五种电泳技术的比较
凝胶电泳的种类和分辨dna片段的范围
凝胶电泳的种类和分辨dna片段的范围一、凝胶电泳的种类凝胶电泳是一种常用的生物技术实验方法，用于分离和检测DNA、RNA和蛋白质等生物大分子。
根据凝胶材料的不同，凝胶电泳可分为以下几种类型：1. 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是最早应用的一种凝胶电泳方法。
琼脂糖是一种高分子碳水化合物，具有很好的生物相容性和透明性，可制成透明的凝胶。
琼脂糖凝胶电泳主要用于分离较大的DNA片段。
2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺是一种合成高分子材料，具有较好的机械强度和稳定性，可制成各种尺寸和浓度的凝胶。
聚丙烯酰胺凝胶电泳广泛应用于DNA、RNA和蛋白质等生物大分子的分离和检测。
3. 碘化淀粉凝胶电泳碘化淀粉凝胶电泳是一种以淀粉为基质的凝胶电泳方法。
碘化淀粉具有很好的透明性和生物相容性，可制成透明的凝胶。
碘化淀粉凝胶电泳主要用于分离RNA和蛋白质等生物大分子。
4. 聚丙烯酰胺-琼脂糖复合凝胶电泳聚丙烯酰胺-琼脂糖复合凝胶电泳是一种将聚丙烯酰胺和琼脂糖两种材料复合制成的凝胶电泳方法。
该方法兼具聚丙烯酰胺和琼脂糖两种材料的优点，可用于分离各种大小的DNA片段。
二、分辨DNA片段的范围在DNA分子中，不同长度的DNA片段在凝胶电泳中会形成不同迁移距离的带状图案，从而实现对DNA片段的分离和检测。
根据不同类型的凝胶电泳，其分辨DNA片段的范围也不同。
1. 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳主要用于分离较大的DNA片段，其分辨范围一般在1000bp以上。
2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于分离不同大小的DNA片段，其分辨范围一般在100bp至20kb之间。
其中，1%的聚丙烯酰胺凝胶适合分离500bp至10kb的DNA片段；2%的聚丙烯酰胺凝胶适合分离100bp 至3kb的DNA片段；3%的聚丙烯酰胺凝胶适合分离50bp至500bp 的DNA片段。
3. 碘化淀粉凝胶电泳碘化淀粉凝胶电泳主要用于分离RNA和蛋白质等生物大分子，其分辨范围一般在10bp至10kb之间。
电泳技术
电泳技术电泳简介电泳又名——电着( 著) ，泳漆，电沉积。
创始于二十世纪六十年代，由福特汽车公司最先应用于汽车底漆。
由于其出色的防腐、防锈功能，很快在军工行业得到广泛应用。
近几年才应用到日用五金的表面处理。
由于其优良的素质和高度环保，正在逐步替代传统油漆喷涂。
电泳漆以离子状态分散于水中，在直流电场的作用下，定向集结在五金工件表面上，形成致密的保护膜。
根据电泳漆中的树脂粒子电离后带电状况的不同，可分为阳极电泳（树脂粒子电离后成负离子，简称AED ）及阴极电泳（树脂粒子电离后成正离子, 简称CED ）。
电泳涂覆层的耐腐蚀性能极其优良（一般能通过中性盐雾试验400 小时以上），抗变色性能强；与基体金属的结合力好，可进行各种机械加工；涂覆层色彩鲜艳，根据用户的要求可以配制成各种颜色，常见的有金色、大红色、翠绿色、宝蓝色、咖啡色、枪色、黑色等；与油漆工艺相比，施工性能好，对环境的污染和危害显著减少，被广泛应用在各个生产部门，如汽车、摩托车、自行车零配件，建材（锁具及门把手）、五金电器、工具、家具、办公用品，金属眼镜架、拉链头、锁匙扣、火机风罩、弹簧，电镀产品、铝制品、表带、标牌、首饰、工艺品及化妆品盒，厨房用品（刀具）、浴室用品（水暖器材）、家用电器、医疗器械及玩具，以及其它要求彩色电泳的场合。
2电泳与电镀的比较电泳电镀电泳漆层高低电位厚薄均匀一般电镀高低电位处镀层厚薄差距大电泳漆层能完全覆盖隐蔽处一般电镀不能深入隐蔽外3电泳与喷涂的比较比较项目油漆喷涂电泳涂装附着力不强，易脱落强，很难脱落防府性不耐腐蚀耐腐蚀装饰性表面粗糙，平滑度低平展光滑环保性污染严重合符环保要求4 简述电泳涂装业在国内的发展及成功应用一、概述电泳涂装技术研究起于一百多年前，基于人们对金属表面防腐防锈要求的不断提高而相关表面处理工艺技术又不能较好地解决这种需求的压力下，而被逐渐研制开发。
直到60 年代才由George Brewer 博士及福特汽车公司研制开发成功阳极电泳漆。
常用电泳技术和电泳方法简介
二、电泳方法简介
2．等电聚焦电泳的特点 ①使用两性载体电解质，在电极之间
形成稳定、连续、线性的pH梯度；②由于 “聚焦效应”，即使很小的样品也能获得清 晰、鲜明的区带界面；③电泳速度快;④分 辨率高;⑤加入样品的位置可任意选择；⑥ 可用于测定蛋白质类物质的等电点;⑦适用 于中、大分子量（如蛋白质、肽类、同工酶 等）生物组分的分离分析。
它具有机械强度好、弹性大、 透明、化学稳定性高、无电渗 作用、设备简单、样品量小 (1～100μg）、分辨率高等优点。
二、电泳方法简介
（一）等电聚焦电泳
1． 等电聚焦电泳过程 一种利用有pH值 梯度的介质，分离等电点不同的蛋白质的 电泳技术。将等电点不同的蛋白质混合物 加入有pH值梯度的凝胶介质中，在电场内 经过一段时间后，各组分将分别聚焦在各 自等电点相应的pH值位置上，最后，样品 的各组分在各自的等电点聚焦成一条清晰 而稳定的窄带。
二、电泳方法简介
（二）醋酸纤维素薄膜电泳 电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、
染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。 此电泳的特点是分离速度快、
电泳时间短、样品 用量少。因此三）凝胶电泳
由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳 的方式，被称为凝胶电泳。普通的凝胶电泳在板上进行，以 凝胶作为介质（多孔性，类似分子筛的作用）。电泳中常用 的凝胶为葡聚糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖。
（一）根据支持物的特点又可分为： ①无阻滞支持物电泳。②高密度的凝胶 电泳。
一、常用电泳技术分类
（二）根据电源控制的不同，一般可分为以下 3类：1. 恒压电泳; 2. 恒流电泳; 3. 恒功 率电泳 。
（一）根据自动化程度的不同，可分为半自动 和全自动型。
一、常用电泳技术分类
电泳工艺介绍概要
电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。
电泳技术的基本原理和分类在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。
F＝QE质点的前移同样要受到阻力（F）的影响，对于一个球形质点，服从Stoke定律，即：F′＝6πrην式中r为质点半径，η为介质粘度，ν为质点移动速度，当质点在电场中作稳定运动时：F＝F′即QE＝6πrην可见，球形质点的迁移率，首先取决于自身状态，即与所带电量成正比，与其半径及介质粘度成反比。
除了自身状态的因素外，电泳体系中其它因素也影响质点的电泳迁移率。
电泳法可分为自由电泳（无支持体）及区带电泳（有支持体）两大类。
前者包括Tise-leas式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳。
区带电泳则包括滤纸电泳（常压及高压）、薄层电泳（薄膜及薄板）、凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶）等。
自由电泳法的发展并不迅速，因为其电泳仪构造复杂、体积庞大，操作要求严格，价格昂贵等。
而区带电泳可用各种类型的物质作支持体，其应用比较广泛。
本节仅对常用的几种区带电泳分别加以叙述。
影响电泳迁移率的因素⒈电场强度电场强度是指单位长度（cm）的电位降，也称电势梯度。
如以滤纸作支持物，其两端浸入到电极液中，电极液与滤纸交界面的纸长为20cm，测得的电位降为200V，那么电场强度为200V/20cm＝10V/cm。
当电压在500V以下，电场强度在2-10v/cm时为常压电泳。
电压在500V以上，电场强度在20-200V/cm时为高压电泳。
电场强度大，带电质点的迁移率加速，因此省时，但因产生大量热量，应配备冷却装置以维持恒温。
⒉溶液的pH值溶液的pH决定被分离物质的解离程度和质点的带电性质及所带净电荷量。
5凝胶电泳技术
电泳迁移率（m）是指在单位电场强度（1V/cm） 时带电分子的迁移速度
迁移率与带电分子所带净电荷成正比，与分子 的大小和缓冲液的粘度成反比。
DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场 作用下向正极泳动。 DNA分子在凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛 效应。不同DNA的分子量大小及构型不同，电泳时的 泳动率就不同，从而分出不同的区带。 为了获得好的电泳结果，应尽量减少电荷效应， 增加分子筛效应。
TBE一般配10 ×或5 ×的贮存液，都以1×TBE作 为使用液进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×的使用液已具 备足够的缓冲容量；进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓 冲液槽较小， 故通过缓冲液的电流量通常较大，需要 使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。 TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一 问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液或高压灭菌。
2、离子强度：离子强度小，溶液的导电性小，带电 颗粒泳动慢 ；离子强度大，溶液的导电性高，带电颗 粒泳动快（过高，产生大量热，胶熔化，或使DNA变 性。
3、种类 ： TAE（Tris、醋酸、EDTA）：缓冲能力差，电流大易发 热，长时间使用阴极为碱性 ，阳极为酸性 ，需要循环使 两极的pH一致；但价格便宜。 TBE（Tris、硼酸、EDTA）：缓冲能力强。首选TBE。 TPE（Tris 磷酸，EDTA）：缓冲能力强，但回收DNA 易与DNA一起沉淀，影响酶反应。 TNE（Tris 醋酸钠，EDTA）：电流大，适合于长时间低 压电泳，分辨率高。 在缓冲液中加入EDTA，可以鳌合二价离子，抑制DNase， 保护DNA。
(二)支持物介质（种类和浓度）
核酸电泳通常使用琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶 两种介质，琼脂糖是一种聚合链线性分子。含有不同 浓度的琼脂糖的凝胶构成的分子筛的网孔大小不同， 适于分离不同浓度范围的核酸分子。聚丙烯酰胺凝胶 由丙烯酰胺（Acr）在N,N,N′-四甲基乙四胺 （TEMED）和过硫酸铵（AP）的催化下聚合形成长 链，并通过交联剂N,N′-亚甲双丙烯酰胺（Bis）交叉 连接而成，其网孔的大小由Acr与Bis的相对比例决定。
电泳
在聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳时，各种蛋白 质的棒状分子表现出相同的电荷密度，它们 纯粹的分子的大小由凝胶的分子筛效应来进 行分离，在SDS电泳中，迁移速率在分子量 之间有精确的线形关系，可通过已知分子量 的标准蛋白与未知蛋白的相对电泳迁移率做 比较，而测定未知量的分子量。
1、试剂
⑴样品缓冲液 0.01M磷酸钠、1％SDS 5％β巯基乙醇、PH7.0，把样品溶于此缓冲液中， 100℃加热5min ⑵凝胶缓冲液：0.1M磷酸钠 、0.2％SDS、 PH7.0 ⑶电泳槽缓冲液：0.05M磷酸纳、0.1％SDS、 PH7.0
பைடு நூலகம்
电渗：因为支持物（琼脂糖，聚丙烯酰胺） 不是绝对的惰性物质，它可吸附溶液中的阴， 阳离子，从而使靠近支持物的溶液相对带电， 从而引起电场中溶液层的移动，这种现象称 为电渗现象。为避免电渗现象，应尽量选择 电渗作用小的支持物
一、琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖是一种天然的线形高分子，沸水中溶解，室 温冷却，在45℃时开始形成凝胶。琼脂糖即使在62 ％的低浓度也能形成多孔型刚性凝胶富含氢键，为 理想的电泳材料。低浓度就具有高的凝胶强度，透 明度好，扩散速度快，不吸收紫外光，可用于分离 病毒、酶、脂蛋白、核酸等大分子，也可分析核苷 酸等小分子。琼脂糖凝胶适合分离长度100至60的 分子，而聚丙烯酰胺凝胶对于小片段（5bp-500bp） 的分离效果最好。选择不同浓度的凝胶，可以分离 不同大小范围的DNA分子。
3、电泳条件
⑴将样品蛋白放在样品缓冲液中于100℃加热10min， 使蛋白质变性和还原，加入0.5µl 1％溴酚兰示踪染 料，并加入一些蔗糖和甘油增加其密度。 ⑵将适量样品液加到凝胶板的样品槽中； ⑶通120v电压7小时，前言的迁移 ⑷固定：在25％异丙醇，10％醋酸液中固定约1h 染色：以0.02％考马斯壳兰R250的7％醋酸水溶液 染色24~48小时 褪底色：由25％甲醇和10％醋酸的水溶液组成。
电泳技术详解
电泳技术概述电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。
例如蛋白质具有两性电离性质。
当蛋白质溶液的pH在蛋白质等电点的碱侧时，该蛋白质带负电荷，在电场中向正极移动，相反则带正电荷，在电场中向负极移动，只有蛋白质溶液pH在蛋白质的等电点时静电荷是零，在电场中不向任何一极移动。
电泳现象早在1890年就被发现，1907年有人曾在琼脂中电泳，研究白喉毒素； 1937年由Tiselius制成界面电泳仪，并开始用于蛋白质的研究。
从此，人们才逐渐认识到电泳技术对于生物科学研究是一种重要工具。
然而，界面电泳结构复杂。
价格昂贵难于普及。
1940年左右。
以纸为支持物的电泳问世后，电泳技术得到迅速发展。
电泳技术以支持物分，可分为纸电泳，醋酸纤维素薄膜电泳，淀粉凝胶电泳，琼脂（糖）凝胶电泳及聚丙烯酰胺凝胶电泳等。
经凝胶形状分有水平平板电泳，园盘柱状电泳及垂直平板电泳。
各种类型的电泳技术概括如表。
表电泳技术的种类各类电泳技术已经广泛地用于基础理论研究，临床诊断及工业制造等方面。
例如用醋酸纤维薄膜电泳分析血清蛋白，用琼脂对流免疫电泳分析病人血清，为早期诊断原发性肝癌提供资料：用高压电泳分离肽段，研究蛋白质一级结构：用高压电泳和层析结合研究核酸的一级结构。
凝胶龟泳技术在分离分析酶。
蛋白质，核酸等生物大分子方面具有较高的分辩力，为生物化学，分子生物学的发展作出了重大贡献。
基本理论不同的带电颗粒在同一电场中泳动的速度不同。
常用泳动度（或迁移率）来表示。
泳动度是指带电颗粒在单位电场强度下泳的速度。
影响泳动度的主要因素有：1、首先决定于带颗粒的性质，即颗粒所带净电荷的数量，大小及形状。
一般说来，颗粒带净电荷多，直径小而接近于球形，则在电场中泳动速度快，反之则慢。
泳动度还与分子的形状，介质粘度，颗粒所带电荷有关，泳动度与颗表面电荷成正比，与介质粘度及颗粒半径反比。
带电荷的高分子在电解质溶液中把一些带有相反电荷的离子吸引在其周围，形成一离子扩散层。
电泳知识点总结
电泳知识点总结一、电泳的原理电泳是利用带电粒子在电场中受到电场力的作用而运动的原理进行物质分离的技术。
电泳技术最基本的核心原理是利用生物分子（如DNA、RNA、蛋白质等）在电场中的电荷性质和电场力的作用而运动的原理进行物质分离。
当生物分子处于电场中时，带电粒子将受到电场力的作用，移动速度与带电粒子的电荷量和电场强度成正比，与溶液的粘度成反比。
电泳的原理可以简单概括为：根据生物分子（如DNA、RNA、蛋白质等）在电场中受到的电场力的作用而运动的速度不同而进行分离的原理。
常见的电泳分离包括凝胶电泳、毛细管电泳、等温点电泳等。
二、电泳的分类根据所使用的分离介质的不同，电泳可以分为凝胶电泳和毛细管电泳等不同类型。
1. 凝胶电泳凝胶电泳是指在凝胶（如琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中进行电泳分离的技术。
凝胶电泳通常用于对DNA、RNA、蛋白质等大分子生物分子进行分离和检测，其分辨率高、操作简便等特点。
凝胶电泳根据凝胶的性质和用途，可以分为琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、琼脂糖-聚丙烯酰胺双杂交凝胶电泳等多种类型。
2. 毛细管电泳毛细管电泳是指利用毛细管进行电泳分离的技术。
毛细管电泳通常用于对小分子药物、多肽、核酸等进行分离和检测，具有分辨率高、分析速度快、用样品量少等优点。
毛细管电泳根据毛细管的类型和使用的分析方法，可以分为毛细管凝胶电泳、毛细管等温点电泳、毛细管毛细管电泳、毛细管毛细管电泳等多种类型。
三、电泳的应用电泳技术广泛应用于生物学、生物化学、医学、食品安全等领域，是实验室中常用的分离和检测技术。
电泳技术的主要应用包括：1. 生物分子分离和检测电泳技术被广泛应用于对DNA、RNA、蛋白质等生物分子的分离和检测。
在分子生物学和生物化学实验室中，凝胶电泳被用于对DNA片段、PCR产物、蛋白质等的分离和检测，毛细管电泳被用于对小分子药物、多肽、核酸等的分离和检测。
2. 波谱分析电泳技术被用于质谱、荧光、放射性同位素等多种检测方法的联用，用于对生物分子的分离和检测。
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五种电泳技术的比较SDSPAGE名词解释:相对迁移率（Rf）问答题：1。
简述SDS-PAGE的基本原理。
2.影响SDS电泳的关键因素有哪些？AGE❖名词解释1.迁移率2。
电渗3。
电泳❖问答题1.影响电泳迁移率的因素有哪些？2。
试述琼脂糖凝胶电泳分离脂蛋白的原理。
CAME1.CAME的基本原理是什么？2.CAME分离血清蛋白电泳时应注意哪些问题？PAGE名词解释1。
凝胶总浓度2.交联度问答题1.与CAME相比，PAGE有哪些特点。
2.试比较CAME与PAGE操作的区别。
3。
简述不连续PAGE的原理。
1。
琼脂糖凝胶电泳Agarose Gel Electrophoresis❖Gel Electrophoresis ：由琼脂、琼脂糖、淀粉胶及聚丙烯酰胺等物质作支持体的电泳.❖特点(characteristic）：1。
可以制成非常均匀的凝胶,带电质点在凝胶的孔中泳动。
2. 电泳操作方法简便，电泳速度快。
3. 分辨率高，重复性好,电泳图谱清晰。
4. 适用于生化，免疫等定性定量测定。
（一）优点(advantage）1。
因不含硫酸根和羧基，几乎消除了琼脂的电渗.2。
对蛋白质吸附极微,故无拖尾现象。
3。
凝胶结构均匀，孔径较大，可用来分离酶的复合物、核酸、病毒等大分子物质。
4。
透明度较好，可直接或干燥成薄膜后进行染色。
5。
不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量测定。
6.有热可逆性.（二）缺点（disadvantage）1.机械强度差,易破碎，浓度不能太低。
2.易被细菌污染，不易保存,临用前配制.3.琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后必须立即固定染色。
4.与PAGE相比,分子筛（molecular sieve)作用小，区带少。
应用1. 适用于大分子的核酸、核蛋白等的分离、鉴定及纯化2。
临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的分离与检测3。
为不同类型的高脂蛋白血症、冠心病等提供生化指标影响迁移的因素❖the size of the molecule❖conformation of the molecule❖the agarose concentration of a gel❖Voltage百分浓度和分辨率限制❖Most agarose gels are made with between 0.7% （good separation or resolution of large 5–10kb DNA fragments) and 2％（good resolution for small 0.2–1kb fragments) agarose dissolved in electrophoresis buffer。
❖Up to 3％can be used for separating very tiny fragments but a vertical polyacrylamide gel聚丙烯酰胺is more appropriate in this case.❖Low percentage gels are very weak and may break when you try to lift them. High percentage gels are often brittle and do not set evenly。
1% gels are common for many applications。
琼脂糖凝胶分离血浆脂蛋白原理：血清脂蛋白经饱和苏丹黑B预染后，以琼脂糖凝胶为支持介质，在pH8。
6巴比妥缓冲液中电泳，根据各脂蛋白的组成、大小、形状分离成不同区带。
❖pH 8.6 > pI ，各种脂蛋白均带负电，电泳时由负极到正极；VLDL为圆形,受阻力小，LDL形态不规则，受阻力大,所以VLDL跑在前。
加样槽在负极，由负极到正极分别是CM\LDL\VLDL\HDL2.醋酸纤维薄膜电泳Cellulose acetate membrane electrophoresis，CAME特点:低吸附作用，低电渗作用，样本用量少，亲水性1.Low sorption2。
Low electroosmosis3.Small sample4.Hydrophilic电泳图谱不齐①点样时血清点加不均匀②薄膜局部干燥③电泳时供给薄膜的液量不均匀或过少④缓冲液变质⑤电泳时薄膜位置不正，与电流方向不平行电泳图谱分理不清①点样时血清点加不均匀②薄膜局部干燥③电泳时供给薄膜的液量不均匀或过少④缓冲液变质⑤电泳时薄膜位置不正,与电流方向不平行电泳速度慢➢电流过低➢供给薄膜的液量不足➢缓冲液离子强度过高➢薄膜中杂质白蛋白区带中间部分不着色,染色不足染色时间不够、点样过多γ球蛋白向反方向移动电渗现象，可提高缓冲液液面或加大电流量以改进区带一边长一边短呈扭曲现象薄膜未紧压在电泳槽的滤纸桥上，使薄膜接触不良而增大了电阻。
区带拖尾或区带过于紧密缓冲液离子强度＜0。
05可出现区带拖尾；离子强度＞0.075可出现区带过于紧密.血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳Separate serum protein in cellulose acetate membrane electrophoresis[原理] CAME是以醋纤膜（CAM）作支持物的一种区带电泳技术。
将血清样品点样于醋纤膜上,在pH8。
6的缓冲液中电泳时,血清蛋白质均带负电荷移向正极。
由于血清中各蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，加之分子大小和形状各异，因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。
加样:用加样器蘸取血清约5ul，垂直印在CAM 粗糙面,点样区距离边缘约1.5cm，电泳时点样面朝下。
加上槽盖平衡5分钟后再通电.电压10~15V/cm膜总宽.电泳40~60分钟，泳动距离约达3.5~4cm时即可断电。
由负极到正极可分为五条条带γβα2 α1 白蛋白3.聚丙烯酰胺凝胶电泳Polyacrylamide Gel Electrophoresis PAGEPAG是由丙烯酰胺（acrylamide，Acr）单体和N，N'—亚甲双丙烯酰胺(N，N，N',N’-methylene bisacrylamide，Bis）交联剂通过自由基( free radicals）聚合而成的一种多孔三维网状结构。
过硫酸胺［(NH4）2S2O8］（Ammonium persulfate，AP)作为催化剂，四甲基乙二胺（—N,N,N’,N’—tetramethylethylene diamine , TEMED）为加速剂.¬TEMED量多少都会影响催化作用，须在碱性条件下聚合。
分子氧存在，聚合不完全，须去除分子氧，隔绝氧®升高温度能提高聚合，降低温度能延迟聚合PAG孔径的大小主要由Acr和Bis这两种单体的浓度决定。
可以根据要分离物质分子的大小，选择合适的单体浓度。
Acr/Bis：20～40 完全透明且有弹性；＜10 很脆,易碎，不透明;＞100 糊状不成形，易破碎常用的标准凝胶是指浓度为7。
5％的凝胶交联度C——Bis占单体与交联剂总量的百分比。
C=b/（a+b）×100%电极槽缓冲液通常为pH8。
3 Tris-甘氨酸缓冲液分离原理1。
浓缩效应1)凝胶层的不连续性两层凝胶T与C不同→孔径不同浓缩胶孔径大，分离胶孔径小，蛋白质在大孔径浓缩胶中移动,受阻力小，移动速度快。
2)缓冲液离子成分的不连续性甘氨酸（pI=6。
0)在pH8.3带负电，朝正极移动，进入浓缩胶（pH6。
7)，甘氨酸解离度（α）很小，有效迁移率（M α）很低,移动速度较慢,称为慢离子。
HCl 是强电解质，α=1，Cl—有效迁移率大，移动速度快，称快离子。
蛋白质（pI＜6.0)带负电荷,有效迁移率介于两者之间。
3）pH值的不连续性为了控制慢离子的解离度，从而控制其有效迁移率,必须使浓缩胶与分离胶之间pH值有所区别。
3.分子筛效应与电荷效应进入分离胶后，Gly-成为快离子分离胶只有电荷效应和分子筛效应，根据各蛋白质所带电荷不同、分子大小不同而分离PAGE特点1。
具有分子筛效应，分辨率高2.样品不易扩散，用量少，灵敏度可达10—6g3。
化学性质稳定，分子结构中富含酰胺基具有稳定的亲水基团4。
凝胶不带电荷，消除了电渗现象5.机械强度好，有弹性，在一定浓度范围内无色透明6。
网孔可调节4.SDSPAGE十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS，also called lauryl sulfate）是一种阴离子去污剂（anionic detergent）。
•作用：破坏蛋白质分子之间以及其他物质分子之间的非共价键,使蛋白质变性（denature)而改变原有的构象；•保证蛋白质分子与SDS充分结合而形成带负电荷的蛋白质—SDS复合物。
原理（一）蛋白质分子的解聚样品介质和聚丙烯酰胺中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小（molecular mass of polypeptides ），而电荷因素可以被忽略. 1、SDS阴离子去污剂（anionic detergent )变性剂(denaturant）助溶性试剂断裂分子内和分子间的氢键(hydrogen bond)分子去折叠破坏蛋白质分子的二级和三级结构2、强还原剂巯基乙醇（β—mercaptoethanal）二硫苏糖醇(dithiothreitol，DTT)使半胱氨酸残基之间的二硫键(disulfide bond)断裂.❖SDS和还原剂的作用：(1）分子被解聚（2）氨基酸侧链与SDS充分结合形成带负电荷的蛋白质-SDS胶束。
(3）蛋白质—SDS胶束所带的负电荷大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，消除了不同分子之间原有的电荷差异。
去污剂的选择无离子去污剂:Lubro W；Brij35, TweenTriton阳离子去污剂：cetyltrimethyl ammoniumbromide (CTAB)cetylpyyridinium (CPC）阴离子去污剂：SDS deoxycholate电泳过程中的不正常现象(1）“微笑”现象指示剂前沿呈现两边向上的曲线形,说明凝胶的不均匀冷却,中间部分冷却不好.2)“皱眉"现象由于垂直电泳槽的装置不合适引起的，特别是当凝胶和玻璃板组成的“三明治”底部有气泡或靠近隔片的凝胶聚合不完全。
（3）“拖尾"现象样品溶解不佳引起。
（4）“纹理"现象由于样品中的不溶颗粒引起的.(5）偏斜现象电极放置不平行引起或加样位置偏斜而引起(6）带太宽加样量太多或加样孔泄漏引起分子量测定1、相对迁移率（relative mobility，Rf）Rf即用每个带的迁移距离除以溴酚蓝前沿的迁移距离得到的。