盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度常见问题及处理方法
电泳技术鉴定玉米种子应注意的几个问题
电泳技术鉴定玉米种子应注意的几个问题电泳技术是一种用电流将混合物中的不同成分分离出来的方法。
在农业领域，电泳技术被广泛应用于种子品质鉴定和品种鉴定等方面，特别是玉米种子的鉴定。
然而，电泳技术在使用过程中需要注意一些问题，以保证鉴定结果的准确性和可靠性。
本文将介绍电泳技术鉴定玉米种子应注意的几个问题。
首先，需要选择合适的电泳方法和条件。
目前，常见的电泳方法包括垂直电泳和水平电泳两种。
垂直电泳是将试样置于竖直方向上的凝胶中，再通以电流，根据DNA分子的大小、形状和电荷等特征进行分离。
水平电泳是将凝胶放置在平板上，再通以电流，分离效果相对较弱。
在选择电泳方法时，应根据样品的性质、鉴定的目的和要求来确定。
同时，还要根据试样的电泳结果进行条件优化，如电泳电压、电泳时间、凝胶浓度、缓冲液pH值等，以提高分离效果和准确性。
其次，需要选择合适的电泳指纹分析技术。
电泳指纹分析技术是利用电泳方法对DNA或蛋白质等生物分子进行特征组成的定量和定性分析。
常见的电泳指纹分析技术包括基因PCR扩增和RAPD等。
其中，基因PCR扩增是通过引物的选择，在样品中扩增出特定长度的DNA片段，再进行电泳分离和检测。
RAPD则是通过选取不同长度的引物进行PCR扩增，产生具有不同大小和序列的DNA片段，在电泳中进行分离和检测。
选择合适的电泳指纹分析技术，可以提高样品的分辨率和鉴定准确性。
还需要注意样品的处理和保存。
样品的处理和保存对电泳分析的结果影响很大。
首先，需要掌握样品的数量、质量和纯度等方面的要求，以保证样品是具有代表性和稳定性的。
其次，需要在样品采集后尽快进行处理，并遵循一定的处理步骤和技术要求，如DNA和蛋白质的提取、洗涤和检测等。
最后，需要对样品进行适当的保存和存储，以避免外部环境和条件的影响，如光照、温度、湿度和酸碱度等。
总之，电泳技术是一种有效的种子鉴定技术，可以用于玉米种子的品质鉴定和品种鉴定等方面。
但要保证鉴定结果的准确性和可靠性，需要注意选择合适的电泳方法和条件，选择合适的电泳指纹分析技术，注意样品的处理和保存等重要问题。
实验四-玉米种子盐溶蛋白凝胶电泳
④贮备液D（浓缩胶贮备液）：称取9.3gAcr和0.31gBis，先 加入30ml去离子水，搅拌至完全溶解，再定容到50ml，倒入 棕色瓶中低温保存。 ⑤贮备液E（浓缩胶缓冲液）：吸取含量为88%甲酸 0.218ml，称取甲酸钠0.5228g，加入30ml去离子水溶解，并 定容到50ml，调节pH至5.6。倒入棕色瓶中低温保存。或者 先溶解甲酸钠，然后用甲酸滴加，调节pH至5.6。 ⑥贮备液F（浓缩胶聚合催化剂1%APS）：称取1gAPS，先 用60-70ml去离子水溶解，搅拌至完全溶解后定容到100ml， 倒入棕色瓶中低温保存。仅能保存1周。 ⑦贮备液G（凝胶聚合加速剂TEMED）：吸取1mlTEMED， 加去离子水1ml溶解，放入冰箱低温保存。
的蛋白谱带来鉴定品种，可根据杂交种的数
量计算出纯度，同时也可统计异交种和自交
种粒数。
五、思考题
1．应用电泳鉴定品种的理论基础是什么？ 2. 如何根据电泳图谱鉴定结果判断玉米种 子的真实性和纯度？
（2）样品提取液的配制
称取0.2928g NaCl，20g蔗糖和0.04g甲基绿，加去离子 水溶解，充分搅拌至溶解，定容到100ml。（稀盐溶液）
（3）电极缓冲液配制
吸取含量为88%甲酸溶液8.54ml，称取甘氨酸6.006g， 先用1600ml去离子水溶解后定容到2000ml，混匀并调节 pH至3.45备用，可重复使用5次（或先将甘氨酸溶解， 然后滴加甲酸，调至pH3.45）。
加入），然后迅速摇匀，沿下槽玻板外壁倒入，将底
缝封住。将电泳槽在实验台面上振动一下，使底缝封
平。对于多个电泳槽的封底缝可用同时进行。一般 510min，分离胶就会聚合将底缝封住。
④灌分离胶：
封底后，用滤纸条插入两玻板之间，吸去因成胶而析出 的水，从分离胶混合液中取出一块板的胶量，按比例加入 G液，迅速摇匀，将电泳槽倾斜，将分离胶混合液倒入两 玻板之间达一定高度（距玻板上边约1.0-1.5cm）。灌胶过 程中注意不能产生气泡，如出现气包可用细不锈钢丝快速 挑出。灌胶后，用预先准备好的注射器注水封住胶面，水 封的动作必须要轻，不能冲坏胶面，当水封后，分离胶和 水层间有一界面，等一下界面消失，再出现界面时表明凝 胶已成，此时倒出封水，用滤纸吸干，注意滤纸不能接触 胶面。
玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法
张金 汉
（ 甘 肃省 张掖 市种子 管理局 ， 甘肃张掖
７ ３ ４ ０ ０ ０ ）
摘
要： 种子 纯度检验是 质量检验 的重要 内容 ， 是对一批 玉米种子 中个体与个体之 间在特征特性方面典型一致程度的检验
和种子真 实性的测定。 一般 有田间检验 、 室 内检验和种植检验 三种 ， 室 内检验 杂交玉米种子纯度 以电泳法鉴定最为普遍。 作 者就
称 取氯化钠 ５ ． ８ ０ ｇ ， 蔗糖 ２ ０ ０ ． ０ ０ ｇ ， 甲基 绿 ０ １ ５ ｇ ， 倒入 ｌ
０ ０ ０ｍＬ烧杯 中 ， 加去离子水 ８ ０ ０ｍＬ溶解 ， 加热至微沸 ， 放 至
月底移栽 ， ５月 中旬揭去棚膜 ， ７月初 上市 。第 三茬 ７月 中旬 点种菠菜 ， ９月 中旬上市 。第 四茬 ９月下旬再扣棚点 种菠菜
试剂均为分析纯 ， 所 用 水 均 为 去 离 子水 ） 。
３ 溶 液配 制 ３ ． １ 电极缓 冲 液
电泳 图谱加 以鉴 别 ，从而对种 子真实性 和品种纯度进 行鉴
定。
２ 仪 器设 备及 试 剂
２ ． １ 仪 器设 备
称取甘氨酸 ６ ． ０ ０ ｇ ，倒入 ２ ０ ０ ０ｍ Ｌ烧杯 中，加入 ｌ ８ ０ ０
【 油白菜 ） １ １ 月初上市 。 ８ 水萝 卜 一 菠菜 （ 油 白菜 ） 一菠 菜 （ 油 白菜 ） 一 菠菜 （ 油 白
菜） 一 菠菜（ 油 白菜 ）
上市。 第 四茬 ８月初点种菠菜（ 油 白菜 ） ， ９月中旬上市。第五 茬９ 月下旬再扣棚点种菠菜（ 油 白菜 ） ， １ １ 月初上 市。
１ 原 理
器（ ５ ～１ ０ ０ Ｌ ） 、 恒温箱 、 观片灯等。
玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定的流程方法及注意事项
·种子科技··2012（04）·于10℃，湿度85%~90％。
将瓶苗移到温室摆放在畦内，浇透水，瓶间距5cm，3天后打开瓶盖封膜，每天用喷壶喷水一次，4天后脱毒苗变绿就可以定植。
一般炼苗7~10天，使幼苗叶片黑绿中大、气生根多而发达时定植。
温室顶部要覆遮荫网，防止爆晒。
4.2定植将畦内蛭石浇水达饱和状态，用木板刮平，按8cm行距划行。
将脱毒苗用镊子从培养瓶中取出，放在清水中轻轻洗净根部的培养基，按株距5cm、行距12cm栽入基质内2.0~2.5cm深（大苗稍深，小苗略浅）。
栽满畦后用喷壶小水细喷一遍，使基质与种苗充分愈合。
栽植后温室顶部覆遮荫网遮荫7~10天，遮荫期间每隔一天细水喷浇一遍，保持空气湿度85%~ 90％，促使幼苗早生根，早发新叶。
7~10天后即可转入正常管理。
实践证明，在温、湿度条件合适时，移栽成活率可达90%以上。
4.3马铃薯移栽苗的扦插试验为了提高马铃薯微型种薯产量，降低生产成本，根据马铃薯的生理特性，我们在苗畦内进行了马铃薯移栽苗的扦插试验。
在试管苗移栽成活、苗高8~10cm、15~20天时，切取顶芽（3~5cm）进行扦插，扦插后立即浇透水，使空气湿度保持在85%左右，3天后略喷点水，以保持湿润。
当发现基质变干时立即浇水，正常情况下两天浇水一次，具体视苗床干湿情况决定，要用手深入到基质中掌握干湿。
需要注意的是，水分也不能过多，否则易引起烂苗。
浇水一般在上午10时以前进行。
通过试验调查：扦插苗结薯数量比试管苗略少，但薯块却明显大于试管苗所结薯块。
试验结果表明：在微型种薯生产过程中，采用试管苗移栽结合顶芽扦插技术，可明显提高微型种薯产量和质量，并降低成本。
收稿日期：2012-02-16玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定较传统的生态方法具有速度快、准确可靠、成本低廉、技术比较容易掌握等优点，在检验工作中应用广泛。
但它涉及到化学、生化、遗传学和植物学等多方面的知识，测定操作步骤较为繁琐，在实际操作中往往会出现一些问题，影响鉴定的正常进行。
玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定的流程方法及注意事项
３ ％过氧 化氢 １ｍ ， “ ” 定溶 。 ｌ加 水 ９ｍｌ
１ 电极 缓 冲 液 的 配 制 ． ５
甲基 绿 ０１ ， 化钠 ５８ ， ．５ｇ 氯 ． ｇ 蔗糖 ２ ００ ， ０ ０ ． ｇ 倒入 ０ １０ ｌ 杯 中 ； “ ”０ ｌ 解 ， 热 至 微 沸 ， ０ ０ｍ 烧 加 水 ８０ｍ 溶 加 放 至 室 温 ； 加 “ ” 溶 至 １０ ｌ 存 放 在 ４ 下 保 再 水 定 ００ｍ ， 存。
１ ０ 。 ０ ｍｌ
夺 ・ ・ ・ ・ ・ ・ 串 夺 孛 ・ ÷ 辛 争
・
取单 粒玉 米种 子 ，在单 粒粉碎 机上 磨碎 ，收集 到 １ 离 心 管 中 ， 约 １ １的量 加 入 提 取 液 ， 荡 、 ． ｍｌ ５ 按 ： 震 摇
４３ 马铃 薯移 栽苗 的扦插 试验 ．
夺 ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ 争 ｛，夺 ÷ 夺 夺 审 争 牵 夺 夺 ・ 夺 牵 夺 夺 ・ ÷ 夺 夺 夺 夺 夺 ｛ 争 争
Ｅ号 液 ：抗坏 血酸 ０１ ，乳 酸 ０Ｏ 【，乳 酸钠 ．１ｇ ．５ｒ Ｉ ｌ ０５ ， 酸亚铁 溶 液 １ｌ ， ． ｍｌ硫 ７ ｌ 定溶 至 １０ｍ 。 Ｉ ｌ ０ ｌ 配置 ： Ｄ号 液 １ ０ｍ 十Ｅ号 液 １０ｍ 。 ０ ｌ ０ ｌ
１４ ３ ． ％过 氧 化 氢 溶 液 的 配 制
侯 银 娟 。 卜文 ， 木 杨 薇 。 小社 魏 ７１０ ２ ０ １） （宝鸡 市种 子 管理站 ， 陕西 宝鸡
玉米 种子 纯度 盐溶 蛋 白 电泳 鉴定 较传 统 的生态 方 法 具有 速 度快 、 准确 可靠 、 成本 低 廉 、 术 比较 容 易 掌 技 握 等优点 ， 检验 工作 中应 用广 泛 。但它 涉及 到化 学 、 在 生 化 、 传学 和植 物学 等 多方 面的知 识 ， 遗 测定操 作 步骤 较 为繁琐 ， 实 际操作 中往 往会 出现 一些 问题 ， 响鉴 在 影 定 的 正常进 行 。笔者 结合 多年 在实 践工 作 中的经 验和 教 训 ，摸索 出的玉米 种 子纯度 盐溶 蛋 白电泳 鉴定 的方 法 及 注意 事项 ， 现介 绍 如下 ， 同行参考 。 供
盐溶蛋白电泳鉴定玉米种子纯度应注意的问题
・
种子科技 ・
・０ ７ ６ ・ ２０ （ ）
中 图分 类号 ： １． ７ Ｓ５３０ ３ 文 献标 识码 ： Ｂ
・ 用技 术 ・ 适
文 章 编 号 ：１０ — ６ ０ ２ ０ ）６ ０ ６ — ２ ０５ ２ ９ （０ ７ ０ — ０ ０ ０
影响鉴 定 的正常进 行 。下 面结 合 多年在实 践丁 作 中的 经 验 和教 训 ．现 将 电 泳 操作 中应 注 意 的 问题 叙 述 如
２ 样 品提 取 需注意 的 问题
取样 要 有 代 表 性 ， 机取 样 ， 能 取霉 烂 、 质 、 随 不 变 虫蛀 或病 粒 种子 ＋ 以防 由于 蛋 白质 变性 和 异种 蛋 白影
的。
２３２ 合理 的通 风 。 ．． 空气是 热 和湿 的传载介质 ． 冷的 干 空气 通 过 种仓 内可将 种 堆 内的 湿热 吸 收 后带 出仓外 ， 起 到 降低种 子温 度和水 分 的作 用 。 子堆放 在仓库 内． 种 不论 是长 期贮存 还 是短 期贮 存都需 要 进行 通 风 。合 理 的通 风能 降温 散湿 ， 同时起 到气体 交换 ， 持 种子 生活 保 力 的作 用 。合 理 通风是 种 子贮 藏期 间 的一 项 非常 重要
种 子入库前 必须 严格 进行 清选 、 干燥和 分级 。尤其 是种 子水分 ． 不 到标准 的种 子不 能入 库 ， 达 对贮 藏 期长 的种子 更应严 格要 求 。 入库 时种 子必须 经过 冷却 （ 热进 仓 处理 的除外 ） 。 ２２ 做好 清仓 消毒 ． ． 改善仓 贮 务件 贮 藏条 件 的好坏 直接 影 响种子 的安 全 状况 。种子 入库前 要 对仓 库 内外进 行彻 底清 除并 消毒 处 理 ，杀 除 有 害微 生物 。仓库 要 具 备通 风 、 闭 、 湿 、 热 的 性 密 隔 隔 能． 以保证 在气 候 剧变期 做 好密 闭＿ ， 在 仓 内温湿 Ｔ作 或 度高 于仓 外时 能及 时通 风 ． 以使种 子 长期处 理 干燥 、 低 温 、 闭 的条件 下 ， 密 确保安 全 贮藏 。 ２ 加 强管理 ． ． ３ 勤于检 查
玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法
玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法NY／T449—20011 范围本标准规定了玉米单交种及亲本的真实性和品种纯度的室内检测方法。
本标准适用于玉米单交种及亲本的真实性和品种纯度鉴定。
2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
本标准出版时，所示版本均为有效。
所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB／T 3543．2—1995 农作物种子检验规程扦样GB／T 3543．5—1995 农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定GB 4404．1—1996 粮食作物种子禾谷类3 定义本标准采用下列定义。
3．1 种子真实性供检品种与文件记录(如标签等)是否相符。
3．2 品种纯度品种在特征特性方面典型一致的程度，用本品种的种子数占供检本作物样品种子数的百分率表示。
[GB／T 3543.5]3．3 育种家种子育种家育成的遗传性状稳定的品种或亲本种子的最初一批种子，用于进一步繁殖原种的种子。
4 原理从玉米种子中提取的盐溶蛋白在聚丙烯酰胺凝胶的浓缩效应、分子筛效应和电泳分离的电荷效应作用下进行分离，通过染色显示蛋白质谱带类型。
不同玉米品种由于遗传组成的不同，种子内所含的蛋白质种类有差异，这种差异可利用电泳图谱加以鉴别，从而对种子真实性和品种纯度进行鉴定。
5 仪器设备及试剂5．1 仪器设备电泳仪(500V±5V连续可调、0～400mA连续可调、额定输出功率200W)、垂直板夹心式电泳槽、单籽粒粉碎器、天平(感量0．0lg、0．001g、0．000 1g 各一台)、酸度计、磁力搅拌器、高速离心机(5 000r／mln以上)、电冰箱、电炉、离心管(1．5 mL)、离心管架、移液管(10 mL、5 mL、2 mL各两支)、微量进样器(5～100μL)、恒温箱、观片灯等。
5．2 试剂丙烯酰胺、NN－亚甲基双丙烯酰胺、乳酸、乳酸钠、甘氨酸、抗坏血酸、硫酸亚铁、氯化钠、蔗糖、甲基绿、三氯乙酸、过氧化氢、考马斯亮蓝R250、无水乙醇、（略：正丁醇等）(所用试剂均为分析纯，所用水均为去离子水)。
玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定方法之改进探究
玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定方法之改进探究摘要：种子检验是保证种子质量最有效的手段，笔者总结多年从事检验工作之经验，探究玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定方法中的有关步骤，提出一些改进方法，旨在为从事种子纯度鉴定的同行提供参考。
关键词：种子；纯度；鉴定；方法中图分类号：s513 文献标识码：b我国的玉米种植面积仅次于美国，位居世界第二。
由于玉米较之其他农作物抗逆性强、适应性广、产量高、价格也在逐年上涨，致使玉米单交种的数量每年都在递增。
同时，利润的驱使，全国每年都有不少假种和低纯度种子播种的案件发生，给农民和农业生产造成重大的损失。
玉米种子的纯度鉴定已成为我国种子生产和质量管理中突出的问题之一。
因此探究和掌握玉米种子纯度实验室精准的鉴定方法显得尤为重要。
玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定方法在20世纪70年代开始应用于种子纯度鉴定，并逐渐得到推广，2001年9月被列为行业标准，是现阶段各级农作物种子质量监督检验站及种业集团普遍采用的实验室纯度检测方法。
较传统的鉴定方法它具有成本低、准确可靠、快速和稳定等优点，另外重演性也比较好，特别是作为种子营销过程的验证方法，具有很大的使用价值，在检验工作中广泛应用。
但是玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定方法，科技含量高，专业技术性强，测定操作步骤较为烦琐，在实际操作中往往会出现一些问题，影响鉴定的正常进行。
笔者根据多年从事种子检验工作的实际经验，探究该鉴定方法中的有关步骤，总结提出以下一些改进方法，在此供同行们体会参考。
1药剂配置方面1.1玉米盐溶蛋白质电泳的试剂配制如下1.1.1 90克丙烯酰胺+3克双丙烯酰胺用蒸馏水准确定容至500ml，过滤液存放在棕色瓶中。
1.1.2 1.14 ml乳酸钠+3.5～4 ml乳酸用蒸馏水准确定容至100 ml，过滤液存放在棕色瓶中。
1.1.3 0.2900g维生素c+0.0030g硫酸亚铁用蒸馏水准确定容至200 ml，过滤液存放在棕色瓶中。
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盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度常见问题及处理方法
摘要介绍了盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度常见问题及处理方法，以期为玉米种子纯度鉴定提供参考。
关键词盐溶蛋白电泳法；玉米种子；纯度鉴定；常见问题；处理方法
盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度是基于品种间种子贮藏蛋白中盐溶蛋白质的组分差异来鉴定玉米种子纯度[1]。
从玉米种子中提取出的盐溶蛋白在聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩效应、分子筛效应、电荷效应作用下得到分离，通过染色显示系列蛋白质谱带根据谱带差异情况鉴定玉米种子的真实性和品种纯度。
该方法快速准确、经济实用，于2001年被列为行业标准。
该标准是我国第一部利用种子贮藏蛋白电泳技术鉴定玉米种子纯度的行业标准。
标准的实施为我国玉米种子室内纯度鉴定提供了重要的手段，在玉米种子纯度检验工作中得到了广泛的应用。
笔者结合工作实践总结在实际使用该标准中可能遇见的问题及处理建议，以供同行们商榷。
1 凝胶液不凝或者聚合缓慢不能形成胶体
如果在胶液中加入催化剂过氧化氢后，凝胶液不凝或聚合缓慢不能形成胶体，可能由以下几个原因造成：一是药品纯度不够；二是试剂配比不当；三是胶液过期；四是催化剂失效。
在实际操作中，常常会碰到分离胶能够聚合，而浓缩胶不能聚合成胶体的情况，这是因为浓缩胶对试剂纯度的要求比分离胶液更高，若出现该种情况，首先，要特别注意N，N-亚甲基甲叉双丙烯酰胺的纯度和保质期，要求其纯度最好是99.0%以上的分析纯；其次，由于抗坏血酸不稳定，极易分解，因此在胶液中可适当增大抗坏血酸的比例至标准中的1.5倍或2.0倍。
可促进胶液聚合，并可有效延长胶液的保存期30～40 d。
2 点样孔破裂较多
从浓缩胶中拔出样品梳时，点样孔破裂较多，会使试验终止。
这是应用电泳法检测种子纯度最常发生的情况，可能有以下几种原因，一是样品梳齿厚度不合适；二是催化剂过氧化氢的用量不合适；三是凝胶聚合的时间不够；四是拔梳子时用力不均，方式不对。
通常在进行该步操作时，首先，要仔细检查样品梳齿的厚度与两玻璃板狭槽是否合适，不能过紧，要稍微有一点空隙为宜，否则凝胶聚合后，很难拔出。
其次，催化剂的用量要合适，量少聚合时间长，量多聚合太快，最好先进行预试验，确定催化剂的用量及聚合时间再倒胶，按经验，通常5 mL 的浓缩胶液加入5～6 μL的3%过氧化氢，聚合4～5 min，再拔出梳子较适宜。
再次，拔梳子时，把短玻璃面朝向自己，双手平放在梳子的近两端处，两手均匀用力，先前后稍微平晃一下梳子，再把手放在梳子中部，前后稍微平晃一下梳子，造成梳子整体松动，然后两手先放在梳子近两端处向左右稍拉紧梳子同时再缓慢向上抬起梳子，注意如果两端梳子齿已抬起而中部梳子齿未抬起时，不能再向上抬，可把两手平放在近中部，稍倾斜往自己怀里方向缓抬，使中部梳子齿抬起，最后再把手放在梳子近两端处缓慢向上抬起，同时稍往自己怀里方向晃动，一次性拔出梳子，即可获得较满意的点样孔。
3 凝胶粘板
电泳后，从2块玻璃板中取出凝胶时，常会出现凝胶粘板不好剥离的情况。
产生的原因通常：一是玻璃板清洗的不干净或有划痕。
因此，在清洗玻璃板时，一定要仔细，先用软毛刷小心刷洗玻璃板两面，并在蒸馏水中浸泡然后放在玻璃
架上自然晾干或烘干。
二是取凝胶时温度较高。
一般电泳完成后，玻璃板还很热，如果马上卸板取出凝胶就容易出现凝胶粘板不好剥离的情况。
通常从胶条上取出玻璃板后稍放置一段时间，让凝胶冷却或用冷水冲玻璃板两面散发凝胶热量再卸板。
也可把取下的玻璃板直接放在冷水中，通过热胀冷缩效应使玻璃板与凝胶分离再进行卸胶。
4 蛋白质谱带问题
4.1 蛋白质谱带较少或样品间普带宽窄及着色深浅不一
凝胶染色后，有的样品蛋白质谱带较少或样品间谱带宽窄及着色深浅差别较大，产生原因可能是样品制作上不规范造成[2]。
一是注意样品的磨碎程度要均匀一致，颗粒不宜过粗或过细。
二是粉碎的样品装入离心管时，种子胚不能丢失，因为种子胚内有大部分盐溶蛋白，胚丢失会造成蛋白谱带严重缺少。
三是离心管内所装的种子颗粒以半管为宜，不宜过多，否则提取液过少，造成某些蛋白未能提取出，致使某些蛋白谱带丢失。
四是样品加入提取液后在室温放置时要充分摇匀，同时注意提前时间不宜过长，以防部分蛋白质降解，造成蛋白谱带缺失，一般放置30～40 min即可进行点样。
4.2 谱带弯曲
如果染色后，有些部位蛋白谱带弯曲，可能是分离胶中加入过氧化氢时，过氧化氢分布不均匀，使得凝胶聚合不均，造成蛋白谱带弯曲[3]。
在倒分离胶时，加入过氧化氢后要充分摇匀保证胶液均匀一致并注意不要有气泡再倒胶。
还有可能是电泳时，电极缓冲液温度过高或凝胶液及电极缓冲液pH值不准确，改变了电泳系统的电阻，一般会使分子量小的蛋白谱带弯曲，可以通过接入冷却水的方法降低电极缓冲液的温度，另外在倒胶和加入电极缓冲液时测一下pH值，并用乳酸调整到准确时再进行电泳。
4.3 蛋白谱带模糊不清
凝胶染色后，发现蛋白谱带模糊不清，可能由以下原因产生：一是凝胶液或样品提取液存放时间过长，使得某些不稳定试剂挥发或失效，造成凝胶染色后蛋白谱带模糊不清，可考虑重新配制试剂并缩短使用期[4]。
二是染色液使用次数较多，使得各成分比例不当，染色后会导致蛋白谱带模糊不清。
染色液用过1次后，三氯乙酸会有挥发以及考马斯亮蓝会结合在凝胶中的蛋白上，因此下次再使用时要适当添加三氯乙酸和染色液。
一般每200 mL染色液，下次再使用时可适当添加5～7 mL的染色原液和50 mL的三氯乙酸。
三是电泳时电极缓冲液温度过高或pH值不准确，导致电泳速度过快。
染色后蛋白谱带变宽，模糊不清，甚至弯曲。
电泳前要准确调整电极缓冲液pH值，并通过连接冷却水来降低电极缓冲液的温度。
四是样品提取时，放置时间过短或过长。
染色后也会造成蛋白谱带模糊不清。
样品提取时放置时间过短，蛋白没有提取出或含量较少；放置时间过长，提取的蛋白会部分降解，此2种情况均会导致染色后蛋白谱带模糊不清或谱带缺失。
一般提取时间在30～50 min较适宜。
染色后蛋白谱带清晰，分辨率高。
5 参考文献
[1] 王玺，张宝石.玉米种子纯度鉴定技术研究进展[J].种子，2002（1）：43-45.
[2] 闫米格，许晶，骈跃斌，等.玉米种子纯度鉴定中DNA提取方法的比较研究[J].山东农业科学，2011（9）：7-8，14.
[3] 刘景云.玉米种子纯度鉴定方法[J].现代农业科技，2011（3）：103-104.
[4] 罗长安，周本义，蔚世林，等.蛋白质凝胶电泳技术在玉米种子纯度鉴定
中的应用[J].种子科技，2007，25（2）：41-43.。