医学免疫学检验-循环免疫复合物检测及应用PPT课件
合集下载
医学免疫学免疫学检测技术ppt课件
14
双抗体夹心法、间接法ELISA
15
间接法ELISA
16
ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
（2）间接荧光法： 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
12
免疫荧光法
13
2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
10
II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原 的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳： 电泳 + 双向免疫扩散 （抗原分析）
21
3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验 细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3） 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验： 测试IV型超敏反应能力
22
（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM
双抗体夹心法、间接法ELISA
15
间接法ELISA
16
ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
（2）间接荧光法： 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
12
免疫荧光法
13
2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
10
II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原 的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳： 电泳 + 双向免疫扩散 （抗原分析）
21
3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验 细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3） 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验： 测试IV型超敏反应能力
22
（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM
免疫循环复合物PPT课件
2
免疫复合物的检测对于判定疾病的活动 性、治疗效果、预后以及探讨发病原因有 重要意义。某些自身免疫性疾病(如全身性 红斑狼疮、类风湿性关节炎、结节性多动 脉炎等)、膜增殖性肾炎、急性链球菌感染 后肾炎、传染病(如慢性乙型肝炎、麻风、 登革热、疟疾等)以及肿瘤患者，血清中都 可能检出循环免疫复合物。
6
(2)与外源性抗原有关者： ①医源性抗原：血清病、药物变态反应。 ②环境中抗原：吸入性抗原(外源性变态反 应性肺泡炎)、摄入性抗原(疱疹样皮炎)。 ③传染性生物性抗原： A.病毒性抗原：肝炎、登革出血热。 B.细菌性抗原：链球菌感染后肾小球肾炎、 麻风。 C.原虫性抗原：疟疾、锥虫病。 D.蠕虫性抗原：血吸虫病、盘尾丝虫病。
15
1、检测补体系统激活状态，鉴别经典激活或 旁路途径的激活。 2、诊断补体C1q肾病，血清补体CH50、C3、 C4水平正常，补体C1q水平异常。 3、诊断补体系统先天性缺陷，如先天性补体 C1q缺陷，临床常表现为混合免疫缺陷、肾 小球肾炎、SLE。
16
4、与免疫复合物中结合抗原的抗体 （IgG类 、 IgM类）的FC段结合。该 复合物沉积于人体局部组织，引发炎 症性免疫反应，如沉积于肾小球系膜 和肾小球基底膜组织，引发肾小球肾 炎、狼疮性肾炎，
3
目前已经明确系统性红斑狼疮、类风湿性 关节炎、部分肾小球肾炎和血管炎等疾病 为免疫复合物病，CIC检测对这些疾病仍是 一种辅助诊断指标，对判断疾病活动和治 疗效果也有一定意义。在发现紫癜、关节 痛、蛋白尿、血管炎和浆膜炎等情况时， 可考虑免疫复合物病的可能性，进行CIC和 组织沉积IC的检测。另外，患有恶性肿瘤 时CIC检出率也增高，但不出现Ⅲ型变态反 应的损伤症状，称之为临床隐匿的IC病， 然而这种状态常与肿瘤的病情和预后相关。
免疫复合物的检测对于判定疾病的活动 性、治疗效果、预后以及探讨发病原因有 重要意义。某些自身免疫性疾病(如全身性 红斑狼疮、类风湿性关节炎、结节性多动 脉炎等)、膜增殖性肾炎、急性链球菌感染 后肾炎、传染病(如慢性乙型肝炎、麻风、 登革热、疟疾等)以及肿瘤患者，血清中都 可能检出循环免疫复合物。
6
(2)与外源性抗原有关者： ①医源性抗原：血清病、药物变态反应。 ②环境中抗原：吸入性抗原(外源性变态反 应性肺泡炎)、摄入性抗原(疱疹样皮炎)。 ③传染性生物性抗原： A.病毒性抗原：肝炎、登革出血热。 B.细菌性抗原：链球菌感染后肾小球肾炎、 麻风。 C.原虫性抗原：疟疾、锥虫病。 D.蠕虫性抗原：血吸虫病、盘尾丝虫病。
15
1、检测补体系统激活状态，鉴别经典激活或 旁路途径的激活。 2、诊断补体C1q肾病，血清补体CH50、C3、 C4水平正常，补体C1q水平异常。 3、诊断补体系统先天性缺陷，如先天性补体 C1q缺陷，临床常表现为混合免疫缺陷、肾 小球肾炎、SLE。
16
4、与免疫复合物中结合抗原的抗体 （IgG类 、 IgM类）的FC段结合。该 复合物沉积于人体局部组织，引发炎 症性免疫反应，如沉积于肾小球系膜 和肾小球基底膜组织，引发肾小球肾 炎、狼疮性肾炎，
3
目前已经明确系统性红斑狼疮、类风湿性 关节炎、部分肾小球肾炎和血管炎等疾病 为免疫复合物病，CIC检测对这些疾病仍是 一种辅助诊断指标，对判断疾病活动和治 疗效果也有一定意义。在发现紫癜、关节 痛、蛋白尿、血管炎和浆膜炎等情况时， 可考虑免疫复合物病的可能性，进行CIC和 组织沉积IC的检测。另外，患有恶性肿瘤 时CIC检出率也增高，但不出现Ⅲ型变态反 应的损伤症状，称之为临床隐匿的IC病， 然而这种状态常与肿瘤的病情和预后相关。
免疫学-免疫复合物PPT课件
化的膜攻击阶段。C5a发挥炎症介质作用，并能诱导树突细胞功
能成熟，调控T细胞分化，调控细胞凋亡。
.
21
补体应答的效应阶段：膜攻击阶段
攻膜单位 membrane attack complexes (MAC)：
结合于细胞膜上的C5b~8促进C9聚合，形成C5b6789n复合物。 MAC通过破坏磷脂双层形成渗漏斑或形成穿膜的亲水性孔道，导 致细胞崩解
.
27
补体固有成分活化后的裂解片段
.
28
C3分子
血清浓度最高，功能最为重要的分子之一 裂解片段可与CR1、CR2、CR3、CR4和C5aR结合
.
29
补体系统的组成
.
30
补体系统的组成
2. 补体调节蛋白：以可溶性或膜结合形式存在的具有调节 某些补体活化作用的分子。
C1抑制物(C1INH)、C4结合蛋白(C4BP)、C8结合蛋白、衰 变加速因子(DAF/CD55)、膜辅助蛋白(MCP/CD46)、膜反应性 溶解抑制物(CD59)、I因子、H因子、P因子、纤粘蛋白、 Sp40/40、羧肽酶N、H因子样蛋白1(FHL1)、H因子相关蛋白 (CFHR1)、 sMAP、MAP-1、clusterin、carboxypeptidaseN等
.
16
补体激活的替代途径
Alternative pathway
由C3、B因子、D因子和P因子参与的激活过程。
特点: • 需要固相表面粘附活化C3的自发裂解产物C3b • 无特异性，快速 • 可区分自我与非我。若C3b沉积于自身细胞表面，可被补体 调节蛋白（如衰变加速因子）灭活。若与缺乏调节蛋白的微生 物表面结合，则激活级联反应
经典途径 (classical pathway) MBP途径 (MBP pathway) 替代途径 (alternative pathway)
免疫学检测技术的基本原理及其应用 ppt课件
提
要
免疫学检测技术主要应用： 对多种免疫性疾病的诊断、疗效评估、 发病机制探讨; 对抗原性物质、免疫细胞、细胞因子、 粘附分子或细胞受体等的定性、定量检测。
PPT课件
1
第一节
抗原或抗体的检测
抗原-抗体反应包括：
沉淀反应、凝集反应、溶解反应、补体 结合反应、中和反应等。
抗原-抗体反应可用已知的特异性抗体检测 未知的抗原；也可用已知的抗原检测未知的 抗体。
将待测血清标本作琼脂将待测血清标本作琼脂凝胶电泳不同分子量凝胶电泳不同分子量蛋白组分开然后与电蛋白组分开然后与电泳方向平行挖一泳方向平行挖一小槽加入加入相应的相应的抗血清抗血清与不同区带的蛋白抗原作不同区带的蛋白抗原作双向免疫扩散在各区双向免疫扩散在各区带相应的位置形成带相应的位置形成沉淀沉淀常用于血清蛋白种类分常用于血清蛋白种类分也称免疫扩散是把单向免疫扩散同电也称免疫扩散是把单向免疫扩散同电泳结合在一起的方法
用荧光素、同位素或酶等示踪物质 标 记抗体（或抗原）进行抗原-抗体反应。 能极大地提高了反应的灵敏度，可以对 微量物质进行定量、定性或定位检测。 三种基本类型：免疫荧光技术、免疫酶 技术和同位素标记技术。
PPT课件
18
免疫荧光显微技术 (Immunofluorescence Technique)
14
免疫电泳 （Immunoelectrophoresis)
将待测血清标本作琼脂 凝胶电泳，不同分子量 蛋白组分开，然后与电 泳方向平行挖一小槽， 加入相应的抗血清，与 不同区带的蛋白抗原作 双向免疫扩散，在各区 带相应的位置形成沉淀 弧。 常用于血清蛋白种类分 析。
PPT课件 15
要
免疫学检测技术主要应用： 对多种免疫性疾病的诊断、疗效评估、 发病机制探讨; 对抗原性物质、免疫细胞、细胞因子、 粘附分子或细胞受体等的定性、定量检测。
PPT课件
1
第一节
抗原或抗体的检测
抗原-抗体反应包括：
沉淀反应、凝集反应、溶解反应、补体 结合反应、中和反应等。
抗原-抗体反应可用已知的特异性抗体检测 未知的抗原；也可用已知的抗原检测未知的 抗体。
将待测血清标本作琼脂将待测血清标本作琼脂凝胶电泳不同分子量凝胶电泳不同分子量蛋白组分开然后与电蛋白组分开然后与电泳方向平行挖一泳方向平行挖一小槽加入加入相应的相应的抗血清抗血清与不同区带的蛋白抗原作不同区带的蛋白抗原作双向免疫扩散在各区双向免疫扩散在各区带相应的位置形成带相应的位置形成沉淀沉淀常用于血清蛋白种类分常用于血清蛋白种类分也称免疫扩散是把单向免疫扩散同电也称免疫扩散是把单向免疫扩散同电泳结合在一起的方法
用荧光素、同位素或酶等示踪物质 标 记抗体（或抗原）进行抗原-抗体反应。 能极大地提高了反应的灵敏度，可以对 微量物质进行定量、定性或定位检测。 三种基本类型：免疫荧光技术、免疫酶 技术和同位素标记技术。
PPT课件
18
免疫荧光显微技术 (Immunofluorescence Technique)
14
免疫电泳 （Immunoelectrophoresis)
将待测血清标本作琼脂 凝胶电泳，不同分子量 蛋白组分开，然后与电 泳方向平行挖一小槽， 加入相应的抗血清，与 不同区带的蛋白抗原作 双向免疫扩散，在各区 带相应的位置形成沉淀 弧。 常用于血清蛋白种类分 析。
PPT课件 15
第四部分 免疫复合物的测定
1. PEG比浊法：
待测血清＋BBS（硼酸盐缓冲液）测A495值做对照 待测血清＋PEG（聚乙二醇, 3.5%）测A495值
待测血清A值 = 实验管A值 - 对照管A值 正常参考值：> X(正常人)+ 2SD (>.12) 敏感性：20mg/L 临床意义： 1.CIC↑：自身免疫性疾病（如SLE、RA），乙肝，
麻风，急性链球菌感染后肾炎 2.CIC↑伴补体↓：膜增殖性肾炎
2.C1q固相法
步骤：C1q包被酶标板BSA封闭待测血清 (EDTA 处理灭活) 加HRP－抗人IgG 加底物终止 反应。测OD492n表现主要有： 血管炎，肾小球肾炎，关节炎，皮炎，DIC，梗塞 性疾病，雷诺氏病等。
第四部分 免疫复合物的测定
免疫复合物(immune complex, IC)：抗原与相应抗 体结合形成的复合物。 局部免疫复合物：沉积于机体某一局部的免疫复和 物。 可溶性免疫复合物：游离于体液中的免疫复合物。 循环免疫复合物(circulating immune complex, CIC)：血液中的免疫复合物。
《免疫学检查》ppt课件
6
标记
7
第一节 免疫球蛋白〔Ig〕的检测
8
❖Ig的产生、构造与功能 Ig通常是指具有抗体活性和〔或〕抗
体样构造的球蛋白，由浆细胞产生，有特 异性识别抗原的功能，但必须与抗原结合 形成免疫复合物后才能启动效应功能。 ❖包括：IgG、A、M、D、E
9
一、IgG
+ 参考值：7.0-16.6g/L, 占70-80％ + 特点：长效、能透过胎盘，抗菌、抗病毒 + 测定方法：单向免疫扩散〔手工〕
1.E花环〔RFC〕 原理：T细胞外表具SRBC受体 正常 58-72％左右
2.淋巴细胞转化试验〔LCT〕 原理：淋T PHA 淋母细胞 正常：同上 意义：T细胞数量↓免疫缺陷、肿瘤、免疫病
20
3．淋巴细胞分化抗原测定
T细胞：CD3-总T标志 CD4-TH标志 CD8-Ts标志
B细胞： CD19、CD20、CD22等 细胞的荧光免疫标记技术 流式细胞仪的应用
3.CA153〔癌抗原153〕－－对乳腺癌有重要
的辅助诊断作用
28
肿瘤标志物的临床应用
1 筛查：高危人群 2 诊断、良/恶鉴别：辅助指标 3 疗效观察：外科—手术切除/残瘤/姑息
保守—药效、放疗效果 4 预后：病员分群,标志物: 5 随访……
29
第五节 自身抗体检测 〔P423〕
--自身免疫病是指免疫系统对自身成 分的免疫耐受性减低或破坏，产生 自身抗体损伤含有相应自身抗原的 组织器官而造成的疾病。
感染、多克隆增高 ↓反复呼吸道感染 非IgA单克隆，如SLE、
免疫缺陷等
11
三、IgM
+ 参考值：0.5-2.6g/L,占5-10％ + 特点：五聚体，大分子
标记
7
第一节 免疫球蛋白〔Ig〕的检测
8
❖Ig的产生、构造与功能 Ig通常是指具有抗体活性和〔或〕抗
体样构造的球蛋白，由浆细胞产生，有特 异性识别抗原的功能，但必须与抗原结合 形成免疫复合物后才能启动效应功能。 ❖包括：IgG、A、M、D、E
9
一、IgG
+ 参考值：7.0-16.6g/L, 占70-80％ + 特点：长效、能透过胎盘，抗菌、抗病毒 + 测定方法：单向免疫扩散〔手工〕
1.E花环〔RFC〕 原理：T细胞外表具SRBC受体 正常 58-72％左右
2.淋巴细胞转化试验〔LCT〕 原理：淋T PHA 淋母细胞 正常：同上 意义：T细胞数量↓免疫缺陷、肿瘤、免疫病
20
3．淋巴细胞分化抗原测定
T细胞：CD3-总T标志 CD4-TH标志 CD8-Ts标志
B细胞： CD19、CD20、CD22等 细胞的荧光免疫标记技术 流式细胞仪的应用
3.CA153〔癌抗原153〕－－对乳腺癌有重要
的辅助诊断作用
28
肿瘤标志物的临床应用
1 筛查：高危人群 2 诊断、良/恶鉴别：辅助指标 3 疗效观察：外科—手术切除/残瘤/姑息
保守—药效、放疗效果 4 预后：病员分群,标志物: 5 随访……
29
第五节 自身抗体检测 〔P423〕
--自身免疫病是指免疫系统对自身成 分的免疫耐受性减低或破坏，产生 自身抗体损伤含有相应自身抗原的 组织器官而造成的疾病。
感染、多克隆增高 ↓反复呼吸道感染 非IgA单克隆，如SLE、
免疫缺陷等
11
三、IgM
+ 参考值：0.5-2.6g/L,占5-10％ + 特点：五聚体，大分子
《elisa检测技术》ppt课件(2024)
拓展ELISA检测技术在生物医学、环境监测 、食品安全等领域的应用，推动相关产业的 发展。
2024/1/28
22
06 ELISA实验操作技巧与注 意事项
2024/1/28
23
实验前准备工作建议
01
仔细阅读试剂盒说明书 ，了解实验原理、操作 步骤和注意事项。
2024/1/28
02
准备好所需的试剂、耗 材和仪器，确保它们的 质量和性能符合要求。
去除异常值、缺失值等， 保证数据质量。
2024/1/28
数据转换
对数据进行对数转换、归 一化等处理，以满足后续 分析需求。
统计分析
采用t检验、方差分析等统 计方法，对实验组和对照 组数据进行比较，评估差 异显著性。
13
结果解读与报告撰写
结果解读
根据统计分析结果，结合专业知 识对实验数据进行解读，如判断 样品中目标物质的含量是否超标
《elisa检测技术》ppt课件
2024/1/28
1
目 录
2024/1/28
• ELISA检测技术概述 • ELISA实验方法与步骤 • ELISA实验数据分析与解读 • ELISA技术在生物医学领域应用 • ELISA技术挑战与发展趋势 • ELISA实验操作技巧与注意事项
2
01 ELISA检测技术概述
发展多重ELISA检测技术，实现对多个目标物的同时检测，提高检 测效率。
20
新型ELISA技术发展趋势
数字化ELISA
利用微流控、微阵列等技术，实现ELISA检测的数字化、自 动化和智能化。
免疫荧光ELISA
结合免疫荧光技术，提高ELISA检测的灵敏度和特异性。
化学发光ELISA
医学检验·检查项目：循环免疫复合物(CIC)_课件模板
医学检验·各论：循环免疫复合物（CIC) >>>
临床意义：
高丙种球蛋白血症性紫癜。 ②核抗原： 系统性红斑狼疮。 ③特发的细胞抗原： 肿瘤、自身免疫性疾病。 (2)与外源性抗 原有关者： ①医源性抗原：血清病、药 物变态反应。 ②环境中抗原：吸入性抗 原(外源性变态反应性肺泡炎)、摄入性抗 原(疱疹样皮炎)。 ③传染性生物性抗原： A.病毒性抗原
谢谢！
医学检验·各论：循环免疫复合物（CIC) >>>
临床意义：
：肝炎、登革出血热。 B.细菌性抗原： 链球菌感染后肾小球肾炎、麻风。 C.原 虫性抗原：疟疾、锥虫病。 D.蠕虫性抗 原：血吸虫病、盘尾丝虫病。 (3)抗原性 质不明者： 慢性免疫复合物性肾小球肾 炎，伴有或不伴有嗜酸性白细胞增多症性 脉管炎。
医学检验·各论：循环免疫复合物（CIC) >>>
相关症状： 免疫力下降、免疫功能障碍、足底溃疡、 关节疼痛、脾肿大、腹部肿块。
医学检验·各论：循环免疫复合物（CIC) >>>
相关疾病：
虹膜睫状体炎、血吸虫尾蚴性皮炎、血吸 虫病、麻风病、血清病、血栓闭塞性脉管 炎、系统性红斑狼疮性关节炎、类风湿性 关节炎、红斑狼疮、风湿性关节炎、流行 性出血热、膜性肾小球肾炎、疟疾、盘状 红斑狼疮、尖锐湿疣、尾蚴性皮炎、类风 湿性关节炎肾损害。
医学检验·各论 循环免疫复合物（CIC)
内容课件模板
医学检验·各论：循环免疫复合物（CIC) >>>
别名： 免疫复合物。
医学检验·各论：循环免疫复合物（CIC) >>>
简介：
抗原和相应抗体结合形成的物质称为 免疫复合物，免疫复合物和补体、其他免 疫活性物质结合，沉积在血管壁，可导致 组织损伤及血管炎，引起一系列的疾病， 如红斑狼疮，由于免疫复合物能在循环血 液中检测到，故称之为循环免疫复合物。
医学免疫学PPT：免疫学实验技术及其应用
BAS-ELISA:可用来检测细菌、病毒、肿 瘤细胞表面抗原等。 生物素与抗生物素 有极高的亲和力，利用抗生物素为桥梁 ，联结生物素化的抗体及生物素化过氧 化物酶，可获得极高的敏感性（多级放 大系统）。
■-Ab+待测Ag+ Ab-生物素化+抗生物素（四价）+ 生物素化—E+底物
• 生物素(biotin，B)
★单向免疫扩散的应用 应用：测定血清中IgG、IgM、IgA 与补体C3的含量. 缺点:1～2天才出结果。
★双向免疫扩散的应用 应用：根据沉淀线的数目和形状可
对抗原或抗体进行定性检测、组分
分析等。
单向琼脂扩散试验
双向琼脂扩散试验
★对流免疫电泳可检测： 血液中的HBsAg和AFP
★免疫比浊法主要用于： 血清蛋白及抗体成分的分析研究
抗原或抗体的检测
双抗体夹心法: 常用于检测标本中的抗原。将已
知抗体包被在固相载体上，加入待测 标本，使其中的抗原与抗体结合，洗 去未结合的抗原，加入已知的酶标抗 体与标本中抗原结合，再洗去未结合 的酶标抗体，加入底物，底物受酶的 催化发生化学反应产生有色物质。
待测 抗原
酶标 抗体
抗体
底物
双抗体夹心法
抗原或抗体的检测
间接法: 常用于检测血清中的抗体。将已知抗
原包被于固相载体，加入待检标本，若标 本中有相应的抗体，则可与抗原结合，再 加入酶标二抗，洗涤后加底物，底物受酶 的催化发生化学反应产生有色物质。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
已知 待测 抗原 抗体
酶标 抗体
• 此法是测定抗体最常用的方法。
间接法
酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法)
Ab 过剩
Ag 过剩
PEG法检测循环免疫复合物(CIC)PPT教案课件(临床免疫学)
【试剂与材料】
1、0.1mol/L硼酸缓冲液： 称取硼砂0.4g，硼酸0.51g， 溶于100ml蒸馏水中，调PH至8.6。
2、4.166%PEG溶液：用硼酸缓冲液配制。 PEG的分子量为6000。
3、受检血清，试管，吸管，721分光光度计。
实验方法
1.吸待检血清0.2ml，用硼酸缓冲液0.4ml稀释（血清 稀释3倍）。 2.分对照管和测定管：
实验六 PEG法检测 循环免疫复合物(CIC)
【实验原理】
•低浓度（3~5%)的聚乙二醇（PEG) 能选择性 沉淀免疫复合物。在受检血清中加入PEG， 使最终浓度为3.75%，可将血清中免疫复合 物沉淀下来，需用分光光度计测定吸光度值 (A)表示其相对量。 • 本法简便易行，国内己广泛应用作为检测循 环免疫复合物的初（粗）筛试验。
▲正常值<510
实验讨论
• 注意在本试验中要求的PEG终浓度为3.75存不得超过一周（因为即使没有污染，也因 血清中聚合IgG的形成而出现假阳性）。
对照管：硼酸缓冲液 2ml+稀释血清0.22ml； 测定管：4.166％PEG 2ml+稀释血清0.22ml
（此时PEG最终浓度为3.75％） 3.混匀后两管均放4℃冰箱1h后取出，室温放置10min。 4.用721 0.5×1cm比色杯，检测测定管A450nm值。
（对照管调零）。
结果判断
▲待测血清浊度值 ＝（测定管A－对照管A)×10000
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
循环免疫复合物的测定 及应用
第一课件网网站
2020年10月2日
Байду номын сангаас
1
一、概述
免疫复合物 （immune complex ，IC） 即抗原抗体复合物，是抗原与其相应抗 体结合的产物。 局部IC 循环免疫复合物（circulating immune complex，CIC）
2020年10月2日
2
二、抗原特异性CIC的检测
2020年10月2日
7
1、C1q固相法 2、抗补体试验
3、胶固素结合试验 4、抗C3-CIC—ELISA
2020年10月2日 第一课件网网站
8
（三）抗球蛋白测定法
1、mRF固相抑制试验 2、PRF胶乳凝集抑制试验
2020年10月2日
9
（四）细胞技术测定法
Raji细胞试验
2020年10月2日
10
汇报人：XXX 汇报日期：20XX年10月10日
11
演讲完毕，谢谢观看！
Thank you for reading! In order to facilitate learning and use, the content of this document can be modified, adjusted and printed at will after downloading. Welcome to download!
抗原特异性CIC的检测主要检测 CIC中抗原抗体的性质，包括单 特异性CIC的检测及双特异性CIC 的检测
2020年10月2日
3
（一）单特异性CIC的检测
只检测CIC中抗原的特异性称单特异性 CIC的检测
（二）双特异性CIC的检测
同时检测CIC中抗原抗体的特异性，称双 特异性CIC的检测。因为同一种抗原可与 不同Ig类型的抗体形成CI
2020年10月2日
4
三、非抗原特异性循环免疫复 合物的检测
此种检测只考虑CIC的量而不考 虑其性质。
2020年10月2日
5
（一）物理测定法 根据CIC的理化性质测定
1、PEG比浊法 2、冷球蛋白测定
2020年10月2日
6
（二）补体相关测定法
IgG和IgM类抗体与抗原形成CIC 后，重链CH2区的补体结合位点 暴露，可以固定C1q并激活补体 的连锁反应。
第一课件网网站
2020年10月2日
Байду номын сангаас
1
一、概述
免疫复合物 （immune complex ，IC） 即抗原抗体复合物，是抗原与其相应抗 体结合的产物。 局部IC 循环免疫复合物（circulating immune complex，CIC）
2020年10月2日
2
二、抗原特异性CIC的检测
2020年10月2日
7
1、C1q固相法 2、抗补体试验
3、胶固素结合试验 4、抗C3-CIC—ELISA
2020年10月2日 第一课件网网站
8
（三）抗球蛋白测定法
1、mRF固相抑制试验 2、PRF胶乳凝集抑制试验
2020年10月2日
9
（四）细胞技术测定法
Raji细胞试验
2020年10月2日
10
汇报人：XXX 汇报日期：20XX年10月10日
11
演讲完毕，谢谢观看！
Thank you for reading! In order to facilitate learning and use, the content of this document can be modified, adjusted and printed at will after downloading. Welcome to download!
抗原特异性CIC的检测主要检测 CIC中抗原抗体的性质，包括单 特异性CIC的检测及双特异性CIC 的检测
2020年10月2日
3
（一）单特异性CIC的检测
只检测CIC中抗原的特异性称单特异性 CIC的检测
（二）双特异性CIC的检测
同时检测CIC中抗原抗体的特异性，称双 特异性CIC的检测。因为同一种抗原可与 不同Ig类型的抗体形成CI
2020年10月2日
4
三、非抗原特异性循环免疫复 合物的检测
此种检测只考虑CIC的量而不考 虑其性质。
2020年10月2日
5
（一）物理测定法 根据CIC的理化性质测定
1、PEG比浊法 2、冷球蛋白测定
2020年10月2日
6
（二）补体相关测定法
IgG和IgM类抗体与抗原形成CIC 后，重链CH2区的补体结合位点 暴露，可以固定C1q并激活补体 的连锁反应。