拟南芥种植及处理基本方法
绿萝栽种方法
绿萝栽种方法
绿萝（又名拟南芥）是一种热带植物，生长在地表上会有不同的形状和色泽，一旦放在室内，它就会完美展现出它的美丽。
绿萝的种植是很容易的，下面就介绍一下绿萝的栽种方法：
首先，先在室内准备绿萝的穴盆，可以使用旧的或者新的穴盆，里面应该填充一定量的泥土和有机肥料，以保证穴盆里的土壤质量。
然后，将绿萝的苗木放入穴盆，使表面排列在搅拌好后的土壤上，把多余的土壤补充到穴盆中，双手轻轻按压平坦即可，避免了尖刺，后期浇水时能够更轻松些。
最后，完成了穴盆的装填，绿萝会慢慢吸收养分，准备为它浇水，一般使用温开水适量和每次浇水的时间控制在5-10分钟内，也可以在短时间后补充少量水分，保证小苗身上的水分稳定。
在季节更替之前，每隔一段时间添加有机肥料及腐熟的肥料到穴盆，以增加养分，使植物更加健康鲜艳，同时需要注意穴盆土壤千万不要过湿以及植物两边不要暴晒，长时间避免曝晒，保持穴盆温暖干燥，每隔一段时间对穴盆进行除虫，以保护植物的安全。
绿萝是应季节温度变化而发生变化的植物，如果是冬季，它新的叶片会慢慢地休眠，如果是夏季，则会有繁盛的叶片，所以每一季顺应环境的变化，及时调整浇水的频率，才能让绿萝生长得茁壮。
通过以上简单的步骤就可以轻松的栽种绿萝。
拟南芥盆栽方案
拟南芥盆栽方案拟南芥（学名：Arabidopsis thaliana）是一种小型的一年生植物，因其生命周期短、易于培养和遗传实验的可行性，被广泛应用于植物科学研究中。
在本文中，我们将提供一个拟南芥盆栽方案，以帮助那些对这一植物进行自家种植的人。
1. 材料准备- 拟南芥种子：可在植物学实验室、种子公司或在线购买。
- 盆：选择适宜大小的盆，保证拟南芥根系能够充分扩展。
- 泥土：使用适宜的培养土，可在花草市场或园艺店购买。
- 平底盘或托盘：用于放置盆，以避免水滴在室内滴落。
2. 盆栽步骤2.1 准备盆土选择质地疏松、排水良好的培养土。
可以将培养土轻轻湿润，但避免过于湿润，以免引发根部腐烂。
2.2 播种将拟南芥种子均匀撒在培养土表面上，并轻轻压实，不要完全覆盖种子。
拟南芥种子较小，所以要小心操作，以确保均匀分散。
2.3 浇水使用喷壶或水壶从顶部轻轻喷洒水，保持培养土湿润。
避免使用喷头过大或水流过大的工具，以免种子被冲走。
2.4 光照与温度控制拟南芥适宜在温度适宜、充足的光照下生长。
将盆栽置于明亮的窗户旁或人工照明设备下。
室温保持在20-25摄氏度之间。
2.5 生长环境调节拟南芥对于光照的要求较高，因此要经常转动盆栽，以保证植株各个方向都能得到充足的光照。
如果环境光线不足，可以补充使用植物专用灯。
2.6 浇水与施肥保持培养土湿润，但避免过度浇水，以免引发根系病害。
约每周浇水一次，根据环境湿度和季节的变化做适当调整。
在生长过程中可以适时施加适量的植物营养液，以促进拟南芥的生长和发育。
3. 生长管理3.1 害虫防治定期检查拟南芥植株，如发现害虫如蚜虫、螨虫等，可以使用适量的杀虫剂进行处理，但要遵循产品说明。
3.2 避免拥挤随着拟南芥生长，植株之间可能会产生拥挤。
在植株茁壮成长后，适当间隔并摘除较弱的植株，以保证光照和营养的充足供给。
3.3 测量和记录生长数据观察拟南芥的生长情况，使用尺子或其它测量工具记录植株的高度、叶片数量等数据，以便后续分析比较。
拟南芥种植方法.doc
培养基上点种子：1.种子处理1.1 种子消毒处理在培养基中点样前，必须对种子进行消毒，防止感菌，具体方法为：先将种子倒在干净的纸上，挑去大的杂质，再将种子倒入EP管中，加入1mL70%酒精，振荡10min，将种子放在超净台中吹干。
1.2 点样将消毒处理后的种子，可以利用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，每个90mm培养皿上大约种30粒种子，防止植株长大后影响根与子叶的发育。
1.3 春化种子点样完毕后，将培养基密封，置于4℃冰箱里放置72h后，放回温室。
土培法：1.种种子前，要将营养土用自来水混匀后，121℃灭菌30min，待土冷却后，装入种植拟南芥的方盒中，再将方盒放入红色托盘中。
2.将要点的种子平铺在称量纸上，用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标记，以免遗种某个盒子。
（每个小盒子种5粒种子，每个大方盒子种9粒种子）3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室，并用一个干净的托盘盖在上面，大约两天后就可以打开上面的托盘，待植物长出4片叶子时，可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。
4.植株生长条件的控制幼苗移植后将花盆置于温室内，保证温室温度恒定在22℃，空气湿度70—80%，光照强度100—150μmol/m2/s，每天浇两次纯净水，上午9点左右一次，下午5点左右一次；一周浇一次营养液（1平匙溶于1L水中），营养液要灌在盆底。
浇水注意事项：1）水不可以浇的过多或过少，用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿；2）水要浇均匀，托盘四个角的方向如果喷壶喷不到，可以用挤瓶均匀地喷一些水；3）用喷壶浇水时，喷壶的水柱不可以太大，以免把植物连根拔起；4）当植株出现花芽时，一定要保证水分的供应，促进果实的发育。
当植株结有豆荚时，可以适当的减少供水量，每两三天浇一次水便可，以利于种子的成熟。
开花后的植物不能再用喷壶浇水，要从盆底灌水，但不可以一次性灌太多水；5）在盆底灌水后，待植物吸收完水后，可以将盆底多余的水分倒出来；6）拟南芥受到胁迫判断标准：叶柄发紫，叶片发黄，开花期提前等；7）如果做生理实验，植物一旦受到胁迫，需要把植物丢弃，重新种植，以免实验数据不准确。
拟南芥植物组织培养
拟南芥植物组织培养 WTD standardization office【WTD 5AB- WTDK 08- WTD 2C】拟南芥组织培养一、种子消毒：方法一：将拟南芥种子置于1 .5 ml eppendorf 管(微量离心管)中，加入1 ml 蒸馏水，4C春化3 d，70 %（v／v ）乙醇1mi n、7 %（v／v ）次氯酸钠10 mi n 浸泡消毒，并用无菌水冲洗5 次。
方法二：在超净工作台内，用无菌蒸馏水浸泡1 min，然后用80％乙醇消毒90s，最后用无菌蒸馏水冲洗3～5次备用。
消毒完毕的种子可以用200ul的tips吸去洗涤液，然后在超净工作台上挥发掉残余水分、洗涤液。
方法三、取野生型拟南芥种子放人离心管内，75％乙醇清洗后，无菌蒸馏水清洗1—2次，转入无菌离心管；5％次氯酸钠溶液浸泡5—6 min，用无菌蒸馏水清洗3～4次，加入1 ml无菌水，用移液枪接种。
二、选用的培养基选用1/2MS培养基对种子进行培养。
（MS和1/2MS都可以，1/2MS就是大量元素减半，其他东西和ms培养基是一样的量。
糖可以加，会长得比较好，但是也很容易污染。
如果在平板上要生长时间比较长，需要做一些实验的，比如根的发育，最好不要加。
）也可以用MS+30 g／L蔗糖的固体培养基。
（我想两种培养基都接种上，比作对比确定好坏）。
MS培养基配料表：三：接种方法拟南芥种子消毒后，用移液枪吸取拟南芥种子和水的混合物，均匀地在MS 生长培养基的培养皿平板上滴落，并使之形成两条平行的直线。
（如不行，可适当添加琼脂）。
四、培养得无菌苗接种后置于光照培养箱(型号：GXZ．500C；培养光照条件为16小时光照，8小时黑暗，培养温度为22℃中竖直培养。
3天后即可取材用于器官离体再生实验。
萌发5天后，在超净工作台中，用镊子将苗移栽到装有1／2 MS培养基的50ml三角瓶中（每瓶4--6棵，视情况而定），于短日照条件下培养30天左右获得无菌苗。
拟南芥植物组织培养
拟南芥植物组织培养 WTD standardization office【WTD 5AB- WTDK 08- WTD 2C】拟南芥组织培养一、种子消毒：方法一：将拟南芥种子置于1 .5 ml eppendorf 管(微量离心管)中，加入1 ml 蒸馏水，4C春化3 d，70 %（v／v ）乙醇1mi n、7 %（v／v ）次氯酸钠10 mi n 浸泡消毒，并用无菌水冲洗5 次。
方法二：在超净工作台内，用无菌蒸馏水浸泡1 min，然后用80％乙醇消毒90s，最后用无菌蒸馏水冲洗3～5次备用。
消毒完毕的种子可以用200ul的tips吸去洗涤液，然后在超净工作台上挥发掉残余水分、洗涤液。
方法三、取野生型拟南芥种子放人离心管内，75％乙醇清洗后，无菌蒸馏水清洗1—2次，转入无菌离心管；5％次氯酸钠溶液浸泡5—6 min，用无菌蒸馏水清洗3～4次，加入1 ml无菌水，用移液枪接种。
二、选用的培养基选用1/2MS培养基对种子进行培养。
（MS和1/2MS都可以，1/2MS就是大量元素减半，其他东西和ms培养基是一样的量。
糖可以加，会长得比较好，但是也很容易污染。
如果在平板上要生长时间比较长，需要做一些实验的，比如根的发育，最好不要加。
）也可以用MS+30 g／L蔗糖的固体培养基。
（我想两种培养基都接种上，比作对比确定好坏）。
MS培养基配料表：三：接种方法拟南芥种子消毒后，用移液枪吸取拟南芥种子和水的混合物，均匀地在MS 生长培养基的培养皿平板上滴落，并使之形成两条平行的直线。
（如不行，可适当添加琼脂）。
四、培养得无菌苗接种后置于光照培养箱(型号：GXZ．500C；培养光照条件为16小时光照，8小时黑暗，培养温度为22℃中竖直培养。
3天后即可取材用于器官离体再生实验。
萌发5天后，在超净工作台中，用镊子将苗移栽到装有1／2 MS培养基的50ml三角瓶中（每瓶4--6棵，视情况而定），于短日照条件下培养30天左右获得无菌苗。
拟南芥种植方法
培养基上点种子：1.种子处理1.1种子消毒处理在培养基中点样前，必须对种子进行消毒，防止感菌，具体方法为：先将种子倒在干净的纸上，挑去大的杂质，再将种子倒入EP管中，加入1mL70%酒精，振荡10min，将种子放在超净台中吹干。
1.2点样将消毒处理后的种子，可以利用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，每个90mm培养皿上大约种30粒种子，防止植株长大后影响根与子叶的发育。
1.3春化种子点样完毕后，将培养基密封，置于4℃冰箱里放置72h后，放回温室。
土培法：1.种种子前，要将营养土用自来水混匀后，121℃灭菌30min，待土冷却后，装入种植拟南芥的方盒中，再将方盒放入红色托盘中。
2.将要点的种子平铺在称量纸上，用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标记，以免遗种某个盒子。
（每个小盒子种5粒种子，每个大方盒子种9粒种子）3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室，并用一个干净的托盘盖在上面，大约两天后就可以打开上面的托盘，待植物长出4片叶子时，可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。
4.植株生长条件的控制幼苗移植后将花盆置于温室内，保证温室温度恒定在22℃，空气湿度70—80%，光照强度100—150μmol/m2/s，每天浇两次纯净水，上午9点左右一次，下午5点左右一次；一周浇一次营养液（1平匙溶于1L水中），营养液要灌在盆底。
浇水注意事项：1）水不可以浇的过多或过少，用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿；2）水要浇均匀，托盘四个角的方向如果喷壶喷不到，可以用挤瓶均匀地喷一些水；3）用喷壶浇水时，喷壶的水柱不可以太大，以免把植物连根拔起；4）当植株出现花芽时，一定要保证水分的供应，促进果实的发育。
当植株结有豆荚时，可以适当的减少供水量，每两三天浇一次水便可，以利于种子的成熟。
开花后的植物不能再用喷壶浇水，要从盆底灌水，但不可以一次性灌太多水；5）在盆底灌水后，待植物吸收完水后，可以将盆底多余的水分倒出来；6）拟南芥受到胁迫判断标准：叶柄发紫，叶片发黄，开花期提前等；7）如果做生理实验，植物一旦受到胁迫，需要把植物丢弃，重新种植，以免实验数据不准确。
拟南芥种植方法
培养基上点种子：1.种子处理1.1 种子消毒处理在培养基中点样前，必须对种子进行消毒，防止感菌，具体方法为：先将种子倒在干净的纸上，挑去大的杂质，再将种子倒入EP管中，加入1mL70%酒精，振荡10min，将种子放在超净台中吹干。
1.2 点样将消毒处理后的种子，可以利用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，每个90mm培养皿上大约种30粒种子，防止植株长大后影响根与子叶的发育。
1.3 春化种子点样完毕后，将培养基密封，置于4℃冰箱里放置72h后，放回温室。
土培法：1.种种子前，要将营养土用自来水混匀后，121℃灭菌30min，待土冷却后，装入种植拟南芥的方盒中，再将方盒放入红色托盘中。
2.将要点的种子平铺在称量纸上，用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标记，以免遗种某个盒子。
（每个小盒子种5粒种子，每个大方盒子种9粒种子）3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室，并用一个干净的托盘盖在上面，大约两天后就可以打开上面的托盘，待植物长出4片叶子时，可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。
4.植株生长条件的控制幼苗移植后将花盆置于温室内，保证温室温度恒定在22℃，空气湿度70—80%，光照强度100—150μmol/m2/s，每天浇两次纯净水，上午9点左右一次，下午5点左右一次；一周浇一次营养液（1平匙溶于1L水中），营养液要灌在盆底。
浇水注意事项：1）水不可以浇的过多或过少，用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿；2）水要浇均匀，托盘四个角的方向如果喷壶喷不到，可以用挤瓶均匀地喷一些水；3）用喷壶浇水时，喷壶的水柱不可以太大，以免把植物连根拔起；4）当植株出现花芽时，一定要保证水分的供应，促进果实的发育。
当植株结有豆荚时，可以适当的减少供水量，每两三天浇一次水便可，以利于种子的成熟。
开花后的植物不能再用喷壶浇水，要从盆底灌水，但不可以一次性灌太多水；5）在盆底灌水后，待植物吸收完水后，可以将盆底多余的水分倒出来；6）拟南芥受到胁迫判断标准：叶柄发紫，叶片发黄，开花期提前等；7）如果做生理实验，植物一旦受到胁迫，需要把植物丢弃，重新种植，以免实验数据不准确。
拟南芥种植
拟南芥种植方法
一．拟南芥生长条件
拟南芥生长的适宜温度白天为22-24℃左右，夜温最好比日温低2℃。
拟南芥在日照长于12小时下才会开花，一般拟南芥生长室的日照长度定于14-16h为佳，土壤湿度70%—80%，营养土：蛭石=1：1，3—4天浇一次营养液，从底盘浸入。
二．种子处理
1.取适量种子置于标记好的1.5ml离心管中，加入1 ml 70％乙醇轻微振1 min；
2.去乙醇，加入1 ml体积分数为10％的NaClO (次氯酸钠), 消毒5~10 min；
3.吸去NaClO, 用无菌水冲洗种子5次后, 加入600μl无菌水；
4.取适量拟南芥种子至10 ml 离心管中，加入0.05%的琼脂悬浮，置于4℃冰箱低温春化处理2-3 天。
三．土壤培养
将已春化处理的拟南芥种子，用消过毒的牙签或者移液枪将种子，点播在土壤中，一盆2—3颗即可，将花盆放入有水的底盘中,框中的水就会通过花盆底部的孔渗上来，待花盆中的基质湿透后即可点播。
用保鲜膜覆盖1-2天后揭膜，如果苗很弱，则在此基础上还需多覆盖1天。
当到4叶期时，要适当移苗，每盆一株。
小心轻轻用镊子拨开周围土壤，连根取出小苗（注意不要伤害根部）。
苗期不使用营养液，移栽后3-4天使用一次营养液，期间视情况浇水，但不要在底盘中始终保持水层。
在开始收籽期,不再需要过多的水分，可保持底盘干燥，此时每隔7-10天加一次水即可。
在种荚变黄，变干时可以收籽。
将种子抖落在纸上，用金属滤网过一下以除去杂质，将种子装入写了标记的小纸袋中，放于干燥的环境中让种子进一步干燥后，封存于1.5ml试管中，切记越干越好，长期保存的种子必需要干燥保存到4℃。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
1 培养基
MS培养基（Sigma公司）
B5培养基（pH 5.5）
改良的1/4 Hoagland 培养液（mM, pH6.0）：
2 植物材料的常规种植
拟南芥种子均匀地播撒于1/3 B5液体培养基浸润的蛭石上，塑料膜遮盖至种子萌
发，揭开膜，让其自然生长，适当间苗，烤苗至蛭石表面干燥后加水。
置于23 o C，
16/8 h的光照培养间中生长。
3 拟南芥种子的表面灭菌处理
1）拟南芥种子在4 C下春化3-5天。
2）在超净台上用70%酒精处理种子2-5分钟。
3）弃去酒精，用无菌水洗1-2次。
4）将种子用15% Bleach （KAO公司）处理15分钟，间歇振荡。
5）用无菌水洗4-6次，每次充分振荡混匀。
6）将种子悬浮在灭菌的0.1% Agar中。
7）均匀地将种子播撒在B5培养基平皿中。
4 植物材料的水培体系
拟南芥种子经表面灭菌处理后均匀播撒于1/2 MS固体培养基上，10-15粒/皿，生长2周后，小心地将其转入水培体系中。
水培体系是由培养皿及起支撑作用的锡箔纸组成。
培养皿中盛适当的液体培养基（通常用上述改良的1/4 Hoagland培养液）；锡箔纸上留出相距适当的小洞后，盖于培养皿之上。
将拟南芥幼苗的根小心地经由锡箔纸上的小洞浸入培养液中。
塑料膜覆盖，2-3天后揭去。
整个体系置于光照培养间中生长，每3-6天更换一次培养液。
5 拟南芥T-DNA插入突变体的筛选方法
到网站/tdnaprimers.html输入salk号设计引物LP、RP
T-DNA LB：LBb1: GCGTGGACCGCTTGCTGCAACT
LBa1: TGGTTCACGTAGTGGGCCATCG
用于PCR扩增。
采用双引物法，分别用LP＋RP，BP＋RP扩增基因组DNA。
方法：
1)将拟南芥突变体种子播种于MS培养基平皿中，生长2周后，将其转入蛭
石中，待长至抽苔期准备DNA的提取。
2)DNA提取缓冲液的配制：
3)剪取一片叶于1.5 ml Eppendorf管中，液氮充分研磨。
4)加40 μl 提取缓冲液，涡旋充分混匀。
5)95℃中水浴20分钟，间或混匀几次。
6)12,000 rpm离心15分钟。
7)吸取上清于一新的Eppendorf管，取10 μl稀释50倍。
然后取稀释后的DNA
用于PCR扩增。
PCR扩增体系为（25 μl体系）：
PCR反应程序：。