实验五、微生物的计数——血球计数板法
血球样板计数实验报告
一、实验目的1. 掌握血球样板计数法的基本原理和操作步骤。
2. 学习利用血球样板计数法对微生物进行计数。
3. 提高对微生物计数结果的分析能力。
二、实验原理血球样板计数法是一种利用显微镜直接计数微生物数量的方法。
该方法适用于各种微生物的计数，如细菌、酵母、真菌等。
计数原理是将一定稀释度的微生物悬液滴加到血球样板计数室中，在显微镜下直接观察并计数。
血球样板计数室由一块特殊的载玻片构成，其上有四条槽构成三个平台，中间较宽的平台被一短横槽隔成两半。
每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格。
每个大方格分为16个中方格，每个中方格又分为25个小方格。
每个大方格中的小方格总数为400个，每个大方格的边长为0.1mm，因此计数室的容积为0.1mm³。
计数时，通常只计数四个四周大方格内的细胞数。
然后求出每个大方格的平均值，即可得出一个大方格中的平均细胞数。
再根据菌液稀释倍数，计算出1ml菌液中的总细胞数。
三、实验材料1. 血球样板计数室2. 显微镜3. 试管4. 吸管5. 微量移液管6. 细胞悬浮液7. 稀释液8. 滤纸四、实验步骤1. 准备工作：将血球样板计数室及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。
2. 制备细胞悬液：将细胞悬浮液吸取少许，注入试管中，加入适量的稀释液，搅拌均匀。
3. 稀释：根据细胞悬液的浓度，将细胞悬液进行适当的稀释，以便在计数时细胞数适中。
4. 计数：将稀释后的细胞悬液吸取少许，滴加到血球样板计数室的盖片边缘，使培养液自然渗透填满计数室。
等待一段时间，让细胞全部沉降到计数室底部。
5. 观察：将计数板放在显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在的位置，然后转换到高倍镜观察。
计数四个四周大方格内的细胞数，记录下来。
6. 计算结果：根据计数结果和菌液稀释倍数，计算出1ml菌液中的总细胞数。
五、实验结果与分析1. 实验结果：通过血球样板计数法，得到酵母菌的计数结果为N个细胞/ml。
微生物大小测定及计数
2、在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一菌体大小时，其测定结果是否相同，为什么？
答：测定结果不相同。因为在不同倍数的目镜下，细菌大小发生变化，而目镜测微尺每格大小不变，所以测定结果不同。
四、仪器和其他用品：载玻片、盖玻片、显微镜、镊子、接种环、血球计数板、显微测微尺、滴管、酒精灯
五、操作步骤：
1、微生物大小的测定
（1）取下显微镜右目镜，将目镜测微尺放在目镜镜筒内的隔板上，然后放上目镜透镜，将目镜装回镜筒。
（2）校正目镜测微尺：在低倍镜下调节焦距，当清晰看到镜台测微尺的刻度后，用推进器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后分别输出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占的格数。
（2）将血球计数板盖上盖玻片，用无菌毛细管吸取少量摇匀的酿酒酵母菌液，滴在盖玻片的一个顶点，待菌液从盖玻片另一对角流出为满。
（3）先在低倍镜下找到计数室，再用高倍镜计数。每小格内的菌数不能超过8个为宜。当每小格内的菌数过多时，适当稀释。
（4）任选5个中格计数（5个中格不可以挨着；酵母菌出芽计1个菌体；计数时，位于边线上的细胞，记上不记下，计左不计右）
（3）用同样的方法在高倍镜下和油镜下进行校正。并计算目镜测微尺每小格所代表的实际长度。
（4）制酵母菌玻片：用接种环取菌在蒸馏水中涂抹，加热干燥，用美兰染色1’30”，流水脱色，自然干燥。
（5）先在低倍镜和高倍镜下找到菌株，再在油镜下测出酵母菌的长度和宽度。重复3次并记下平均值。
2、酵母菌的显微计数
（1）将血球计数板洗净，再用95%乙醇棉球擦洗，自然干燥。
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微生物大小及数量测定
一、实验目的：
实验五 霉菌的形态观察
实验五霉菌的形态观察、微生物的测微与计数一．实验目的1。
学习并掌握观察霉菌形态的基本方法,初步了解霉菌的形态特征及鉴别依据。
2.学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。
3.了解血球计数板的构造和使用方法。
学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。
4.总结并掌握细菌、放线菌和霉菌的鉴别方法.二、实验原理1。
霉菌定义及用途⏹霉菌不是真菌分类中的名词，而是丝状真菌的统称。
⏹霉菌在自然界中广泛分布,与食品的关系密切，是人类在实践活动中最早利用的一种微生物,如早期进行的酱和酱油的制作等。
⏹霉菌也可以使食品发生腐败变质或产生毒素，影响人体健康甚至危及生命。
2.霉菌特征⏹霉菌可产生分支的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子.⏹菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
⏹霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗的多(约3-10um），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍。
因此,用低倍镜即可观察。
3。
霉菌的菌落⏹松：由于霉菌的菌丝较粗较长，菌丝体疏松,因而形成的菌落也比较疏松,呈绒毛状、棉絮状或蜘蛛网状;⏹大：菌落形态较大,一般比细菌和放线菌的菌落大几倍到几十倍,有时会长满整个培养皿；⏹干：外观干燥,不透明;⏹挑：菌落与培养基间的连接紧密，不易挑取;⏹颜色：由于基内菌丝、气生菌丝、孢子颜色不同，不同的霉菌菌落表面呈现不同的颜色，菌落正反面、边缘与中心颜色常不一致。
同一种霉菌在不同的培养基上或不同的培养条件下所形成的菌落特征可能有所不同.但同一种霉菌在相同的培养条件下和培养基上所形成的菌落特征相对稳定。
菌落特征是霉菌鉴定的重要依据之一.4、霉菌的菌丝形态⏹构成霉菌营养体的基本单位是菌丝。
菌丝的宽度一般为3-10μm，比放线菌菌丝宽很多倍，其菌可伸长并产生分枝。
许多分枝的菌丝相互交织在一起，称为菌丝体。
⏹一部分菌丝存在于培养基质中吸收营养，称为基内菌线或营养菌丝。
细胞数的测定(血球计数板的使用方法)
、目的与要求了解血球计数板计数的原理，学会测定细胞总数方法。
二、原理用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。
血球计数板是一块特制的厚载玻片，其上由四条槽构成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为9个大方格，中间的大方格即为计数室。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小格（即16x25），另一种是一个大方格分成25个中方格，每个中方格又分为16个小方格（即25X 16），但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个，每一个大方格边长为 1 mm则每一个大方格的面积为 1 mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm,所以计数室的容积为0.1 mm3实磴圈-石血球计弦板杓构jfi三、血球计数板的使用方法（一）菌悬液的制备为便于计数，对样品进行适当稀释，稀释程度以每小格内含5〜10个酵母为宜，可采用10倍系列稀释法。
（二）加菌悬液样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余水液。
由盖玻片边缘或槽内加入计数板来回推压盖玻片，使其紧贴在计数板上，计数室内不能有气泡。
静置5-10分钟。
（三）显微镜计数在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数，上下调动细螺旋，以便看到小室内不同深度的菌体。
位于分格线上的菌体，只数两条边上的，其余两边不计数。
如数上线就不数下线，数左边线就不数右边线。
当芽抱菌体达到母细胞大小的二分之一时，可记作两个细胞。
（四）计数时若使用刻度为25X 16 （大格）的计数板，则数四角的4个大格（即100小格）内的菌数。
如用刻细胞数的测定D申決甌裕牧我度为16X 25 （大格）的计数板，除数四角的4个大格外，还需数中央1个大格的菌数（即80 小格）。
血球计数板的计数方法
血球计数板的计数方法血球计数板是临床实验室中常用的一种设备，用于进行血细胞计数。
正确的计数方法对于获得准确的结果至关重要。
下面将介绍血球计数板的计数方法，以便能够正确操作并获得可靠的结果。
首先，准备工作。
在进行血球计数之前，需要准备好所需的材料和设备，包括血球计数板、显微镜、血液样本、稀释液、计数计。
确保所有设备都经过清洁消毒，并且处于良好的工作状态。
接下来，进行稀释。
取一定量的血液样本，加入适量的稀释液进行稀释。
稀释的目的是使血液细胞在显微镜下能够清晰可见，并且数量适中，便于计数。
然后，装载计数板。
将稀释后的血液样本吸入到血球计数板的计数室中，填满计数室的深度。
注意避免气泡的产生，以免影响计数的准确性。
接着，进行计数。
将计数板放置在显微镜下，选择合适的倍率进行观察。
通过目镜和物镜的调节，使细胞能够清晰可见。
然后，在计数室的方格中进行血细胞的计数。
通常情况下，我们会选择若干个方格进行计数，然后取平均值作为最终结果。
最后，计算结果。
根据所选取的方格数目和计数结果，进行计算得出血液细胞的浓度。
根据浓度和稀释倍数，最终可以得出原始血液样本中细胞的数量。
需要注意的是，进行血球计数时，要保持专注和耐心，避免疏忽和错误。
另外，在进行计数前后，要对设备和材料进行清洁和消毒，以确保实验结果的准确性和可靠性。
总之，血球计数板的计数方法是一项重要的实验操作，正确的操作方法能够保证实验结果的准确性。
希望以上介绍能够帮助大家正确使用血球计数板，并获得准确可靠的实验结果。
微生物学实验5 酵母菌细胞总数和大小的测定
2022/9/12
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三．实验原理
➢ 利用血球计数板进行微生物计数的原理？ 总菌数（个/ml）＝5×104 A·B A：5个中方格中的总菌数，B：稀释倍数（＝1） ；
➢ 利用接目测微尺测定微生物大小的原理？
接目测微尺每格长度（mm）=10n/m n：两重合线间镜台测微尺格数 m：两重合线间接目测微尺格数
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四．实验内容
1. 利用血球计数板对所给酵母培养液进行计数：上下两 个计数室各计数一次
2. 微生物大小测定 ➢ 40 ×10放大系统下对接目测微尺进行标定； ➢ 在同样放大系统下测定所给酵母细胞大小：要求测定
10个细胞长和宽
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五. 实验结果报告与思考题
1. 计数：将2个计数室结果分别填入P14的表中，并按公式 计算菌体细胞浓度：
2. 大小测定
➢ 接目测微尺标定结果：高倍镜下两重合线间镜台测微
尺 格、目镜测微尺
格；
目镜测微尺每小格实际长度为
μm。
➢ 10个细胞测定结果填入 P17的表中，计算酵母细胞大小 的范围及平均值（宽×长）
3. 思考题：讲义P14 2，3； P17 3
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实验五 酵母菌细胞总数和大小的数板进行微生物计数的方法。 2. 学习并掌握接目测微尺的标定方法及微生物大小的测
定方法，增强微生物细胞大小的感性认识。
二．实验材料
1. 菌种：啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌悬液 2. 其他：血球计数板，接目测微尺，镜台测微尺，显微
血球计数实验报告
一、实验目的1. 了解血球计数板的使用方法及原理。
2. 掌握血细胞计数的实验操作流程。
3. 学会计算血细胞数量，为后续生物学实验提供数据支持。
二、实验原理血球计数板是一种用于计数血细胞或其他细胞群体的实验器材。
其原理是将一定体积的细胞悬液加入计数板中，在显微镜下观察计数板中的细胞数量，然后根据计数板的结构和悬液稀释倍数计算出细胞总数。
血球计数板由盖玻片和计数室两部分组成。
计数室是一块特制的载玻片，上面有四个长方形槽，槽内各有三个平台，每个平台上有九个大方格。
大方格又分为16个中方格，每个中方格又分为25个小方格。
每个大方格的体积为0.1mm³，其中包含400个小方格。
三、实验材料1. 血球计数板2. 显微镜3. 试管4. 吸管5. 微量移液管6. 细胞悬液7. 蒸馏水四、实验步骤1. 准备计数板：将计数板及盖玻片用擦镜纸擦拭干净，并将盖玻片放置在计数板上。
2. 稀释细胞悬液：将细胞悬液用微量移液管吸取适量，加入试管中，用蒸馏水稀释至适当浓度。
3. 加样：用吸管吸取稀释后的细胞悬液，滴加在计数板盖玻片的边缘，使细胞悬液自行渗入计数室。
4. 观察计数：将计数板放置在显微镜载物台上，调节焦距，使细胞清晰可见。
按照从左上角开始，逐个中方格进行计数，注意观察四个大方格内的细胞数量。
5. 计算细胞数量：根据计数结果，计算出每个大方格的平均细胞数，再根据计数板的结构和悬液稀释倍数，计算出细胞总数。
五、实验结果与分析1. 实验结果：本次实验中，四个大方格内的细胞数量分别为120、150、130、140个。
2. 结果分析：根据计数板的结构，每个大方格包含400个小方格，因此每个大方格的平均细胞数为（120+150+130+140）÷4=135个。
根据实验原理，1ml菌液中的总细胞数为135×10000×M（M为悬液稀释倍数），例如，若悬液稀释倍数为100倍，则1ml菌液中的总细胞数为135×10000×100=1.35×10⁷个。
血球计数板的计数方法
血球计数板的计数方法
血球计数板是一种常用的实验仪器，用于计算血球数量。
具体的计数方法如下：
1. 准备工作：首先，确保血球计数板干净，无污染。
可用洗涤剂和双蒸水进行清洗和冲洗，然后用无纹纸巾擦干。
2. 取血样：使用无菌针头采集一定量的血液样本，通常使用的样本量为0.02毫升。
3. 加样：将血液样本滴入血球计数板的计数区。
滴落的血液应均匀地分布在计数区的每个小方格内。
4. 观察：视觉放大镜或显微镜的帮助下，通过目镜观察计数区的血球数量。
5. 计数：随机选择若干个小方格，计算这些方格中血球的数量。
一般使用的计数面积为3个或4个方格。
6. 计算：将所选方格中的血球数量相加，然后乘以血球计数板的稀释倍数和倒干涉系数。
根据计算公式，可得出血球的浓度，常用单位为每立方毫米的血液中血球的数量。
7. 结果：将最终计算出的血球浓度记录下来，并报告给相关的医务人员或研究人员。
使用血球计数板进行血球计数时，需要严格按照操作规程进行，
避免出现污染或操作错误。
在完成计数后，要及时清洗血球计数板，以备下次使用。
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实验五、微生物的计数——血球计数板法测定微生物细胞数量的方法很多，有分光光度法、显微直接计数法和平板计数法。
分光光度法比较简便，易操作，但是会使数据严重偏大。
而平板计数法则会使实验数据严重偏小。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。
菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。
两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。
本实验采用血球计数板法，主要目的是了解血球计数板法的构造和使用方法，学会用血球计数板对酵母菌细胞进行计数。
一、实验目的与要求
1、了解微生物计数常用的三种方法：分光光度法；平板计数法；血球计数板法。
2、了解血球计数板的构造和使用方法。
3、学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。
二、基本原理
利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。
此法的优点是直观、快速。
将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。
由于计数室的容积是一定的（0.1mm2），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。
由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。
血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。
中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。
但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方
格数都是相同的，即16×25=400小方格。
每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。
在计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。
下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数
因1ml=1cm3=1000mm3，
=50000A·B（个）
同理，如果是16个中方格的计数板，设五个中方格的总菌数为A＇，则
三、实验材料
1）菌种：酿酒酵母菌
2）用品：显微镜、血球计数板、酒精灯、盖玻片、接种环、番红染液、胶头滴管。
四、实验方法
1、实验流程图
制备稀释液→加样→找计数室→计数
2、实验步骤
1）镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物，则需清洗后才能进行计数。
2）将酿酒酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。
3)取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
然后在显微镜下找到计数室。
若计数室沾有杂质或者菌体，要用蒸馏水冲洗计数板，用滤纸吸干其上的水分。
然后再放到显微镜下找到计数室。
4)将酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。
5)静置片刻，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。
由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。
6)计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。
如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央l个大方格的菌数（即80个小格）。
如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
本实验采用25格×16格的血球计数板。
计数时应数5个大方格。
7)计数。
每个样品重复计数2—3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），求出每一个小格中细胞平均数（N），按公式计算出每ml（g）菌悬液所含酵母菌细胞数量。
8)测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。
洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。
9）计算结果。
可用以下公式进行计算
（1）16格×25格的血球计数板计算公式：
细胞数/ml=100小格内细胞个数/100×400×10000×稀释倍数（2）25格×16格的血球计数板计算公式：
细胞数/ml=80小格内细胞个数/80×400×10000×稀释倍数五、实验结果
计算次数
各大格中细胞数
大格中
细胞总
数
稀
释
倍
数
总菌数
（CFU/mL或
g)
左上右上左下右下
中
间
第一次
第二次
第三次
第四次
六、结论与分析
1、用血球计数板计数时，那些步骤容易造成误差？应如何减少误差，力求准确？
2、如何判断所计数的酵母菌为活菌体？怎样计算样品中的活菌率？。