氨基柱使用注意事项
氨基柱使用及维护常识
氨基柱的使用：
需要注意的是，氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8要容易水解，所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备，特别是当你的使用条件是反相条件下时。
反相条件下使用时，要特别注意控制PH值范围，PH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。所以，在使用后以及准备长时间放置该柱时，必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。
95％水/5％乙腈
THF四氢呋喃
95％乙腈/5％水
并保持95％乙腈/5％水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min过夜冲洗。
6.3
方案3：柱子使用一定时间后，柱效下降，老化，也可清洗一下柱子恢复柱性能,清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲洗：
95％水/5％乙腈
THF四氢呋喃
95％乙腈/5％水
氨基柱使用及维护常识
2007年7月2日 评论 发表评论 氨基柱是同时可以用于正相条件和反相条件的这一点很多用户都已经知道；但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，对这一点的忽略可能会带给使用者一些麻烦。
对于新购买到的柱子，首先请注意打开分析测试说明书，了解柱子的保存溶剂。如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶，请先用异丙醇过渡。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压很高，适当调低流速即可。如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。
3.2
以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH11.0的氢氧化钠（LUNA）水溶液冲柱子（注意pH值切不可超过11.0），立即用水（
0.5ml/min的流速，30倍柱体积）冲洗，再换成流动相。
氨基柱的使用和保养
氨基柱的使用和保养氨基柱是同时可以用于正相和反相条件的一种色谱柱。
但正相溶剂和反相溶剂是不互溶的，这一点不能忽略。
对于新购柱子，首先请注意打开分析测试说明书，了解柱子的保存溶剂。
如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶，请先用异丙醇过渡。
过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压很高，适当调低流速。
如果流动相中还有缓冲盐类，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，避免缓冲盐的析出。
柱效检测：我用于判断一个用户是否有经验的指标之一，是用户是否习惯配制一些柱效检测标准溶液。
说到柱效检测，我可以向大家提供一个方法，而且很通用，你也可以用同样的标准溶液和流动相来检测硅胶柱和氰基柱。
流动相：10％乙酸乙酯＋90％正己烷流速1.0标准溶液：乙苯（或甲苯）＋苯甲酸甲酯检测波长254nm这个方法特别适用于新购柱子（新购柱子往往保存在正相溶剂中）时即进行检测，如有问题，可及时与供应商沟通。
也适合柱子在准备放置相当长一段时间之前，进行充分清洗后进行检测作为记录留档。
在平常的使用过程中，如果分析物是固定重复的，我们当然可以从对分析物的分离分析情况来作出判断；但如果分析物和分析条件不同时，定期检测柱效可以避免柱效下降导致分离不佳再分析查找原因这样浪费人力物力的过程。
特别要注意的是，当氨基柱（或氰基柱）在反相条件中使用时，如用该条件检测，请注意流动相的换相过渡问题。
氨基柱的使用：氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8容易水解，所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备，特别是当你的使用条件是反相条件下时。
反相条件使用时，要特别注意控制PH值范围，PH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。
所以，在使用后以及准备长时间放置时，必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是必需的。
当使用氨基柱进行酸性物质如果汁中糖份的分析时，酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，使用一段时间后对于某类的分析物保留性质有所改变或表现为柱效下降。
氨基柱简单说明注意
Luna NH2 PH：1.5-11氨基柱的使用注意事项：说明：.氨基柱既可以正相使用，也可以反相使用，但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，正常情况新氨基柱保存在正相环境中，例如LUNA氨基柱保存在正己烷-乙腈（99：1）中。
而我们做糖分析是用反相流动相，所以要先用异丙醇过渡。
反相使用1先用异丙醇冲洗管路（此时不接色谱柱）；然后接上色谱柱，以低流速（0.1ml/min）用30倍柱体积的异丙醇过渡(差不多一夜) 。
（必须用异丙醇过渡，否则会发生乳化现象，导致色谱柱使用效果变差。
）2再换成流动相，流动相平衡时间要长一些（为以后色谱柱的稳定打好基础）。
3 配制流动相时，应各组分分别量取，比例较小的组分要精密量取，需调pH值时要精密到0.1。
4反相条件下使用时，要特别注意控制pH值范围，pH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。
最理想的pH范围在pH3.0-7.05如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用80%水做流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。
色谱柱的冲洗：乙腈：水（95：5），过渡到乙腈：水（50：50），最后保存在乙腈：水（95：5）中。
色谱柱的保存反相使用时，如短期不用，可用95%甲醇或乙腈保存；长期不用时需将甲醇依次用异丙醇、氯仿置换，最后用正己烷保存。
再生：再生方案1：NH2柱用于反相条件时，NH2键会水解，尤其是在该柱子pH范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快，如果在这个条件下使用需要清洗一下，需要用10倍柱体积溶液冲洗，如下：先用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），再进行下面操作：95％水/5％乙腈THF四氢呋喃95％乙腈/5％水并保持95％乙腈/5％水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min过夜冲洗。
氨基柱清洗与使用
氨基柱的使用注意事项：
首先氨基柱的使用寿命肯定会比我们最常使用的C18、C8等色谱柱使用寿命短，这是氨基柱本身容易发生柱流失引起的，是色谱柱生产厂家普遍存在的问题，和哪个品牌没有关系。
使用时的注意事项如下：
新柱启用：由于氨基柱是保存在95%正己烷—5%异丙醇中的，做糖分析用乙腈+水流动相，所以首先要：不接色谱柱（即用两通代替色谱柱），用异丙醇冲洗仪器系统，0.5ml/min，冲洗0.5h左右
-----接上新的色谱柱，进口端先接上，流速由0.1ml/min升到0.3ml/min左右，出口端待有液体流出再接到检测器上，过渡4h----换成乙腈+水流动相，特别注意如果水中含有盐，先用乙腈+不含盐的水相过渡，而后再换成流动相。
使用后的冲洗：用完之后用分析时的乙腈+水同样比例冲洗40min左右----换成100%乙腈冲洗30min，并保存。
氨基柱清洗:
建议先用含0.5-1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液冲洗该柱, 30倍柱体积---再用50%水-50乙腈冲洗10倍柱体积----纯乙腈冲洗30倍柱体积---纯异丙醇冲洗30倍柱体积(流速降到0.3ml/min左右)----纯乙腈冲洗5min---72:28乙腈:水平衡------分析
现在做糖的分析我们推荐的是更耐用的氨基柱：InertSustain NH2 ，这款氨基柱相对于传统氨基柱，寿命会更长，具体如下。
NH2柱注意事项
氨基柱的使用和保养氨基柱是同时可以用于正相条件和反相条件的这一点很多用户都已经知道；但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，对这一点的忽略可能会带给使用者一些麻对于新购买到的柱子，首先请注意打开分析测试说明书，了解柱子的保存溶剂。
如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶，请先用异丙醇过渡。
过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压很高，适当调低流速即可。
如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。
柱效检测：我用于判断一个用户是否有经验的指标之一，是用户是否习惯配制一些柱效检测标准溶液。
说到柱效检测，我可以向大家提供一个方法，而且很通用，你也可以用同样的标准溶液和流动相来检测硅胶柱和氰基柱。
流动相：0％乙酸乙酯＋90％正己烷流速1.0标准溶液：乙苯（如乙苯找不动就用甲苯代替呗）＋苯甲酸甲酯检测波长：254nm这个方法特别适用于新购柱子（新购柱子往往保存在正相溶剂中）时即进行检测，如有问题，可及时与供应商沟通。
也适合在柱子在准备放置相当长一段时间之前进行充分清洗后进行检测作为记录留档。
在平常的使用过程中，如果分析物是固定重复的，我们当然可以从对分析物的分离分析情况来作出判断；但如果分析物和分析条件不同时，定期检测柱效可以避免柱效下降导致分离不佳再分析查找原因这样浪费人力物力的过程。
不过特别要注意的是，当氨基柱（或氰基柱）在反相条件中使用时，如用该条件检测，请注意流动相的换相过渡问题。
氨基柱的使用：需要注意的是，氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8要容易水解，所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备，特别是当你的使用条件是反相条件下时。
反相条件下使用时，要特别注意控制PH值范围，PH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。
所以，在使用后以及准备长时间放置该柱时，必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。
氨基柱的使用和保养
氨基柱的使用和保养氨基柱是一种用于离子交换的色谱柱，常用于生物化学、分子生物学等领域中。
它可以用于样品的富集、分离和纯化，常见的氨基柱有强阳离子交换柱和强阴离子交换柱。
1.样品预处理：氨基柱在使用之前需要进行打膜处理，将柱子封堵活性位点，并参与到离子交换反应中。
常见的打膜方法有傅肯封堵法、交联封堵法等。
2.样品加载：将样品溶液通过柱子，样品中的目标离子与氨基柱上的功能基团发生交换反应，将目标离子吸附在柱子上，而非目标离子会从柱子中洗脱。
3.清洗：清洗是为了去除非目标离子和杂质，保证样品的纯度和分离效果。
主要可以用不同的缓冲溶液进行清洗，也可以使用溶剂进行洗脱。
4.洗脱：洗脱是将吸附在柱子上的目标离子洗脱下来，常用的方法有梯度洗脱、浓度洗脱等。
洗脱时需要控制洗脱缓冲液的pH值和离子浓度，来调节目标离子与功能基团间的亲和力。
5.再生：在使用后，柱子可能会受到杂质的积累或堵塞，需要进行再生。
可以用酸性、碱性溶液或盐溶液进行洗脱，去除污染物和杂质。
氨基柱的保养：1.注意保存：柱子需要保存在干燥、避光的地方，避免受潮和受热。
2.清洗：每次使用后，都要对柱子进行适当的清洗，去除残留的溶液和杂质。
可以用纯水或其他清洗溶液进行清洗，注意不要使用过于强酸或强碱溶液，避免损坏柱子。
3.洗脱剂的pH值：在洗脱时，要注意洗脱缓冲液的pH值，过高或过低的pH值都可能影响柱子的稳定性和分离效果。
推荐使用pH范围在2-10之间的缓冲液。
4.洗脱剂浓度：洗脱剂的浓度也会影响柱子的使用寿命和分离效果，过高的浓度可能会损坏功能基团，过低的浓度则可能无法有效洗脱样品。
根据具体实验需要，选择合适的洗脱浓度。
5.避免堵塞：在使用氨基柱时，样品中的杂质和残留物可能会堵塞柱子，影响分离和洗脱效果。
因此需要注意样品的净化和前处理，以减少污染物对柱子的影响。
总结起来，氨基柱的使用和保养非常重要，它直接影响样品的分离效果和纯度。
正确的使用和保养方法可以延长柱子的使用寿命，提高实验的可靠性和稳定性。
氨基色谱柱操作说明书
氨基色谱柱操作说明书感谢您使用广州研创生物技术发展有限公司生产的HPLC色谱柱，为获得最佳的分离效果和更长的使用寿命，请在使用色谱柱前仔细阅读本操作说明，若因使用不当造成色谱柱损坏，本公司概不负责。
1、使用前注意事项1）出厂的色谱柱保存在正己烷/异丙醇（9/1）中,使用正相条件前请先用正己烷冲洗色谱柱30 mL,再用流动相稳定系统至基线平稳；如使用反相条件，请先使用无水乙醇过渡（＜0.3 mL/min）,过渡体积不小于30 mL,最后用流动相稳定系统至基线平稳。
2）色谱柱可适用于正相模式和反相模式，建议专柱专用。
2、参考操作条件3、流动相3.1正相流动相1）甲醇在烷炷中的溶解性不好，正己烷中甲醇的最大含量是5%。
如果要烷炷中使用甲醇，最好同时加入一定量的乙醇；2）如果待分析样品为酸性（碱性）化合物，往往要在流动相中使用酸性（碱性）添加剂。
对于碱性化合物建议在流动相中加入碱性添加剂，如二乙胺、三乙胺、乙醇胺等；而酸性化合物，一般加入有机酸，如三氟乙酸、乙酸、甲酸等。
有机酸或有机碱的加入量一般为0.1%,不宜超过0.3%。
3.2反相流动相1）反相流动相一般使用甲醇、乙月青和水，流动相允许的最高有机相比例为100%,最高的水相比例为40%；2）当需要使用缓冲溶液时，缓冲液的浓度不宜太高，有机和无机的缓冲溶液浓度不能超过0.3%；3）色谱柱可承受的缓冲溶液pH范围为4.0〜8.0,超过该范围时会降低色谱柱的寿命。
4、色谱柱保养1）必须使用色谱级试剂配制流动相，使用前需经0.45 pm滤膜过滤和超声脱气处理；2）进样前，需过滤样品溶液；3）使用含酸/碱添加剂的正相流动相后，需用正己烷/异丙醇=9/1冲洗色谱柱40 mL,然后封存；4）使用含酸、碱或盐的反相流动相后，应用低比例有机相冲洗色谱柱60 mL去除，用80%甲醇或80%乙月青冲洗色谱柱30 mL,保存色谱柱；5）若反相流动相中不含酸、碱或盐等，可用80%甲醇或80%乙腊冲洗色谱柱30 mL,保存色谱柱。
氨基柱使用注意事项
1．柱子所使用的PH范围是2~8，且最好不好在极端条件下使用2．柱子能承受最大40mpa（6000psi）的压力，但是过高的压力应该是被避免的，过高的压力会造成柱床的结构的破坏，而且可能会导致分析过程中峰分叉3．柱子能够使用所有有机溶剂（PH范围在2~8），试剂最好是HPLC级别（色谱纯），且使用前用0.45um滤膜过滤。
不纯试剂（非HPLC级别）的使用会造成色谱柱柱头不可逆的吸附，这些杂志会阻碍吸附位点、改变色谱柱的选择性甚至会造成峰分叉。
在梯度洗脱中会造成所谓的“鬼峰”，鬼峰在梯度洗脱中总是会出现在相同的位置，他们的源头不是样品，而是溶剂或者溶剂中添加的物质，因此建议在每个方法开始的时候要不进样品走一针梯度程序以确定鬼峰是否存在。
为了防止柱头不可逆的吸附，建议经常用一个预柱，预柱可以延长色谱柱的使用寿命，此外它可以过滤从泵头还有进样阀中颗粒性的物质。
在线过滤器对于预柱来说是个代替，它安装在进样阀和色谱柱之间，新型的在线过滤器可以直接接在柱子上。
在线过滤器可以极大的吸附溶剂中的颗粒性物质，但是它不能代替像预柱那样阻止溶剂杂志对柱子造成不可逆的吸附。
4．柱子的保存：对于反相柱子（.NH2和苯基）来说最佳的保存体系是乙腈/水，且水的比例绝不能低于50%.注意：哪怕是短时间的保存，也要将缓冲溶液从色谱柱中冲洗干净以防止海藻的生长。
缓冲盐和乙腈是不互溶的，而且它会阻塞管路和柱子。
5.平衡时间：色谱柱的平衡时间取决于色谱柱死体积，一般需要20个柱体积。
而250*4.6mm柱子的死体积是2.91ml，如果用1ml/min 的话大概需要58min6.色谱柱的再生对于反相填料来说（和苯基）过程如下先用20倍柱体积的水（一般要加5%的乙腈），再用20倍柱体积的乙腈，再用5倍柱体积的异丙醇，再用20倍柱体积的正己烷，再用5倍柱体积的异丙醇，再用20倍柱体积的乙腈。
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1．柱子所使用的PH范围是2~8，且最好不好在极端条件下使用2．柱子能承受最大40mpa（6000psi）的压力，但是过高的压力应该是被避免的，过高的压力会造成柱床的结构的破坏，而且可能会导致分析过程中峰分叉
3．柱子能够使用所有有机溶剂（PH范围在2~8），试剂最好是HPLC级别（色谱纯），且使用前用0.45um滤膜过滤。
不纯试剂（非HPLC级别）的使用会造成色谱柱柱头不可逆的吸附，这些杂志会阻碍吸附位点、改变色谱柱的选择性甚至会造成峰分叉。
在梯度洗脱中会造成所谓的“鬼峰”，鬼峰在梯度洗脱中总是会出现在相同的位置，他们的源头不是样品，而是溶剂或者溶剂中添加的物质，因此建议在每个方法开始的时候要不进样品走一针梯度程序以确定鬼峰是否存在。
为了防止柱头不可逆的吸附，建议经常用一个预柱，预柱可以延长色谱柱的使用寿命，此外它可以过滤从泵头还有进样阀中颗粒性的物质。
在线过滤器对于预柱来说是个代替，它安装在进样阀和色谱柱之间，新型的在线过滤器可以直接接在柱子上。
在线过滤器可以极大的吸附溶剂中的颗粒性物质，但是它不能代替像预柱那样阻止溶剂杂志对柱子造成不可逆的吸附。
4．柱子的保存：
对于反相柱子（.NH2和苯基）来说最佳的保存体系是乙腈/水，且水的比例绝不能低于50%.
注意：哪怕是短时间的保存，也要将缓冲溶液从色谱柱中冲洗干净以
防止海藻的生长。
缓冲盐和乙腈是不互溶的，而且它会阻塞管路和柱子。
5.平衡时间：色谱柱的平衡时间取决于色谱柱死体积，一般需要20个柱体积。
而250*4.6mm柱子的死体积是2.91ml，如果用1ml/min 的话大概需要58min
6.色谱柱的再生
对于反相填料来说（和苯基）过程如下
先用20倍柱体积的水（一般要加5%的乙腈），再用20倍柱体积的乙腈，再用5倍柱体积的异丙醇，再用20倍柱体积的正己烷，再用5倍柱体积的异丙醇，再用20倍柱体积的乙腈。