尿素(UREA)检测标准操作规程
血清尿素的测定标准操作规程
血清尿素的测定标准操作规程【目的】学习血清尿素(Urea)测定方法，了解其意义。
【原理】血清尿素（Urea）是蛋白质的正常代谢产物。
它的测定是常用的衡量肾小球功能的指标之一。
肾性血清尿素含量增加，提示肾小球损伤。
是研究药物肾毒性的重要指标之一。
【器材】兔固定架、注射器、烧杯、可见分光光度计、试管、水浴【药品】0.5%氯化高汞溶液、生理盐水【动物】家兔2只【方法】取家兔2只，1只注射氯化高汞5ml/kg（0.5%氯化高汞溶液1.0ml/kg)，另1只注射等量的生理盐水。
48小时后，从家兔耳静脉取血1ml，制取血清，按血清尿素测定方法测定血清尿素含量。
【结果】记录2只家兔血清尿素含量，比较并分析其差别。
附血清尿素(Urea)测定方法【原理】尿素与二乙酰在酸性反应环境中加热，缩合生成色素原二嗪化合物。
因二乙酰不稳定，不宜直接加入，可由化学反应生成。
通常由反应系统中二乙酰一肟与强酸作用，产生乙二酰。
二乙酰和尿素反应，缩合生成红色的二嗪。
根据颜色深浅确定尿素含量的多少。
【试剂】(1)酸性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%磷酸66ml。
冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉(CdSO4·8H2O)2g。
溶解后用蒸馏水稀释至1L，置棕色瓶中冰箱保存，可稳定6个月。
(2)二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml，溶解后，再用蒸馏水稀释至1L，置棕色瓶中，贮放冰箱内可保存半年。
(3)尿素标准贮存液（100mmol/L）:称取干燥纯尿素(MW=60.06)0.6g，溶解于蒸馏水中，并稀释至100ml，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内可稳定半年。
(4)尿素标准液应用液(5mmol/L)：取5.0ml贮存液用无氨蒸馏水稀释至100ml.【操作】按表T4-1进行混匀后，置沸水中加热12分钟，置冷水中冷却5分钟后，用分光光度计在波长540nm，以空白管调至零点。
比色读取标准管及测定管的吸光度。
UREA 项目操作手册
SOP标准操作程序UREA 尿素（货号：OSR6134，OSR6234）一、 目的：规范尿素测定的操作程序，确保尿素测定的结果准确二、 适用范围：在Beckman Coulter AU 分析仪上定量测定人血清中的尿素（UREA ） 三、 临床意义尿素在肝脏中合成，它是蛋白质和氨基酸代谢的最终产物。
因此，尿素合成取决于每日的蛋白质摄入量和内源性蛋白质代谢。
在这些代谢过程中产生的绝大多数尿素通过肾小球过滤消除，40 – 60% 扩散返回血液中（与近端小管中的流速无关）。
远侧小管内的重新扩散取决于尿流，受抗利尿激素调节。
在利尿期间，最少量的尿素重新扩散进入血液，大量尿素被排泄到尿液中，血浆尿素浓度很低。
在抗利尿（在少尿性心力衰竭，缺水状态或口渴中，可能出现这种状况）期间，尿素重新扩散到小管内的速度增加，血浆尿素增加。
在肾前性和肾后性肾衰竭中，小管尿流减少，导致远侧小管中的尿素重新扩散增加，肌酐分泌增加。
在心脏代偿失调、蛋白质分解代谢增加和缺水时，尿素会发生肾前性增加。
尿素水平可能因肾脏因素而升高，例如急性肾小球肾炎，慢性肾炎，多囊肾，肾小管坏死和肾硬化。
尿素的肾后性升高可能由泌尿道梗阻引起。
血浆尿素浓度取决于肾灌注、尿素合成速度和肾小球滤过率 (GFR)，在急性肾功能衰竭，慢性肾衰竭和肾前性氮质血症中，可能会升高。
在透析患者中，尿素浓度代表蛋白质的降解，也是代谢状态的指标。
在肾衰竭终末期，尿毒素病征（特别是与胃肠系统有关的尿毒素病征）与尿素浓度有密切的相关性。
在肾功能的鉴别诊断中，血清尿素和血清肌酐通常会一起测定。
四、 方法原理在水和尿素酶存在的情况下，尿素被水解，产生氨和二氧化碳。
在谷氨酸脱氢酶 (GLDH) 存在的情况下，上一反应中产生的氨与 2-酮戊二酸和NADH 结合，产生谷氨酸盐和 NAD+。
单位时间 NADH 吸光度的降低与尿素浓度成正比。
反应原理五、 标本的采集与处理5.1. 受检者的准备：空腹，采集前静坐5min ，如有输液，应在停止输液3min 后在另一侧肢体静脉采集。
血清尿素UREA测定
血清尿素UREA测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理在下述反应中，NAD+生成速率与样本中尿素（尿素氮）的浓度成正比。
通过在340 nm处测定固定时间间隔内吸光度的下降速率，即可测得样本中尿素（尿素氮）的浓度。
尿素酶尿素 + 2H2O 2 NH4＋ + 2 HCO3－谷氨酸脱氢酶NH4＋+α-酮戊二酸+NADH+H+ L-谷氨酸+NAD＋+H2O3 标本：3.1 病人准备：血清无特殊要求。
要留取24小时尿样。
3.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。
无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。
用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。
3.3标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。
尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司UREA试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：α-酮戊二酸7.5mmol/L谷氨酸脱氢酶＞800U/LNADH 0.35mmol/L二磷酸腺苷 1.5mmol/L Tris缓冲液115mmol/L试剂2（R2）：Tris缓冲液115mmol/L尿素酶＞40000 U/L α-酮戊二酸7mmol/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.1.5 注意事项：试剂中含有防腐剂叠氮化钠，可能存在一定的刺激作用，请勿直接接触皮肤、眼睛。
二乙酰一肟法测定血清尿素
(无色)
(粉红色)
三、器材
1、主要器具
试管与试管架
微量移液器
三用水浴箱
紫外可见分光光度计
四、试剂
1.酸性试剂
离子水约100ml、浓硫酸44ml、85%
磷酸66ml、氨基硫脲50mg及硫酸镉(CdSO4·8H2O) 2g。
2.二乙酰一肟溶液 3.尿素标准贮存液(100mmol/L) 4.尿素标准应用液(5mmol/L)
实验一：二乙酰一肟法测定血清尿素
一、实验目的
1.掌握血清尿素的测定原理和方法。
2. 了解尿素测定的参考范围及临床意义。
二、实验原理
尿素（urea）在强酸、加热的条件下，与
二乙酰缩合生成红色的二嗪化合物（Fearon反
应），其颜色深浅与尿素含量成正比。与同样
处理的标准液在540nm处比色，求得尿素含量。 由于二乙酰不稳定，一般由二乙酰一肟与强酸 作用产生。其反应式如下：外,常见
于肝功能衰竭患者。
九、方法学评价
1．本法试剂单一，方法简便，但试剂具毒性和腐蚀
性。在标本数量多时加热开始难以达到100℃,各管 间受热温度也可能不一致,因而本法重复性不佳.若
改善加热条件,如采用在水浴锅底部加置高约5mm
的网垫,在网垫上加热显色,可使CV由不加网垫时的
6.46%降至2.99%。
2．线性上限仅达7.14mmol/L；回收率为96%～ 102.1%。
3．二乙酰一肟法的主要干扰来自血清中存在的含
氮化合物。很多其它化合物在结构中会有尿素的
残基，如瓜氨酸、四氧嘧啶和尿囊素，虽然也会
产生一种带颜色的产物，但这些化合物在血清中
浓度很低，故很少引起明显的干扰。另一些其它 的化合物在血清中浓度高，但这些色素的最大吸 收峰不同，因此不产生明显干扰。胆红素达 171μmol/L、血红蛋白达10g/L均无影响。
尿素检验操作规程
1.目的：规范尿素检验操作，保证尿素的质量。
2.范围：适用于本公司车间用尿素的检验。
3.责任：质量管理科、中心化验室主任、检验员对本规程的实施负责。
4.检验依据：GB2441.1-20015.取样依据：按《原辅料取样标准操作规程》取样。
6.内容:6.1 外观：无色结晶或白色结晶性粉未。
6.2 鉴别◆溶剂：硝酸为分析纯；水为纯化水；◆测定方法：取本品0.1g, 加水1ml溶解后，加硝酸1ml，即生成白色结晶性沉淀。
6.3 含量◆试剂与溶液3%硫酸铜溶液、硫酸、20%NaOH溶液、4%硼酸溶液、甲基红指示液、0.2mol/L 盐酸标准液、锌粒◆仪器与设备电子天平、凯氏烧瓶、蒸馏瓶、冷却器、电炉、锥形瓶、滴定管◆操作方法取本品约0.15g，精密称定，置凯氏烧瓶中，加水25ml、3%硫酸铜溶液2ml与硫酸8ml；缓缓加热至溶液呈澄明的绿色后，继续加热30分钟，放冷，加水100 ml，摇匀。
沿瓶壁缓缓加20%氢氧化钠溶液75ml，自成一液层，加锌粒0.2g，用氮气球将凯氏烧瓶与冷凝管连接，并将冷凝管的末端伸入盛有4%硼酸溶液50ml的500ml锥形瓶的液面下；轻轻摆动凯氏烧瓶使溶液混合均匀，加热蒸馏，俟氨馏尽，停止蒸馏；馏出液中加甲基红指示液数滴，用盐酸标准液(0.2mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。
每1ml的盐酸液(0.2mol/L)相当于6.006mg的CH4N2O。
◆计算公式含量%= (V样－V空)·C×0.03003×F ×100%G式中：C——盐酸标准液之摩尔浓度(mol/L)V空——空白所耗标准液之体积(ml)V样——样品所耗标准液之体积(ml)G——样品重(g)F——力价◆结果判定若测得的结果不低于95.0%,则判定为符合规定;否则,判定为不符合规定。
7.文件变更历史:。
尿素检测标准操作规程SOP
还原型辅酶I（NADH)
0.3mol/l
α-酮戊二酸
13.0mol/l
不同批次的试剂不推荐混合使用
7.4储存条件有效期
试剂在2-8℃保存可稳定1年，试剂开瓶后于2-8℃可稳定1个月。
7.5参数设置
主波长
340nm
辅助波长
405nm
反应方法
速率法
反应温度
37℃
反应方向
向下
试剂1
200ulቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
样本
2.5ul
4.1生理性：高蛋白饮食可引起血尿素浓度和尿液排出量显著增高。成人血清尿素浓度男性比女性平均高出0.3-0.8mmol/l，并随着年龄增加有增高倾向。妊娠妇女由于血容量增加，尿素浓度比非孕妇低。
4.2病理性：分为肾前性、肾性、肾后性。①肾前性:主要是严重失水引起的血液浓缩，肾血流量減少及肾小球滤过率降低，从而使尿素潴留，可见于剧烈呕吐、肠梗阻和长期腹泻;②肾性:为最常见的因素，可见于急性肾小球肾炎、肾功能衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎等，在肾功能不全的代偿期可见尿素轻度升高(＞8.0mmol/L)，肾功能衰竭失代偿期，尿素可中度升高(17.9～21.4mmol/L)，肌酐也中度升高(442.0umol/L);尿毒症时尿素＞21.4mmol/L，肌酐也可达1800umol/L，为尿毒症的诊断标准之一;③肾后性:如前列腺肥大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤等都可能使尿路阻塞引起血尿素升高。血液尿素减少较为少见，除了妊娠、蛋白质营养不良等情況外。常表示有严重的肝病、肝坏死。
12.2尿素氮测定只是临床医师对患者进行诊断的指标之一，临床医师还要根据患者的体征、病史及其他的诊断项目、诊断手段进行综合判断。
13.性能指标
13.1线性范围：在（0.3-35.7）mmol/L范围内：a)线性相关系数（r）应>0.995;b)（0.3-10.0）mmol/L范围内，线性偏差应≦2.0mmol/L;（10.0-35.7）mmol/L范围内，线性偏差应该≦10.0%。
尿素检测--检测技术
迪信泰检测平台
尿素检测
尿素（Urea），又称碳酰胺（Carbamide)，是哺乳动物和某些鱼类体内蛋白质代谢分解的主要含氮终产物，也是目前含氮量最高的氮肥。
作为一种中性肥料，尿素适用于各种土壤和植物。
它易保存，使用方便，对土壤的破坏作用小，是目前使用量较大的一种化学氮肥。
工业上用氨气和二氧化碳在一定条件下合成尿素。
迪信泰检测平台采用液相质谱联用(LC-MS)的方法，使用Thermo Scientific的
U3000快速液相色谱对样品进行分离，Thermo Scientific™ Q Exactive™对样品进行鉴定，可高效、精准的检测尿素的含量变化。
此外，我们还提供其他极性小分子系列检测服务，以满足您的不同需求。
LC-MS测定尿素样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关参数（中英文）。
3.质谱图片。
4. 原始数据。
5. 尿素含量信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
尿素检验标准操作规程
3．[检查]
3.1 仪器与用具
分析天平 烧杯 垂熔玻璃坩埚
3.2 试药与试液
乙醇
3.3检查项目与操作方法
3.3.1 氯化物
取本品1.0g，照氯化物检查法（见《中国药典》2005版二部附录Ⅷ A）检查，与标准氯化钠溶液7.0ml制成的对照液比较，不得更浓为符合规定（0.007%）。
4．[含量测定]
4.1仪器与用具
分析天平 凯氏烧瓶 冷凝管 500ml锥形瓶
4.2 试药与试液
3%硫酸铜溶液 20%氢氧化钠溶液 4%硼酸溶液 硫酸 锌粒
甲基红指示液
盐酸滴定液（0.2mol/L）
4.3 操作方法
取本品约0.15g，精密称定，置凯氏烧瓶中，加水25ml、3%硫酸铜溶液2ml与硫酸8ml，缓缓加热至溶液呈澄明的绿色后，继续加热30分钟，放冷，加水100ml，摇匀，沿瓶壁缓缓加20%氢氧化钠溶液75ml，自成一液层，加锌粒0.2g，用氮气球将凯氏烧瓶与冷凝管连接，并将冷凝管的末端伸入盛有4%硼酸溶液50ml的500ml锥形瓶的液面下；轻轻摆动凯氏烧瓶，使溶液混合均匀，加热蒸馏，俟氨馏尽，停止蒸馏；馏出液中加甲基红指示液数滴，用盐酸滴定液（0.2mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml盐酸滴定液（0.2mol/L）相当于6.006mg的CH4N2O。
3.3.4炽灼残渣
取本品，按炽灼残渣检查法（见《中国药典》2005版二部附录Ⅷ N）检查，不得过0.1%为符合规定。
3.3.5重金属
取本品1.0g，加水20ml溶解后，加0.1mol/L盐酸溶液5ml，按重金属检查法（第一法）(见《中国药典》2005版二部附录Ⅷ H第一法)检查，含重金属不得过百万分之二十为符合规定。
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深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司尿素测定方法
2、适用范围
适用于尿素的测定
3、试剂仪器
3.1试剂：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司原装试剂盒
3.2未开启的试剂盒避光保存于2℃—8℃有效期一年。
试剂不可以冰冻。
4、操作程序
4.1方法原理
脲酶
尿素+ 2H2O————→2N H4+ + CO32-
谷氨酸脱氢酶
a-酮戊二酸+ NH4+ +NADH————→L-谷氨酸+ NAD+ + H2O
4.2样本要求
新鲜血清或肝素血浆，样本收集后应尽快测定，必须避光保存，避免使用溶血样本。
4.3上机操作
4.3.1试剂装载、校准、样品和质控血清分析操作详见“《迈瑞BS-220全自动生化分析仪标准操作、维护、保养规程》”
4.3.2校准“
4.3.2.1 标准液的准备：校准品使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司配套冻干品，按说明书要求稀释后分装，-20℃冷冻保存，用前提前15分钟从冰箱取出，复溶到室温后上机检测。
4.3.2.2校准程序：每30天需要定标一次。
当有以下情况时需重新定标：
1）换试剂批号或出现质控漂移时；
2）当仪器做完保养后；
3）仪器进行零件更换时。
每次试验前用准备好的校准品进行定标，定标通过后进行检测。