循环免疫复合物测定
原理
聚乙二醇比浊法 聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)是非离子型亲水剂，
为乙二醇的聚合物。分子式HO(CH2CHO)nH，有较强脱
水作用，破坏蛋白质表面的水化层和电子云，用于沉淀 蛋白质，沉淀具有选择性。
在pH、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量越大，用以 沉淀的PEG浓度越小。血清中加入终浓度为 3％～5％的聚 乙二醇，能相对选择性地沉淀免疫复合物。 PEG还可抑制CIC解离，促进CIC进一步聚合成更大的凝聚 物，使溶液浊度增加。用分光光度计测定浊度，可反映 CIC含量。不能进行抗原特异性免疫复合物的测定，故仅 适用于免疫复合物的粗筛
表1 PEG比浊法测CIC方法 测定管 稀释血清（ml） 0.4 4.1%PEG（ml） 4.0 pH8.4硼酸缓冲液（ml） －
对照管 0.4
－ 4.0
结果判断
待测血清浊度值=（测定管吸光度-对照管吸光度）×100 以大于正常人浊度值的均值加2个标准差为CIC阳
材料
1.
2. 3. 4. 5.
硼酸缓冲液
4.1％聚乙二醇(PEG)溶液 微量加样器、试管等 分光光度计、普通冰箱 待检血清 不同CIC含量血清可由临床筛选获得， 不宜冻融
操作步骤
样品稀释（0.2ml血清+0.4ml硼酸缓冲液） 按表1加样混匀 4℃冰箱lh 室温10～15min
测A495nm值,硼酸缓冲液调零
低密度脂蛋白可引起浊度增加，应空腹采血，高γ球蛋白 血症和标本反复冻融也可引起浊度增加。
2％PEG只能沉淀较大分子，4％PEG能沉淀较小分子的循 环免疫复合物，大于5％PEG，选择性沉淀循环免疫复合 物特性消失； 当温度4 ℃时，循环免疫复合物沉淀最佳，室温每升高 1℃，A值就下降0.02
临床意义
目的
1.掌握循环免疫复合物测定原理 2.熟悉循环免疫复合物检测的临床意义
原理
免疫复合物(immune complex，IC) 抗原抗体复合物，在正常情况下，机体防御系统 作为清除异物抗原的一种方式，清除体内免疫复
合物对机体有利。
在某些情况下，体内形成的免疫复合物不能被及
时清除，沉积在机体某一部位称为局部免疫复合物， 游离于体液中称为可溶性免疫复合物，随血液循环的 免疫复合物称循环免疫复合物(circulating immune complex，CIC)。免疫复合物沉积可引起多种疾病。
不是疾病诊断的主要指标，但在发病机制研究， 了解病情进展，判断治疗效果方面能提供有意 义的帮助
对有蛋白尿、关节痛、血管炎、浆膜炎、紫癜
症状且诊断不明确的病人，可考虑检测循环免
疫复合物
思考题
试分析循环免疫复合物测定实验过程中有何因 素将影响实验结果？
采取什么措施保证实验的准确性？
循环免疫复合物(CIC;circulating immune complex)
循环免疫复合物(CIC;circulating immune complex)一、循环免疫复合物抗原和相应抗体结合形成的物质称为免疫复合物，免疫复合物和补体、其他免疫活性物质结合，沉积在血管壁，可导致组织损伤及血管炎，引起一系列的疾病，如红斑狼疮，由于免疫复合物能在循环血液中检测到，故称之为循环免疫复合物。
循环免疫复合物的测定虽无特异性诊断意义，但对病情的活动性判断和指导治疗有一定价值，测定循环免疫复合物的方法很多，这里仅介绍临床常用的两种。
1、聚乙二醇法循环免疫复合物与聚乙二醇作用，以浊度变化表现出来，可根据浊度的大小来反映免疫复合物的多少。
如浊度大，则说明血液中循环免疫复合物增多，病情活动，但是对诊断没有特异性价值。
2、冷球蛋白测定亦可称冷免疫球蛋白，是在低温自然沉淀，加热后又能溶解的蛋白复合物。
当血液中出现冷球蛋白时，称冷球蛋白血症，在红斑狼疮病人中较多见。
有时见两小腿部皮下紫癜，而血小板检查正常，这是由于冷球蛋白在皮下沉淀的结果，该方法对判断病情变化和指导治疗有参考价值。
二、相关问题1、问：“红细胞免疫黏附，清除体内CIC”中的“CIC”是什么意思？答：循环免疫复合物（Circulationimmunecomplex，CIC）又称可溶性免疫复合物，分子量为50万～100万，沉降系数8.8～19S，它不易被吞噬细胞吞噬，又不能经肾小球排出，可较长时间在血液中循环，一旦大量循环免疫复合物沉积于组织中，则引起组织损伤及相关的免疫复合物病。
CIC阳性常见于：（1）部分自身免疫性疾病，如SLE，类风湿关节炎等；（2）膜增殖性肾炎，链球菌感染后肾炎；（3）传染病，如慢性乙型肝炎，疟疾，麻风等；（4）恶性肿瘤。
2、问：我想检测血中的CIC，如果溶血了，测的结果还准吗？答：我觉得CIC是用免疫的方法测定的，所以我觉得抗原抗体的反应，受溶血的影响比较小。
3、问：笔者在日常工作中,遇到循环免疫复合物（CIC）检测,检测结果显示CIC浓度较高，想进一步了解是什么性质的CIC，想采用分离剂将其分离，即抗原抗体分离后再检测其抗原或抗体，以进一步确定是什么病原体引起的CIC增高？问题是采用什么分离剂来分离CIC效果比较好？答：用低pH可以试试，但是只能在低PH的缓冲体系里是分开的，而且时间不能太长，不然抗体容易失活。
实验循环免疫复合物测定.PEG法测定CIC
注意事项
1.不同浓度的PEG可沉淀不同分子量的免疫复合物。 2% PEG可沉淀较大CIC，4% PEG则沉淀较小CIC， 但浓度＞5%时 PEG选择性CIC的特性即消失，可导致 假阳性结果。故一般选择 3%-4% 浓度 2.温度变化对结果影响较大。4℃时CIC沉淀最佳， 室温每升高1℃，A值下降0.2。 3.低密度脂蛋白、高g球蛋白血症或脂肪含量过高 均可使浊度增加，故应空腹采血。 4.样本陈旧或反复冻融可影响检测结果，故待检血清 要新鲜，防止污染及聚合IgG形成。通常4℃冰箱保存 不能超过3天，-20℃保存时间可适当延长。
主要试剂与器材
1、待检血清。 2、0.1mol/L pH8.4硼酸缓冲液(BBS)、 3、4.1% PEG标准溶液。 4、分光光度计、离心机、微量加样器、 试管、吸管等。
操作方法
1. 待检血清用BBS作1∶3稀释 (血清0.4ml加入BBS缓冲液0.8ml)。
2. 试剂及加入量(ml) 测定管 对照管 1：3稀释血清 0.2 0.2 41g/L PEG 2.0 -pH8.4 BBS-2.0 -2.0 3. 充分混匀，放4℃冰箱1h，取出，放室温 10min，以BBS调零，495nm波长比色。 4. 计算 待测血清浊度值= （测定管A-对照管A值）×100
记录实验结果
A测定= A对照= 血清浊度值= 正常血清CIC的参考值： A值=4.3±2.0 (X±SD）； 0.043±0.02(X±SDC检测的临床意义
1.CIC检测一般无特异性诊断意义，但对免疫性疾病 的病情监测，疗效，有一定价值 2. CIC增高：见于某些自身免疫性疾病： 如SLE、类风湿、结节性多动脉炎、小儿肾炎、 急性链球菌感染后肾炎、慢性乙肝以及肿瘤患者， 血清中可检出循环免疫复合物。 3.中等大小的可溶性免疫复合物在血管中沉积是引起 Ⅲ型超敏反应主要因素，有助于判断Ⅲ型超敏反应 的发生，发展，预防对细胞，组织的损伤。
免疫复合物(immunecomplex,IC)的测定
免疫复合物（immunecomplex，IC）的测定
免疫复合物（immunecomplex，IC）或抗原抗体复合物是抗原与其对应抗体相结合的产物。在正常情况下，机体内的游离抗原与相应抗体结合形成IC，可被机体的防御系统清除，作为清除异物抗原的一种方式，对机体有利。但在某些情况下，体内形成的IC不能被及时清除，则可在局部沉积，通过激活补体，并在血小板、中性粒细胞等参与下，引起一系列连锁反应而导致组织损伤，出现临床症状，称为免疫复合物病（immunocomplexdisease，ICD）。
2、相对特异性，但又能检测出各种类型和大小的CIC；
3、重复性好；
4、操作简便，可作常规应用；
5、试ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ前不需要对标本进行加热灭活或特殊的吸收处理。
1978年WHO曾组织进行IC检测方法学研究，发现尚无任何一种技术具备上述所有特点。由于方法的复杂性、敏感性和所检测IC类型的局限性，目前的常用试验均受到复合物内免疫球蛋白种类及亚类、复合物大小、抗原与抗体比例、固定补体的能力等因素影响，在临床实验室应用受到很大限制。目前很多实验室常采用多种不同方法来检测IC。
当血管壁通透性增加时，此类IC可随血流沉积在某些部位的毛细血管壁或嵌合在肾小球基底膜上，激活补体导致ICD的发生。检查组织内或循环中IC的存在有助于某些疾病的诊断、发病机制的研究、预后估计、病情活动观察和疗效判断等。因此，IC的检测日益受到重视。
超敏反应的主要免疫学检测
试验部位应清洗干净，严格消毒，以免皮肤的不洁物引起非特异性反应或感染。当皮肤患湿疹、感染、皮炎或外伤时不宜进行皮肤试验。正在或近日服用免疫抑制剂或抗组胺药物者也不宜进行皮肤试验。
（二）试验类型及方法
皮肤试验的最常用部位是前臂屈侧，因此处皮肤较为光滑细腻，而且便于试验操作和结果观察。按正规作法，左右两臂一侧作试验，另一侧作对照。需要时也可选用上臂或背部皮肤。具体试验方法可分为皮内试验、挑刺试验和斑贴试验。
2.特异性IgE：slgE测定是体外检测变应原的重要手段。主要用于Ⅰ型超敏反应的诊断。其试验的灵敏度及特异性都很高、特别是对花粉、螨类、宠物皮屑、牛奶、鸡蛋、坚果等变应原的sIgE测定，灵敏度和特异性都在90%以上，有的甚至接近l00%.根据sIgE含量可确定患者变应原种类，可评价患者过敏状态，脱敏治疗的疗效，对哮喘的诊断和鉴别诊断有重要帮助。
出现假阳性的常见原因有：①试验抗原不纯，在提取、配制，甚至在试验过程中被其他抗原污染，引起交叉反应；②试验溶液配制不当，过酸或过碱都会对皮肤产生非特异性刺激；③皮肤反应性过强，例如被试者患有皮肤划痕症，或者有既往过敏的痕迹等；④操作不当，例如注入少量空气也可出现假阳性。
（四）应用与评价
Байду номын сангаас
1.放射变应原吸附试验（RAST）：将纯化的变应原与固相载体结合，加入待检血清及参考对照，再与同位素标记的抗IgE抗体反应，然后测定固相的放射活性，通过标准曲线求出待检血清中特异性IgE的含量，或在标本放射活性高于正常人均数加3s时判为阳性。
2.酶联免疫测定法试验：原理及步骤基本同RAST，仅是最后加入酶标记的抗IgE，利用酶底物进行显色。测定结果的表示也与RAST相同。
皮肤试验属于活体试验，虽然影响因素众多，却能反应机体各种因素综合作用的实际免疫状态；并且简单易行，结果的可信度大；这些优点是其他方法难以替代的，所以在临床和防疫工作中都经常应用。
循环免疫复合物临床意义
循环免疫复合物临床意义
Ⅲ型超敏反应的发生主要是由循环免疫复合物(CIC)引起，通过检测CIC可以证实某些疾病是否与Ⅲ型超敏反应有关，也可帮助分析判断疾病的进程及转归。
判定免疫复合物为发病机制的证据有三：①病变局部有IC沉积;②CIC水平显著升高;③明确IC中的抗原性质。第三条证据有时很难查到，但至少要具备前两条，单独CIC的测定不足为凭。人体在健康状态下也存在少量的CIC(大约10～20μg/ml)，其生理与病理的界限不易区分。另外，CIC检测的方法太多，其原理各不相同，用一种方法测定为阳性，另一种方法检测可能为阴性;但与免疫组化法一起检测，其意义就大得多。
免疫检验考试辅导：循环免疫复合物补体相关测定法
IgG和IgM类抗体与抗原结合后，重链CH2区的补体结合点暴露，可以固定C1q并激活补体的系列反应，这是利用补体有关技术检测免疫复合物的基础。
1.C1q结合试验：将待检血清先行加热56℃30min，以灭活其中的补体和破坏已与CIC结合的C1q，空出补体结合点。
CIC与C1q的结合可用多种方法进行检测，常用的有以下3种。
（1）液相法：先将同位素标记的C1q与灭活过的血清标本混合作用，再加入0.5%（终浓度）的PEG将结合了C1q的CIC沉淀下来，通过检测沉淀物中的放射活性来计算CIC的含量。
（2）固相法：先将C1q吸附于固相载体表面，加入待检血清使CIC与C1q结合，再加入同位标记的或酶标记的抗人IgG或SPA，最后检测其放射活性或酶活性。
（3）C1q偏离试验：先将同位素标记的C1q与灭活的血清标本混合，再加抗体致敏的绵羊红细胞，温育后离心，检测红细胞上的放射活性。
红细胞的放射活性与免疫复合物的量呈负相关。
2.补体试验本法的原理类似补体结合试验。
将一定量的补体（多为混合豚鼠血清）与灭活的待检血清混合温育，反应后加入致敏绵羊红细胞。
如出现溶血表示血清中没有CIC存在；不溶血说明标本中有CIC存在医`学教育网搜集整理。
将血清标本做不同稀释，并与已知的热聚合IgG作对照，可以计算出CIC的含量。
本方法的灵敏度较高，且易于在一般实验室开展，不足之处是特异性较差。
3.胶固素结合试验胶固素（conglutinin）是牛血清中的一种正常蛋白，能与C3d特异性结合；体内与补体结合的CIC都带有C3d，因此胶固素可与CIC结合。
用一定量的胶固素包被塑料管，往管中加入稀释的血清标本，温育后再加入同位素标记或酶标记的抗人IgG抗体，最后检测各管的放射活性或酶活性，计算CIC的含量。
环卵沉淀试验名词解释
环卵沉淀试验名词解释
环卵沉淀试验（Circulating immune complex assay，CIC）是一种检测体内循环免疫复合物（CIC）水平的方法。
循环免疫复合物是指由抗原和抗体结合形成的复合物，它们在血液循环中存在并参与多种疾病的发生和发展。
环卵沉淀试验是通过将血清样品与卵清白蛋白（BSA）结合，形成免疫复合物，然后使用聚乙二醇（PEG）沉淀这些复合物，最后测量剩余的游离BSA浓度，从而确定循环免疫复合物的水平。
环卵沉淀试验可以用于多种疾病的诊断和监测，如风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肝炎、艾滋病等。
它可以帮助医生评估疾病的严重程度、预测疾病的进展和治疗效果。
但是，环卵沉淀试验也存在一些局限性，如对某些类型的循环免疫复合物不敏感、结果受到抗体和抗原的影响等。
总之，环卵沉淀试验是一种重要的免疫学检测方法，可以帮助医生了解循环免疫复合物的水平，从而更好地诊断和治疗疾病。
循环免疫复合物测定
待测血清浊度值=（测定管吸光度-对照管吸光度）×100
免疫复合物称循环免疫复合物(circulating immune 在pH、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量越大，用以沉淀的PEG浓度越小。
在pH、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量越大，用以沉淀的PEG浓度越小。 聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)是非离子型亲水剂，为乙二醇的聚合物。
合物，随血液循环的免疫复合物称循环免疫复合物(circulating immune complex，CIC)。
熟悉循环免疫复合物检测的临床意义
不是疾病诊断的主要指标，但在发病机制研究，了解病情进展，判断治疗效果方面能提供有意义的帮助
聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)是非离子型亲水剂，为乙二醇的聚合物。
用1％分聚光乙光二度醇计(P测Ec定Go)浊溶m度液，p可le反x映，CIC含C量I。C)。免疫复合物沉积可引起多种疾病。
试分析循环免疫复合物测定实验过程中有何因素将影响实验结果？
聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)是非离子型亲水剂，为乙二醇的聚合物。
聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)是非离子型亲水剂，为乙二醇的聚合物。
循环免疫复合物测定
目的
1.掌握循环免疫复合物测定原理 2.熟悉循环免疫复合物检测的临床意义
原理
免疫复合物(immune complex，IC) 抗原抗体复合物，在正常情况下，机体防御系统 作为清除异物抗原的一种方式，清除体内免疫复 合物对机体有利。
免疫复合物沉积可引起多种疾病。
在某些情况下，体内形成的免疫复合物不能被及时清除，沉积在机体某一部位称为局部免疫复合物，游离于体液中称为可溶性免疫复
PEG法检测循环免疫复合物 临床免疫学实验
PEG法检测循环免疫复合物【实验目的】掌握PEG法检测循环免疫复合物的实验步骤，影响因素，结果判断，结果计算方法。
【实验原理】低浓度（3~5%)的聚乙二醇（PEG) 能选择性沉淀免疫复合物。
在受检血清中加入PEG，使最终浓度为3.5%，可将血清中免疫复合物沉淀下来，需用分光光度计测定吸光度值(A)表示其相对量。
【实验材料】1.0.1mol/L硼酸缓冲液：称取硼砂0.4g，硼酸0.51g溶于100ml蒸馏水中，调PH至8.6。
2.4.166%PEG溶液：用硼酸缓冲液配制。
PEG的分子量为6000。
3.受检血清，试管，吸管，721分光光度计。
【实验步骤】1.吸待检血清0.2ml，用硼酸缓冲液0.4ml稀释（血清稀释3倍）。
2.分对照管和测定管：对照管：硼酸缓冲液2ml+稀释血清0.22ml；测定管：4.166％PEG 2ml+稀释血清0.22ml（此时PEG最终浓度为3.75％）3.混匀后两管均放4℃冰箱1h后取出，室温放置10min。
4.用721 0.5×1cm比色杯，检测测定管A450nm值，（对照管调零）。
【实验结果】待测血清浊度值＝（测定管A－对照管A)×10000=540【实验讨论】1.注意在本试验中要求的PEG终浓度为3.75％。
2.受检查血清为何要一定保持新鲜，放冰箱保存不得超过一周（因为即使没有污染，也因血清中聚合IgG的形成而出现假阳性）3优缺点：①该试验不但可检测IC，还可获得IC（收集沉淀），简单，快速；②特异性差，易受血清中大分子物质干扰；③常作为IC检测的粗筛试验4.检测IC的理想方法：①操作简便，敏感；②可检测各种类型IC；③能分析IC的大小和组成成分；④能精确定量，无假阳性。
临床医学检验技术(士)-临床免疫和免疫学检验(B型题)_1
临床医学检验技术（士）-临床免疫和免疫学检验(B型题)1、循环免疫复合物检测可用于诊断A.Ⅰ型变态反应B.Ⅱ型变态反应C.Ⅲ型变态反应D.Ⅳ型变态反应E.非变态反应2、放射性过敏原吸附试验可用于诊断A.Ⅰ型变态反应B.Ⅱ型变态反应C.Ⅲ型变态反应D.Ⅳ型变态反应E.非变态反应3、抗血细胞抗体检测可用于诊断A.Ⅰ型变态反应B.Ⅱ型变态反应C.Ⅲ型变态反应D.Ⅳ型变态反应E.非变态反应4、结核菌素皮肤试验用于检测A.Ⅰ型变态反应B.Ⅱ型变态反应C.Ⅲ型变态反应D.Ⅳ型变态反应E.非变态反应5、支气管哮喘属于A.Ⅰ型变态反应B.Ⅱ型变态反应C.Ⅲ型变态反应D.Ⅳ型变态反应E.非变态反应6、接触性皮炎属于A.Ⅰ型变态反应B.Ⅱ型变态反应C.Ⅲ型变态反应D.Ⅳ型变态反应E.非变态反应7、直接凝集试验检测的抗原是A.ABO血型抗原B.游离抗-Rh抗体C.结合抗-Rh抗体D.血小板抗体E.ABO血型抗体8、直接抗球蛋白试验检测的抗体是A.ABO血型抗原B.游离抗-Rh抗体C.结合抗-Rh抗体D.血小板抗体E.ABO血型抗体9、不能通过凝集试验检测的抗体是A.ABO血型抗原B.游离抗-Rh抗体C.结合抗-Rh抗体D.血小板抗体E.ABO血型抗体10、总补体活性测定试验原理属于A.凝集反应B.沉淀反应C.补体结合反应D.溶血反应E.微量细胞毒反应11、血清学法鉴定HLA型别的试验原理A.凝集反应B.沉淀反应C.补体结合反应D.溶血反应E.微量细胞毒反应12、免疫荧光技术采用A.化学发光剂作为酶反应底物B.化学发光剂直接标记抗原或抗体C.抗体包被在磁颗粒表面技术D.二价的三联吡啶钌E.荧光物质标记抗体13、电化学发光免疫采用A.化学发光剂作为酶反应底物B.化学发光剂直接标记抗原或抗体C.抗体包被在磁颗粒表面技术D.二价的三联吡啶钌E.荧光物质标记抗体14、微粒子化学发光免疫采用A.化学发光剂作为酶反应底物B.化学发光剂直接标记抗原或抗体C.抗体包被在磁颗粒表面技术D.二价的三联吡啶钌E.荧光物质标记抗体15、化学发光免疫采用A.化学发光剂作为酶反应底物B.化学发光剂直接标记抗原或抗体C.抗体包被在磁颗粒表面技术D.二价的三联吡啶钌E.荧光物质标记抗体16、化学发光酶免疫采用A.化学发光剂作为酶反应底物B.化学发光剂直接标记抗原或抗体C.抗体包被在磁颗粒表面技术D.二价的三联吡啶钌E.荧光物质标记抗体17、检测血细胞抗体是为确定A.Ⅰ型变态反应B.Ⅱ型变态反应C.Ⅲ型变态反应D.Ⅳ型变态反应E.Ⅰ型和Ⅳ型变态反应18、检测过敏原和血清特异性IgE是为确定A.Ⅰ型变态反应B.Ⅱ型变态反应C.Ⅲ型变态反应D.Ⅳ型变态反应E.Ⅰ型和Ⅳ型变态反应19、皮肤过敏试验是为确定A.Ⅰ型变态反应B.Ⅱ型变态反应C.Ⅲ型变态反应D.Ⅳ型变态反应E.Ⅰ型和Ⅳ型变态反应20、检测血清中循环免疫复合物是为确定A.Ⅰ型变态反应B.Ⅱ型变态反应C.Ⅲ型变态反应D.Ⅳ型变态反应E.Ⅰ型和Ⅳ型变态反应。