2 基因组DNA的提取与分离
实验二细菌基因组DNA的提取
4、取上清，加入等体积（约800ul）的酚：氯仿：异戊醇（25：24： 1），混匀，离心12000rpm,5min，将上清液转至新管中。（抽提 两次）
DNA纯化（去杂质） 蛋白质： 常用苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）或氯仿：异戊醇（24：1） 抽提。 RNA ：常选用RNase消化 ，或是用LiCl来消除大分子的RNA。 酚类物质： 提取液中加少量巯基乙醇，选取幼嫩的材料。 多糖： 提取液中加1％PVP。
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核酸样品的保存
温度： 4℃（5℃）最佳和最简单 -70℃是长期保存的良好温度，为一次性保存 -20℃保存
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DNase抑制
①加入少量金属离子螯合剂，如0.01 mol/L EDTA 或柠檬酸钠，DNase基本可以全部失活。 ②去垢剂、蛋白变性剂及DNase抑制剂也可使 DNase失活。
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RNase抑制 ①操作要带手套。 ②所有器皿要严格消毒， ③试剂处理 ④低温操作
⑤在分离过程中要加入一定的RNase抑制剂。
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四、注意事项——细胞裂解
➢ 材料应适量，过多会影响裂解，导致DNA量 少，纯度低
➢ 针对不同材料，选择适当的裂解预处理方式：
• 植物材料－－液氮研磨 • 动物组织－－匀浆或液氮研磨 • 组培细胞－－蛋白K • 细菌－－溶菌酶破壁 • 酵母－－破壁酶或玻璃珠
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核酸制备中常用的蛋白质变性剂
1.使蛋白质变性、沉淀，从核酸提取液中分离除去，以防造 成蛋白污染。
实验二 全血基因组DNA的提取
实验二：全血基因组DNA的提取一实验目的：1．学习并掌握动物全血提取DNA的方法2．从全血中提取到一定量的纯净的DNA样品二实验原理DNA存在于细胞核中，用细胞裂解液除取红细胞，核裂解液破坏白细胞，氯仿使蛋白质变性，用无水乙醇洗涤DNA，从而得到纯净的DNA分子。
三、实验仪器、材料、试剂（一）仪器1．高速离心机 2．烘箱 3．冰箱4．水浴锅5．微量移液器6．高压灭菌锅（二）材料1．鸡血、2．细胞裂解液3．核裂解液、4．饱和NaCl、5．氯仿、6．无水乙醇、7．ddHO、8.滤纸、9．微量取液器、10.1.5mL/2mL 离心管、11.一次性2手套、12.离心管架、13.记号笔等（三）试剂配制细胞裂解液:10mm/l Tris-Hcl(1mol/L) ,11%w/l蔗糖,5 mmol/L Mgcl2,1%v/vEDTA, 10mm/L Triton 核裂解液：10mm/l Tris-Hcl, 1%w/v SDS, 10mm/L Na2柠檬酸三钠四、实验步骤1．吸取500ul血液至2ml离心管，加入1000ul的细胞裂解液，上下颠倒2-3min。
2．在4°C，6000rpm转速离心3min,弃上清液。
3．重复1-2步（1-3次），直至洗净红细胞，颜色变白为止。
4.加入300ul核裂解液，上下颠倒2min,室温静置2min。
5.加入100ul饱和NaCl和600ul氯仿，轻轻上下颠倒2min, 4°C，6000rpm 转速离心5min。
6.小心吸取上清液（不能吸入下层液体），移至新的1.5ml的离心管。
7.加入600ul冷藏无水乙醇，轻轻摇动，观察有无絮状物质。
8. 4°C，13000rpm转速离心3min，小心倒掉上清液，用滤纸吸取管壁周围的液体，室温下是离心管完全干燥。
（1h左右）9.沿管壁慢慢加入50ul ddHO，然后轻轻吹打均匀。
210.-20°C的冰箱保存。
基因组dna提取实验报告
基因组dna提取实验报告基因组 DNA 提取实验报告一、实验目的本次实验的主要目的是从不同的生物样本中提取高质量的基因组DNA，以便进行后续的分子生物学实验，如 PCR 扩增、基因测序等。
通过本次实验，掌握基因组 DNA 提取的基本原理和操作方法，了解影响 DNA 提取质量的因素，并对提取的 DNA 进行质量检测和分析。
二、实验原理基因组DNA 提取的基本原理是利用细胞裂解液破坏细胞膜和核膜，使细胞内的物质释放出来，然后通过蛋白酶 K 消化蛋白质，去除 RNA 等杂质，再利用酚/氯仿等有机溶剂抽提，将蛋白质、多糖等杂质去除，最后通过乙醇沉淀或异丙醇沉淀得到纯净的基因组 DNA。
三、实验材料与试剂（一）实验材料1、新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉等）2、植物叶片3、细菌培养物（二）实验试剂1、细胞裂解液（含 TrisHCl、EDTA、NaCl、SDS 等）2、蛋白酶 K3、酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）4、无水乙醇5、 70%乙醇6、 RNA 酶 A7、 3M 醋酸钠（pH 52）8、 TE 缓冲液（10 mM TrisHCl，1 mM EDTA，pH 80）（三）实验仪器1、离心机2、移液器3、恒温水浴锅4、紫外分光光度计5、电泳仪及电泳槽四、实验步骤（一）动物组织基因组 DNA 提取1、取约 01g 新鲜的动物组织，放入 15ml 离心管中，加入 1ml 细胞裂解液，用剪刀将组织剪碎，然后在冰上放置 10min。
2、向离心管中加入20μl 蛋白酶 K（20mg/ml），充分混匀，在 55℃水浴锅中孵育过夜，直至组织完全消化。
3、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25:24:1），轻轻颠倒离心管10min，使溶液充分混匀。
4、 12000rpm 离心 10min，将上清液转移到新的离心管中。
5、重复步骤 3 和 4 一次。
6、向上清液中加入 1/10 体积的 3M 醋酸钠（pH 52）和 2 倍体积的无水乙醇，轻轻颠倒离心管，可见白色的 DNA 沉淀出现。
实验一 基因组DNA的提取
六、操作步骤
1.5ml离心管中加入500μl提取缓冲液 离心管中加入500μl提取缓冲液, 1. 在1.5ml离心管中加入500μl提取缓冲液, 60℃水浴预热 水浴预热。 60℃水浴预热。 植物组织0.1g, 剪碎, 2. 植物组织0.1g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨 成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟 时间长,DNA产量高), 水浴保温30 分钟( ,DNA产量高 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不 时摇动。 时摇动。 加入500μl氯仿/戊醇/乙醇溶液, 500μl氯仿 3. 加入500μl氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混 需带手套, 防止损伤皮肤) 室温下静置5分钟, 匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀) 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。
实验一、基因组DNA DNA的提取 实验一、基因组DNA的提取
一、实验目的： 实验目的： 1.了解真核生物基因组DNA提取 的一般原理。 2. 2.掌握DN理，是将分散好 的一般原理， 提取 的一般原理 的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶 和蛋白酶K 的真核生物组织细胞在含 和蛋白酶 的溶液中消化分解蛋白质，再用酚： 的溶液中消化分解蛋白质，再用酚：异戊 醇抽提的方法去除蛋白质，得到的DNA 醇抽提的方法去除蛋白质，得到的 经乙醇沉淀或透析等方法进一步纯化。 经乙醇沉淀或透析等方法进一步纯化。
三、材料
植物组织
四、设备
移液器，冷冻高速离心机， 移液器，冷冻高速离心机，台式高速 离心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5ml离心 离心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5ml离心 管。
基因分离的主要方法与步骤
基因分离的主要方法与步骤
基因分离的主要方法与步骤如下：
1. 细胞破碎：将含有DNA的细胞完全破碎，可以通过物理方法（如超声波破碎、冻融法）或化学方法（如洗涤法、高渗溶解法）实现。
2. DNA的分离：DNA被大量的细胞组分包围，这些组分需要被去除以将DNA纯化。
一个常见的DNA分离方法是酚/氯仿抽提法。
先用酚和氯仿的混合液沉淀蛋白质和其他杂质物质，然后通过离心去除上清液中的DNA。
3. 脱盐：提取出的DNA通常含有大量的盐类，需要通过脱盐处理来除去这些盐类，否则这些盐类可能会影响下一步操作，如PCR扩增。
4. 纯化：DNA提取后需要进行纯化以消除污染和杂质。
可以通过醇沉淀（如乙醇、异丙醇），离子交换柱层析、凝胶过滤等方法实现。
5. 基因组DNA的制备：从细胞中获得DNA有各种物理、化学和酶法。
无论所采用的方法或DNA来源如何，所有步骤都经过选择和优化，以获得最大数量、质量和完整性的基因组DNA。
由于DNA是细胞质的一部分，被细胞核和或细胞膜包围，因此在核酸纯化之前，细胞碎片、脂质和蛋白质的消除分为三个重要步骤：细胞膜/细胞壁的破裂、DNA的分离和沉淀，以及最后溶解DNA。
以上是一般的基因分离步骤，实验中具体的步骤和方法则需要根据基因来源和研究目标来选择。
基因组dna提取流程
基因组DNA提取的流程
1. 样本选择：选择适合提取基因组DNA的样本类型，如细胞、组织或血液。
确保样本保存在合适的条件下，以保持DNA的完整性。
2. 细胞破碎：对于细胞样本，首先需要将细胞破碎以释放DNA。
可以使用物理方法，如机械剪切或超声波处理，或者使用化学方法，如洗涤溶解和细胞裂解酶处理。
3. DNA溶解：将细胞裂解提取物加入DNA溶解缓冲液中，以彻底溶解DNA。
4. 去除杂质：通过离心、过滤或沉淀等方法去除蛋白质、RNA 等杂质。
5. 纯化DNA：使用吸附剂、洗涤剂或沉淀剂等方法去除剩余的杂质，得到纯化的基因组DNA。
6. 检测与定量：通过电泳、荧光光谱等技术检测提取的DNA质量和浓度，确保提取的DNA满足后续实验的要求。
以上是基因组DNA提取的一般流程，具体操作可能会因实验条件、样本类型和目标DNA的不同而有所差异。
实验二 CTAB小样法提取植物基因组DNA2
实验二CTAB小样法提取植物基因组DNA【原理】CTAB是一种阳离子去污剂，溶于热水、乙醇、三氯甲烷，易溶于异丙醇水溶液，可溶解细胞膜，能与核酸形成复合物，在高盐溶液中可溶，当降低溶液盐浓度到一定程度时，从溶液中沉淀，通过离心可将CTAB-核酸的复合物与蛋白、多糖类物质分开。
最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。
植物细胞内各种DNA（包括基因组DNA和核外DNA）称为总DNA。
高等植物的DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋白（DNP），能溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液中，而不溶于有机溶剂。
苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相。
因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。
上清液中加入异丙醇或乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于双蒸水或TE溶液中，即得植物总DNA溶液。
【实验器具、药品试剂】水浴锅，研钵，微量移液器，枪头，离心管，台式离心机，液氮，恒温箱，标签纸，紫外分光光度计，磁力搅拌机，剪刀，记号笔等。
2% CTAB抽提缓冲溶液（100 ml 1 M Tris HCl pH 8.0，280 ml 5 M NaCl，40 ml 0.5 M EDTA，20 g of CTAB，定容至1 L），异丙醇, 氯仿-异戊醇（24：1）等。
【实验步骤】(1) 2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。
(2) 取少量叶片（0.2 g~0.3g）置于研钵中，加入700 μl预热的2%CTAB抽提缓冲液磨至细粉状；(4) 将磨碎液倒入1.5或者2.0 ml的灭菌离心管中；(5) 65℃水浴，每隔10 min轻轻摇动，30-35 min后取出（或更长时间）；（破碎细胞）(6）冷却至室温后，加入等体积氯仿-异戊醇（24：1），充分颠倒混匀3~5 min；（抽提去蛋白）(7) 12 000 rpm离心5 min；(8) 用移液器轻轻地吸取上清夜至2.0ml灭菌离心管，注意不要将乳白色中间层吸走；(9) 重复(6)～（8）两次；其间，将600 μl的异丙醇（预先置于-20℃冰箱中）加入另一批1.5ml 灭菌空离心管中；(10) 在第三次抽提后上清夜转入含有异丙醇的1.5ml离心管内，将离心管轻轻上下摇动30 sec，使异丙醇与水层充分混合，然后静置于冰上（或者低温冰箱）30分钟或者更长时间（可过夜），一般可见DNA絮状漂浮物；（沉淀核酸）(11) 2 500 rpm离心2 min后，可见白色DNA丸状物附着于管壁底部，倾斜管口倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管斜立于铺开的纸巾上沥去液体；(12) 加入800 μL的70%乙醇，用手指轻弹管尖，使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中；(13) 放置20 min或者更长时间，使DNA块状物中的不纯物溶解；(14) 5 000 rpm离心2 min后，倒掉液体；(15) 可重复（12）-（14）步以进一步洗涤DNA；(16) 自然风干或电风扇吹干DNA，过分干燥DNA稍后较难溶解；(17) 加入50~200 μL 1×TE缓冲液，置于4℃直至DNA充分溶解，其间可用手指轻弹管尖以促进DNA溶解（切勿剧烈震荡！！）；(18) 将充分溶解的DNA置于-20℃保存、备用。
基因组dna的提取原理
基因组dna的提取原理基因组DNA的提取原理。
基因组DNA的提取是生物学实验中的一项重要步骤，它是从生物样本中分离出DNA分子的过程。
DNA提取的目的是为了进一步的分子生物学研究，如PCR扩增、测序、重组等实验。
下面将介绍基因组DNA提取的原理及步骤。
1. 样本的准备。
在进行基因组DNA提取之前，首先需要准备样本。
样本可以是细胞、组织或血液等。
对于细胞和组织样本，通常需要将其打碎以释放细胞内的DNA。
而对于血液样本，则需要进行红细胞溶解，以获得含有DNA的白细胞。
2. 细胞裂解。
细胞裂解是DNA提取的第一步，其目的是破坏细胞膜和核膜，释放细胞内的DNA。
通常可以使用裂解酶或裂解缓冲液来实现细胞裂解。
在裂解过程中，可以加入蛋白酶来降解蛋白质，以减少对DNA的污染。
3. 蛋白质沉淀。
裂解后的细胞溶液中可能含有大量的蛋白质和其他杂质，需要进行蛋白质沉淀。
通常可以加入盐和酒精来沉淀蛋白质，然后通过离心将沉淀的蛋白质去除，留下含有DNA的上清液。
4. DNA沉淀。
为了获得纯净的DNA，需要将其从上清液中沉淀出来。
可以通过加入乙醇或异丙醇来沉淀DNA，然后通过离心将沉淀的DNA收集起来。
5. DNA纯化。
最后一步是对沉淀得到的DNA进行纯化。
可以使用乙醚或异丙醇来去除残留的盐和其他杂质，然后用适当的缓冲液溶解DNA，得到纯净的基因组DNA。
通过以上步骤，就可以从生物样本中提取出纯净的基因组DNA。
这些DNA可以用于后续的分子生物学实验，如PCR扩增、基因测序、重组等。
基因组DNA的提取原理并不复杂，但需要严格控制实验条件，以确保提取得到的DNA质量和纯度。
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核酸分离纯化
RNA的去除
用不含DNA酶的RNase处理，使RNA降解。 添加RNase处理后，可再用等量的苯酚/氯仿抽
提，离心除去蛋白质及寡核苷酸。
沉淀并吸附核酸
含DNA的水相可用1倍体积的异丙醇或2倍体积的无水 乙醇沉淀。
基因组的大分子DNA沉淀形成纤维状絮团漂浮其中， 可用吸头将其挑出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉 淀附在壁上是荷电溶质或粒子在电场作 用下发生定向泳动的现象。核酸的分离和鉴定通常采用琼脂 糖凝胶电泳。
不同大小、不同形状和不同构象的DNA 分子在相同的电 泳条件下（如凝胶浓度、电流、电压、缓冲液等），有不同 的迁移率，所以可通过电泳使其分离。琼脂糖凝胶电泳分离 后的DNA可用溴化乙啶（EB）染色。
纯度高：尽量排除其他大分子成分的污染（蛋白 质、多糖和RNA等）。
得率好：选用合适的方法获得足够量的DNA。
三、基因组DNA提取的原理
准备适宜的材料
裂解细胞，释放DNA 核酸分离纯化
去除蛋白质、 RNA等杂质
沉淀并吸附核酸
核酸溶解（缓冲液）
细胞破碎
化学法、机械法、生物法
细菌—溶菌酶（降解细胞壁），EDTA（抑制 DNA酶，防止DNA降解），去垢剂SDS（破 坏细胞膜）
实验1 大肠杆菌基因组DNA 的提取与分离鉴定
理论介绍
一、内容提要
基因组是指细胞内遗传信息的携带者DNA的总体。
为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常需要从 不同的生物材料中提取DNA。由于DNA分子在生物体内 的分布及含量不同，要选择适当的材料提取DNA。
从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程 度也不同。真核生物的DNA主要存在于细胞核中，与蛋 白质结合构成染色体，原核生物的DNA不与任何蛋白质 结合。
酵母—破壁酶或液氮研磨
植物材料—液氮研磨（使细胞冻结，用研钵 碾制成粉状）
动物组织—匀浆或液氮研磨
核酸分离纯化
DNA与蛋白质的分离
1.DNA与蛋白质的分离
SDS：真核生物的DNA与组蛋白结合形成DNP，SDS能够破坏DNA与 蛋白质之间的静电引力或配位键，可使DNA与蛋白质解聚，释放 出DNA。
四、实验步骤
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系 统提取细菌的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为新型材 料，能够高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其 他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。
五、琼脂糖凝胶电泳法测定DNA分子大小
详见实验课件：DNA的琼脂糖凝胶电泳
图1 E. coli JM109基因组DNA琼脂糖凝胶电泳图
简化操作步骤，缩短提取过程，避免物理、化学和生 物的因素对核酸的降解，如机械剪切力、高温和 DNase等酶，防止过酸、过碱，避免剧烈振荡和混合。
采用酚-氯仿抽提时应采用上下颠倒的方法充分混匀， 但动作要轻柔，离心分离两相时，应保证一定的转速 和时间。
沉淀DNA用的异戊醇、乙醇事先放入-20℃冰箱，待用 时取出。
CTAB：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，能与核酸形成复 合物，在高盐溶液（NaCl>0.7M）中是可溶的，当NaCl降低到 0.3M 时，可沉淀CTAB-核酸复合物。（植物）
2.蛋白质的去除
苯酚-氯仿-异戊醇：苯酚、氯仿能变性蛋白质，离心分层，DNA 溶于上层水相，变性蛋白质位于水相和有机相之间。异戊醇可 减少抽提过程的泡沫产生。
动物
小牛胸腺 肝脏
来源
植物 微生物
鱼类精子 幼苗 种子胚胎 谷氨酸菌体（ 7%~10%） 面包酵母（4%）
啤酒酵母（6%）
大肠肝菌（9%~10%）
许多病毒的DNA分子长度超过100kb，细菌DNA为 几千kb，高等动植物的基因组DNA长度达到上亿kb。
二、分离纯化核酸的总原则
保持基因组DNA结构相对完整：防止各种因素引 起的降解。
如果DNA沉淀量少或无法捞出，可离心获取沉淀。 沉淀DNA前，为提高沉淀效果，可加入NaAC、乙酸铵
等盐类促进沉淀。 获取的沉淀需再用70%乙醇洗涤除去残留的有机物、
无机盐等。
基因组DNA提取注意事项 使用新鲜、幼嫩的材料；材料应适量，过少造成核酸
提取量少，过多影响裂解，导致DNA量少。（推荐2-4 mL）。