血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤.doc
血型鉴定与交叉配血
根据红细胞膜上有无A抗原或B抗原， 将血型分为A型、B型、AB型及O型四 种。通常利用红细胞凝集试验，通过 正定型和反定型鉴定ABO血型。
正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测 定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原； 反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血 清中有无相应的抗A或抗B。
血型抗原
抗B A型RBC B型RBC O型RBC
-
-+
+
-
结果 O
+
--
+
-
A
-
++
--B来自++-
-
-
AB
Rh血型鉴定
一、试剂 1、IgM抗-D试剂血清 2、待检红细胞悬液
二、操作 1、取12×75mm干净小试管1支 2、滴入IgM抗-D试剂血清1~2滴 3、滴入红细胞悬液 4、混匀后3400转/分离心15秒 5、轻轻摇动试管，观察结果 6、凝集为阳性，不凝集为阴性
红细胞血型抗原： 已确定的有29个系统、200多种抗原
其中必查血型抗原： ABO抗原和RhD抗原
血型抗体
常见的血型抗体分子大多属于IgM或IgG两类
*五类免疫球蛋白具有相似的单体结构 *两条轻链(L链)和两条重链(H链)组成的四肽 链 (H2L2)---单体结构
1、 IgG 抗体
分子较小，通常以单体形式存在。多经妊娠 或输血后免疫产生。在盐水介质中只能致敏相应 抗原的红细胞，而不能使之凝集，所以又称为不 完全抗体。必须通过特定的方法（如抗人球蛋白） 使致敏红细胞发生凝集。
2. 各加LIM溶液0.7m1 ，混合均匀后，再各加 Polybrene溶液1滴，并混合均匀，置室温1分钟。
3．普通离心机1000g离心15秒，然后把上清液 倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。
输血科疑难交叉配血试验标准操作规程
输血科疑难交叉配血试验标准操作规程1.目的为规范疑难交叉配血试验操作，保证临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7(2)条款的要求制定本规程。
2.适用范围适用于医疗机构输血科对临床疑难交叉配血受血者，主要是对红细胞ABO血型鉴定困难、红细胞不规则抗体筛选阳性及自身免疫性溶血性贫血(AlHA)患者的交叉配血试验。
3.职责医疗机构输血科技术人员负责疑难交叉配血试验。
4.原理本规程中疑难交叉配血是指受血者ABO血型鉴定困难、红细胞不规则抗体筛选阳性或受血者是自身免疫性溶血性贫血患者等情况下的交叉配血试验。
配血前需确定受血者的ABO血型或红细胞不规则抗体的特异性,选择ABO血型相容的红细胞或红细胞不规则抗体对应抗原阴性的红细胞进行交叉配血试验。
5.所需设备和试剂普通离心机，血型血清学专用离心机，水浴震荡仪，普通显微镜等。
6.检测环境条件室温应控制在18-27°C,湿度应保持30%-70%°7.步骤与方法7.1交叉配血前受血者ABO血型鉴定不确定者执行《ABO疑难血型鉴定标准操作规程》，确定ABO血型后，再选择ABO血型相同或相容的献血者血液进行交叉配血试验。
7.2红细胞不规则抗体筛选阳性时7.2.1随机与库存血中多袋血液进行交叉配血试验，选择交叉配血相合的血液输注。
7.2.2我院库存血中无相合的血液时，应立即联系临床医生说明情况：①上述实际情况；②应送市血液中心进行“疑难配血”，会产生费用，存在配血不成功的可能：③详细告知家属，决定是否送市血液中心。
7.2.3家属同意后，由医生填写“免疫学申请单”，并抽取血样EDTA抗凝血5-10ml,送输血科。
7.2.4输血科联系血液中心，并送血样。
7.3冷型自身抗体或冷型AIHA患者交叉配血试验：执行7.2.2-7.2.4程序8.交叉配血结果判定主侧、次侧交叉配血均无溶血、无凝集，表示配血相合。
对于AlHA患者，已经排除同种抗体的存在，而所有交叉配血又都不相和时，可选择凝集强度弱于自身凝集的血液输注。
交叉配血操作规程
1.目的：检查受血者与献血者的抗原及抗体成分是否相容,以保证安全输血;
2.要求：
要求全科人员能够熟练掌握原理及操作;
3.
,
4.
4.1
4.2
4.3
4.4
5.
5.1 首先查看输血申请单,核对姓名、科室、床号等内容,无误后方可进行配血;★5.2盐水介质配血法
1首先对患者血样充分离心后,吸出血清于另一试管中并标记;
2取试管12支,分别标记患者细胞、患者抗A、抗B、抗D、A C、BC、O C、主侧、次侧、献血者抗A、抗B、献血者细胞管;对患者血样进行ABO血型正反定性和Rh血型检定,主侧管加受血者血清2滴,献血者2%~5%红细胞悬液1滴；次侧管加献血者血清2滴,受血者2%~5%红细胞悬液1滴,对献血者血辫进行ABO血型复查,以
1000g离心15秒,观察结果
6.结果判断
ABO同型配血,主侧和次侧均无凝集及溶血现象;为盐水介质配血结果阴性,可将原标本接着做聚凝胺法或抗人球蛋白法配血;
6.1聚凝胺法：具体方法见聚凝胺法;
6.2 抗人球蛋白法：具体方法见抗人球法;
7.
7.1
7.2
7.3,然后再离心;
7.4
误,,37℃或7.5
7.6 各医院前来配血时,要有输血申请单方可配血;
8.相关文件
8.1中国输血技术操作规程
9.相关表单
9.1 CB—004血型参比室实验记录单
9.2 CB—005青海省血液中心交叉配血报告单
起草人：批准人：审核人：。
临床血型复查、不规则抗体筛查、交叉配血实验等红细胞输注前检验要点
临床血型复查、不规则抗体筛查、交叉配血实验等红细胞输注前检验要点临床治疗当中，输血治疗属于移植细胞治疗，红细胞作为运输氧气的重要载体，是治疗或者辅助治疗的重要手段，但不适当的血液制品的输注将造成不良后果，严重者可以危及生命，因此应该按照相关程序对受血者和供血者的血液进行准确的输血前血型血清学检查才能保证受血者的输血安全。
血型复查红细胞上的抗原纷繁复杂，但是具有重大临床意义的，也是现在临床上运用的是ABO 血型系统和Rh 血型系统，通常所有住院患者在一开始会常规查一个血型定性，就包括ABO 系统和Rh 系统。
大型医院一般微柱凝胶法，而在输血前也需要再进行血型复查，包括正定型（用抗-A 及抗-B 的试剂与被检测血细胞反应，检测红细胞表面是否存在A 抗原B 抗原），和反定型（用标准A 细胞和B 细胞与被检血清反应，检测血清中是否含有抗体），此时复查多采用试管法或者玻璃法，由于ABO 系统的天然抗体多属于IgM 型抗体，属于温抗体，盐水介质下就可以看见凝集，一般不需要离心即可看出结果，当受血者的抗体较弱时可以离心观察，临床上反定型防止假阴性均采用盐水介质法离心后观察。
不规则抗体筛查受血者有输血史、妊娠史或者短期内需要大量输血时应按规定进行不规则抗体的筛查和鉴定，以便及时发现有临床意义的不规则抗体从而避免输血反应的发生，不规则抗体指除了抗-A 和抗-B 抗体以外的抗体，分为自身抗体和同种异体抗体。
自身抗体是指受血者体内产生的抗体，针对自身红细胞的抗原，这种抗体不仅可以和自身红细胞反应还可以和大多数红细胞反应，而同种异体抗体是指多次输血或者妊娠刺激机体产生的针对同种异基因的红细胞的抗体。
不规则抗体按照抗体的类型可以分为IgM 和IgG 类，根据次分类可以选择不同的筛选方法，主要有盐水介质法、聚凝胺法、抗球蛋白实验，以及微柱凝胶法等。
交叉配血实验在完成前个试验后，复查收到的受血者血样的ABO、Rh 血型以及不规则抗体筛查实验，进行最后一步，交叉配血实验，主要是检查受血者血清中有无破坏供者的红细胞的抗体，使受血者和供血者的血液间没有可测的不相配合的抗原、抗体成分，实验包括以下几项：1、主侧配血：受血者的血清和供血者的血细胞反应，检测受血者体内是否存在针对供者红细胞的抗体。
血型鉴定与交叉配血
＋表示凝集，－表示无凝集
对抗血清的要求※
①高度特异，只能与相应的红细胞抗原发
生凝集，无非特异性凝集， ABO
血 抗B血清效价在1:64以上。 型 鉴 ③高亲和力，15秒内出现凝集，其强度 为3分钟时凝块>1mm2。 定
②高效价，抗A血清效价在1:128以上，
④无冷凝集素。
⑤无菌。分离血清后56℃，30min灭活。
型 （2）立即水平离心1000r/min, 10min. 鉴 定 （3）观察及判断血型结果①阳性：对照管细胞沉
淀在管底，检测管凝集块在胶上或胶中。 ②阴性：对照管和检测管细胞沉淀均在管底。 ③试验失败：对照管细胞在胶上或 胶中，应重新做试验。
（4）报告方式：同生理盐水法。
注意事项
ABO 血 型 鉴 定
【注意事项】
交 1.如果对患者的输血史或妊辰史不明， 叉 必须使用48h内的标本。 配 血 2.不能使用溶血标本。
（ 盐 水 凝 集 法 ）
3.配血后，受血者/供血者的全部标本 须于2～6℃冰箱保存7d以备复查。
交 叉 配 血
（ 盐 水 凝 集 法 ）
【方法学评价】
本法简易、经济、快速，缺点是
仅用于检查ABO血型系统的IgM 血型抗体是否相配，不能检出不 相配的IgG血型抗体。
（ 盐 水 凝 集 法 ）
查找原因。
②异型配血时，主侧无凝集无溶血，次侧
有凝集无溶血，可以输少量血；如主侧、
次侧均不凝集或主侧凝集，不能输血，
需查找原因
交 叉 （1）受血者xxx（X型）血清＋供血者xxx 配 （X型）红细胞 凝集与否及强弱程度 血 （ （2）供血者xxx（X型）血清＋受血者xxx
交叉配血试验的注意事项
稀有血型、不规则抗体阳性、及配血不相合等及时报告程序范本.docx
稀有血型、不规则抗体阳性及配血不相符等情况的报告程序
为保证临床安全用血、合理用血，制定稀有血型、不规则抗体阳性及配血不相符等情况的报告程序，输血科人员在进行交叉配血实验时，如发生此类情况，应按照以下程序报告。
一、输血科人员在进行交叉配合实验时，应严格按照操作规程，认真完成配血实验，在多人值班时，应由另一人进行复核，确保无误后，方可签字发出血液。
二、对稀有血型的输血，输血科应立即通知用血临床科室，在血液无充足储备情况下，应暂停手术。
输血科人员应上报输血科主任，立刻与市中心血站取得联系，保证血液的供应，对紧急的稀有血型输血，输血科人员应立即上报输血科主任，输血科主任应立即与血站联系，确保急症抢救用血并上报医务科。
三、对不规则抗体阳性及配血不相合等情况，输血科人员应重新做不规则抗体及交叉配合实验并复查血型，必要时更换试剂，重做试验。
如仍然不相符，应上报输血科主任，输血科主任应上报医务科和主管院长。
上述工作制服规范了不规则抗体阳性及配血不相合等情况的报告程序，输血科人员应认真学习掌握，确保临床安全、有效、合理用血。
ABO血型鉴定及交叉配血
血型基因位于第9对染色体上， 基因名为ABO，由A、B和O三个 等位基因控制遗传。
基因特性
ABO血 型系统
ABO血型系统中A和B基因是显性基 因，O基因是隐性基因。
各基因编码产物
O基因编码产物无酶活性
各基因编码产物
B基因编码半乳糖转移酶
各基因编码产物
A基因编码N-乙酰半乳糖胺 转移酶
根据红细胞膜上所具有的抗原，将血型分为四个血型
（一）排除人为因素或操作失误(第一步) 复检ABO血型:
1)重新采集血样:分抗凝血和不抗凝血的2管, 排除血样采错、静脉输液处采样和血样 不规范等因素。 2)核对试剂、器材：核对试剂效期, 仔细阅读试剂说明书, 特别是操作规程和注意事 项;核对离心机转速、时间、离心力, 以及其它器材有无污染, 排除试剂、器材, 特别是 离心力不标准的干扰。
受检者血清（浆）与标准红细 胞（反定型）
抗-A + +
抗-B + +
Ac
Bc
Oc
-
+
-
+
-
-
+
+
-
-
-
-
受检者血型
A B O AB
思考题？
ABO反定型鉴定
1.ABO反定型中试剂为什么会有O型细胞？
如果在反定型试验中，受检者的血清（血浆）与O型红细胞试剂产生阳性反应，则需要添加自 身对照试验。如果自身对照试验为阳性，表明是自身冷凝集素导致。如果自身对照试验为阴性， 则表明被检者血清（血浆）中可能存在ABO系统以外的其他系统的抗体干扰定型。 2.只做ABO反定型，结果出来后能否直接报告血型？
1 A型
红细胞膜上只具有A抗 原
血型及交叉合血操作规程
血型及交叉合血操作规程一、引言作为医疗机构中常见的操作流程之一，血型及交叉合血是确保输血安全的重要环节。
本文将介绍血型和交叉配血的基本概念、操作步骤以及注意事项，以提供规范的操作指南。
二、血型的基本概念血型是指个体红细胞膜上存在的抗原和抗体的组合情况，分为A、B、AB和O四种类型。
在血型鉴定中，需要使用抗A和抗B两种血清对被测血液进行试验，从而确定其血型类型。
此外，还需要测试被测血液中是否存在抗D抗体，以判断其Rh阴性或Rh阳性。
三、交叉配血的基本概念交叉配血是在输血前进行的一项重要试验，旨在检测受血者的血清中是否存在与供血者红细胞的抗体相对应的抗原，以避免输血反应的发生。
具体操作如下：1. 取受血者的血清和供血者的红细胞，将它们分别置于两个试管中。
2. 依次加入适量混合胶体试验红细胞悬液和抗人球蛋白试剂，轻轻振荡混合。
3. 观察反应是否出现凝集、增浊或溶解等现象。
4. 凝集或增浊反应表示交叉配血不合格，需停止输血操作；溶解反应则表示血型和抗体基本匹配，可以进行输血。
四、血型及交叉合血操作规程以下为血型及交叉合血操作的具体步骤，操作人员应根据实际情况进行：1. 准备工作a. 确认受血者的基本信息，包括姓名、住院号、血型等。
b. 根据受血者血型，选择相应的供血者。
c. 根据病情和输血需求，估计所需输血量。
d. 消毒操作台面和操作器具。
2. 操作步骤a. 将受血者的血液样本采集到干燥无菌试管中，标明受血者信息。
b. 将受血者的样本送至血库，进行血型鉴定。
c. 根据受血者的血型和抗体情况，在血库选择适当的供血者。
d. 从血库获取供血者的血液样本。
e. 将供血者样本标记并送至血型试验室进行交叉试验。
f. 根据交叉试验结果判断是否合适进行输血操作。
g. 如满足输血条件，按照医嘱进行输血操作。
五、注意事项1. 操作人员应进行严格的洗手和穿戴手套等防护措施，以防交叉感染。
2. 每一步操作都需要仔细核对患者信息，确保输血操作正确。
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血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤
一.
1. 血型鉴定
排管并标记患者红细胞悬液管、患者血浆管、患者ABO正定型试管、患者ABO反定型试管、患者RhD定型试管。
2.标本准备分离患者的血浆，取一滴压积红细胞，三次洗涤，制备患者 2%-5%红细胞悬液。
3.加样
ABO正定型： 1 滴（ 50ul ）抗 A、抗 B 试剂加 1 滴（ 50ul ）患者红细胞悬液。
ABO反定型： 1 滴（ 50ul ）患者血清加 1 滴（ 50ul ）反定型试剂红细胞。
RhD定型： 1 滴（ 50ul ）抗 D 血清加 1 滴（ 50ul ）患者红细胞悬液。
4.
二. 结果判断
离心（ 2 档）：轻摇试管，肉眼观察有无凝集，记录ABO、RhD血型结果。
不规则抗体筛查（生理盐水法+凝聚胺法）
1.排管标记 01、 02、 03 及自身对照管
2. 加样各试管分别加入相应的患者血清 2 滴（ 100ul ）及筛选细胞 1 滴（ 50ul ）。
3.结果观察
离心（ 2 档），观察结果
先看上清液有无溶血，轻轻混匀，肉眼观察有无凝集，结果判断并记录。
各试管分别加入低离子介质，轻轻混匀（参照试剂说明书）
各试管再分别加凝聚胺溶液 2 滴（ 100ul ）混匀，离心
先观察上清液有无溶血
弃去上清液，留约，轻轻混匀
肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）
各试管分别加入重悬液 2 滴（ 100ul ），轻轻混匀
肉眼观察凝集是否在1min 内消失
显微镜检查
三. 交叉配血试验（生理盐水法+凝聚胺法）
1.标本准备
分离供血者血浆与红细胞
三次洗涤，制备供血者 2%-5%红细胞悬液
2.排管标记
排管，主侧、次侧及自身对照管
3.加样
各试管分别加入相应的备检血清 2 滴（ 100ul ）及 2%-5%备检红细胞悬液 1 滴（ 50ul ）4.结果观察
离心（ 2 档），观察结果
先看上清液有无溶血
轻轻混匀，肉眼观察有无凝集
结果判断并记录
各试管分别加入低离子介质，轻轻混匀（参照试剂说明书）
各试管再分别加凝聚胺溶液 2 滴（ 100ul ）混匀，离心
先观察上清液有无溶血
弃去上清液，留，轻轻混匀
肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）
各试管分别加入重悬液 2 滴（ 100ul ），轻轻混匀
肉眼观察凝集是否在1min 内消失
肉眼观察阴性者，显微镜检查
记录交叉配血结果
A、 B、O试验红细胞悬液的制备
1.分别采取已知A、 B、O 三种血型的红细胞，经盐水洗涤 3 次，以压紧红细胞配成不
同浓度的红细胞悬液（见表格）
红细胞悬液的配置
悬液浓度（ %）压实红细胞（滴）盐水（滴）
2 1 （ 40）
5 1 （ 16）
10 1 （ 8）
20 1 （ 4）
2.为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取 3 个以上健康成人血液，按A、B、O 型分别混合后，按上法制备。