实验五、肝讲义糖原的提取与鉴定2
肝糖原的提取、鉴定与定量-实验报告材料-第四实验室
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级： 2015级护理本科组别：第四实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期2016-12-20 实验地点第四实验室合作者指导教师评分教师签名批改日期一、实验目的1、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和须知事项，掌握其操作方法。
2、了解离心管和分光光度计使用的原理并掌握操作步骤。
3、熟悉吸量管、可调式微量移液器的操作步骤。
4、熟悉溶液的转移操作；熟练运用溶液混匀的各种方法〔视具体情况，采用适宜的混匀方法〕。
5、了解呈色反响。
二、实验原理(一) 肝糖原的提取与鉴定采用研磨匀浆使细胞破碎，用低浓度的三氯醋酸使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶从而使其沉淀，而糖原仍稳定保持在上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分别离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故用95%乙醇溶液将糖原沉淀，再用热水溶解。
(1)糖原螺旋链吸附碘分子：糖原水溶液呈乳样光泽，其长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子，呈现出红棕色。
(2)呈色反响——利用葡萄糖的复原性：①CuSO4+2NaOH = NaSO4 + Cu(OH)2↓②2Cu(OH)2 + C6H12O6 = 2CuOH + 氧化型葡萄糖+ H2O③2CuOH = Cu2O↓(红色) + H2O④Cu(OH)2 = CuO↓〔黑色〕+ H2O〔二〕肝糖原定量测定糖原的水解产物葡萄糖可以在浓硫酸的作用下生成糠醛衍生物-5-羟甲基呋喃甲醛，其可以和蒽酮生成蓝色的化合物，该物质在620nm处有最大吸收。
糖含量在10μg～100μg，溶液颜色的深浅与可溶性糖的含量成正比，利用此反响与同样处理的葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
三、材料与方法：〔一〕肝糖原的提取与鉴定1.实验材料：〔1〕样品：鸡肝〔2〕试剂：5%三氯乙酸溶液、95％乙醇溶液、蒸馏水、浓盐酸、50%氢氧〔3〕仪器和器材：剪刀、天平、镊子、圆纸片、研钵、试管、离心机、刻2.实验流程 鸡肝约1.5 g ，剪碎3.实验步骤〔二〕肝糖原定量测定1.实验材料：〔1〕样品：鸡肝〔2〕试剂：30%氢氧化钾溶液、蒸馏水、标准葡萄糖溶液、蒽酮显色剂〔3〕仪器和器材：剪刀、天平、镊子、圆纸片、试管、刻度吸量管〔移液3.实验步骤见下表混匀，沸水浴10分钟，冷却c。
2025年研究生考试考研动物生理学与生物化学(415)试卷及解答参考
2025年研究生考试考研动物生理学与生物化学(415)复习试卷(答案在后面)一、选择题（动物生理学部分，10题，每题2分，总分20分）1、下列关于酶的活性中心的描述，错误的是：A、酶的活性中心具有高度专一性B、酶的活性中心是酶与底物结合的部位C、酶的活性中心可以接受电子传递D、酶的活性中心是酶分子中最为稳定的结构2、以下关于生物大分子结构的描述，正确的是：A、蛋白质的一级结构是指蛋白质的氨基酸序列B、核酸的一级结构是指核酸的糖和磷酸骨架C、脂质的一级结构是指脂质的脂肪酸链D、糖类的一级结构是指糖类的糖苷键3、以下关于细胞信号传导的描述，错误的是：A、信号分子可以穿过细胞膜B、信号分子可以激活细胞内的第二信使C、信号分子可以调节细胞内的基因表达D、信号分子在细胞内传递时，不会发生降解4、在细胞内，下列哪种酶与生物氧化直接相关？A. 胰岛素B. 胞嘧啶脱氨酶C. 胞浆素D. 线粒体呼吸链复合物I的NADH脱氢酶5、以下哪种物质在生物体内主要以磷酸酯的形式存在？A. 糖B. 脂肪C. 蛋白质D. 核酸6、在蛋白质的二级结构中，以下哪一种结构单元被称为“α-螺旋”？A. β-折叠B. 无规卷曲C. α-螺旋D. β-转角7、以下哪种物质不属于生物体内常见的辅酶？A、NADHB、FADH2C、ATPD、CoA8、在蛋白质的氨基酸序列中，以下哪种氨基酸含量最低？A、甘氨酸B、丙氨酸C、苯丙氨酸D、赖氨酸9、以下哪种生理现象与生物体的能量代谢无关？A、呼吸作用B、光合作用C、神经传导D、肌肉收缩10、以下哪种酶属于水解酶？A. 氧化酶B. 聚合酶C. 裂合酶D. 水解酶二、实验题（动物生理学部分，总分13分）实验背景：在生物体内，蛋白质的合成是一个复杂的过程，涉及多个步骤。
本题以大肠杆菌为研究对象，探讨蛋白质合成的分子机制。
实验内容：取一定数量的大肠杆菌，分为甲、乙两组。
甲组加入蛋白酶抑制剂，乙组不加。
分别培养两组大肠杆菌，并在不同时间点提取蛋白质，进行SDS-PAGE电泳分析。
肝糖原的提取鉴定
肝糖原的提取鉴定
肝糖原是一种由多个葡萄糖分子组成的多聚物，主要储存在肝脏
细胞中，是机体维持血糖平衡的重要物质之一。
以下是肝糖原的提取
和鉴定方法：
提取肝糖原方法：
1. 取新鲜肝脏切成细小的碎片，放入0.5 mol/L HClO4（冰醋酸也可）中。
2. 在4°C下振荡24小时，然后离心提取上清液。
3. 上清液的pH值调节至中性，加入4倍体积的85%乙醇，混合
均匀并放置于-20°C冷藏过夜。
4. 离心沉淀，用冷酒精洗涤沉淀，干燥后即为纯净的肝糖原。
鉴定肝糖原方法：
1. 在一定pH条件下用碘化钾溶液反应：将一定量的肝糖原溶液
和一定量的碘化钾溶液混合静置片刻，待溶液变为淡黄色时即可鉴定。
如果混合产生的沉淀呈现棕色，则肝糖原的存在得到证明。
2. 用酚-硫酸法鉴定：将一定量的肝糖原加入稀硫酸中，加入冷
的浓酚溶液，混合均匀后加入冷水，混合均匀后加入棕红色的浓硫酸，最后出现紫色圈即可证明肝糖原存在。
肝糖原的提取和鉴定
肝糖原的提取和鉴定一、实验目的1、学会和掌握肝糖原提取和鉴定的原理和方法。
2、正确掌握使用离心机的方法步骤。
二、实验原理三、实验步骤（一）、肝糖原提取1、用脱臼法处死白鼠，立即取出肝脏，迅速以滤纸吸取附着的血液。
称取肝组织约2g，置研钵中，加入10%三氯乙酸2ml，用剪刀把肝组织剪碎，再加石英砂少许，研磨5min。
2、再加5%三氯乙酸4ml，继续研磨1min，至肝脏组织已充分磨成糜状为止，转入离心管，然后以2000r/min离心10min。
3、小心将离心管上清液转入另一个离心管中，加入同体积的95%乙醇，混匀后，此时糖原成絮状沉淀析出。
4、溶液以2000r/min离心10min。
弃去上清液，并将离心管倒置于滤纸上1~2min。
5、在沉淀内加入蒸馏水2ml，用细玻璃棒搅拌沉淀至溶解，即成糖原溶液。
（二）、鉴定1、取2支小试管A、B，一支A加糖原溶液10滴，另一支B加蒸馏水10滴，然后在两管中各加碘-碘化钾溶液1滴，混匀，比较两管溶液颜色有何不同。
2、再取2支小试管，将剩余的糖原溶液平分倒入两试管，试管甲加浓盐酸3滴，试管乙加蒸馏水3滴，将两管在沸水浴中加热10min以上。
取出冷却，试管甲中逐滴加入20%NaOH溶液，并且PH试纸检验，直至溶液成中性。
试管乙中加入同等滴数的蒸馏水。
3、向甲、乙两试管各加入班氏试剂2ml，再置沸水浴中加热5min，取出冷却。
观察有无沉淀生成。
注意事项：1、实验小白鼠在实验前必须饱食。
2、脱臼法处死小白鼠：手提着小白鼠将其小白鼠尾巴将其从笼子里取出，使其四脚着地，另一支手按着小白鼠耳后，尾巴向外拉，使其脊柱断节，背部脊髓断裂，致使四肢瘫痪。
3、肝脏离体后，所得肝脏必须迅速以三氯乙酸处理。
4、研磨应充分，这是实验成败的关键。
5、离心时与另一组同学的离心管平衡，对称放入离心机。
6、鉴定的第（2）步，试管甲中溶液必须调至中性或偏碱性。
四、实验结果试管A 试管B棕红色黄色试管甲试管乙砖红色沉淀无沉淀分析：1、实验小白鼠在实验前必须饱食，因为空腹时，血糖含量降低，肝糖原分解来提高血糖含量，肝糖原含量易于减少或耗尽。
肝糖原的提取、鉴定与定量-实验报告-第四实验室【参考借鉴】
生物化学实验报告
姓名：
学号：
专业年级： 2015级护理本科
组别：第四实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量
实验日期2016-12-20 实验地点第四实验室
合作者指导老师
评分教师签名批改日期
一、实验目的
1、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
2、了解离心管和分光光度计使用的原理并掌握操作步骤。
3、熟悉吸量管、可调式微量移液器的操作步骤。
4、熟悉溶液的转移操作；熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
5、了解呈色反应。
二、实验原理
(一) 肝糖原的提取与鉴定
1.糖原的分离
采用研磨匀浆使细胞破碎，用低浓度的三氯醋酸使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶从而使其沉淀，而糖原仍稳定保持在上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开。
肝糖原的提取、鉴定与定量实验实验报告
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1．掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2．了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3．正确操作使用刻度吸管和可调微量移液器。
4．熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
5．正确掌握溶液转移的操作。
6．正确操作使用分光光度计。
二、实验原理1、肝糖原的提取与鉴定糖原储存于细胞内,采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎,低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,而糖原仍稳定地保存于上清液中,从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀,再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中, 依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可判定肝组织中糖原的存在。
2、肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛,此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)g范围内,溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色,通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前,肝组织先臵于浓碱中加热,以破坏其它成分,而保留肝糖原。
三、材料与方法：以流程图示意1、材料(1)样品:鸡肝(2)试剂:95%乙醇、5%(W/V)三氯乙酸、浓盐酸、12.5mol/L(50%)NaOH溶液、碘试剂、班氏试剂、5.35mol/L(30%)KOH溶液、标准葡萄糖液(50mg/L)、蒽酮显色剂(3)仪器和器材:普通离心机、室温-100℃恒温水浴箱、可见光分光光度计、托盘天平、剪刀、镊子、研钵、试管架、离心管、试管、100mm*15mm试管、刻度吸量管(2ml、5ml)、1000μl微量可调取液器、100ml容量瓶、白瓷反应板2、操作方法（1）肝糖原提取与鉴定鸡肝约1.5 g，剪碎COOH 1 ml＋5%CCl3研磨至乳状COOH 3 ml＋5%CCl3研磨成肝匀浆全部转入离心管中，离心3分钟（4000 r / min）沉淀（弃去）上清（取约3 ml）＋3ml （等量）95%乙醇，混匀，静置10分钟离心5分钟（4000 r / min）上清（弃去）沉淀＋蒸镏水1 ml沸水浴2分钟，溶解沉淀白瓷板孔穴中糖原溶液1ml＋浓HCl 250μl加碘试剂2滴加碘试剂2滴沸水浴15分钟，冷却糖原溶液2滴呈色对比糖原水解液2滴糖原水解液＋班氏试剂4滴混匀沸水浴2分钟，观察变化（2）肝糖原定量实验鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液糖原的测定取3支试管，按下表操作。
肝糖原的提取,定性以及定量实验
生物化学实验报告姓名：张子荣学号： 3150901080专业年级： 2015级临床医学组别：第五实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖元的提取，鉴定和定量检测实验日期2016.12.29 实验地点第五实验室合作者张林燕指导老师何肖娟评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的1.掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2.了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3.正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4.熟练运用溶液混匀的各种方法。
5.正确掌握溶液转移的操作。
6.正确操作使用分光光度计。
二、实验原理1.肝糖原的提取糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。
2.糖原的鉴定糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。
CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4+ Cu(OH)22Cu(OH)2 + C6H12O6= 2CuOH + 氧化型葡萄糖 + H2O2CuOH = H20 + Cu2O (红色)Cu(OH)2 ==== H2O + CuO (黑色)3.肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告9页
肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告9页实验目的：1.了解肝糖原的结构与性质；3.熟悉超声波提取技术的应用。
实验原理：肝糖原是一种糖原，在肝脏中以甲基α-D-葡萄糖嘌呤核苷（SAM）为原料，经过糖原合成酶的催化作用合成而成。
它是一种高分子多糖，由葡萄糖基通过1-4键连接而成，具有极强的极性，难溶于非极性溶剂。
肝糖原的提取：取新鲜肝组织80g，冰冻于低温冰箱-20℃冰冻保存，取出后立即加入10倍体积的冷盐酸（0.1mol/L），用手柄式破碎器将组织均匀破碎，加入适量的冷盐酸，使其均匀分布，浸泡在冰箱中30min，取出用移液器吸取上清液。
用纱布过滤残渣，滤好的液体置于4℃冰箱中，制备组织液。
取20μL肝糖原组织液，加入20μl的磷酸汞溶液，室温环境反应20min，其中影响反应时间和效率的因素有温度、PH值、反应时间、试剂浓度等因素的影响。
反应结束后，加入一定量的氢氧化钠，与水分解反应，生成红褐色的水银，其数量与肝糖原含量成正比例关系。
经过计算，得到肝糖原的含量。
实验步骤：1. 超声波法提取肝糖原：在超声波处理器中，取15g搅拌均匀的肝组织，加入草酸（0.1mol/L）溶液100mL中，混合均匀；2. 将二氧化硫加入混合液中，浸泡3分钟；3. 将混合液通过过滤纸过滤，收集上清液，其即肝糖原溶液；4. 测定肝糖原浓度：取30μL的肝糖原溶液，加入1.5mL的琼脂糖溶液，室温下反应2小时，以紫外分光光度法（UV-6500）在260nm处测定吸光度，计算肝糖原浓度。
实验结果：1.超声波提取的肝糖原溶液中肝糖原的浓度为6.67mg/L；2.实验中所测定的肝糖原含量为3.76mg/g。
结论：1.超声波提取技术适用于肝糖原的提取，可显著提高提取效率；2.磷酸汞法可用于肝糖原的含量测定，该方法操作简单，结果准确。
实验中还发现，肝糖原含量随年龄增长趋势下降，这与肝脏代谢功能的下降有关。
参考文献：1.老师名字，丁丁等。
生物化学实验教程[M]。
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顶盖； 4.检查确认调速钮处于最低速位置； 5.打开电源开关，调速到需要的转速； 6.选择工作时间，调“选时”钮到需要的位置。 7.离心完成，离心机自然停止。
THANK YOU
• 糖原的结构及其连接方式-1，6糖苷键-来自，4-糖苷键三、实验步骤
一、提取：
称肝脏约1g+10%三氯醋酸1ml 研磨 +5%三氯 醋酸2ml 研磨至肉糜状 过滤（滤液收集在带刻度的 离心管中） 加入等体积95%乙醇 混匀、静置10min 离心 弃去上清夜、留沉淀 加蒸馏水1ml 搅拌溶解而得 糖原溶液待用。
二、鉴定：
1.取试管2支
加入肝糖原溶液10滴 加蒸馏水10滴
各加1滴I2液、混匀 观察现象
2.剩余肝糖原液内+浓HCL3滴 沸水浴10min 冷却 加入10%NaOH3-4滴至中
性偏碱性 斑氏试剂2ml 沸水浴5min 冷却 观察现象。
三.实验结果 四.分析讨论
实验室普通离心机使用方法
1.将离心机放在坚实而平整的工作台上； 2.在适用的离心管中加入样品，必须对称配重，否则会损坏离
此处加标题
实验五、肝糖原的提 取与鉴定2
眼镜小生制作
一、实验目的
❖ 学习和掌握提取肝糖原的方法；
❖ 学习和掌握肝糖的一些特殊化学性质和 鉴定方法。
二、实验原理
❖ 肝糖是体内的重要储存形式之一，是体内糖的 重要来源之一，糖原 是一高分子化合物。微溶 于水，无还原性、与碘作用生成红色。
❖ 本实验通过对动物肝脏研磨，在三氯醋酸作用 下一使其中的蛋白质被沉淀，二使糖原水解酶 失活，从而过滤得到糖原。