水产饲料中复方硝基酚钠的高效液相色谱法分析
肥料中复硝酚钠的测定高效液相色谱法
肥料中复硝酚钠的测定高效液相色谱法警告：本标准有可能涉及到有害物质、危险操作和设备的安全。
本标准并未指出所有可能的安全问题。
使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的要求。
1 范围本标准规定了肥料中复硝酚钠的高效液相色谱法。
本标准适用于水溶肥料、复混肥料、掺混肥料、配方肥料中复硝酚钠的检测。
称样量为1.0 g时，方法中复硝酚钠检出限为3 mg/kg。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法3 原理试样中复硝酚钠用甲醇进行超声提取，以甲醇-甲酸溶液为流动相，在选定的工作条件下，用高效液相色谱仪（配有二极管阵列检测器）进行测定，外标法定量。
4 试剂和材料本标准中试验用水应符合GB/T 6682中一级用水的规格。
4.1 甲醇：色谱纯。
4.2 甲酸：分析纯。
4.3 甲酸-水溶液（1+1 000）：移取1.0 mL甲酸（4.2）与1 000 mL水混匀。
4.4 2-硝基苯酚钠标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。
4.5 4-硝基苯酚钠标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。
4.6 5-硝基邻甲氧基苯酚钠标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %，2-硝基苯酚钠、4-硝基苯酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠信息一览表见附录A中表A.1。
4.7 复硝酚钠标准溶液：称取2-硝基苯酚钠、4-硝基苯酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠标准品，用甲醇（4.1）配制成各个标准物质浓度为1 000 mg/L的混合标准溶液，现用现配。
5 仪器与设备5.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器和色谱数据处理机。
5.2 微量注射器：50 μL。
5.3 漩涡混合器。
5.4 高速离心机：最高转速不低于6 000 r/min。
5.5 超声波清洗器。
超高效液相色谱-_串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类代谢物
收稿日期：2022-10-11作者简介：杨丽，女，1996年生，助理工程师。
*通信作者：马义虔，男，1989年生，硕士，中级工程师。
超高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类代谢物杨丽，王雪蓉，陈大鹏，杨燕红，马义虔*贵州省产品质量检验检测院，贵阳550016摘要[目的]建立超高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS ）测定鱼肉中呋喃它酮（AMOZ ）、呋喃西林（SEM ）、呋喃妥因（AHD ）和呋喃唑酮（AOZ ）4种硝基呋喃代谢物的检测方法。
[方法]试样经2-硝基苯甲醛衍生化，调节pH 值至7.0~7.5，经乙酸乙酯提取，5%甲醇水溶液定容，采用多反应监测（MRM ）模式，电喷雾正离子（ESI +）模式电离，内标法定量。
[结果]硝基呋喃代谢物在0.5~50.0ng/mL 范围内线性关系良好，相关系数>0.996。
方法检出限为0.5μg/kg ，3个添加水平（0.5、1.5、5.0μg/kg ）下的回收率在70%~120%范围内，相对标准偏差RSD 均小于10%。
[结论]该方法具有较好的准确性和稳定性，能够用于鱼肉中硝基呋喃代谢物的检测。
关键词超高效液相色谱-串联质谱法；鱼肉；呋喃它酮；呋喃西林；呋喃妥因；呋喃唑酮YANG Li,WANG Xuerong,CHEN Dapeng,YANG Yanhong,MA Yiqian *Guizhou Institute of Products Quality Inspection &Testing,Guiyang 550016,China[Objectives]To establish a method for the determination of furaltadone （AMOZ ）,nitrofura -zone nitrofurantoin （AHD ）and furazolidone （AOZ ）,four nitrofuran metabolites in aquatic prod -ucts by ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS ）.[Methods]The samples were derivatized by 2-nitrobenzaldehyde,and the pH value was adjusted to 7.0-7.5.The samples were extracted by ethyl acetate,and 5%methanol in aqueous solution was fixed volume.The samples were detected by selective multiple reaction monitoring （MRM ）mode,ionized by electrospraypositive ion （ESI +）mode,and quantified by internal standard method.[Results]The nitrofuran metabolitehad a good linear relationship in the range of 0.5-50.0ng/mL,and the correlation coefficients （）betterthan 0.996,and the detection limit of this method was 0.5μg/kg.The recoveries rates were in the rangeof 70%-120%at the three supplemental levels （0.5,1.5and 5.0μg/kg ）,and the relative standard devi -时间/min A 05.00.8095.02.0095.02.01 5.03.00 5.0B95.05.05.095.095.0ation （RSD ）was less than 10%.[Conclusions]The results show that this method has good accuracy andbe used for the determination of nitrofuran metabolites in fish.UPLC-MS/MS;fish;furaltadone;nitrofurazone;nitrofurantoin;furazolidone硝基呋喃类药物是通过在呋喃核的5位引入硝基和2位引入其他基团而人工合成的抗菌药，主要有呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃它酮和呋喃妥因[1]。
高效液相色谱法检测饲料中的硝基呋喃类药物
２６ 混合 型 阳离 子交 换柱 ： ． 规格 为 ６ ｍ 。 ０ ｇ ２７ 微孔滤 膜 ： 格 为 ０２ ｍ。 ． 规 ．１ ｘ ２８ 呋喃西 林 （ ｉｏｕａｏ ｅ ： ． Ｎ ￣ ｆｒ ｎ ） 纯度 Ｉ９ ％。 ｚ ＞ ９ ２９ 呋喃妥 因（ ｉｏｕ ｎｉｎ ： 度 Ｉ９ ％。 ． Ｎ ｔ ｆａ ｔ ）纯 ＞ ９ ｒ ｏ ２１ 呋 喃它酮 （ ｕＭ ａ ｏ ｅ ： 度 ＞９ ％。 ． ０ Ｆ ｒ ｔｄ ｎ ）纯 １ ９ ２１ 呋 喃唑酮 （ ｕａｏｉｏ ｅ ： 度 Ｉ９ ％。 ．１ Ｆ ｒｚｌ ｎ ）纯 ＞ ９ ｄ ２１ ２ ． ２ ％甲酸 溶液 ： 甲酸＋ ＝ ＋ ８ 水 ２９。 ２１ ｌ ．３ ％氨水 溶液 ：５ ３ ％氨水＋ ＝ ＋ ９ 水 １９ 。 ２１ 固相 萃取 柱洗脱 液 ：％氨水＋ ． ４ ｌ 甲醇＝ ０ ７ 。 ３ ＋０ ２１ 硝 基 呋 喃 类 药 物 混 合 标 准 贮 备 液 （０ ｍ￣ ． ５ １０ ｍＬ ： 称 取 ４ 种 硝 基 呋 喃 类 药 物 （． ，． ， ） ２８ ２９ ２１ ，．１ 各 １ ０ （ 确 到 ００ ０ ｇ 于 １ｍＬ容 ． ２１ ） ０ ． ｇ精 ０ ． １） ０ ０ 量瓶 中 。 乙腈溶 解定 容 。一 ０ 用 ２ ℃保存 ６个月 。 ２１ 硝 基 呋 喃 类 药 物 混 合 标 准贮 备 液 （０ １ ／ ．６ ２ ０ｘ ｇ
中 的硝 基 呋 喃 类 药 物 。 缩 近 干 ， ２ 甲酸 溶 解 ， 混 合 浓 用 ％ 经
除非 另有 说 明 ． 分 析 中仅使 用 确 认 为分 析 在 纯 的试 剂 和 Ｇ ／ ６ ２ ２ ０ （ 析实 验室 用水 规 ＢＴ ６ ８ — ０ ８ 分 格 和试 验方 法》 中规定 的二级 水 。
高效液相色谱法检测虾肉中硝基呋喃类药物残留 毕业论文
1.7.1.2
高效液相色谱仪的主要部件有：贮液罐、高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪和数据处理装置。其基本的工作流程是：贮液罐中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来[15]。
2.3.4加标回收率和精密度9
3结果与分析9
3.1衍生温度的确定9
3.2提取方式的影响11
3.3提取时间的影响13
3.4线性关系、线性范围的确定14
3.5检测限的确定16
3.6加标回收率和精密度16
4讨论19
5小结与展望20
致谢21
参考文献22
1
1.1
我国是水产品生产与出口大国,自20世纪80年代以来,我国的水产品产量一直居世界首位，然而制约我国水产业发展的突出问题,其中之一便是水产品的质量安全问题，其中就包括药物残留超标。目前常见的因残留超标引起水产品质量安全事件的药物主要有氯霉素、孔雀石绿、硝基呋喃类代谢物和甲醛等,当人们食用了残留超标的水产品后,会出现不同程度的中毒反应,轻者影响健康,重者危及生命。而硝基呋喃类药物在水产品中的残留问题是近年来我国水产品出口中重点监控的项目[1]。
1.2
在我国，硝基呋喃类药物曾经得到广泛使用。呋喃唑酮在畜禽养殖、水产养殖上应用非常广泛，曾广泛用于防治畜禽肠道感染、防治水生动物疾病。作为医药，呋喃唑酮用于治疗细菌和原虫引起的腹泻、结肠炎和霍乱等[3]。呋喃西林一般用作外用消毒药物，也有拌饵投喂防治水生动物疾病的报道[4]。从藻类中提取的卡拉胶(食品增稠剂)中也存在呋喃西林[5]。此外，硝基呋喃类药物也有可能添加到化妆品种以实现某些功效。
水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定—高效液相色谱法
水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定—高效液相色谱法1 范围本标准规定了水产品中呋喃唑酮的代谢物3-氨基-2-唑烷基酮（AOZ）、呋喃它酮的代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮（AMOZ）、呋喃西林德代谢物氨基脲（SEM）和呋喃妥因德代谢物1-氨基-2-内酰脲（AHD）残留量的的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于水产品中呋喃唑酮代谢物、呋喃它酮代谢物、呋喃西林代谢物和呋喃妥因代谢物残留量的测定。
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理试样中残留的硝基呋喃类代谢物用硝基呋喃类代谢物快速检测前处理试剂盒提供的试剂提取，经衍生化试剂衍生、经乙酸乙酯反萃、净化后用紫外检测器进行检测，外标法定量。
4 试剂和材料本标准所用试剂应无干扰峰。
除另有特别说明外，所用试剂均为分析纯；试验用水应符合GB/T 6682一级水的要求。
4.1 乙腈:色谱纯。
4.2 乙腈水溶液：乙腈+水=30+70（v/v）4.3 甲醇:色谱纯。
4.4 乙酸乙酯：色谱纯4.5 异丙醇：色谱纯。
4.6 庚烷磺酸钠：HPLC级。
4.7 异辛烷：色谱纯。
4.8 乙酸：色谱纯。
4.9 标准品: 氨基脲（SEM）、3-氨基-2-唑烷基酮（AOZ）、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮（AMOZ）、1-氨基-乙内酰脲（AHD）：≧99%。
4.10 标准贮备溶液:准确称量各AMOZ、AHD 、AOZ、SEM各10 mg，用甲醇分别定容于100 mL容量瓶中，配制成100 µg/mL的标准贮备液。
4.11 混合标准工作溶液：使用前，取4.10标准贮备溶液用甲醇稀释成所需浓度。
高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产品硝基呋喃类代谢物残留
酸乙酯提取 ， 用 正己烷脱脂 ， Ｈ Ｌ Ｂ固相萃取柱净化 ， 采用 Ｌ Ｃ ． Ｍ Ｓ ／ Ｍ Ｓ 选择反应监测 （ Ｓ Ｒ Ｍ） 正离子模式测定进 行定性
及定 量分析． 结果表 明 ： 硝基 呋喃类 代谢物检 测结 果的相对 标 准偏差为 １ ． ２ ％ 一１ ０ ． ３ ％ （ ＝６ ） ， 加 标 回收率 达到 ６ ８ ． ６ ％ 一１ ０ ６ ． ２ ％． 该 方法重 现性好 、 灵敏度 高 、 分 析时 间短、 确证 能力强 ， 适用 于水产 品中硝基呋 喃类 代谢物残 留
的确证检 测．
关键 词
高效液相色谱・ 串联质谱 法 ； 硝基 呋喃类代谢 物 ； 水产 品
Ｔ Ｓ ２ ５ ４ ． ７ 文献标识码 Ａ 文章编 号 １ ０ ０ ０ － ２ ５ ３ ７ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ５ － ０ ０ ４ ５ － ０ ６
中图分类号
Ｓｉ ｍｕ ｌ ｔ ａ ｎ ｅ ｏ ｕ ｓ Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｍｅ ｔ ａ ｂ ｏ ｌ ｉ ｔ ｅ ｓ ｏ ｆ Ｎｉ ｔ ｒ ｏ ｆ ｕ ｒ ａ ｎ Ｒｅ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｄ ｃ ａ ｒ ｔ ｒ ｉ ｄ ｇ ｅ ｓ（ ＨＬ Ｂ） ．Ｔ ｈｅ ｍ ｓｓ ａ ｓ ｐ ｅ ｃ ｒ ｔ ｏ ｍ ｅ ｔ ｅ ｒ ｗ ａ ｓ ｏ ｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ｉ ｏ ｎ ｍ ｏ ｄ ｅ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｓ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｒ ｅ －
Ｚ Ｅ Ｎ Ｇ Ｃ ｈ ｕ ｎ － ｆ ａ ｎ ｇ ，Ｗ Ａ Ｎ Ｙ ｉ — ｙ ３ ｅ Ｒ’ ， Ｌ Ｉ Ｘ ｉ ａ ｏ — ｌ ｉ ｎ ｇ ， Ｌ Ｉ Ｕ Ｌ ｉ
（ Ｆ ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ ｙ Ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｓ Ｑ ｕ ｌ ａ ｉ ｔ ｙ Ｓ ｕ ｐ ｅ ｒ ｖ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ， Ｍｉ ｎ ｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ｏ ｆ Ａ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ，Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｓ ｈ ａ ４ １ ０ １ ５ ３ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
高效液相色谱法检测饲料中7种硝基呋喃类药物
高效液相色谱法检测饲料中7种硝基呋喃类药物张会彩;李军;闫晓东;刘静;王建平【摘要】@@ 硝基呋喃类药物是一类化学合成的广谱抗菌药物,因具有高效抗菌作用和促生长作用曾广泛应用于畜牧和水产养殖业中,但此类药物及其代谢物具有潜在的致癌和诱导突变作用.其中的呋喃唑酮(FZD)、呋喃西林(NFZ)、呋喃妥因(NFT)和呋喃它酮(FTD)在世界多数国家中被禁止用于食品动物养殖,硝呋索尔(NFS)于2002年被欧盟禁用,呋喃苯烯酸钠(NFSS)于2002年被中国禁用.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2011(047)005【总页数】3页(P72-74)【作者】张会彩;李军;闫晓东;刘静;王建平【作者单位】河北农业大学动物科技学院,河北保定071000;河北农业大学动物科技学院,河北保定071000;河北农业大学动物科技学院,河北保定071000;河北农业大学动物科技学院,河北保定071000;河北农业大学动物科技学院,河北保定071000【正文语种】中文【中图分类】S859.79+9.1硝基呋喃类药物是一类化学合成的广谱抗菌药物,因具有高效抗菌作用和促生长作用曾广泛应用于畜牧和水产养殖业中,但此类药物及其代谢物具有潜在的致癌和诱导突变作用。
其中的呋喃唑酮(FZD)、呋喃西林(NFZ)、呋喃妥因(NFT)和呋喃它酮(FTD)在世界多数国家中被禁止用于食品动物养殖,硝呋索尔(NFS)于2002年被欧盟禁用,呋喃苯烯酸钠(NFSS)于2002年被中国禁用。
由于没有资料表明硝呋酚酰肼(NFX)也具有相似毒性,因此,还没有国家发布对该药的禁令。
但由于此类药物具有高效廉价的特点,在畜牧和水产养殖过程中可能仍存在非法使用的情况,因此,监控硝基呋喃类药物的非法使用至关重要。
由于硝基呋喃类药物在动物体内代谢迅速,其代谢物以组织结合蛋白的形式持续存在,因此,许多报道的方法,如液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)[1-3]和/或酶联免疫检测法(ELISA)[4-6]都主要针对呋喃代谢物。
超高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中硝基呋喃代谢物残留
基 呋喃类 药物残 留状 况都 是通 过检 测其 中硝基 呋喃 类代谢 产 物含量 作 为依据 的 。 硝基 呋喃类 代谢 产物 残 留检 测手 段主要 有酶联 免疫法 （ Ｌ Ｓ 、 Ｅ Ｉ Ａ） 高效 液相 色 谱法 （ Ｌ ） 高 效液 ＨＰ Ｃ 、
物 可 以在 人 胃液 的酸性 条件 下从 蛋 白质 中释放 出来 被 人体 吸收 而对人 类健 康造 成危 害 。硝基 呋喃类 抗 菌剂 及其 代谢 产物 的长 期食 人会对 人 体有 “ 三致 ” 威
胁 ， 世界 各 国普 遍 禁 止 使用 的兽 用 药 物 。硝 基 呋 是 喃类 抗 菌 剂 常 见 的 有 以 下 ４种 药 物 ：呋 喃 唑 酮 （Ｚ 、 Ｆ Ｄ） 呋喃它 酮 （ Ｔ 、 Ｆ Ｄ） 呋喃西林 （ Ｚ 和 呋喃 妥 ＮＦ ） 因 （ Ｔ） 其对 应 的代谢 物 分 别 为 ： 一氨基 一 一嗯 ＮＦ ， ３ ２ 唑烷基 酮 （ Ｚ 、 一甲基 一吗啉 一３ 氨 基 一２ ＡＯ ） ５ 一 一嗯 唑 烷基酮 （ ＡＭＯ ） 氨基 脲 （ Ｅ 和 卜 氨基 一 一内酰 Ｚ 、 Ｓ Ｍ） ２
随着 经济 的发 展 和人 民生 活水 平 的不 断提 高 ， 人 们对水 产 品的 消 费量 也 在 不 断增 长 ， 产 品质 量 水
安 全 越 来 越 受 到 关 注 。欧 盟 和 美 国 分 别 在 １ ９ ９ ５年
由于 硝 基 呋 喃 类 药 物 特 异 性 抗 体 各 不 相 同 ， 且
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对硝基酚钠、邻硝基酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚 钠标准储备液：分别准确称取对硝基酚钠、邻硝基酚 钠和 5-硝基邻甲氧基苯酚钠对照品各约 0.010 0 g，用 甲醇溶解并定容至 10 ml，配成浓度为 1 mg/ml 的单标 标准储备液；对硝基酚钠、邻硝基酚钠和 5-硝基邻甲 氧基苯酚钠混合标准使用液：准确移取适量对硝基 酚钠、邻硝基酚钠和 5-硝基邻甲氧基苯酚钠单标标 准储备液，用甲醇逐级稀释配成浓度为 100 μg/ml 和 10 μg/ml 混合标准使用液。
我国是世界水产养殖大国，对水产饲料的需求巨 大。复方硝基酚钠在虾蟹等水产动物饲料中的添加 量约为 0.02‰~0.03‰。目前，水产饲料中复方硝基酚 钠含量的检测方法还未建立。因此，本研究采用高效 液相色谱法建立复方硝基酚钠在水产饲料中含量的 检测方法，从而为水产饲料样品中复方硝基酚钠的质 量控制提供技术支持。 1 材料与方法 1.1 实验仪器
2015 年第 36 卷第 12 期 总第 489 期
SILIAO GONGYE
水产饲料中复方硝基酚钠的高效液相色谱法分析
■ 邢丽红 冷凯良 孙伟红 李兆新 付树林 孙晓杰
（农业部水产品质量安全检测与评价重点实验室 农业部水产品质量安全风险评估实验室（青岛） 中国水产科学研究院黄海水产研究所，山东青岛 266071）
phenolates in aquatic feeds. The samples were extracted by acetonitrile. The extracts were purified by
liquid- liquid extraction with n- hexane and dehydrated by anhydrous sodium sulfate. Then the ex⁃
0.5~20 μg/ml 范围内线性关系良好，相关系数 r2>0.999。添加水平为 1~20 mg/kg 时，对硝基酚钠、邻硝
基酚钠和 5-硝基邻甲氧基苯酚钠的回收率分别为 84.5%~96.6%、74.0%~89.2%和 78.5%~95.8%，批内
相对标准偏差及批间相对标准偏差均<15%。经验证该方法操作简便，准确性和重现性良好，可用于
水产饲料中复方硝基酚钠含量的测定。
关键词：高效液相色谱；水产饲料；复方硝基酚钠
doi:10.13302/ki.fi.2015.12.012
中图分类号：S816.17
文献标识码：A
文章编号：1001-991X（2015）12-0053-05
Analytical method for the determination of compound sodium nitrophenolates
通讯作者：孙伟红，博士，高级工程师。 收稿日期：2015-04-30 基金项目：2014 年国家水产品质量安全风险评估项目 [GJFP2014009]“；十二五”国家科技支撑计划项目[2012BAD29B06]
复方硝基酚钠是 20 世纪 60 年代由日本旭化学工业 株式会社最先发现的一种高效植物生长调节剂，由对硝 基酚钠、邻硝基酚钠和 5-硝基邻甲氧基苯酚钠及其助剂 按一定比例混配而成[1-2]。复方硝基酚钠是一种新型强力 细胞赋活剂，在农业、畜牧和渔业上有广泛应用。由于复 方硝基酚钠的价廉高效，使得化肥生产商在肥料生产过
摘 要：研究旨在建立一种检测水产饲料中复方硝基酚钠含量的高效液相色谱方法。饲料经乙
腈提取，正己烷液液萃取净化，无水硫酸钠脱水，碱性条件下浓缩后，以 0.1%磷酸溶液-甲醇溶液（体
积比 63������37）为流动相，经 C18色谱柱分离，紫外检测波长 280 nm 下分离检测。结果表明，对硝基酚 钠、邻硝基酚钠和 5-硝基邻甲氧基苯酚钠的检出限均为 0.5 mg/kg，定量限均为 1.0 mg/kg。该方法在
方法的检测限（LOD）一般是根据信噪比外推得到， 然而由于基质干扰等因素的影响，在进行实际样品测定 时，LOD 通常很难实现。方法的检测限和定量限是按样 品实际添加计算得到的，在空白饲料中添加硝基酚钠混 合标准溶液，按照 1.4 的方法处理样品，1.5 的方法确定 的色谱条件进样，记录色谱图。以检出的对硝基酚钠、邻 硝基酚钠和 5-硝基邻甲氧基苯酚钠的峰高为 3 倍基线噪 音值时所对应的浓度计算，得到检出限为 0.5 mg/kg。 以检出目标峰的峰高为 10 倍基线噪音值时所对应的浓 度计算，得到定量限为 1.0 mg/kg。饲料中硝基酚钠添 加样品色谱图及空白样品色谱图见图 1~图 2。 2.2 方法的线性范围
tracts were concentrated in alkaline conditions. The analytes were separated on C18 column with UV
detector at 280 nm, using 0.1% phosphoric acid solution and methanol (V������ V=63������ 37) as mobile
penolate sodium. The average recoveries for aquatic feeds samples of ρ-nitrophenol sodium, ο-nitro⁃
phenol sodium and 2-methoxy-5-nitropenolate sodium were 84.5%~96.6%, 74.0%~89.2% and 78.5%~
测定。线性回归曲线及方程见图 3~图 5。
mAU VWD1 A, Wavelength=280 nm (XJFN\14062412.D) 20 15 10 5 0 -5
5
10 15 20 25 30 min
注：1. 5-硝基邻甲氧基苯酚钠；2. 对硝基酚钠；3. 邻硝基酚钠。
53
检测技术
2015 年第 36 卷第 12 期 总第 489 期
程中，添加少量的复方硝基酚钠，以增强其肥效，降低成 本[3]。我国农业部公告第 193 号《食品动物禁用的兽药及 其它化合物清单》中将硝基酚钠列为禁用药物。
现有文献报道，硝基酚类化合物的测定方法主要 有：电位法[4]、分光光度法[5]、高效液相色谱法[6-7]、气相 色谱法 [8-9]、液-质联用法[10-11]和气-质联用法[12-14]等。 电位法和分光光度法干扰较多，灵敏度较差；气相色 谱法分析具有较高的灵敏度，但前处理过程需要进行 衍生化操作，对操作人员有较高的要求，步骤较为繁 琐；液相色谱-质谱法和气相色谱-质谱法的检测成本 较高。而采用液相色谱法分析则不需衍生，前处理操 作相对简单，应用最为广泛。
1.4 样品前处理 1.4.1 提取和净化
称取试样5 g(精确到0.01 g)，置于50 ml离心管中， 加入 2 g 无水硫酸钠，加入 15 ml 乙腈，涡旋混合 1 min， 使样品分散均匀，超声提取 10 min，于 8 000 r/min 离心 10 min，将上清液全部转移至 100 ml 离心管中，残渣再 用乙腈重复提取两次，每次乙腈用量均为 10 ml。提取 液合并入 100 ml 离心管中。在提取液中加入 10 ml 正 己烷，涡旋混合 1 min，弃去正己烷。再加入 10 ml 正己 烷重复上述操作。将提取液转移入 100 ml 梨形瓶中， 加入 4 mol/l 氢氧化钠溶液 100 μl，35 ℃下减压浓缩至 近干。再加入 1.95 ml 甲醇-磷酸水溶液，充分涡旋 溶解残余物，再加入 50 μl 磷酸，涡旋混合均匀，并于 10 000 r/min 离心 10 min，清液过 0.45 μm 微孔滤膜， 供高效液相色谱仪测定。 1.4.2 标准曲线的配制
准确移取适量对硝基酚钠、邻硝基酚钠和 5-硝 基邻甲氧基苯酚钠混合标准使用液，用流动相稀释成 浓度分别为 0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/ml 和 20.0 μg/ml 混合标准工作液，供高效液相色谱仪测定。 1.5 色谱参考条件
色谱柱:AgelaVenusil XBP C18(2)，250 mm×4.6 mm, 5 μm；流动相：0.1%磷酸溶液������甲醇=63������37（V/V）； 柱温：40 ℃；流速：1 ml/min；进样量：20 μl；紫外检测 器：波长 280 nm。 2 结果 2.1 方法的检出限和定量限
Байду номын сангаас
suitable for determination of compound sodium nitrophenolates in aquatic feeds.
Key words：HPLC；aquatic feeds；compound sodium nitrophenolates
作者简介：邢丽红，硕士，助理研究员，研究方向为水产品 质量安全检测及研究。
respectively. In the range of 0.5~20 μg/ml, there was a good linear correlation (r2>0.999) between the
peak area and concentration of ρ-nitrophenol sodium, ο-nitrophenol sodium and 2-methoxy-5-nitro⁃
in aquatic feeds by HPLC
Xing Lihong, Leng Kailiang, Sun Weihong, Li Zhaoxin, Fu Shulin, Sun Xiaojie
Abstract：This study aimed to establish a kind of HPLC method of detecting compound sodium nitro⁃