芸香苷的提取、精制、水解和鉴定
实验二 槐米中芸香苷的精制、水解与检识
实验二槐米中芸香苷的精制、水解与检识【实验目的】1、学会运用重结晶的方法精制芸香苷,并进行水解.2、学会用显色反应检识黄酮类化合物.【实验原理】采用碱溶酸沉法提取,其原理是芸香苷结构中含有酚羟基,具酸性,能溶于碱水,当加入酸溶液后,则芸香苷沉淀析出.芸香苷的精制是利用其可溶于热水,难溶于冷水的性质与杂质分离.【实验材料】设备:电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、新华色谱滤纸、试管、试管架。
药品:芸香苷粗品、浓盐酸、蒸馏水、2%硫酸、95%乙醇、氨水、三氯化铝、浓硫酸、α–萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉醋酸镁【实验步骤】1. 芸香苷的精制:称一定重量的粗品，按约1∶200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。
抽滤，置空气中晾干或60℃～70 ℃干燥，得精制芸香苷，称重。
计算得率。
2. 芸香苷的水解:取芸香苷1 g,研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇(95%乙醇约15 ml)重结晶即得精制槲皮素。
4、检识：(1)Molish反应：取芸香苷少许置小试管中，加乙醇0.5 ml，加10%α-萘酚溶液1 ml振摇使溶解，沿管壁徐徐加入浓硫酸约0.5 ml，静置。
观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性。
以同法试验槲皮素，比较二者的不同。
(2)酸性实验：取小试管四支为一组，共二组，第一组每管中加入芸香苷1 mg，第二组每试管中加入槲皮素1 mg，每组分别加稀氨水、5% 碳酸氢钠溶液、5% 碳酸钠溶液和1% 氢氧化钠溶液各2 ml，振摇后，观察各管溶解情况，溶解的溶液应呈黄色。
再加盐酸数滴，黄色应褪去或变浅，并有沉淀或浑浊析出。
提取云香苷的实训报告
一、实验目的1. 熟悉云香苷的提取、精制、水解及检识的方法。
2. 培养学生对实验仪器的操作技能。
3. 提高学生对实验数据的处理和分析能力。
二、实验原理云香苷，又称芦丁，是一种黄酮类化合物，具有广泛的生物活性。
在植物界中，云香苷主要存在于槐米、玉米须、荞麦叶等植物中。
云香苷的提取、精制、水解及检识是研究其生物活性及其应用的重要步骤。
本实验采用碱溶酸沉法提取云香苷，该方法利用云香苷在碱性条件下可溶于水，而在酸性条件下可沉淀析出的特性。
通过水解反应，将云香苷分解为槲皮素和葡萄糖，进一步鉴定其结构。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外光分析仪、水泵、试管、烧杯、回流提取器、抽滤瓶、锥型瓶、层析缸、蒸发皿、布氏漏斗等。
2. 试剂：槐米、2%硫酸、0.4%硼砂溶液、石灰乳、镁粉、浓盐酸、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等。
四、实验步骤1. 提取（1）称取槐米粉末5g，加入100mL 2%硫酸溶液，搅拌均匀，置于回流提取器中，加热回流1小时。
（2）取出提取液，用布氏漏斗过滤，收集滤液。
（3）将滤液用石灰乳调节pH至中性，静置过夜。
（4）取上清液，用浓盐酸调节pH至4.5，静置，待沉淀完全析出。
（5）用布氏漏斗过滤，收集沉淀。
2. 精制（1）将沉淀用少量甲醇洗涤，再用布氏漏斗过滤。
（2）将滤液置于蒸发皿中，蒸发浓缩至近干。
（3）加入少量甲醇溶解，转移至锥型瓶中，加入适量的活性炭脱色。
（4）过滤，收集滤液。
3. 水解（1）取上述滤液，加入适量的稀硫酸，加热回流2小时。
（2）取出，用石灰乳调节pH至中性，静置过夜。
（3）取上清液，用布氏漏斗过滤，收集滤液。
4. 检识（1）取上述滤液，加入适量的镁粉，滴加浓盐酸，观察颜色变化。
（2）取上述滤液，加入适量的三氯化铁溶液，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 提取通过碱溶酸沉法，成功提取了槐米中的云香苷。
在实验过程中，观察到沉淀的形成，表明云香苷在酸性条件下析出。
2. 精制通过活性炭脱色，成功去除滤液中的杂质，提高了云香苷的纯度。
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定二.ppt
香苷的乙醇液作为供试液做芸香苷化学检识反应。
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 1、盐酸—镁粉反应：取供试液2ml于试管中，加 入少许镁粉，再向试管中滴加浓盐酸数滴，观察 现象。
• 2、三氯化铝反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液 （注意相互不要晕染），其中一滴作为空白对照， 另一滴上面滴一滴三氯化铝溶液。观察二者颜色 变化，并在紫外灯下观察荧光。
• 3、氨熏反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液，其 中一滴作为空白对照，将另一滴点有供试液的部 分倒扣在浓氨水的瓶口上。观察二者颜色变化。
槐花中芸香苷的提取分 离、精制、鉴定（二）
Байду номын сангаас
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 一、实验目的：使芸香苷在水中重结晶，去除杂质达到精 制的目的。
• 二、实验原理：芸香苷粗品易溶于热水，难溶于冷水。 • 三、操作步骤： • （一）抽滤得到芸香苷粗品。 • （二）芸香苷的精制 • 取芸香苷粗品5/6份，置于500ml烧杯中，加蒸馏水300ml
槐米中芦丁(芸香苷)的提取分离及检识
结晶
静置液减压抽滤在 60-70温度下烘干 得粗品芸香苷 置于300ml蒸馏水 煮沸至芸香苷全部溶解 趁热抽滤 滤液放冷析晶
天然产物化学
水解 取精制芸香苷1g 置250ml圆底烧瓶中 加2%H2SO4溶液80ml 加热回流30分钟至1小时， 开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结晶， 即为槲皮素。放冷抽滤 沉淀物用蒸馏水洗至中性， 抽干水份，晾干称重，得粗制槲皮素
天然产物化学
提取
碱溶酸沉法
芸香苷分子中含有酚羟基，显弱酸性，能与 碱成盐而溶于碱液中加酸酸化后又可以沉淀 析出，因此可用碱溶酸沉法提取芸香苷。
天然产物化学
实验步骤
重复以上操作， 硼砂水150ml,时 间20min
加0.4%硼砂水200ml 加热微沸30min,用石 灰乳保持pH8-9
结晶
天然产物化学
天然产物化学
聚酰胺薄层色谱检识
点 样：（1）自制1%芸香苷乙醇溶液 （2）自制1%槲皮素乙醇溶液 对照品：1%芸香苷对照品乙醇溶液乙酯（3∶1∶0.5）
显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在紫 外灯下观察斑点颜色 （2）用氨水熏，记录斑点颜色和位置 结果：记录图谱，斑点颜色，计算芸香苷和槲皮素 Rf
天然产物化学
槐米中芦丁（芸香苷）的提取、分离和检识
天然产物化学
芦 丁
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含 有三分子的结晶水，熔点为174~178℃， 无水物188~190℃。 溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200； 冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。 微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、 氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
天然产物化学
化学检识
• 取芸香苷和槲皮素约10mg，各用5ml乙醇溶解，制成样 品溶液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 • （1）Molish反应 取样品溶液1ml，加10%α-萘酚溶液 1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5ml浓硫酸，静置， 观察并记录液面交界处颜色变化。 • （2）盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管 中，加入金属镁粉少许，浓盐酸2~3滴，观察并记录颜色 变化。
芸香苷的提取、精制、水解和鉴定
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实验注意事项
• 1、提取过程中，加入硼砂的目的是为了保护芸香苷分子中 邻二酚羟基，以减少其氧化，并使其不与钙离子结合（钙 盐络合物不溶于水），使芸香苷不受损失，提高产率。 • 2、实验中应严格控制碱提取、酸沉淀的PH值。加入石灰 乳即可以达到碱性溶解提取的目的，还可以除去槐花米中 的多糖类、粘液质等，但碱性不宜过高（PH不超过10）， 因为在强碱性条件下煮沸，时间稍长就可促使芸香苷水解 破坏，降低产率；酸化时PH不可过低，否则会使芸香苷形 成样盐而降低产率。 • 3、水解时应随时加水，避免蒸干。
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• 实验器材： • 试药：槐花米、0.4%硼砂水溶液、石灰乳、蒸馏 水、浓盐酸、2%硫酸、乙醇、1%氢氧化钠溶液、 1%盐酸溶液、10%α-萘酚溶液、浓硫酸、镁粉、 1%醋酸镁甲醇溶液、正丁醇、醋酸 • 仪器：电炉、漏斗、紫外分析仪、锥形瓶、量筒、 烧杯、层析筒、试管
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实验内容与方法：
• 一、芸香苷的提取 • 取槐花米20g（研碎），置于1000ml圆底烧瓶中， 加0.4%硼砂水溶液200ml，在搅拌下加石灰乳调PH8， 加热微沸30分钟，静置几分钟倾出上清液，用棉花 过滤，药渣同上重复一次。合并滤液用6N盐酸调 PH2~3，放置冰箱中析晶（一夜以上），待全部结 晶析出，抽滤，得粗芸香苷（滤饼用水洗3~4次）， 放置空气中自然干燥得粗品，称重、计算提取率。
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• 五、芸香苷及槲皮素的纸层析鉴定 • 层析材料：层析滤纸 • 点 样：（1）提取的芸香苷乙醇溶液 （2）提取的槲皮素乙醇溶液 • 展开剂：正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶5）上层溶液 • 显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在 紫外灯下观察斑点颜色 • （2）喷洒三氯化铝试剂后再观察斑点的变化
实验三中药化学成分提取槐米
实验三槐米中芸香苷的提取、精制和检识
一、目的要求
掌握芸香苷的主要性质及提取、分离精制和检识方法。
二、实验原理
根据芸香苷可溶于碱水，在酸性条件下又可沉淀析出，采用碱溶酸沉法提取。
根据芸香苷在冷水和热水中溶解度相差较大，以水为溶剂,采用结晶法进行精制。
三、实验方法
（一）芸香苷的提取
1.不锈钢锅中加500毫升水，加热至沸后加入槐米50克，
用石灰乳调pH值8-9，继续加热20分钟，随时补充损失的水分，趁热用纱布过滤，药渣再提取一次，两次滤液合并。
2.用浓盐酸调提取液使pH值2-3，放置过夜。
3.抽滤，将沉淀抽干，置于室温中自然干燥，得芸香苷粗品。
（二）芸香苷的精制
1.取芸香苷粗品2克置800毫升的烧杯中，加水约400毫升，
加热至沸，使芸香苷完全溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜，析晶。
2.抽滤，自然干燥，得芸香苷精制品。
（三）芸香苷的检识(要求写出反应现象)
1.氢氧化钠实验
取芸香苷少许置于试管中，加入2ml蒸馏水，振摇。
滴加2-3滴氢氧化钠溶液，芸香苷溶解，呈黄色澄明溶液。
再滴加盐酸溶液2-3滴，观察是否有沉淀生成。
2.α-萘酚—浓硫酸实验（Molish反应）
取芸香苷少许置干燥试管中，加2ml无水乙醇，振摇。
再滴加2-3滴α-萘酚溶液，振摇。
将试管倾斜，沿管壁滴加1ml 浓硫酸，观察两液面交界处颜色变化。
3.盐酸-镁粉实验
取芸香苷少许置于试管中，加入2ml 50%的乙醇，水浴加热溶解。
加入少许镁粉，再加入盐酸数滴，观察颜色变化。
写出碱提取酸沉淀提取芸香苷的流程
写出碱提取酸沉淀提取芸香苷的流程
1. 原料预处理：取槐花米（或其他含芸香苷的植物原料），洗净，晾干，粉碎成粗粉。
2. 碱提取：
- 将粗粉置于烧杯中，加入适量的0.4%硼砂水溶液，搅拌均匀。
- 再缓慢加入石灰乳（氢氧化钙乳液），调节pH值至8 - 9。
- 加热至微沸，保持该状态并搅拌提取一定时间（约30 - 60分钟）。
- 趁热过滤，得到碱提取液。
3. 酸沉淀：
- 在碱提取液中，边搅拌边缓慢加入稀盐酸，调节pH值至4 - 5。
- 随着酸的加入，可见芸香苷逐渐沉淀析出。
- 静置一段时间（如1 - 2小时），使沉淀完全。
- 过滤，得到芸香苷粗品沉淀。
4. 精制：
- 将芸香苷粗品沉淀用适量蒸馏水洗涤，以除去杂质。
- 再用乙醇进行重结晶，得到较纯的芸香苷晶体。
芸香苷实验报告
一、实验目的1. 掌握芸香苷的提取方法。
2. 学习黄酮类化合物的分离纯化技术。
3. 了解芸香苷的鉴定方法。
4. 培养实验操作技能和科学思维。
二、实验原理芸香苷（Rutin）是一种天然黄酮类化合物，广泛存在于槐米、山楂、茶叶等植物中。
本实验采用醇提法提取芸香苷，通过分离纯化得到较高纯度的芸香苷，并对其进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 槐米- 甲醇- 氢氧化钠- 碳酸钠- 盐酸- 硝酸- 氢氧化钠溶液- 醋酸铅溶液- 醋酸镁溶液- 香草醛溶液- 水合氯醛溶液- 蒸馏水- 硅胶2. 实验仪器：- 电子天平- 热水浴锅- 超声波清洗器- 烘箱- 分液漏斗- 抽滤装置- 显微镜- 紫外可见分光光度计四、实验步骤1. 芸香苷的提取：（1）称取干燥的槐米粉末10g，置于100mL三角瓶中。
（2）加入50mL甲醇，超声提取30分钟。
（3）过滤，收集滤液。
（4）将滤液浓缩至约5mL，加入适量的氢氧化钠溶液，调节pH值为8.5。
（5）静置过夜，使芸香苷沉淀。
（6）抽滤，收集沉淀。
2. 芸香苷的分离纯化：（1）将沉淀用适量甲醇溶解，加入适量的硅胶，搅拌均匀。
（2）将混合物倒入色谱柱中，采用柱层析法进行分离纯化。
（3）依次用不同极性的溶剂进行梯度洗脱，收集目标峰。
（4）将收集到的目标峰浓缩，得到纯化的芸香苷。
3. 芸香苷的鉴定：（1）紫外-可见光谱法：取适量纯化后的芸香苷，用甲醇溶解，测定其在254nm和364nm处的吸光度值。
（2）薄层色谱法：将纯化后的芸香苷点于薄层板上，用适宜的溶剂进行展开，与对照品进行对比，观察其斑点位置。
（3）红外光谱法：对纯化后的芸香苷进行红外光谱分析，与标准图谱进行对比，确定其结构。
五、实验结果与分析1. 芸香苷的提取：通过醇提法，从槐米中成功提取了芸香苷。
2. 芸香苷的分离纯化：采用柱层析法，从提取液中分离纯化了芸香苷。
3. 芸香苷的鉴定：通过紫外-可见光谱法、薄层色谱法和红外光谱法，对纯化后的芸香苷进行了鉴定，确认其为芸香苷。
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• 五、芸香苷及槲皮素的纸层析鉴定 • 层析材料：层析滤纸 • 点 样：（1）提取的芸香苷乙醇溶液 （2）提取的槲皮素乙醇溶液 • 展开剂：正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶5）上层溶液 • 显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在 紫外灯下观察斑点颜色 • （2）喷洒三氯化铝试剂后再观察斑点的变化
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• 四、芸香苷的检识反应 • 1．成盐反应 取芸香甙10mg左右，置试管中加 蒸馏水2ml，振摇，观察试管有无变化，滴加1%氢 氧化钠溶液数滴，振摇使芸香甙全部溶解成为黄色 澄明溶液，然后再滴加1%盐酸溶液数滴至成酸性 反应，溶液则由澄明转为混浊状态（若当时不出现 混浊时可放置片刻或放置冰箱中冷冻一定时间后再 观察）。
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实验注意事项
• 1、提取过程中，加入硼砂的目的是为了保护芸香苷分子中 邻二酚羟基，以减少其氧化，并使其不与钙离子结合（钙 盐络合物不溶于水），使芸香苷不受损失，提高产率。 • 2、实验中应严格控制碱提取、酸沉淀的PH值。加入石灰 乳即可以达到碱性溶解提取的目的，还可以除去槐花米中 的多糖类、粘液质等，但碱性不宜过高（PH不超过10）， 因为在强碱性条件下煮沸，时间稍长就可促使芸香苷水解 破坏，降低产率；酸化时PH不可过低，否则会使芸香苷形 成样盐而降低产率。 • 3、水解时应随时加水，避免蒸干。
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• 实验器材： • 试药：槐花米、0.4%硼砂水溶液、石灰乳、蒸馏 水、浓盐酸、2%硫酸、乙醇、1%氢氧化钠溶液、 1%盐酸溶液、10%α-萘酚溶液、浓硫酸、镁粉、 1%醋酸镁甲醇溶液、正丁醇、醋酸 • 仪器：电炉、漏斗、紫外分析仪、锥形瓶、量筒、 烧杯、层析筒、试管
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• 2．呈色反应 • 取芸香苷和槲皮素约10mg，各用5ml乙醇溶解，制成样品 溶液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 • （1）Molish反应 取样品溶液1ml，加10%α-萘酚溶液 1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5ml浓硫酸，静置， 观察并记录液面交界处颜色变化。 • （2）盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管中， 加入金属镁粉少许，浓盐酸2~3滴，观察并记录颜色变化。 • （3）醋酸镁纸片反应 取两张滤纸条，分别滴两滴芸香苷、 槲皮素的乙醇溶液，然后各加1%醋酸镁甲醇溶液两滴，于 紫外灯下观察荧光变化，记录现象。
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实验内容与方法：
• 二、芸香苷的精制 • 取2g加蒸馏水400ml，加热煮沸溶解，趁热 抽滤，滤液放置过夜，析晶，抽滤，得精制 芸香甙。烘干。
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实验内容与方法：
• 三、芸香苷的水解 • 取精制芸香甙1g，置250ml圆底烧瓶中，加 2%H2SO4溶液80ml，加热回流30分钟至1小时， 开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结 晶，即为槲皮素。放冷抽滤得结晶，滤液保留作为 糖的检查，沉淀物用蒸馏水洗至中性，抽干水份， 晾干称重，得粗制槲皮素。必要时可用稀乙醇重结 晶。
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实验内容与方法：
• 一、芸香苷的提取 • 取槐花米20g（研碎），置于1000ml圆底烧瓶中， 加0.4%硼砂水溶液200ml，在搅拌下加石灰乳调PH8， 加热微沸30分钟，静置几分钟倾出上清液，用棉花 过滤，药渣同上重复一次。合并滤液用6N盐酸调 PH2~3，放置冰箱中析晶（一夜以上），待全部结 晶析出，抽滤，得粗芸香苷（滤饼用水洗3~4次）， 放置空气中自然干燥得粗品，称重、计算提取率。
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实验二 芸香苷的提取、精制、 水解和鉴定
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O OH O
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实验二 芸香苷的提取、精制、 水解和鉴定
实验原理：
1.芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性， 在碱水中成盐增大溶解能力，用碱水为溶 剂煮沸提取，提取液加酸酸化后又成为游 离的芸香苷而析出。并利用芸香苷对冷水 和热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。 2.黄酮苷可通过酸水解得到苷元和糖，并 可通过薄层色谱法进行检识。