实验二 槐米中芸香苷的精制、水解与检识
实验二 槐米中芸香苷的精制、水解与检识
实验二槐米中芸香苷的精制、水解与检识【实验目的】1、学会运用重结晶的方法精制芸香苷,并进行水解.2、学会用显色反应检识黄酮类化合物.【实验原理】采用碱溶酸沉法提取,其原理是芸香苷结构中含有酚羟基,具酸性,能溶于碱水,当加入酸溶液后,则芸香苷沉淀析出.芸香苷的精制是利用其可溶于热水,难溶于冷水的性质与杂质分离.【实验材料】设备:电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、新华色谱滤纸、试管、试管架。
药品:芸香苷粗品、浓盐酸、蒸馏水、2%硫酸、95%乙醇、氨水、三氯化铝、浓硫酸、α–萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉醋酸镁【实验步骤】1. 芸香苷的精制:称一定重量的粗品，按约1∶200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。
抽滤，置空气中晾干或60℃～70 ℃干燥，得精制芸香苷，称重。
计算得率。
2. 芸香苷的水解:取芸香苷1 g,研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇(95%乙醇约15 ml)重结晶即得精制槲皮素。
4、检识：(1)Molish反应：取芸香苷少许置小试管中，加乙醇0.5 ml，加10%α-萘酚溶液1 ml振摇使溶解，沿管壁徐徐加入浓硫酸约0.5 ml，静置。
观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性。
以同法试验槲皮素，比较二者的不同。
(2)酸性实验：取小试管四支为一组，共二组，第一组每管中加入芸香苷1 mg，第二组每试管中加入槲皮素1 mg，每组分别加稀氨水、5% 碳酸氢钠溶液、5% 碳酸钠溶液和1% 氢氧化钠溶液各2 ml，振摇后，观察各管溶解情况，溶解的溶液应呈黄色。
再加盐酸数滴，黄色应褪去或变浅，并有沉淀或浑浊析出。
槐花米中芸香的提取及槲皮素的制备与检识
芸香苷、槲皮素及糖的检识 芸香苷、
3、盐酸 镁粉反应： 、盐酸-镁粉反应 镁粉反应： 取芸香苷1 取芸香苷 mg，加乙醇 ml，在水浴上加热 ，加乙醇2 ， 溶解，加镁粉约50 溶解，加镁粉约 mg，滴加数滴浓盐酸，溶液由 ，滴加数滴浓盐酸， 黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物。 黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物 。 以同法试 验槲皮素。 验槲皮素。 如用锌粉代替镁粉，则芸香苷（ 羟基与糖结 如用锌粉代替镁粉，则芸香苷（3-羟基与糖结 合成苷）仍有作用，而槲皮素（黄酮醇类） 合成苷） 仍有作用 ，而槲皮素 （ 黄酮醇类） 不呈 还原显色反应。因此可区别两者。 还原显色反应。因此可区别两者。
思考
1、苷类水解有几种催化方法？ 、苷类水解有几种催化方法？ 2、黄酮类化合物还有哪些提取方法？芸香苷 、黄酮类化合物还有哪些提取方法？ 的提取还可用什么方法？ 的提取还可用什么方法？ 3、酸水解常用什么酸？为什么用硫酸比用盐 、酸水解常用什么酸？ 酸水解后处理更方便？ 酸水解后处理更方便？
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
芸香苷的提取
方法Ⅰ 方法Ⅰ：水提取法
槐花米粗粉20g 槐花米粗粉20g 20 加10倍量沸水煮沸20min，反复2 10倍量沸水煮沸20min，反复2 倍量沸水煮沸20min 次，趁热脱脂棉滤过
药渣
滤液 静置过夜， 静置过夜，滤过
滤液
芸香苷粗品
粗提） 芸香苷的提取 （粗提）
方法Ⅱ 方法Ⅱ ：碱溶酸沉法
芸香苷、槲皮素及糖的检识 芸香苷、
4、三氯化铝反应： 、三氯化铝反应： 取样品1 溶于甲醇中， 取样品 mg溶于甲醇中，加1%三氯化铝甲醇溶液 溶于甲醇中 三氯化铝甲醇溶液 2~3滴，黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。 滴 黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。 5、锆-柠檬酸反应： 、 柠檬酸反应 柠檬酸反应： 取样品1 取样品 mg，加甲醇 ml，在水浴上加热溶解， ，加甲醇2 ，在水浴上加热溶解， 再加2%二氯氧锆甲醇溶液 二氯氧锆甲醇溶液3~4滴 ， 凡有 羟基或 再加 二氯氧锆甲醇溶液 滴 凡有3-羟基或 5-羟基的黄酮即呈鲜黄色。然后加 羟基的黄酮即呈鲜黄色。 羟基的黄酮即呈鲜黄色 然后加2%柠檬酸甲醇 柠檬酸甲醇 溶液3~4滴，有3-羟基的黄酮黄色不褪。比较芸香 羟基的黄酮黄色不褪。 溶液 滴 羟基的黄酮黄色不褪 苷和槲皮素的不同。 苷和槲皮素的不同。
槐花米中芸香的提取及槲皮素的制备与检识
芸香苷粗品
芸香苷的提取（精制）
芸香苷粗品2g 加蒸馏水400ml，煮沸 溶解15min趁热抽滤 滤液 静置析晶，抽滤 滤液 药渣
结晶 室温下晾干 精制芸香苷
芸香苷的水解
精制芸香苷 加止，放冷抽滤 沉淀
芸香苷、槲皮素及糖的检识
6、Fehling试验：
取试样数 mg，溶于0.5 ml热水中，加斐林氏试剂 甲、乙等量混合液2 ml，沸水浴上加热，如产生 氧化亚铜的暗红色或黄色沉淀表示有还原糖或其 它还原性物质。充分加热作用后滤去沉淀，滤液 滴加浓盐酸酸化，在水浴上加热水解，水解液以 10% NaOH 中和，再进行斐林氏试验，此时显阳 性反应者表示样品为糖苷化合物。比较芸香苷和 槲皮素的不同。
2、计算槲皮素的得率
3、记录芦丁的检测结果
注意事项
3 ．本实验直接用沸水由槐花米中提取芸香 苷，收得率稳定，且操作简便。如用碱溶酸沉 法提取，加入石灰乳可以达到碱性溶解的目的， 又可除去槐花 7 米中所含的大量粘液质，但应 严格控制其碱性pH8～9，不可超过pH10。如 pH 值过高，加热提取过程中芸香苷可被水解 破坏，降低收得率。加酸沉淀时，控制pH3～ 4,不宜过低，否则芸香苷可生成yang盐而溶于 水，也降低收得率。
注意事项
1 ．在提取前应将槐花米略捣碎，使芸香苷 易于被热水溶出。 2 ．在提取过程中，加入硼砂的目的是使其 与芸香苷分子中的邻二酚羟基发生络合，既保 护了邻二酚羟基不被氧化破坏，又避免了邻二 酚羟基与钙离子络合（芸香苷的钙络合物不溶 于水），使芸香苷不受损失，提高收得率。
实验结果
1、计算芦丁的得率
实验原理
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定二.ppt
香苷的乙醇液作为供试液做芸香苷化学检识反应。
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 1、盐酸—镁粉反应：取供试液2ml于试管中，加 入少许镁粉，再向试管中滴加浓盐酸数滴，观察 现象。
• 2、三氯化铝反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液 （注意相互不要晕染），其中一滴作为空白对照， 另一滴上面滴一滴三氯化铝溶液。观察二者颜色 变化，并在紫外灯下观察荧光。
• 3、氨熏反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液，其 中一滴作为空白对照，将另一滴点有供试液的部 分倒扣在浓氨水的瓶口上。观察二者颜色变化。
槐花中芸香苷的提取分 离、精制、鉴定（二）
Байду номын сангаас
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 一、实验目的：使芸香苷在水中重结晶，去除杂质达到精 制的目的。
• 二、实验原理：芸香苷粗品易溶于热水，难溶于冷水。 • 三、操作步骤： • （一）抽滤得到芸香苷粗品。 • （二）芸香苷的精制 • 取芸香苷粗品5/6份，置于500ml烧杯中，加蒸馏水300ml
实验三中药化学成分提取槐米
实验三槐米中芸香苷的提取、精制和检识
一、目的要求
掌握芸香苷的主要性质及提取、分离精制和检识方法。
二、实验原理
根据芸香苷可溶于碱水，在酸性条件下又可沉淀析出，采用碱溶酸沉法提取。
根据芸香苷在冷水和热水中溶解度相差较大，以水为溶剂,采用结晶法进行精制。
三、实验方法
（一）芸香苷的提取
1.不锈钢锅中加500毫升水，加热至沸后加入槐米50克，
用石灰乳调pH值8-9，继续加热20分钟，随时补充损失的水分，趁热用纱布过滤，药渣再提取一次，两次滤液合并。
2.用浓盐酸调提取液使pH值2-3，放置过夜。
3.抽滤，将沉淀抽干，置于室温中自然干燥，得芸香苷粗品。
（二）芸香苷的精制
1.取芸香苷粗品2克置800毫升的烧杯中，加水约400毫升，
加热至沸，使芸香苷完全溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜，析晶。
2.抽滤，自然干燥，得芸香苷精制品。
（三）芸香苷的检识(要求写出反应现象)
1.氢氧化钠实验
取芸香苷少许置于试管中，加入2ml蒸馏水，振摇。
滴加2-3滴氢氧化钠溶液，芸香苷溶解，呈黄色澄明溶液。
再滴加盐酸溶液2-3滴，观察是否有沉淀生成。
2.α-萘酚—浓硫酸实验（Molish反应）
取芸香苷少许置干燥试管中，加2ml无水乙醇，振摇。
再滴加2-3滴α-萘酚溶液，振摇。
将试管倾斜，沿管壁滴加1ml 浓硫酸，观察两液面交界处颜色变化。
3.盐酸-镁粉实验
取芸香苷少许置于试管中，加入2ml 50%的乙醇，水浴加热溶解。
加入少许镁粉，再加入盐酸数滴，观察颜色变化。
槐米中芸香苷提讲义取分离及检识-课件PPT(精)
芸香苷的提取、精制、水解和鉴定
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• 实验器材： • 试药：槐花米、0.4%硼砂水溶液、石灰乳、蒸馏
水、浓盐酸、2%硫酸、乙醇、1%氢氧化钠溶液、 1%盐酸溶液、10%α-萘酚溶液、浓硫酸、镁粉、 1%醋酸镁甲醇溶液、正丁醇、醋酸 • 仪器：电炉、漏斗、紫外分析仪、锥形瓶、量筒、 烧杯、层析筒、试管
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实验内容与方法：
• 一、芸香苷的提取 • 取槐花米20g（研碎），置于1000ml圆底烧瓶中，
加0.4%硼砂水溶液200ml，在搅拌下加石灰乳调PH8， 加热微沸30分钟，静置几分钟倾出上清液，用棉花 过滤，药渣同上重复一次。合并滤液用6N盐酸调 PH2~3，放置冰箱中析晶（一夜以上），待全部结 晶析出，抽滤，得粗芸香苷（滤饼用水洗3~4次）， 放置空气中自然干燥得粗品，称重、计算提取率。
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实验内容与方法：
• 二、芸香苷的精制
• 取2g加蒸馏水400ml，加热煮沸溶解，趁热 抽滤，滤液放置过夜，析晶，抽滤，得精制 芸香甙。烘干。
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实验内容与方法：
• 三、芸香苷的水解
• 取精制芸香甙1g，置250ml圆底烧瓶中，加 2%H2SO4溶液80ml，加热回流30分钟至1小时， 开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结 晶，即为槲皮素。放冷抽滤得结晶，滤液保留作为 糖的检查，沉淀物用蒸馏水洗至中性，抽干水份， 晾干称重，得粗制槲皮素。必要时可用稀乙醇重结 晶。
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• 五、芸香苷及槲皮素的纸层析鉴定 • 层析材料：层析滤纸 • 点 样：（1）提取的芸香苷乙醇溶液
（2）提取的槲皮素乙醇溶液 • 展开剂：正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶5）上层溶液 • 显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在
天然产物实验
（一）实验原理
由槐花米中提取芸香苷的方法很多， 本实验是根据芸香苷在冷水和热水中的溶 解度差异的特性进行提取和精制，或根据 芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性，能 与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮 沸提取，其提取液加酸酸化后则芸香苷游 离析出。
（二）芸香苷的提取
方法Ⅰ：水提取法
槐花米粗粉20g 加10倍量沸水煮沸20min， 反复2次，趁热脱脂棉滤过
2％柠檬酸甲醇溶液3～4滴 褪色 不褪色
（六）注意事项
1．在提取前应将槐花米略捣碎，使芸 香苷易于被热水溶出。
2．在提取过程中，加入硼砂的目的是 使其与芸香苷分子中的邻二酚羟基发生络 合，既保护了邻二酚羟基不被氧化破坏， 又避免了邻二酚羟基与钙离子络合（芸香 苷的钙络合物不溶于水），使芸香苷不受 损失，提高收得率。
滤液 静置析晶，苷
（四）芸香苷的水解
精制芸香苷 加2％硫酸100ml，加热回流30min， 至沉淀不再增加为止，放冷抽滤
沉淀
滤液
用少量水洗去余酸，晾干 加氢氧化钡中和至中性，滤过
槲皮素粗品 硫酸钡沉淀
95％乙醇 重结晶
槲皮素精制品
滤液
浓缩至干，加 2～3ml乙醇溶解
糖供试液
注：抽滤瓶的使用：
①开始顺序：减滤纸（大小 应合适）→安装分液漏斗（分 液漏斗下斜口应对准抽气口） →连接真空泵→打开真空泵→ 抽滤。
②结束时顺序：先拔掉抽滤 瓶上与真空泵连接的像皮管， 再拆除装置。否则真空泵中的 水回因为压力较抽滤瓶中空气 的压力大而流入抽滤瓶。
（五）芸香苷、槲皮素及糖的检识
实验名称 Molish反应 盐酸-镁粉反应 醋酸镁反应 三氯化铝反应 锆-柠檬酸反应
实验试剂
现象
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实验二槐米中芸香苷的精制、水解与检识
【实验目的】
1、学会运用重结晶的方法精制芸香苷,并进行水解.
2、学会用显色反应检识黄酮类化合物.
【实验原理】
采用碱溶酸沉法提取,其原理是芸香苷结构中含有酚羟基,具酸性,能溶于碱水,当加入酸溶液后,则芸香苷沉淀析出.芸香苷的精制是利用其可溶于热水,难溶于冷水的性质与杂质分离.
【实验材料】
设备:电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、新华色谱滤纸、试管、试管架。
药品:芸香苷粗品、浓盐酸、蒸馏水、2%硫酸、95%乙醇、氨水、三氯化铝、浓硫酸、α–萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉醋酸镁
【实验步骤】
1. 芸香苷的精制:
称一定重量的粗品，按约1∶200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。
抽滤，置空气中晾干或60℃～70 ℃干燥，得精制芸香苷，称重。
计算得率。
2. 芸香苷的水解:
取芸香苷1 g,研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇(95%乙醇约15 ml)重结晶即得精制槲皮素。
4、检识：
(1)Molish反应：
取芸香苷少许置小试管中，加乙醇0.5 ml，加10%α-萘酚溶液1 ml振摇使溶解，沿管壁徐徐加入浓硫酸约0.5 ml，静置。
观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性。
以同法试验槲皮素，比较二者的不同。
(2)酸性实验：
取小试管四支为一组，共二组，第一组每管中加入芸香苷1 mg，第二组每试管中加入槲皮素1 mg，每组分别加稀氨水、5% 碳酸氢钠溶液、5% 碳酸钠溶液和1% 氢氧化钠溶液各2 ml，振摇后，观察各管溶解情况，溶解的溶液应呈黄色。
再加盐酸数滴，黄色应褪去或变浅，并有沉淀或浑浊析出。
(3)镁粉-盐酸反应:
取芸香苷1 mg，加乙醇1～2 ml在水浴上加热溶解，加镁粉约50mg，滴加几滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者，表示有黄酮类化合物。
以同法试验槲皮素。
(4)三氯化铝反应:
取芸香苷1 mg，加甲醇1～2 ml在水浴上加热溶解，加入1% 三氯化铝甲醇溶液2～3滴，呈鲜黄色，以同法试验槲皮素。
(5)醋酸镁反应:
取芸香苷1 mg，加甲醇1～2 ml水浴中加热溶解，加1% 醋酸镁甲醇溶液2～3滴，呈黄色荧光反应。
以同法试验槲皮素。
【实验装置图】【实验结论】【实验注意】。