5.用凝聚胺做交叉配血试验的操作程序
最新凝聚胺介质交叉配血试验操作规程
凝聚胺介质交叉配血试验操作规程凝聚胺介质交叉配血试验操作规程(SOP文件)1目的作为介质辅助用于完全抗体及不完全抗体的临床筛选检测及辅助用于临床交叉配血实验。
2检验原理红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕，而形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。
凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM)，降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。
其后，加入凝聚胺（Polybrene)溶液，它是一种高价阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝聚。
最后，加入悬浮液（Resuspending),Resuspending具有中和凝聚胺（Polybrene)阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝聚散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。
3储存条件及有效期未开封试剂应贮存于2℃~25℃、相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体的室内；已开封试剂应贮存于相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体和通风良好的室温环境，试剂用后应及时拧紧瓶盖保存；未开封试剂的有效期为二年，在有效期内的已开封试剂应在开封后的6个月内使用完。
4样本要求4.1新鲜血清，含EDTA抗凝血浆、3%~5%的红细胞悬液。
4.2不能使用溶血标本及含枸橼酸钠、肝素抗凝血浆标本。
5检验方法辅助交叉配血试验5.1取试管二支，标主次侧，主侧管加病人血清（血浆）2滴，加供血者3%~5%红细胞悬液（洗涤或不洗涤均可）1滴，次侧管反之。
5.2各加LIM0.65ml,混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀。
5.3用离心机3400转/min(相当于1000g离心力）离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml 液体。
交叉配血操作规程凝聚胺法
交叉配血操作规程凝聚胺法交叉配血操作规程（凝聚胺法）一．目的规范交叉配血试验操作；保证临床用血的安全性和有效性。
二．适用范围适用于临床配血标本。
三．职责血库技术人员负责交叉配血试验四．所需材料和设备材料：凝聚胺试剂盒、患者血标本、生理盐水、小试管、滴管、献血者标本。
设备：普通离心机、血型血清学专用离心机、37℃恒温水浴箱、显微镜五．操作步骤1.凝聚胺法（1）以生理盐水配制供、受者3％～5％红细胞悬液。
（2）取试管3支，标记主、侧和自身对照主侧加受血者血浆（血清）2滴，献血者3%～5%的红细胞悬液1滴；次侧加献血者血浆（血清）2滴，受血者3%～5%的红细胞悬液1滴；自身对照管加患者血浆（血清）2滴和患者3%～5%的红细胞悬液1滴混匀。
（3）以1000r/分钟离心1分钟，观察盐水介质实验结果。
（4）每管各加低离子介质（LIM）溶液0.7ml,混合均匀，室温孵育1min。
（5）每管各加2滴凝聚胺溶液，混匀后静置15s。
（6）1000r/分钟离心1分钟，倾去上清液，不要沥干。
（7）轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，必须重复步骤（3）-（6）（8）加入2滴重悬液，并轻轻混合，观察结果。
（9）结果判定如凝聚散开，则为凝聚胺引起的非特异性凝集，判为阴性结果，配血相合；如凝聚不散开，则为抗原抗体结合的特异性反应，判为阳性结果，配血不相合，如肉眼观察凝集强度弱，可进一步在显微镜下观察有无凝集。
结果判定要求在1min内完成，最长不要超过3min，因为弱凝集的阳性结果，超过1min 可能变为阴性。
六．注意事项1.配血技术①常规配血技术：选择的技术不仅要能检查出不配合的IgM抗体，还必须能检查出尽可能多的不配合的IgG抗体，最大限度地减少抗体的漏检。
目前认为盐水法交叉配血是输血前检查必不可少的试验，首先采用盐水法进行交叉配血，再采用能够检出IgG类抗体的方法进行交叉配血；②特殊配血技术，如：预温配血技术：主要用于解决无临床意义的冷抗体引起的交叉配血不配合。
血库凝聚按法交叉配血操作规程及血库收发标本制度
交叉配血操作规程交叉配血试验（凝聚胺法）[原理]凝聚胺试验是利用低离子溶液促进红细胞抗原与血清（浆）中的抗体反应，再利用凝聚胺引起红细胞间非免疫性的凝集，让已有抗体（IgG）反应的红细胞间的距离缩短。
距离缩短后更能引起已反应的抗体和别的红细胞产生反应形成免疫性的凝集。
而由凝聚胺所引起的非免疫性红细胞凝集反应可被后来加入的复悬液所中和而散开，如有免疫反应，凝集就不会散开，为阳性反应。
如没有免疫反应，凝集就会散开，为阴性反应。
交叉配血试验是在盐水介质的基础上加入凝聚胺，检测供患之间是否相合，患者血清（浆）中是否含有具临床意义的红细胞异体抗体。
[试剂组成]1，洁净试管，离心机，显微镜。
2，0.85% 氯化钠溶液：准确称取氯化钠（AR）8.5 g，用蒸馏水溶解并定容至1000 ml。
试剂启用后，有效期为：二周。
3，凝聚胺试剂*1 低离子介质溶液：含葡萄糖，乙二胺四醋酸-2钠及稳定剂。
*2 凝聚胺溶液：含凝聚胺，氯化钠及稳定剂。
*3 复悬液：含柠檬酸钠，葡萄糖及稳定剂。
*4 阳性对照血清：含抗D血清，氯化钠及稳定剂。
4，抗人IgG 血清。
[试剂保存和稳定性]1．凝聚胺试剂须保存在2-25℃。
2．有效期内可使用。
3．抗人IgG血清低温冰箱保存。
复溶后放2—4℃冰箱保存。
[标本收集和准备]1．抽取受血者静脉血3-4ml（操作中小心防止红细胞破损），放入一已贴标签干燥洁净的试管中为血清管(也可用EDTA-K2抗凝血液)，并将注射器中余下的少量血液配成2%红细胞生理盐水悬液，放入另一已贴标签干燥洁净的试管中为红细胞悬液管。
以上标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。
2．2% 红细胞悬液：用生理盐水洗涤红细胞3次。
根据下表进行红细胞悬液的配制。
悬液浓度（%）压积红细胞（滴）盐水（滴）----------------------------------------------------------------2 1 2ml(40)5 1 0.8ml(16)----------------------------------------------------------------[操作步骤]1．取出3支试管分别标记主，次及对照测试：主测管：加入病人血清（浆）2滴，再加入供血者3-5%红细胞悬液1滴，次测管：加入供血者血清（浆）2滴，再加入病人3-5%红细胞悬液1滴，对照管：加入2滴*4阳性对照血清，再加入供血者3-5%红细胞悬液1滴。
交叉配血试验标准化操作规程聚凝胺法
交叉配血试验标准化操作规程聚凝胺法一、目的为保证临床输血的相容性,确保临床输血安全,对全血、红细胞悬液、洗涤红细胞、浓缩红细胞、少白细胞红细胞、冰冻红细胞、机采浓缩白细胞悬液等血液成分进行交叉配血试验;二、方法采用聚凝胺介质试管法；三、原理聚凝胺法第一步采用低离子强度溶液降低红细胞和抗体反应介质的离子强度,从而减少了红细胞周围的阳离子云,促进带正电荷的IgG抗体与带负电荷的红细胞发生反应,这样大大加快了抗原和抗体反应的速率;第二步通过加入聚凝胺来促使红细胞产生可逆性的非特异性凝聚;聚凝胺是一种多价阳离子溴化己二甲胺多聚物,可以中和红细胞表面的负电荷,使红细胞的Zeta电位降低,从而产生红细胞可逆性的聚集,缩短红细胞之间的距离,让IgG抗体可直接引起红细胞凝聚;第三步加入重悬液,重悬液可中和聚凝胺的作用;可区分由聚凝胺诱发的红细胞之间的非特异性凝聚与由抗原抗体反应所致的特异性凝聚;四、适用范围适用于输血前需进行交叉配血试验的血液及血液成分;五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：快速聚凝胺试剂盒2、试剂生产厂家：珠海贝索生物技术有限公司；3、批准文号：国食药监械准字2009第3400076号；4、包装规格盒：低离子强度溶液LIM 49ml×2；聚凝胺溶液Polybrene Solution 15ml×1；重悬液Resuspending Solution 15ml×1；4、贮藏条件；2-8℃避光保存;5、有效期：自检定合格之日起2年；七、检测样本要求1、标本类型：静脉血EDTA抗凝剂:血液=1:10;2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程;3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时;4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染,严重溶血等不能测定;八、操作步骤1、收集标本,严格进行查对无误后,分离血清浆;2、取10mmx60mm洁净小试管2支,分别标明主次侧管;3、主次侧管加入受供血者血清浆1滴,加供受血者3-5%红细胞悬液1滴;4、向各管加低离子强度溶液,混匀,静置30-60秒；5、向各管加聚凝胺溶液1滴,混匀,3000r/min离心15秒,轻轻摇均,肉眼可见明显的凝集状如无凝集须重做；6、向各管中加重悬液1滴于管底,轻轻摇起观察结果;1分钟内凝集消失呈均匀混悬液,如反应很弱,应镜下观察并与阴性对照比较;镜下无凝集红细胞为阴性, 1分钟内凝集不消失,既为阳性,7、阴性结果表明受血者与献血者血型相合；阳性结果表明受血者与献血者血型不相合九、质量控制1、此检测项目应参加卫生部临床检验中心组织的室间质评,且成绩合格；2、每日做室内质量控制,且要求在控;3、严格执行查对制度,判断结果后应仔细核对、记录,避免笔误等引起的差错;4、交叉配血标本应在2～8℃保存留一周,以备复查;十、生物参考区间相合,不相合;十一、注意事项与干扰因素1、本方法可结合盐水介质交叉配血相合后进行临床发血;2、交叉配血标本必须正确有标识,其血液量、红细胞或血浆的质量符合实验要求和受血者当前的免疫学状态；3、交叉配血试验血样要求是输血前3天内的血样预防受血者在输血前的3个月之内可能有妊娠或输血等免疫史而可能产生不规则抗体;4、标本血液离体后要求尽快送检,至检测完毕最长不能超过3d,每次检测后受血者和供血者的血标本应在2℃～8℃保存7天；5、试剂使用前应仔细检查试剂的贮存条件是否符合要求、是否变质失效；6、患者使用的药物影响的处理：如果使用右旋糖酐、PVP等治疗,应注意将红细胞洗涤；如果受者使用肝素治疗,则应用硫酸鱼精蛋白对抗,使样本凝结；7、交叉配血试验不相合时应注意红细胞缗钱状的假阳性鉴别,可结合盐水介质交叉配血试验镜下观察或离心去上清液后重悬观察;8、抗体筛选试验阴性,而交叉配血结果阳性,提示有未检测明的同种抗体存在;9、交叉配血结果不相合提示有未查明的同种抗体存在;10、注意交叉配血试验过程中离心力、温度、红细胞浓度、抗原抗体的比例；11、血清或血浆中如含有溶血性抗体,则相应红细胞被溶解而不凝集,交叉配血结果阳性,如排除标本中补体干扰因素的影响,可来活后重新试验;12、注意在室温反应中或抗球蛋白试验中显示有自身抗体,应加做自身对照试验或直接抗人球蛋白试验加以鉴别;十二、参考文献1、胡丽华主编,临床输血检验,第1版;中国医药科技出版社,2004；2、叶应妩,等主编,全国临床检验操作规程,第3版;东南大学出版社,2006,11；3、安万新主编,输血技术学,第1版.科学技术文献出版社,2006,9；4、聚凝胺试剂盒说明书;。
s014交叉配血试验标准化操作规程(聚凝胺法)
红细胞外表的负电荷，使红细胞的 Zeta 电位降低，从而产生红细胞
可逆性的聚集，缩短红细胞之间的距离，让 IgG 抗体可直接引起红细
胞凝聚。第三步参加重悬液，重悬液可中和聚凝胺的作用。可区分由
聚凝胺诱发的红细胞之间的非特异性凝聚与由抗原抗体反响所致的
特异性凝聚。
四、适用范围
适用于输血前需进展穿插配血试验的血液及血液成分。
采用聚凝胺介质试管法；
三、原理
聚凝胺法第一步采用低离子强度溶液降低红细胞和抗体反响介
质的离子强度，从而减少了红细胞周围的阳离子云，促进带正电荷的
IgG 抗体与带负电荷的红细胞发生反响，这样大大加快了抗原和抗体
反响的速率。第二步通过参加聚凝胺来促使红细胞产生可逆性的非特
异性凝聚。聚凝胺是一种多价阳离子溴化己二甲胺多聚物，可以中和
五、仪器设备
ห้องสมุดไป่ตู้
普通离心机；血型专用离心机；
六、试剂
.
z.
-
文件名
穿插配血试验标准化操作规程〔聚凝胺法〕
编制人
审核人
批准人
批准日期
修改日期
签字
修改日期
签字
复审日期
签字
复审日期
签字
.
z.
-
穿插配血试验标准化操作规程〔聚凝胺法〕
一、目的
为保证临床输血的相容性，确保临床输血平安，对全血、红细胞 悬液、洗涤红细胞、浓缩红细胞、少白细胞红细胞、冰冻红细胞、机 采浓缩白细胞悬液等血液成分进展穿插配血试验。 二、方法
交叉配血操作规范(凝聚胺法)
交叉配血操作规范（凝聚胺法）【操作人员】经批准人授权的同志【部门主管】【质量控制员】【目的】保证测试结果的准确性。
【适用仪器范围】双目显微镜、普通离心机。
【该SOP变动程序】该标准操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人员提出并报请专业主管及科主任签字后生效。
【应用范围】交叉配血（凝聚胺法）的手工操作。
【标本采集和处理】1．由临床科室采用真空负压EDTA K2抗凝管采集3ml-5ml，作好标记，立即送检。
备血使用的受血者标本必须是输血前三天之内的血样。
采血时要防止溶血及多量组织液混入（多发生在静脉穿刺不顺利勉强抽血时），在病人输液时采集标本，必须从未输液的一侧肢体抽取，绝不允许在输液管接头处采集。
2．非急症病人输血前，应事先采取血标本作血型鉴定，填写申请单配血单上，以便核对。
急症抢救输血，未能事先采血检测血型，则要求由专人核对、贴标签、采取血标本送检。
3. 检验人员认真核对患者姓名、性别、床号、检验目的以及标本是否与申请单一致。
确认无误后用专用记号笔在试管与申请单上编写对应数字序号。
并按日期索引进行登记。
4. 将标本置于台式离心机内，放置保证平衡，以1500转/min离心10分钟。
保证血浆于血球有效分离。
溶血标本应重采取、乳糜血及标本量不足应加以登记，溶血性疾病应注明。
【方法学原理】凝聚胺试验是利用低离子溶液促进红细胞抗原与血清（浆）中的抗体反应，再利用凝聚胺引起红细胞间非免疫性的凝集，让已有抗体（IgG）反应的红细胞间的距离缩短。
距离缩短后更能引起已反应的抗体和别的红细胞产生反应形成免疫性的凝集。
而由凝聚胺所引起的非免疫性红细胞凝集反应可被后来加入的复悬液所中和而散开，如有免疫反应，凝集就不会散开，为阳性反应。
如没有免疫反应，凝集就会散开，为阴性反应。
交叉配血试验是在盐水介质的基础上加入凝聚胺，检测供患之间是否相合，患者血清（浆）中是否含有具临床意义的红细胞异体抗体。
【试剂和材料】1．供血者血清（血浆）；2．受血者血清（血浆）；3．BASO凝聚胺（Polybrene）试剂盒。
交叉配血操作规程凝聚胺法
交叉配血操作规程凝聚胺法交叉配血是指将一定数量的输血者的红细胞与另一组供血者的血清进行混合，通过观察混合血后是否发生凝集反应来确定血型。
交叉配血操作主要采用凝聚胺法进行，以下是交叉配血操作规程的详细步骤。
1.准备工作a.配置所需试剂，包括输入血浆、配血瓶、试剂盘、标本管、溶血酶溶液、配血盘等。
b.通过测定输血者和供血者的血型，确认双方的血型信息，并记录在相关记录表中。
2.标本采集a.采集输血者和供血者的静脉血标本，放入标本管中，避免血样凝固。
b.标本采集的相关操作要符合严格的无菌原则，确保血样的无菌及安全性。
3.标本处理a.将标本管中的静脉血标本置于冰上，在4℃下保存。
b.用溶血酶溶液处理输血者的红细胞，将3滴红细胞加入到每一个配血瓶中，轻轻摇动混合均匀。
4.试剂配置a.将配血盘中的试剂盘取出，配置新鲜的抗血型血清和已知血型标准红细胞。
5.凝胶装配a.打开凝胶洞口，将配血盘的试剂盘放入凝胶洞中。
b.确保试剂盘的位置正确，使试剂液体触及到凝胶洞的底部。
6.样本混合a.取出保存在冰上的输血者和供血者的静脉血标本，放置于试剂盘的对应位置。
b.轻轻旋转试剂盘，使血样和试剂充分混合起来，注意避免搅拌过于激烈。
7.观察凝聚反应a.在一定的时间内，观察配血盘中是否发生凝聚反应。
b.根据凝聚反应的情况，判断输血者和供血者的血型是否兼容。
8.结果判读a.若输血者的红细胞与供血者的血清发生凝聚反应，表示两者的血型不兼容，不适合进行输血。
b.若输血者的红细胞与供血者的血清没有发生凝聚反应，表示两者的血型兼容，可以进行输血。
9.记录和报告a.记录每次交叉配血的操作过程和结果，包括输血者和供血者的血型信息、配血的凝聚反应情况等。
b.报告输血者的血型结果和是否适合进行输血。
交叉配血操作规程凝聚胺法主要是通过观察凝聚反应来判定血型的兼容性，该方法操作简单、结果可靠。
但需要注意的是，交叉配血结果只能作为指导输血的参考依据，还需要综合考虑患者的临床情况和输血指征等因素，确保安全有效地进行输血操作。
交叉配血标准操作规程
交叉配血标准操作规程(一)检验目的检测供血者与受血者之间的输血相容性，包括主侧配血与次侧配血，确保输血安全。
(二)检验原理1.凝聚胺法利用多聚季胺盐类——凝聚胺携带很多正电荷，中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集。
无抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，当加入中和液后，则凝集消散，而抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则不能消散，以此来判断供、受者间血液的相容性。
2.微柱凝胶法微柱凝胶卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶上端，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
3.玻璃珠微柱法微柱卡的每一个微管中装填有直径均一的玻璃微珠和抗人球蛋白试剂(抗-IgG和抗补体C3)，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工凝聚胺法、全自动微柱凝胶法、全自动玻璃珠微柱法交叉配血试验。
(四)设备性能参数各种交叉配血检测系统性能指标参见相应检测系统说明书。
(五)器材与试剂1.器材KA-2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心机、WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro Au-toVuelnnova全自动血型及配血系统、阅片灯箱、光学显微镜、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×l2mm和75m m ×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
交叉配血（凝聚胺法）试验操作规程(SOP)
1.目的：交叉配血；检出和鉴定意外抗体；红细胞血型抗原定型
2.原理：凝聚胺溶解后产生的阳离子中和红细胞表面的唾液酸使红细胞间距缩短，发生由IgG直接搭桥的可逆的非特异性凝集，当非特异性凝集回复时，只剩下由抗原抗体
1.目的：检出和鉴定意外抗体；红细胞血型抗原定型
2.原理：凝聚胺溶解后产生的阳离子中和红细胞表面的唾液酸使红细胞间距缩短，发生由IgG直接搭桥的可逆的非特异性凝集，当非特异性凝集回复时，只剩下由抗原抗体搭桥的特异性凝集。
3.适用范围：配血、免疫性抗体检查、红细胞血型鉴定、特殊的研究
4.所需材料：聚凝胺试剂、定型血清、谱细胞、洁净试管、滴管、离心机
5.操作程序：（以交叉配血为例）
5.1以生理盐水洗涤受血者和献血者红细胞1—3次，配成3-5%的悬液。
5.2交叉配血试验：
主侧：2滴患者血清加1滴供者3-5%的RBC悬液。
次侧：2滴供者血清加1滴患者3-5%的RBC悬液。
阳对：2滴抗-D血清加1滴RH（+）3-5%的RBC悬液。
自身对照：2滴患者血清加1滴患者3-5%的RBC悬液。
5.3每只试管加600微升低离子液，混合放置1分。
5.4分别加2滴Polybrene应用液，混合放置15秒。
5.5离心3400转/分15秒，弃上清，控干。
5.6观察管底有无聚凝物，如果没有则需重做。
5.7每管各加2滴解聚液，轻轻混合10秒，观察结果并做记录。
5.8结果判定：10秒内若为Polybrene引起的聚合应该会散开，判为阴性。
若为抗原抗体引起的凝聚则不会散开，判为阳性。
6.注意事项：
6.1可以用EDTA血浆代替血清
6.2加入解聚液后应该在3分钟之内观察结果
6.3解聚液不可多加，以免降低试验灵敏度。