分光光度法测定水体中叶绿素a含量的改进

置于 ４℃冰 箱中 ｌ 放
避 光 浸 泡 ４ １ 用 。 ￣ ２ｈ备
６ 离心 。 离心管放人离心机 中 ， ３５０ｒｒ ｎ的速 ） 将 以 ０ ｎ ／ｉ 度离心 １ ｎ ５ｍｉ。
７ 测定和 计算 。将离心 后的上清液 倒入 １ ｍ 比色皿 ） ｃ
水 生态 环境
【 文章编号 ］ｏ ２—０２ （０ ２０ —０ ３ １ｏ ６ ４ ２ １ ）６ ０２—０ ２
东 北水利水 电
２ １ 年 第 ６期 ０２
分光光度法测定水体中叶绿素 ａ 含量的改进
戴 欣 ，杨 航 ・石 岩 ， 雪 ， ， ， 鲁 王玲静 ｚ李 聪 ，
（． １ 松辽流域水资源保护局松辽流域水环境监测中心 ， 吉林 长春 １０２ ；． ３０ １２ 河海大学 ， 江苏 南京 ２０９ ） １０８
Ｓ ８ —１９ Ｌ ８ ９ ４标准 方法使用 的是一般 微孔 滤膜 ， 多为醋
酸 纤维材质 。叶绿素 ａ 定时要求 ７０ｎ 处吸光 度值低 测 ５ ｍ 于 ０ ０， ． ５ 因醋酸 纤维 滤膜在丙酮 溶液 中溶解 ， 一次离心 ０ 用
方 法有时很难达 到分 析要求 。在 实际 测试 中 ， 用醋酸 纤 使
附滤膜残渣， 不易洗脱 ， 易造成样品损失； 由于实验人员的差 ・
异， 对研磨的操作不尽相同 ， 引起实验 结果重现性差。 容易
本方 法中使用 的反 复冻融 法 【 即 使用 超低 温冰 箱对 ３ １ ，
于室温下 ５ｍｉ， ｎ 此过程反 复 ３次。向离心管 中加入 ９ ％ ０ 丙
游植物 的数 量 ， 而表征水 体富营养化 的程度 。 进
目前国 内 测定叶 绿素 ａ的方 法主 要是 使 用分 光光 度 法和 荧光 法 ， 其中 分光 光度法 较为 常用 。方法 上主要 采用 Ｓ ８ — ９ ４ 标准 规定 的方法 ， 该标准 方法在 实践工作 中 Ｌ８ １９ｍ 但 还存在 着实验 结果平行性 不好 、叶绿素 ａ 取效率不高 等 提
裹一层铝 箔 ， 放人 一 ０℃以下 的冰 箱中保存 。 ２
・
０ ０ 的要求 。实验 结果见 表 １ ．５ ０ 。
２２ 不同提取方法对 测定结果 的影 响 ．
Ｓ８ — ９ ４ 准中使用研钵研 磨滤膜 。研钵是开放式 Ｌ ８ １９ 标
的 器皿 ， 完全 由实 验人 员手 工操 作 ， 实验 中使 用的 溶剂丙 酮 易挥 发 ， 人体产 生危害 ； 对 另外研钵 内壁不 平整 ， 粘 极易
维滤膜 ， 品在 ７０ｎ 样 ５ ｍ处 的吸 光度为 ０ ０～ ． ９ 平均 ．８０ １， ０ ０
００２ ．１ 。该方法 参考美国 Ｅ Ａ标 准ｌ 用玻璃 纤维 滤膜 ， Ｐ ２ １ 使 虽
然价格稍高 ， 以有 效地避 免滤膜 的溶解 对测定 结果的 但可 影 响。在实 际 测试 中 ，样 品 ７０ｎ ５ ｌ 的吸 光度 值为 ０ ｎ处 —
００ ５ ． ，平 均为 Ｏ０ ２ ０ ． ，可 以满 足 ７ ０ｎ ０ ５ ｍ处 吸光 度值 低于
３ 水样 采集 。根据不 同的水体 ， ） 采集 ５０ １ ０ ｌ ０～ ０ 水 ０ ｍ 样 于棕 色玻璃 瓶或 深 色塑料瓶 中 ，每升 水样加入 １ 的碳 ％ 酸 镁悬浊液 １ｍ ， ｌ以防止酸 化 引起 的色素溶解 。 ４ 样品富 集 。 ） 将微孔 滤膜放置在 连接有真 空泵的抽滤 器上 ， 根据水 样 的富营 养化程 度准 确量 取定量 体积 的混匀 水样进 行抽滤 。 滤时 负压不 应超 过 ２ Ｐ ， 抽 ０ｋａ逐渐减 压 ， 在 水 样刚 刚完 全通过 滤膜时结束 抽滤 。用镊子ｉ Ｃ Ｊ ， ． 将滤膜取 出 ， 样品 的一面对 折 ， 将有 用滤纸吸干 剩余水分 。如样品不 能及 时提 取 ， 将吸 干 水分 的 滤膜 放入 培 养皿 中 ， 应 外面包
中 ， ９ ％丙酮 溶液 做 参比 ， 以 ０ 分别 在 ７０ ６ ４ ６７ ６０ｎ ５ ，６ ，４ ，３ ｍ 波长处测定吸光度值 。带入到计算 公式中计算结果 。
问题， 因此 ， 为了使 测定叶绿 素的 标准 方法更 加完 善 ， 有必 要对 方法进行改 进 。 以下针对原 方法 中样品保 存 、 水样处 理等环 节存在 的
［ 中图分类号 】 ３ ． Ｘ８ ０ ２
［ 文献标识码 ］ Ａ ５ 提取 。将 过滤后的滤 膜放 入带有 螺帽 的离心管 中 ， ）
０ 引
言
叶绿素 ａ 浮游性 藻类植物 体 内重要化学 成分 ， 过 是 通
测定 水体 中藻 类体 内叶 绿 素的 含 量可 以推 断 出水 体 中浮
旋 紧螺帽 ， 放入 － ０℃ 低温 冰箱 中冷 冻 ２ ｉ， 出放置 ４ ０ｍｎ 取
［ 要 ］ 文在大量 实验基础上 对分光光度法测定 水体 中叶 绿素 ａ 法进 行 了改进研 究。实 摘 本 方
验结果表 明 ： 过滤 藻类使 用玻璃 纤维滤膜结果要优 于普通微孔 滤膜 ： 提取过 程 中用反 复冻融 法
结 果 优 于研 钵 研 磨 法 。
［ 关键词 ］分光光度 法 ； 叶绿素 ａ 改进措施 ；
问 题进行了 一系列 实验 ， 出了 有效的改进措施 。 提
２ 结果 与讨 论
２１ 过滤藻类的滤膜 对测定结果的影 响 ．
１ 实验 部 分
１试 剂。碳酸镁悬 浊液 ， （ Ｃ ＝ ％ 丙酮溶液 ， ） ￣ Ｍｇ Ｏ ） １ ； ｏ
ｐ（ ｃＨ ） ９ ％（ Ｖ ； 酸 溶 液 ， ＨＣ） Ｏ１ｍｏ／ ＝ Ｏ ｖ／ ）盐 Ｃ（ １ ． ＝ ｌＬ
２仪 器和设 备。可见分 光光度计 ； 滤器 ； 滤膜 ， ） 抽 微孔 直径为 ４ ｎ、 径为 ０ ｍ的玻 璃纤维滤膜 ； 空泵 ； ７ ｎｌ ｒ 孔 ． ７ 真 低 温冰箱 ， 制在一 ０℃ ± ℃ ； 能控 ４ １ 离心机 ， 速能达到 ３００ 转 ０～
４０ ０ｒｍｉ， ０ ／ ｎ 宜使 用带控温 装置的离心 机。