鲜豆浆中菌落总数的测定

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食品中细菌菌落总数的测定

312 10-4
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2.6x103 3.1x106
26
3、若所有稀释度的平板菌落数均 >300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
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试样稀释度
例次 10-2
10-3
1
380
52
平
2 均 526
205
菌
3 落 271
60
数
4
284
152
菌量
10-4 选定计数稀释度 /(个/g 或mL)
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菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，也不能区分其中细菌的种类，只包括一群在计数平板琼脂中生长发育、嗜中温的需氧和兼性厌氧的细菌菌落总数，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
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2 菌落总数测定的卫生学意义
（1）菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
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三、材料
1、食品检样 2、培养基平板计数培养基，无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液 3、其它无菌培养皿，无菌吸管，电炉、恒温培养箱等。
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四、流程
1、检样 2、做几个适当倍数的稀释液 3、选择2~3个适宜稀释度各1 mL,分别加入
灭菌平皿内 4、平皿内倾注15～20 mL琼脂培养基，混匀 5、36 ±1℃培养48±2小时或（24±2）小
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7、为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转，检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min，以防止细菌有所死亡或繁殖。

食品中菌落总数测定方案(菌落总数测试片)

食品中菌落总数测定方案菌落总数测试片1.操作步骤1.1 样品的稀释1.1.1 称取25g样品（剪碎）置盛有225ml无菌生理盐水的三角瓶中，充分振摇混匀，制成1:10的样品匀液。

1.1.2 用1ml微量移液器吸取1:10的样品匀液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml无菌生理盐水的无菌试管中（注意吸头尖端不要触及稀释液面），充分振摇混匀，制成1:100的样品匀液。

1.1.3 用1ml微量移液器吸取1:100的样品匀液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml无菌生理盐水的无菌试管中（注意吸头尖端不要触及稀释液面），充分振摇混匀，制成1:1000的样品匀液。

1.2 样品的接种揭开菌落总数测试片上层膜，用1ml微量移液器分别吸取1:10、1:100、1:1000的样品匀液1ml慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固（每个样品匀液做2个纸片）。

同时做一片空白阴性对照。

1.3 培养将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于36℃±1℃培养箱内培养15～24h，堆叠片数不超过12片。

1.4 菌落计数1.3.1 细菌在测试片上生长后会显示红色斑点，可用肉眼观察,必要时用放大镜,记录稀释倍数和相应的菌落数量。

菌落计数以菌落形成单位(CFU)表示。

1.3.2 选取菌落数在30CFU—300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。

低于30CFU的纸片记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。

每个稀释度的菌落数应采用两个纸片的平均数。

1.3.3 其中一个纸片有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的纸片作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到纸片的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个纸片后乘以2,代表一个纸片菌落数。

1.3.4 当纸片上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。

—1 —— 2 —1.5 结果与报告1.5.1 菌落总数的计算方法1.5.1.1 若只有一个稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个纸片菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g 样品中菌落总数结果。

食品中菌落总数的测定实验

食品中菌落总数的测定实验一、实验目的：了解稀释平板计数的原理，掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法，认识细菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。

二、原理平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。

统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。

但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的多个细胞。

因此平板菌落计数的结果往往偏低。

为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。

该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是这种计数方法最大的优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验，以及食品、饮料和水等含菌指数或污染度的检测三、试剂和材料1.仪器恒温培养箱：（36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。

）均质器或振荡器无菌吸管：1 ml（0.01 ml 刻度）、10 ml（0.1 ml 刻度）或微量移液器及吸头无菌锥形瓶：容量250 ml、500 ml、无菌培养皿：直径90 mm菌落计数器2.样品1）平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基：蛋白胨5.0 g 、酵母浸膏2.5 g 、葡萄糖1.0 g 、琼脂15.0 g、蒸馏水1000 ml、pH 7.0±0.2。

将所有成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。

分装试管或锥形瓶，121 ℃高压灭菌15 min。

注：用平板计数琼脂，称取23.5 g于1 000 ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121 ℃高压灭菌20min，冷却至45~47℃左右备用。

2）无菌生理盐水：氯化钠（NaCl）5.875g 蒸馏水(纯净水) 500ml 称取5.875ｇNaCl溶于500ml蒸馏水中，121 ℃高压灭菌20min。

菌落总数检测方法

菌落总数检测方法菌落总数检测是一种常见的微生物检测方法，用于评估食品、饮用水、医药制品、化妆品等产品的卫生质量。

菌落总数是指在一定条件下，一定时间内生长的微生物菌落总数，是评价样品中微生物污染程度的重要指标。

正确的菌落总数检测方法对于保障产品质量和消费者健康具有重要意义。

菌落总数检测方法主要包括表面菌落总数检测和悬浮菌落总数检测两种。

表面菌落总数检测是指将样品表面的微生物进行检测，常用的方法包括接触平板法和印记法。

接触平板法是将含有富集培养基的琼脂平板与样品表面接触一定时间，然后进行培养计数。

印记法则是将样品表面印在琼脂平板上，然后进行培养计数。

悬浮菌落总数检测是指将样品中的悬浮微生物进行检测，常用的方法包括滤膜法和涂布法。

滤膜法是通过将样品过滤到膜上，然后将膜培养计数。

涂布法则是将样品涂布在琼脂平板上，然后进行培养计数。

在进行菌落总数检测时，需要注意以下几点。

首先，样品的采集和处理应当符合相关标准和规范，避免外界环境对样品的污染。

其次，培养基的选择应当根据样品的特性和检测要求进行合理选择，以保证菌落的生长和计数准确。

此外，培养条件的控制也非常重要，包括温度、湿度、培养时间等因素，都会对菌落总数的检测结果产生影响。

最后，在进行菌落计数时，需要注意菌落的形态和颜色，避免误判。

除了传统的培养计数方法外，现代生物技术的发展也为菌落总数检测提供了新的手段。

比如，基于PCR技术的快速检测方法可以在较短的时间内对样品中的微生物进行快速检测和鉴定，大大缩短了检测周期。

另外，基于光学原理的生物传感器技术也可以实现对微生物的快速检测，具有灵敏度高、操作简便等优点。

总的来说，菌落总数检测方法是保障产品卫生质量的重要手段，正确的检测方法和操作流程对于获取准确的检测结果至关重要。

随着生物技术的不断发展，菌落总数检测方法也在不断完善和更新，为产品质量安全提供了更多的保障。

希望本文所述内容对您有所帮助，谢谢阅读！。

教学课件第一节食品中菌落总数的测定

第一节食品中菌落总数的测定
一、菌落总数
是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后,所得1mL(g)或1cm2面积检样中所含菌落的总数。
二、菌落总数测定的意义
1、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。 2、预测食品存用的期限长短。 3、了解细菌在食品中的繁殖动态。
三、菌落总数测定的方法
※ 平板倾注法＃平板表面涂布法平板表面点滴法
或中心深紫色，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，常有金属光泽；在麦康凯琼脂上的典型菌落:呈桃红色或中心桃红、圆形，扁平，光滑湿润。
EMB平板照片及原理
麦康凯琼脂平板 Age of culture is 24 h
大肠杆菌、大肠菌群选择性显色培养基--COLI ID 用于在37℃下对食品中大肠菌群和大肠杆菌进行检测、计数及大肠杆菌的鉴定
湿润纸片后，立即贴于食具内侧表面，30秒后取下，置于原塑料袋内。筷子以5只为一份样品，用吸管吸取生理盐水湿润纸片后，立即将筷子进口端（约5cm）抹拭两张，放入原塑料袋内。
2.将已采样的纸样置于37°C培养15小时.
纸片在黄色背景上出现红色斑点为阳性，纸片在紫兰色背景上呈现红色斑点，但周围没有黄晕均为大肠菌群阴性。同一份样品两张纸片均是阴性为合格。
MPN 个/100 g/ml
0
0
0
＜30
0
0
1
30
0
0
2
60
0
0
3
90
0
1
0
30
0
1
1
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0
1
2
90
0
1
3
120
0
2
0
60
0

食品卫生微生物学检验菌落总数测定

本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
菌落总数，cfu / g (ml) 大肠菌群 (MPN)个 / 100 ml
稀释液：取储存液 1.25 mL，用蒸馏水稀释至 1000 mL。分装每瓶 100 mL 或每管 10 mL，
121 ℃ 高压灭菌 15 min。 5.3 0.85 %灭菌生理盐水 5.4 75 %乙醇
6 检验程序
检样做成几个适当倍数的稀释液
选择2个～3个适宜稀释度各取1mL分别加入灭菌培养皿内
7.1.2 用1 mL 灭菌吸管吸取1∶10 释液1 mL，注入含有9 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管
内，振摇试管混匀，做成 1∶l00 的稀释液。 7.1.3 另取 1 mL 灭菌吸管，按上条操作依次做
10 倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支 1 mL灭菌吸管。 7.1.4 根据食品卫生标准要球或对检样污染情况的估计，选掸三个稀释度，每个稀释度，接种三管。
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
中华人民和国国家标准 GB／T 4789.2 — 2003 代替GB／T 4789.2 —1994
2003—08—11发布 2004—01—01实各类食品中菌落总数的测定。
3.1 菌落总数
食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等），所得 1mL(g）检样中所含菌落的总数。
4 设备和材料 4.1 冰箱：0 ℃～4 ℃ 4.2 恒温培养箱： 36 ℃ ± 1 ℃ 4.3 恒温水浴锅： 16 ℃ ± 1 ℃ 4.4 均质器或灭菌乳钵 4.5 架盘药物天平： 0 ～500 g，精确至 0.5 g 4.6 菌落计数器 4.7 放大镜 4 × 4.8 灭菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、

实验二市售豆浆中大肠菌群数量的测定

市售豆浆中大肠菌群的测定（一）大肠菌群MPN计数法测定市售豆浆中的大肠菌群一实验目的1.掌握大肠菌群的MPN测定法2.了解MPN计数原理二实验原理大肠菌群是指一群来自于温血动物肠道，36℃48h能发酵乳糖产酸产气的需氧或兼性厌氧菌革兰氏阴性菌无芽孢杆菌。

大肠菌群MPN计数法的原理就是根据大肠菌群的定义，利用它们能发酵乳糖产酸产气的特性，通过二次验证确为大肠菌群阳性的培养管数，对照MPN检索表，可以报告大肠菌群数。

三实验材料月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）、0.85%生理盐水、带小倒管的试管四方法步骤该实验四个同学一组，按学号排。

选择原液、10-1、10-2稀释液进行培养。

每个稀释度接种1mL，每个稀释度接种3管。

五实验记录六结果与分析查MPN表，报告：该样品的大肠菌群MPN数为：____________/mL七思考题1.初发酵的阳性管为什么需要做复发酵实验？2.你认为MPN计数可信度如何？为什么？（二） PetrifilmTM测试片法测定大肠菌群数量一实验目的：1.通过接触PetrifilmTM测试片，了解微生物测试片的使用方法。

2.了解Petrifilm™测试片计数原则。

二实验原理Petrifilm™测试片的计数原则：①计数范围：15~150cfu②都＜15，以最低稀释度计算③都＞150，以最高稀释度计算④都不长菌，报告“＜1×最低稀释倍数”计算方法：同菌落总数报告单位：cfu/g或cuf/mL四实验步骤：每组同学做一张片，选择原液。

方法同菌落总数测定。

放入37℃培养24h计数。

五结果记录报告：24h后计数菌落总数为_____个，据此计算得出该样品的菌落总数为________。

六思考题根据你的测定结果，该样品是否符合卫生国家标准，为什么？。

食品中菌落总数的测定方法

食品微生物学检验菌落总数测定1范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。

本标准适于食品中菌落总数的测定方法。

2术语和定义菌落总数：指食品检样经过处理，在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等),所得1mL(g)检样中所含菌落的总数3设备和材料恒温培养箱：36±1℃30±1℃；冰箱：2～5℃；恒温水浴：46±1℃；天平：感量为0.1g；均质器；震荡器；无菌吸管1mL、10mL或微量移液器及吸头；无菌锥形瓶：250 mL；500 mL；无菌培养皿：直径90mm；pH计或pH比色管或精密pH试纸；放大镜、菌落计数器4培养基和试剂4.1平板计数琼脂培养基4.1.1成分4.1.2制法将上述成分加入到蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。

分装试管和锥形瓶，121℃高压灭菌15min。

4.2磷酸盐缓冲液4.2.1成分4.2.2制法贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L 的氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。

稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。

4.3无菌生理盐水4.3.1成分4.3.2称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，，121℃高压灭菌15min。

5检验程序菌落总数的检验程序如下：检样25g（或25mL）样品+225mL稀释液，均质↓10倍系列稀释↓选择2～3个适宜样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养皿内↓每皿中加入15 ～20mL平板计数琼脂培养基，混匀↓培养36℃±1℃↓48 h±2 h计算各平板菌落数↓计算菌落总数↓报告6操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8 000r/min～10 000r/min 均质1 min～2 min ，或放人盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min ，制成1：10 的样品匀液。

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至少２ｒｉ，然后再进行测定，发现菌落总数为０Ｆ／。ｎａＵｍＬＣ
关键词：鲜豆浆；菌落总数的测定；煮沸
中图分类号：Ｔ２２７Ｓ５．文献标识码：Ａ文章编号：１７—１７２１）５０２．３６１８（０００．２８０５
ｂｅｄｕｅｆｍｅｉｍ．ｈｏｏｙｃｕｔｓ８３１ＣＦｍＬ．ｏｏｙｃｕｔｎｆｅｈｓｙｅｎｍｉｓｄｔｒｉｅｆｅｅｎｅｔｄｔＴｅｃｌｎｏｎ．￣ｗａ０Ｕ／Ｃｌｎｏｎｓｏｂａｌｗａｅｅｍｎｄａｒｉｇｈａｅｉｌｋｔｂｏ
ｂｇｎｂｉｎ．ｔｓ６ＣＦｍＬ．ｄｉｗａｅｏｗｈｎｔｅｆｓｏｂａｌｓｅｔｄｔｏｌｎｅｔｔｅｓ２ｍｉｕｅＳｅｉｏｌｇＩｗａＵ／ｉ１０Ａｎｓｚｒｅｅｈｓｙｅｎｍｉｗａａｅｏｂｉａｄｋｐａｔｎｔ．ｏｔｈｒｋｈａｌｔｅｆｅｈｓｙｅｎｍｉｅｄｏｂｅｔｄｂｆｒｅｎｒｎｅｈｒｓｏｂａｌｎｅｓｔｅｈａｅｅｏｅｂｉｇｄｉｋｄ．ｋ
２８２
乳业科学与技术
２１年第５期００
（第１４期）总４
鲜豆浆中菌落总数的测定
韩磊，史艳东，秦盼盼，张峰，孙华华
潍坊职业学院微生物研究所，山东潍坊２１４６０１
摘要：通过稀释平板计数法对鲜豆浆进行菌落总数的测定，在牛肉膏蛋白胨培养基平板上有３种菌落产生，菌落总数为８￣０ＣＵｍＬ．１Ｆ／。取刚煮沸的鲜豆浆进行测定，菌落总数达６０ＣＵｍＬ３１Ｆ／；保持沸腾
ｔｐｓｏｌｎｅ，ｎｉｄｏｉａｔｒａｃｌｎ，ｎｉｄｏｌｃｎｎｉｄｏｉｃｉｏｃｔ，ｐｅｒｄｉｅｔｎｙｅｆｏｏｉｓｏｅｋｎｆｃｗｈｔｂｃｅｉｌｏｏｙｏｅｋｎｆａｋａｄｏｅｋｎｆｅｂｗｈｔａｔｍｙｅｅａｐａｅｎｐｐｏｅｅｎ
踪调查。豆浆加热至１０℃，１ｉ，微生物指标０５ｒｎｎ１０％合格，分装后，０经菌落总数合格率为６．９６％，冲洗管道水菌落总数１０％超标。０空气、包装材料消毒前后无影响。认为主要是生产线上的管道污染，造成豆浆卫生质量下降【。４Ｊ目前有关豆浆的研究多在于工艺方法，有零星的关于腐败豆浆的研究，新鲜豆浆中菌落总数测定的报道极少，因此我们尝试测定鲜豆浆中的菌落总数，为倡导健康消费豆浆提供理论依据。
ＩｓｉｔｆｉｒｂｏｏｙＷｅｆｎｏａｉｎｌｌｇ，ｉａｇｏｈｎｏｇ２１４，ｉａｎｔｕｅｏＭｃｏｉｌｇ，ｉｇＶｃｔａｌｅＷｅｆｎｆＳａｄｎ６０１ＣｈｎｔａｏＣｏｅ
Ａｂｔａｔ：ＩｉｅｐｒｍｅｔｃｌｎｏｎｎｆｅｈｓｙｅｎｍｉｓｄｔｒｉｅｙｄｌｔｎｍｅｈｄｏｌｔｏｎｉｇＴｈｅｓｒｃｓｎｔｓｘｅｈｉｎ，ｏｏｙｃｕｔｓｏｂａｌｗａｅｅｍｎｄｂｉｉｔｏｆｐａｅｃｕｔ．ｒｅｉｌｋｕｏｎ
成分比较接近完全蛋白质。与牛奶相比，虽然豆浆的蛋白质和钙含量低于牛奶，但铁、磷等微量元素和Ｂ类维生素的含量却远高于牛奶。牛奶含有胆固醇，而豆浆不含胆固醇，且饱和脂肪酸含量低。另外，豆浆含有丰富的不饱和脂肪酸、大豆异黄酮、卵磷脂等几十种对人体有益的物质，具有降低人体胆固醇、防止高血压、冠心病、糖尿病等多种疾病的效果，还具有增强免疫力、延缓肌体衰老的作用【。ＩＪ豆浆保留了大豆中绝大部分营养成分和生理活性物质。但是由于豆浆营养丰富，腐败微生物
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
ＤｅｅｍｉａｉｎｏｌｎｕｎＦｒｓｏｂａｉｔｒｎｔｏｆＣｏｏｙＣｏｎｔｅｈＳｙｅｎＭｌｉｋ
ＨｎＬｉＳｉａｄｎ，ｉａｐｎＺａｇｅｇＳｎＨａｕａｅ，ｈｎｏｇＱｎＰｎａ，ｈｎｎ，ｕｕｈａＹＦ
Ｋｅｒｓｆｅｈｓｙｅｎｍｉ，ｅｅｍｉａｉｎｏｌｎｏｎ，ｅｔｏｂｉｙｗｏｄ：ｓｏｂａｌｄｔｎｎｔｆｏｏｙｃｕｔｈａｏｌｌｋｏｃｔ
豆浆被誉为 “ 植物性牛奶 ” 蛋白质氨基酸，其