肝糖原的提取与鉴定实验报告
肝糖原的提取与鉴定实验报告实验六肝糖原的提取实验六肝糖原的提取、鉴定与定量（生物化学实验操作考核卷）姓名，学号，专业，级班组，月日目的要求:1. 掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2. 了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3. 正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4. 熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
5. 正确掌握溶液转移的操作。
6. 正确操作使用分光光度计。
实验原理:糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95, 乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。
CuSO 什 2NaOH ? Na2 SO4+Cu(OH)2?2Cu(OH)2十 C6H12O6 ? 2CuO 十氧化型葡萄糖 +H2O2CuOH ? Cu2O?红色)+H2OCu(OH)CuO?(黑色)+H2O糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生 物—— 5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质 在620nm 处有最大吸收。
糖含量在（10?100）?g 范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比 色，通过标准对照法 （直接比较法 ）即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留 肝糖原。
实验材料 :（ 一 ） 仪器1. 普通离心机，室温？100?恒温水浴箱（X 2） , 722型分光光度计，精度为 10mg 级电子天平（X 1）试管架（X 1），10mL 离心管（X 2），（100 X 15）mm 试管（X 6）刻度吸量管（2mL X 1，5 mL X 2），1000^L 微量可调取液器（X 1）5. 100mL 容量瓶(X 1)6. 白瓷反应板 （X 1）（ 二） 实验样品和试剂1. 鸡肝。
2. 95, 乙醇。
3. 0.31mol/L(5,) 三氯醋酸溶液 :称2. 剪刀（X 1），镊子（X 1），研钵（X 1）3. 4.取未潮解的三氯醋酸(C2HCl3O2，163.39)5g ，加蒸馏水溶解至100 mL。
4. 0.15mol/L NaCl 溶液:称取8.8g NaCl 加蒸馏水溶解至1000 mL。
5. 12mol/L HCI: 浓HCI 原液(36%?38%)6. 12.5mol/L(50,)NaOH: 称取NaOH 50g 用蒸馏水溶解至lOOmL7. 碘试剂：碘lOOmg和K1 200mg溶于50mL蒸馏水中。
8. 班氏试剂: 称取柠檬酸钠(C5H5Na3O7?5H2O294.10)173g 和无水碳酸钠(Na2C03，105.99)100g 溶于蒸馏水800mL中，加热促溶。
冷却，慢慢倾人17.3,硫酸铜(CuSO4?5H2O249.68) l00mL,边加边摇。
再加蒸馏水至1000mL混匀，如混浊可过滤取滤液。
此试剂可长期保存。
9. 5.35mol/L(30,)KOH 溶液：称取KOH 30g加蒸馏水溶解至100 mL。
11. 标准葡萄糖液(50mg/L):称取已干燥恒重的无水葡萄糖25mg加蒸馏水溶解至500 mL。
12. 17mol/L(90,)H2SO4:量取蒸馏水30mL 加浓H2SO4500 m。
13. 蒽酮显色剂：称取蒽酮0.20g，用17mol/L H2SO4溶解至100 mL。
此试剂不稳定，以当日配制为宜，冰箱保存可用4?5 天。
实验方法:吸取1mL量溶液时使用可调微量取液器，吸取1mL以上量溶液时使用刻度吸量管。
( 一) 肝糖原的提取与鉴定操作流程如下。
鸡肝约1 g ，剪碎，5%CCl3COOH 1 ml5%CCl3COOH 3 ml研磨成肝匀浆3分钟(4000 r / min)，5 ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟4000 r / min)上清（弃去）沉淀，蒸镏水2 ml鉴定方法?1ml，浓HCl 0.2mL0.1mL(2 滴)，班氏试剂0.2mL（4 滴）混匀沸水浴2注意事项1. 肝糖原提取一步，向上清液中加入5mL95乙醇后，务必注意混匀。
由于上清液为水溶液，比重大于95,乙醇，溶液分成两层。
加之上清液已3mL多，总量接近9mL混匀操作比较困难，最好用倾倒混匀，也可用滴管或吸量管吸、吹混匀, 或用玻璃棒搅拌混匀。
2. 糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基数的多少有关。
葡萄糖残基在20 个以下的会使碘呈现红色，20?30个之间使碘呈现紫色，60 个以上的会使碘呈现蓝色。
淀粉中分枝链较长，故呈蓝色，而肝糖原分枝中的葡萄糖残基在20 个以下（通常8?12个葡萄糖残基），吸附碘后呈现红棕色。
3. 糖原水解液中葡萄糖的鉴定一步，加班氏试剂不能过量，否则反应液呈黑色浑浊，观察不到应有的结果。
（二）肝糖原定量测定操作流程如下鸡肝0.070.15 g , 30%KOH 1.5ml沸水浴15 分钟取干净试管4支，按下表操作。
试剂（ml）蒸馏水标准葡萄糖溶液（0.05mg/mL）糖原消化液0.2%蒽酮溶液定其余各管溶液的吸光度（A）。
计算:肝糖原（g/100 g肝组织）=考核操作内容： 1（吸量管操作（5 分）;2（可调式微量取液器操作（5 分）; 3（溶液混匀操作（视具体情况，采用合适的混匀方法）（5 分）;4（溶液转移操作（5 分）; 5（分光光度计比色操作（5 分）。
操作标准：面每1 项操作满分记5 分，操作共计25 分。
1（执管：要求右手拿吸量管，左手拿橡皮球，只能用食指而不能用拇指按压吸量管上口来调节吸取液量的刻度; 吸液、排液整个操作过程吸量管应始终保持垂直。
2(坐姿: 要求腰、背保持竖直，看刻度时眼睛保持平视。
3(吸取溶液：吸量管插入液面深度约0.5cm,不能一插到底，也不能插入过浅而吸进空气致使溶液进入橡皮球内; 调控吸量管吸取液量的刻度时，吸量管尖应离开液面靠在容器内壁上。
4(排出液体：吸量管尖应靠上受纳容器内壁，让管内溶液自然流出。
不能用橡皮球吹压，而且在流净后吸量管尖停靠受纳容器内壁至少3 秒。
( 二) 可调式微量取液器操作1( 设定容量值：转动加样器的调节旋钮，反时针方向转动旋钮，可提高设定取液量。
顺时针方向转动旋钮，可降低设定取液量。
在调整设定移液量的旋钮时，不要用力过猛，并应注意使取液器显示的数值不超过其可调范围。
2( 吸液：(1) 选择合适的吸头安放在取液套筒上，稍加扭转压紧吸嘴使之与套筒之间无空气间A样品A标准X 0.05 100肝组织重(g) X 100 1000 Xl.11空白管1.0 -------------------- 2.5 标准管一1.02.5 样品管——1.0 2.5 混匀，沸水浴10分钟，冷却。
在分光光度计620 nm波长处，用空白管溶液调零，测隙;(2) 把按钮压至第一停点，垂直握持加样器, 使吸头浸入液面下2~3毫米处,然后缓慢平稳地松开按钮，吸入液体，等一秒钟，然后将吸头提离液面，贴壁停留2-3 秒，使管尖外侧的液滴滑落。
3( 放液：(1) 将吸头口贴到容器内壁底部并保持100?~40?倾斜;(2) 平稳地把按钮压到第一停点，等一秒钟后再把按钮压到第二停点以排出剩余液体;（3）压住按钮，同时提起加样器，使吸头贴容器壁擦过，再松开按钮。
按吸头弹射器除去吸头。
4（压放按钮时保持平稳; 加样器不得倒转; 吸头中有液体时不可将加样器平放。
取液器吸嘴为一次性使用。
实验完毕，将取液器读数调至最大量程值，竖立放于支架上。
（三）溶液的混匀（操作流程中下划实线的3 处）1（肝糖原的提取与鉴定操作中，肝匀浆上清液中加5mL95乙醇后的混匀最好用倾倒混匀，也可用滴管或吸量管吸、吹混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。
2（肝糖原定量测定中，肝组织消化液沸水浴后全部转入100 mL容量瓶，加水至刻线后的混匀应采用倒转混匀。
3（肝糖原定量测定中，加蒽酮溶液后的混匀，可将试管倾斜约450再作旋转混匀。
因蒽酮溶液（浓硫酸配制）比重大于样品水溶液很多，一加入便沉于管底（加试剂的顺序一定不能颠倒），不倾斜试管旋转混匀不了。
（四）溶液的转移（操作流程中下划波纹线的两处）1（在研钵中研磨后的肝匀浆转入试管离心可用滴管或取液器吸取转移，如果采用倒入，不能洒落管外，应尽量转移干净。
2（肝组织沸水浴后的消化液转入100 mL容量瓶前应冷却；转入时用玻璃棒引入，玻璃棒头插入容量瓶靠瓶颈磨口下约1cm处，玻璃棒上端不要靠上瓶口边沿，引入时试管口靠玻璃棒的位置靠近容量瓶口，不要离开瓶口太高，以免消化液沾染玻璃棒较长；转入过程中，溶液不要沾染到容量瓶磨砂口上，更不能滴洒到容量瓶外面；应用蒸馏水洗消化管3 遍以上，洗液一并全部转入容量瓶。
（五）分光光度计操作1（波长选择，仪器调零，空白调零，灵敏度挡选择等操作正确。
2（手拿比色杯毛面。
3（比色溶液不能洒落比色杯外或试管外。
4（比色过程操作正确。
实验结束后，器材按要求清洗干净、器材与试剂瓶归回原位和台面卫生满分5实验报告结果要求1（肝糖原的提取、鉴定鉴定方法?和鉴定方法?中最后的“呈色对比”和“观察颜色变化”，结果一定要明确表达是“有变化”或“没有变化”，有变化的话还要具体写出变成什么颜色了。
而且要作出篇二: 肝糖原的提取和鉴定肝糖原的提取和鉴定、实验目的1、学会和掌握肝糖原提取和鉴定的原理和方法。
2、正确掌握使用离心机的方法步骤。
、实验原理三、实验步骤（一）、肝糖原提取1、用脱臼法处死白鼠，立即取出肝脏，迅速以滤纸吸取附着的血液。
称取肝组织约2g,置研钵中，加入10汇氯乙酸2ml，用剪刀把肝组织剪碎，再加石英砂少许，研磨5min。
2、再加5%三氯乙酸4ml，继续研磨1min,至肝脏组织已充分磨成糜状为止,转入离心管，然后以2000r/min 离心10min。
3、小心将离心管上清液转入另一个离心管中，加入同体积的95%乙醇，混匀后，此时糖原成絮状沉淀析出。
4、溶液以2000r/min离心10min。
弃去上清液，并将离心管倒置于滤纸上1~2min。
5、在沉淀内加入蒸馏水2ml,用细玻璃棒搅拌沉淀至溶解，即成糖原溶液。
( 二) 、鉴定1、取2支小试管A、B, —支A加糖原溶液10滴，另一支B加蒸馏水10滴,然后在两管中各加碘- 碘化钾溶液1 滴，混匀，比较两管溶液颜色有何不同。
肝糖原的提取与鉴定实验报告
肝糖原的提取与鉴定实验报告实验六肝糖原的提取实验六肝糖原的提取、鉴定与定量(生物化学实验操作考核卷)姓名，学号，专业，级班组，月日目的要求:1. 掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2. 了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3. 正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4. 熟练运用溶液混匀的各种方法(视具体情况，采用合适的混匀方法)。
5. 正确掌握溶液转移的操作。
6. 正确操作使用分光光度计。
实验原理:(一)肝糖原的提取、鉴定糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95,乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。
CuSO4十2NaOH ? Na2 SO4+Cu(OH)2?2Cu(OH)2十C6H12O6 ? 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2O2CuOH ? Cu2O?(红色)+H2OCu(OH)CuO?(黑色)+H2O(二)肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm处有最大吸收。
糖含量在(10?100)?g范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法(直接比较法)即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。
实验材料:(一)仪器1. 普通离心机，室温?100?恒温水浴箱(×2)，722型分光光度计，精度为10mg级电子天平(×1)2. 剪刀(×1)，镊子(×1)，研钵(×1)3. 试管架(×1)，10mL离心管(×2)，(100×15)mm试管(×6)4. 刻度吸量管(2mL×1，5 mL×2)，1000μL微量可调取液器(×1)5. 100mL容量瓶(×1)6. 白瓷反应板(×1)(二)实验样品和试剂1. 鸡肝。
肝糖原的提取与测定
肝糖原的提取与鉴定一、实验目的：1、掌握碘与糖原作用的显色原理。
2、熟悉班氏试剂检验还原糖的原理。
3、了解实验动物的选择和注意事项。
二、实验原理：肝糖原是葡萄糖在人体内重要的储存方式之一。
肝糖原的合成和分解，对血糖浓度的调节起着关键的作用。
糖原是高分子化合物，正常情况下分子量约4×106，微溶于水，无还原性，与碘作用呈红色，这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
将新鲜的肝组织与石英砂以及CCl3COOH共同研磨，当肝组织被充分破碎后，其中的蛋白质被CCl3COOH变性沉淀，而糖原仍溶于溶液中。
过滤除去沉淀，糖原不溶于乙醇，在滤液中加入乙醇将糖原沉淀出来。
将沉淀的糖原溶于水，一部分做碘的颜色反应，一部分经酸水解为葡萄糖，用班氏试剂检验。
三、实验步骤：（一）肝糖原提取1.取大白鼠一只，饱食30-60min后，置于封闭桶中，乙醚麻醉5分钟。
立即取出肝脏，迅速用滤纸吸去血液。
称重后置于研钵中，按照1g/1mL的比例加入10%三氯醋酸以及少量石英砂，初步研磨。
2.再按照1g/2mL比例加入5%三氯醋酸，继续研磨组织至糜状。
3000r/min离心10min，取上清液置于一刻度离心管中。
3.加入等体积95%预冷乙醇，混匀静置10min，此时糖原成絮状沉淀析出。
4.3000r/min离心10min，弃上清后将离心管倒置于滤纸上1-2min，吸去残余液体。
5.沉淀中加入蒸馏水溶解。
（二）肝糖原的鉴定1.取小试管2支，一支加入糖原溶液10滴，另一支加入蒸馏水10滴。
两管各加碘液1滴，混匀观察现象。
2.剩余糖原溶液中加入浓盐酸3滴，沸水浴10min水解。
取出冷却，用20%NaOH调至中性。
3.在一只大试管中加入班氏试剂2mL，在沸水浴中预热后，小心取水解液沿管壁加入，注意不要搅动下层班氏试剂。
沸水浴2min观察现象。
四、实验结果：1.加入糖原溶液的小试管中变为红色，而加入蒸馏水的小试管中仍为黄色；2.加入班氏试剂沸水浴后，试管中产生砖红色的沉淀环。
079-肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告
生物化学实验报告姓名：符含敏学号： 3140090079专业年级： 2014级预防医学组别：第三实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期2015-1-8 实验地点第三实验室合作者杨锐指导老师朱利娜评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的：提取鸡肝中的肝糖原进行肝糖原的定性以及定量实验二、实验原理：1.低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，使糖原能很好地保存在上清液中，95%的乙醇能将滤液中的糖原沉淀。
2.糖原溶液遇碘呈红棕色，糖原水解成的葡萄糖与班氏试剂水浴加热可变黑色。
3.糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸可使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物，它再与蒽酮试剂脱水缩合生成蓝色的化合物。
4.糖含量在10-100μg，溶液颜色深浅与可溶性糖含量成正比。
三．实验材料：1.鸡肝乙醇 5%三氯醋酸 50%NaOH 12mol/LHCl 碘试剂班氏试剂普通离心机室温至100℃恒温箱可见光分光光度计天平剪刀镊子研钵试管架10ml离心管刻度吸量管白瓷反应板2. 30%KOH 标准葡萄糖溶液 90%浓硫酸蒽酮显色剂四．实验步骤：1.肝糖原的提取与鉴定：鸡肝约1.5 g，剪碎＋5%CClCOOH 1 ml3研磨至乳状＋5%CClCOOH 3 ml3研磨成肝匀浆3分钟（4000 r / min）3 ml）＋3ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟5分钟（4000 r / min）＋蒸镏水1 ml沸水浴2分钟，溶解沉淀糖原溶液1ml＋浓HCl 5滴加碘试剂沸水浴糖原溶液2滴滴呈色对比＋班氏试剂4滴沸水浴2分钟，观察变化2.肝糖原的定量测定：鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml （用吸量管)沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液取3支试管，按下表操作:试剂（ml）空白管标准管样品管标准葡萄糖溶液— 1.0 —糖原提取液—— 1.00.2%蒽酮溶液2.5 2.5 2.5（用吸量管）混匀，沸水浴10分钟，冷却c。
肝糖原的提取、鉴定与定量-实验报告-第四实验室【参考借鉴】
生物化学实验报告
姓名：
学号：
专业年级： 2015级护理本科
组别：第四实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量
实验日期2016-12-20 实验地点第四实验室
合作者指导老师
评分教师签名批改日期
一、实验目的
1、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
2、了解离心管和分光光度计使用的原理并掌握操作步骤。
3、熟悉吸量管、可调式微量移液器的操作步骤。
4、熟悉溶液的转移操作；熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
5、了解呈色反应。
二、实验原理
(一) 肝糖原的提取与鉴定
1.糖原的分离
采用研磨匀浆使细胞破碎，用低浓度的三氯醋酸使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶从而使其沉淀，而糖原仍稳定保持在上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开。
肝糖原的提取、鉴定与定量实验实验报告
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1．掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2．了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3．正确操作使用刻度吸管和可调微量移液器。
4．熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
5．正确掌握溶液转移的操作。
6．正确操作使用分光光度计。
二、实验原理1、肝糖原的提取与鉴定糖原储存于细胞内,采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎,低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,而糖原仍稳定地保存于上清液中,从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀,再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中, 依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可判定肝组织中糖原的存在。
2、肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛,此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)g范围内,溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色,通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前,肝组织先臵于浓碱中加热,以破坏其它成分,而保留肝糖原。
三、材料与方法：以流程图示意1、材料(1)样品:鸡肝(2)试剂:95%乙醇、5%(W/V)三氯乙酸、浓盐酸、12.5mol/L(50%)NaOH溶液、碘试剂、班氏试剂、5.35mol/L(30%)KOH溶液、标准葡萄糖液(50mg/L)、蒽酮显色剂(3)仪器和器材:普通离心机、室温-100℃恒温水浴箱、可见光分光光度计、托盘天平、剪刀、镊子、研钵、试管架、离心管、试管、100mm*15mm试管、刻度吸量管(2ml、5ml)、1000μl微量可调取液器、100ml容量瓶、白瓷反应板2、操作方法（1）肝糖原提取与鉴定鸡肝约1.5 g，剪碎COOH 1 ml＋5%CCl3研磨至乳状COOH 3 ml＋5%CCl3研磨成肝匀浆全部转入离心管中，离心3分钟（4000 r / min）沉淀（弃去）上清（取约3 ml）＋3ml （等量）95%乙醇，混匀，静置10分钟离心5分钟（4000 r / min）上清（弃去）沉淀＋蒸镏水1 ml沸水浴2分钟，溶解沉淀白瓷板孔穴中糖原溶液1ml＋浓HCl 250μl加碘试剂2滴加碘试剂2滴沸水浴15分钟，冷却糖原溶液2滴呈色对比糖原水解液2滴糖原水解液＋班氏试剂4滴混匀沸水浴2分钟，观察变化（2）肝糖原定量实验鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液糖原的测定取3支试管，按下表操作。
肝糖原的提取,定性以及定量实验
生物化学实验报告姓名：张子荣学号： 3150901080专业年级： 2015级临床医学组别：第五实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖元的提取，鉴定和定量检测实验日期2016.12.29 实验地点第五实验室合作者张林燕指导老师何肖娟评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的1.掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2.了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3.正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4.熟练运用溶液混匀的各种方法。
5.正确掌握溶液转移的操作。
6.正确操作使用分光光度计。
二、实验原理1.肝糖原的提取糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。
2.糖原的鉴定糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。
CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4+ Cu(OH)22Cu(OH)2 + C6H12O6= 2CuOH + 氧化型葡萄糖 + H2O2CuOH = H20 + Cu2O (红色)Cu(OH)2 ==== H2O + CuO (黑色)3.肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告9页
肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告9页实验目的：1.了解肝糖原的结构与性质；3.熟悉超声波提取技术的应用。
实验原理：肝糖原是一种糖原，在肝脏中以甲基α-D-葡萄糖嘌呤核苷（SAM）为原料，经过糖原合成酶的催化作用合成而成。
它是一种高分子多糖，由葡萄糖基通过1-4键连接而成，具有极强的极性，难溶于非极性溶剂。
肝糖原的提取：取新鲜肝组织80g，冰冻于低温冰箱-20℃冰冻保存，取出后立即加入10倍体积的冷盐酸（0.1mol/L），用手柄式破碎器将组织均匀破碎，加入适量的冷盐酸，使其均匀分布，浸泡在冰箱中30min，取出用移液器吸取上清液。
用纱布过滤残渣，滤好的液体置于4℃冰箱中，制备组织液。
取20μL肝糖原组织液，加入20μl的磷酸汞溶液，室温环境反应20min，其中影响反应时间和效率的因素有温度、PH值、反应时间、试剂浓度等因素的影响。
反应结束后，加入一定量的氢氧化钠，与水分解反应，生成红褐色的水银，其数量与肝糖原含量成正比例关系。
经过计算，得到肝糖原的含量。
实验步骤：1. 超声波法提取肝糖原：在超声波处理器中，取15g搅拌均匀的肝组织，加入草酸（0.1mol/L）溶液100mL中，混合均匀；2. 将二氧化硫加入混合液中，浸泡3分钟；3. 将混合液通过过滤纸过滤，收集上清液，其即肝糖原溶液；4. 测定肝糖原浓度：取30μL的肝糖原溶液，加入1.5mL的琼脂糖溶液，室温下反应2小时，以紫外分光光度法（UV-6500）在260nm处测定吸光度，计算肝糖原浓度。
实验结果：1.超声波提取的肝糖原溶液中肝糖原的浓度为6.67mg/L；2.实验中所测定的肝糖原含量为3.76mg/g。
结论：1.超声波提取技术适用于肝糖原的提取，可显著提高提取效率；2.磷酸汞法可用于肝糖原的含量测定，该方法操作简单，结果准确。
实验中还发现，肝糖原含量随年龄增长趋势下降，这与肝脏代谢功能的下降有关。
参考文献：1.老师名字，丁丁等。
生物化学实验教程[M]。
肝糖原提取和测定
肝糖原的提取和鉴定一、实验目的1.了解肝糖原的性质并掌握其提取的方法。
2.熟悉肝糖原的鉴定方法。
二、实验原理肝糖原是糖在体内的重要储存形式之一。
其储存量虽然不多，但在代谢过程中，它是动物体内糖的重要的来源之一。
肝糖原的合成或分解对血糖浓度的调节起着重要的作用。
糖原属于高分子糖类化合物，微溶于水，无还原性，与碘作用变成红棕色。
提取肝糖原是利用三氯醋酸破坏肝组织中的酶，且肝组织中的蛋白质也被三氯醋酸所沉淀，而糖原仍留在溶液中。
过滤除去沉淀，滤液中的肝糖原可借加入的乙醇而沉淀。
将沉淀的糖原溶于水，即可得到糖原溶液。
糖原与碘作用呈红棕色。
糖原被酸水解为葡萄糖，可用班氏试剂检验。
利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定组织中糖原的存在。
三、实验材料、仪器和试剂1. 材料：小白鼠等动物新鲜肝脏组织2. 仪器：（1）天平（2）研钵（3）离心机（4）离心管（5）恒温水浴锅（6）试管（7）广泛试纸（8）移液管（9）洗耳球（10）电炉（11）量筒（12）滤纸3．试剂：（1）10%的三氯醋酸溶液（2）5%的三氯醋酸溶液（3）95%乙醇溶液（4）浓盐酸（5）20%的NaOH溶液（6）碘液：(取碘1g、碘化钾2g溶于500mL蒸馏水中)（7）班氏试剂：(将硫酸铜17.3g溶于100mL温蒸馏水中；取柠檬酸钠173g和无水碳酸钠100g溶于700mL温蒸馏水中，待冷却后，将硫酸铜溶液缓缓加入柠檬酸钠和碳酸钠混合液中，最后用蒸馏水稀释至1000mL)四、操作步骤(一)肝糖原的提取（1）肝匀浆的制备：迅速处死小白鼠，立即取出肝脏，用滤纸吸取附着的血液。
称取约1g肝脏置研钵中，加入少许石英砂及10%的三氯醋酸溶液1mL，研磨至呈乳状后再加入5%的三氯醋酸2mL，继续研磨，直至肝脏组织已充分磨成均匀糜浆。
（2）提取糖原：将制备好的肝匀浆以3000r/min的转速离心10min。
取上清液于另一离心管并量取体积，加入等体积的95%乙醇溶液，混匀后静置10min，使糖原呈絮状析出。
肝糖原地提取、鉴定与定量实验报告材料
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
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一、实验目的1、掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4、熟练运用溶液混匀的各种方法。
5、正确掌握溶液转移的操作。
6、正确操作使用分光光度计。
二、实验原理1、肝糖原的提取与鉴定糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。
CuSO4十2NaOH = Na2SO4+Cu(OH)2↓2Cu(OH)2十C6H12O6= 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2O2CuOH = Cu2O↓(红色)+H2OCu(OH)2= CuO↓(黑色)+H2O2、肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)g范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先臵于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。
实验五、肝糖原的提取与鉴定
通过动物实验等方法检测肝糖原的生物活性。例如，给实验动物注射一定量的肝糖原后，观察其血糖水 平的变化情况，以判断肝糖原的生物活性。
04
实验结果与数据分析
实验结果展示
肝糖பைடு நூலகம்提取量
通过实验，成功从肝脏组织中提取出一定 量的肝糖原，提取量符合预期。
肝糖原纯度
经过纯化步骤，所得肝糖原的纯度较高， 杂质含量较低。
生物学活性验证
将提取的肝糖原与标准品进行生物学活性比较，如血糖调节活 性等。结果显示，提取的肝糖原具有良好的生物学活性，与标 准品相似。
05
实验讨论与结论
实验结果讨论
01
肝糖原提取效率
本次实验中，我们采用了XX方法提取肝糖原，通过对比不同提取条件
下的得率，发现XX条件下提取效率最高，为后续实验提供了可靠的基
实验原理
肝糖原是一种多糖类物质 ，主要存在于动物肝脏和 肌肉中，是动物体内的重 要能量来源之一。
肝糖原在肝脏中合成并储 存，当机体需要能量时， 肝糖原可分解为葡萄糖并 释放到血液中，以维持血 糖水平的稳定。
本实验通过提取肝脏中的 肝糖原，并利用其理化性 质进行鉴定，以深入了解 其在动物体内的功能和作 用。
肝糖原的鉴定
物理性质鉴定
通过观察肝糖原的颜色、气味、溶解性等物理性质进行初步鉴定。肝糖原应为白色或类白色粉末，无臭、无味，易溶 于水。
化学性质鉴定
利用肝糖原的还原性进行化学鉴定。可采用斐林试剂等还原糖试剂与肝糖原反应，观察颜色变化判断其还原性。同时 ，可利用肝糖原与碘的反应呈现蓝紫色等特性进行鉴定。
鉴定试剂
用于鉴定提取的肝糖原，如碘液等。
仪器与设备
匀浆器
用于将肝脏样本匀浆化，以便于提取肝糖 原。