸片法
真菌药敏试验的方法
E试验（E-test）法
为一种琼脂扩散法的改良，采用标准培养基，将
待测菌液涂抹于培养基表面后，臵入含有以梯度浓度 排列的药液条，经孵育后观察药液条周围出现的椭圆
形抑菌区，以达到抑菌的最小药物浓度为MIC终点。
优点：简单易行，判断抑制终点清晰，可以进行 定量测定
合成培养基（如察氏培养基）
常规培养基：沙氏琼脂（SDA）、改良沙氏琼脂（SAB）、
脑心浸膏琼脂（BHIA）、脑心浸膏肉汤（BHIB）、
马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）等
抗生素：常用氯霉素（50μg/ml）、放线菌酮（500 μg/ml）
真菌培养鉴定
培养方法
试管培养 平皿培养（大培养） 小培养 玻片法
缺点：价格昂贵
E-test 法
真菌的实验诊断PPT.
17
092
18
区分酵母样或霉样菌落
19
Aspergillus fumigatus - Colonial Morphology, Sabouraud葡萄糖琼脂培养基烟曲霉菌
20
Aspergillus fumigatus - Microscopic Morphology, 100x Lactophenol cotton blue (单列) 分生孢子头、分生孢 子梗、顶囊、瓶梗、分生孢子
真菌感染的危险因素：
中心静脉插管 尿道插管 广谱抗生素 气管插管 腹部外科 肠胃外营养 营养不良 住院时间
感染之前定殖
1
医学重要的酵母菌分类
Segal B, Bow EJ, Menichetti F: Infect Dis Clin N Am 2002;16:935-64
条件致病的酵母菌
21
Aspergillus flavus - 在Sabouraud葡萄糖琼脂黄曲霉菌 生长快黄色表面粉末状
22
Aspergillus flavus - Microscopic Morphology, 100x Lactophenol cotton blue 黄曲霉菌( 二列为主)分生孢子头、 分生孢子梗、顶囊、瓶梗、梗基、分生孢子
23
Penicillium species - Colonial Morphology, Sabouraud agar 青霉属 气生菌丝密毯状
24
1.6.1设定标准 1.5.3留心简历中的空白时间和前后矛盾之处 2.6.4感谢应聘者 （2）如果摔伤后，在四肢部位有大血管破裂，出血量很能多，应马上找些橡皮管、布带、绷带作为止血带在大腿根部上肢腋窝处勒紧 止血。 4、总结
6
092
18
区分酵母样或霉样菌落
19
Aspergillus fumigatus - Colonial Morphology, Sabouraud葡萄糖琼脂培养基烟曲霉菌
20
Aspergillus fumigatus - Microscopic Morphology, 100x Lactophenol cotton blue (单列) 分生孢子头、分生孢 子梗、顶囊、瓶梗、分生孢子
真菌感染的危险因素：
中心静脉插管 尿道插管 广谱抗生素 气管插管 腹部外科 肠胃外营养 营养不良 住院时间
感染之前定殖
1
医学重要的酵母菌分类
Segal B, Bow EJ, Menichetti F: Infect Dis Clin N Am 2002;16:935-64
条件致病的酵母菌
21
Aspergillus flavus - 在Sabouraud葡萄糖琼脂黄曲霉菌 生长快黄色表面粉末状
22
Aspergillus flavus - Microscopic Morphology, 100x Lactophenol cotton blue 黄曲霉菌( 二列为主)分生孢子头、 分生孢子梗、顶囊、瓶梗、梗基、分生孢子
23
Penicillium species - Colonial Morphology, Sabouraud agar 青霉属 气生菌丝密毯状
24
1.6.1设定标准 1.5.3留心简历中的空白时间和前后矛盾之处 2.6.4感谢应聘者 （2）如果摔伤后，在四肢部位有大血管破裂，出血量很能多，应马上找些橡皮管、布带、绷带作为止血带在大腿根部上肢腋窝处勒紧 止血。 4、总结
6
真菌检验【送检】 ppt课件
e) 标本保存方式不恰当或保存时间超过规定； g) 血 培 养 瓶 破 碎 、 渗 漏 或 过 有 效 期 ； i) 稀薄唾液或低倍镜下上皮细胞数大于 10
j) 尿液采集未清洗会阴部及尿道口。
ppt课件
29
参 考 文 献 ： [1] 秦 启 贤 主 编 ： 临 床 真 菌 学 . 复 旦 大 学 出 版 社 ， 2001. [2] 王 端 礼 主 编 ： 医 学 真 菌 学 － 实 验 室 检 验 规 范 . 人 民 卫 生 出 版 社 ， 2005. [3] 吴 绍 熙 主 编 ： 现 代 医 学 真 菌 检 验 手 册 （ 第 二 版 ） . 中 国 协 和 医 科 大 学 出 版 社 ， 2005. [4] 周 庭 银 ， 倪 语 星 。 临 床 微 生 物 检 验 标 准 化 操 作 . 上 海 科 学 技 术 出 版 社 ， 2009. [5] 周 庭 银 . 临 床 微 生 物 学 诊 断 与 图 解 （ 第 三 版 ） . 上 海 科 学 技 术 出 版 社 ， 2012. [6] James V. Manual of Clinical Microbiology [M], 10th ed. Washington, DC: ASM Press, 2011. [7] Sybren de Hoog, Guarro J, Gene J, et al. Atlas of clinical fungi [M]. CBS,Electronic Version 3.1, 2011. [8] CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts, 2009, M27-A3, vol.28, No14. [9] CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts, 2012, M27-S4, vol.28, No15. [10] CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Filamentous Fungi, 2009, M38-A2, vol.28, No16. [11] CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute, principles and procedures for blood cultures; approved guideline, 2009, M47-A2, vol.28, No16. [12] EUCAST.The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing.Breakpoint tables for interpretation of MICs. Version 6.1,2013. [13] 抗酵样真菌药物敏感性试验肉汤稀释法，中华人民共和国行业标准， WS/T,421 -2013,2013-07-16 发布， 1-14 [14] 抗丝状真菌药物敏感性试验肉汤稀释法，中华人民共和国行业标准， WS/T,411-2013,2013-06-03 发布， 1-14
感染真菌的实验室诊断课件
小分生孢子 ：无
大分生孢子形态 ( × 400)
19
皮肤癣菌的孢子形态
C.表皮癣菌 ⑤大分生孢子：侧生
或顶生，棍棒状， 壁薄 小分生孢子 ：无
20
三、形态和培养特征
毛癣菌属
大分生孢子 ：细长 、薄壁 、棒状 、两端钝圆
小分生孢子：侧生、散在， 呈葡萄状
毛癣菌的菌落
21
三、形态和培养特征
皮肤癣菌的孢子形态 A.毛癣菌 ①大分生孢子：细长 、 薄壁 、棒状 、两端钝圆 ②小分生孢子：侧生、 散在，呈葡萄状
二 临床意义 三 形态和培养特征 四 实验诊断
7
一、 分类
主要为皮肤丝状菌(Dermatophytes)，侵犯皮肤、 毛发、指甲等角化组织引起癣症，又称癣菌 (Ringworm)，分为三属，共37个种。
三个属 ：表皮癣菌属 (Epidermophyton) 毛癣菌属 (Trichophyton) 小孢子癣菌属 (Microsporum)
69
(2)脲酶试验
新生隐球菌能产生脲酶，可分解尿素琼脂培养基 的尿素形成NH3和CO2 ，使培养基由黄色变为粉红色 白假丝酵母菌则为阴性。
70
(3)糖同化及发酵试验
新生隐球菌能同化葡萄糖、半乳糖、蔗糖和肌醇 不能发酵糖类、不同化硝酸盐 非致病性隐球菌则不能同化肌醇
71
(4)动物试验
将新生隐球菌悬液0.5ml接种小白鼠腹腔或0.2ml 接种小鼠脑内， 5~30d动物可死亡，尸检可见各 器官均发现菌体 以脑和肺多见
(三)标本的直接检查
• 厚膜孢子形成试验：将假丝 酵母菌接种于玉米粉培养基， 仅白假丝酵母菌在菌丝顶端、 侧缘或中间形成厚膜孢子。
51
四、实验室诊断
大分生孢子形态 ( × 400)
19
皮肤癣菌的孢子形态
C.表皮癣菌 ⑤大分生孢子：侧生
或顶生，棍棒状， 壁薄 小分生孢子 ：无
20
三、形态和培养特征
毛癣菌属
大分生孢子 ：细长 、薄壁 、棒状 、两端钝圆
小分生孢子：侧生、散在， 呈葡萄状
毛癣菌的菌落
21
三、形态和培养特征
皮肤癣菌的孢子形态 A.毛癣菌 ①大分生孢子：细长 、 薄壁 、棒状 、两端钝圆 ②小分生孢子：侧生、 散在，呈葡萄状
二 临床意义 三 形态和培养特征 四 实验诊断
7
一、 分类
主要为皮肤丝状菌(Dermatophytes)，侵犯皮肤、 毛发、指甲等角化组织引起癣症，又称癣菌 (Ringworm)，分为三属，共37个种。
三个属 ：表皮癣菌属 (Epidermophyton) 毛癣菌属 (Trichophyton) 小孢子癣菌属 (Microsporum)
69
(2)脲酶试验
新生隐球菌能产生脲酶，可分解尿素琼脂培养基 的尿素形成NH3和CO2 ，使培养基由黄色变为粉红色 白假丝酵母菌则为阴性。
70
(3)糖同化及发酵试验
新生隐球菌能同化葡萄糖、半乳糖、蔗糖和肌醇 不能发酵糖类、不同化硝酸盐 非致病性隐球菌则不能同化肌醇
71
(4)动物试验
将新生隐球菌悬液0.5ml接种小白鼠腹腔或0.2ml 接种小鼠脑内， 5~30d动物可死亡，尸检可见各 器官均发现菌体 以脑和肺多见
(三)标本的直接检查
• 厚膜孢子形成试验：将假丝 酵母菌接种于玉米粉培养基， 仅白假丝酵母菌在菌丝顶端、 侧缘或中间形成厚膜孢子。
51
四、实验室诊断
真菌镜检PPT课件
9
瑞氏染色组织胞浆菌
10
PAS染色甲真菌病黄曲霉甲床病理
11
培养检查
可提高真菌检出率，并能确定菌种。 方法：标本接种于葡萄糖蛋白胨琼脂培养基
（Sabouraud agar/沙氏琼脂）上，置室温或37℃培 养1～3周。 必要时可行小培养协助鉴定。菌种鉴定常根据菌 落的形态及显微镜下形态判断。对某些真菌，有 时尚需配合其他鉴别培养基、生化反应、分子生 物学方法确定。
真菌镜检
.
1
一. 采集标本
浅部真菌的标本有毛发、皮屑、甲屑、痂等，标 本在分离前常先用75%乙醇处理。
深部真菌的标本可根据情况取痰、尿液、粪便、 脓液、口腔或阴道分泌物、血液、脑脊液、各种 穿刺液和活检组织，采集时应注意无菌操作。
2
二. 检查方法
直接涂片 墨汁涂片 染色 培养
12
真菌培养
13
谢谢！
14
3
直接涂片
最简单而重要的诊断方法 方法：取标本置玻片上，加一滴10%KOH溶液，
盖上盖玻片，在酒精灯火焰上稍加热溶解角质后， 轻轻加压盖玻片使标本透明即可镜检。 用于检查有无菌丝或孢子，不能确定菌种。
4
直接检测隐球菌及其它有荚膜的孢子 方法：取一小滴墨汁与标本（如脑脊液）混合，
盖上盖玻片后直接镜检。
6
墨汁涂片
7
涂片或组织切片染色
染色可更好地显示真菌形态和结构 革兰染色适用于白念珠菌、孢子丝菌等 瑞氏染色（美蓝-伊红Y 染料）适用于组织胞浆菌 PAS（Periodic Acid-Schiff stain ）染色（糖原染色 ）
常用于组织切片
8
革兰染色白色念珠菌
瑞氏染色组织胞浆菌
10
PAS染色甲真菌病黄曲霉甲床病理
11
培养检查
可提高真菌检出率，并能确定菌种。 方法：标本接种于葡萄糖蛋白胨琼脂培养基
（Sabouraud agar/沙氏琼脂）上，置室温或37℃培 养1～3周。 必要时可行小培养协助鉴定。菌种鉴定常根据菌 落的形态及显微镜下形态判断。对某些真菌，有 时尚需配合其他鉴别培养基、生化反应、分子生 物学方法确定。
真菌镜检
.
1
一. 采集标本
浅部真菌的标本有毛发、皮屑、甲屑、痂等，标 本在分离前常先用75%乙醇处理。
深部真菌的标本可根据情况取痰、尿液、粪便、 脓液、口腔或阴道分泌物、血液、脑脊液、各种 穿刺液和活检组织，采集时应注意无菌操作。
2
二. 检查方法
直接涂片 墨汁涂片 染色 培养
12
真菌培养
13
谢谢！
14
3
直接涂片
最简单而重要的诊断方法 方法：取标本置玻片上，加一滴10%KOH溶液，
盖上盖玻片，在酒精灯火焰上稍加热溶解角质后， 轻轻加压盖玻片使标本透明即可镜检。 用于检查有无菌丝或孢子，不能确定菌种。
4
直接检测隐球菌及其它有荚膜的孢子 方法：取一小滴墨汁与标本（如脑脊液）混合，
盖上盖玻片后直接镜检。
6
墨汁涂片
7
涂片或组织切片染色
染色可更好地显示真菌形态和结构 革兰染色适用于白念珠菌、孢子丝菌等 瑞氏染色（美蓝-伊红Y 染料）适用于组织胞浆菌 PAS（Periodic Acid-Schiff stain ）染色（糖原染色 ）
常用于组织切片
8
革兰染色白色念珠菌
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要点：
1、醋酸白试验并非HPV感染的特异性试验，有假阳、阴性。
（非特异性龟头包皮炎、上皮增厚、外伤擦伤、尿道口炎）
2、醋酸白试验的特异性及敏感性尚未确定
醋酸白试验
结果判读 阳性结果：
涂抹处白色均匀 白色部位界限清楚 临近正常皮肤对比
阴性结果：
排除患者中途部位变化 不能排除HPV感染
北大真菌室开展项目
生理盐水（黏膜部位、创伤较大处）
第二步：采集
皮损界限清楚 皮损界限模糊 （腹股沟、手掌、脚掌、指/趾甲）
头皮及毛发
1、断发 2、结痂 3、鳞屑 4、脓液
发内、外孢子、菌丝、糠秕孢子
创伤性采集
1、疥疮
手缝、手掌、手腕屈侧（对应脚部）
2、水泡丘疹性皮损
皮损内侧（水疱型）、分泌物（毛囊炎）
3、毛囊虫
面部（鼻翼）背部（脊柱旁）
真菌镜检的实验室操作
真菌镜检的实验流程
采集标本 标本处理 真菌镜检 审核报告
标本的采集原则
躯干
一 般
皮
四肢
损 的
选
头皮及毛发
取
创伤性采集
大小 新旧 位置
小 新 相对内侧
柔软细腻 避免摩擦
标本的采集方法
第一步：消毒
采集刀 采集部位 特殊部位
二次消毒（采集前、后）
1、防止采集部位感染 2、预防交叉感染 3、确保真菌培养环境
标本处理
10％-15％KOHθ溶解角质细胞 加盖玻片，压薄涂片
压片厚 角质未溶
如果有必要可酒精灯上微热促溶
真菌镜检
审核报告
真菌镜检的报告为临床定性实验 镜下只有糠秕孢子无菌丝的标本应慎重 痰类标本应判断“痰标本是否合格” 口腔标本应排除长杆菌及放线菌的干扰
醋酸白试验
方法：
用5％冰醋酸水溶液涂抹待检部位，3-5分钟观察，尖锐湿 疣病变处可观察到均匀的白色，以此作为一种筛查试验来鉴别 不典型病变及亚临床的皮疹。
真菌培养 真菌鉴定
梅毒TPHA 梅毒RPR
真菌药敏 真菌-D-葡聚糖检测（G试验）
支、衣原体、淋球菌检测 醋酸白试验
真菌半乳甘露聚糖检测（GM试验）HPV分子学诊断
1、醋酸白试验并非HPV感染的特异性试验，有假阳、阴性。
（非特异性龟头包皮炎、上皮增厚、外伤擦伤、尿道口炎）
2、醋酸白试验的特异性及敏感性尚未确定
醋酸白试验
结果判读 阳性结果：
涂抹处白色均匀 白色部位界限清楚 临近正常皮肤对比
阴性结果：
排除患者中途部位变化 不能排除HPV感染
北大真菌室开展项目
生理盐水（黏膜部位、创伤较大处）
第二步：采集
皮损界限清楚 皮损界限模糊 （腹股沟、手掌、脚掌、指/趾甲）
头皮及毛发
1、断发 2、结痂 3、鳞屑 4、脓液
发内、外孢子、菌丝、糠秕孢子
创伤性采集
1、疥疮
手缝、手掌、手腕屈侧（对应脚部）
2、水泡丘疹性皮损
皮损内侧（水疱型）、分泌物（毛囊炎）
3、毛囊虫
面部（鼻翼）背部（脊柱旁）
真菌镜检的实验室操作
真菌镜检的实验流程
采集标本 标本处理 真菌镜检 审核报告
标本的采集原则
躯干
一 般
皮
四肢
损 的
选
头皮及毛发
取
创伤性采集
大小 新旧 位置
小 新 相对内侧
柔软细腻 避免摩擦
标本的采集方法
第一步：消毒
采集刀 采集部位 特殊部位
二次消毒（采集前、后）
1、防止采集部位感染 2、预防交叉感染 3、确保真菌培养环境
标本处理
10％-15％KOHθ溶解角质细胞 加盖玻片，压薄涂片
压片厚 角质未溶
如果有必要可酒精灯上微热促溶
真菌镜检
审核报告
真菌镜检的报告为临床定性实验 镜下只有糠秕孢子无菌丝的标本应慎重 痰类标本应判断“痰标本是否合格” 口腔标本应排除长杆菌及放线菌的干扰
醋酸白试验
方法：
用5％冰醋酸水溶液涂抹待检部位，3-5分钟观察，尖锐湿 疣病变处可观察到均匀的白色，以此作为一种筛查试验来鉴别 不典型病变及亚临床的皮疹。
真菌培养 真菌鉴定
梅毒TPHA 梅毒RPR
真菌药敏 真菌-D-葡聚糖检测（G试验）
支、衣原体、淋球菌检测 醋酸白试验
真菌半乳甘露聚糖检测（GM试验）HPV分子学诊断