β-半乳糖苷酶(β-GAL)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
LacZ染色试剂盒使用说明书
华越洋⽣生物提供 QQ: 1733351176LacZ染⾊色试剂盒使⽤用说明书β-‐Galactosidase S taining K it M annual编号 名称 产品规格北京华越洋生物RS3601-‐23 LacZ染色试剂盒 250次分析基本信息：大肠杆菌中的LacZ基因是应用极广的报告基因之一，被用来检测表达载体介导的基因转移效率，也用于基因启动子研究。
LacZ编码β-‐半乳糖苷酶，该物质非常稳定，能抵抗蛋白酶的水解，并且可以利用许多底物，包括X-‐gal。
X-‐Gal是β-‐半乳糖苷酶（β-‐galactosidase）的显色底物，在β-‐半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物，所以可以轻易的检测出LacZ基因的表达。
The LacZ gene from E. coli is one of the most commonly used reporter genes f or t esting t he e fficiency o f e xpression v ector m ediated g ene t ransfer and for studying the regulation of promoters of genes. The LacZ gene encodes the enzyme β-‐galactosidase, which is very stable, resistant to proteolytic d egradation, c an u tilize a v ariety o f s ubstrates a nd c an b e e asily assayed in situ. The β-‐Galactosidase staining kit utilizes X-‐gal as the substrate.产品说明：华越洋的β-‐半乳糖苷酶染色试剂盒利用X-‐gal作为底物，配合试剂盒内提供的其他试剂，可以完成250次染色反应。
小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA试剂盒使用说明书本
小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA试剂盒使用说明书本本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中β半乳糖苷酶(βGAL)的含量。
试验原理：βGAL试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知βGAL浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将βGAL和生物素标记的抗体同时温育。
小鼠β半乳糖苷酶ELISA试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中βGAL的浓度呈比例关系。
试剂盒组成：自备材料蒸馏水。
加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。
安全性避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
衰老相关β-半乳糖苷酶染色
衰老相关β-半乳糖苷酶染色细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒产品编号产品名称规格BL133A细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒100 T产品简介：细胞衰老时，SA-β-Gal (senescence-associated β-galactosidase)活性水平会上调，此时本试剂盒可以对衰老的细胞或组织进行染色检测。
正常细胞经过有限次数的分裂后停止分裂，出现不可逆的生长停滞，此时细胞仍然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化，通常表现为细胞体积变大，与衰老相关的β-半乳糖苷酶为活化状态。
β-半乳糖苷酶是细胞溶酶体内的水解酶，通常在pH 4.0时表现活性，但在衰老细胞内该酶在pH 6.0条件下表现活性。
本试剂盒即是基于此现象及原理，以X-Gal为底物，衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶催化该底物生成蓝色产物，表现为细胞胞质有蓝色沉积物，在光学显微镜下即可很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。
本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测，也可以用于组织切片的衰老检测。
本试剂盒仅染色衰老细胞，对衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞等不会染色。
产品组成:组分名称规格BL133A-1β-半乳糖苷酶染色固定液100 mLBL133A-2β-半乳糖苷酶染色液A100 mLBL133A-3β-半乳糖苷酶染色液B 1.2 mLBL133A-4DMF（二甲基甲酰胺） 5 mlBL133A-5X-Gal（粉末）100 mg使用方法：见说明书注意事项：1、X-Gal粉末配制成溶液后，分装成小份-20℃保存，3个月内有效，X-Gal溶液需室温完全解冻混匀后再使用。
2、β-半乳糖苷酶染色液A和B需提前恢复至室温后再使用，配制好的染色工作液需充分混匀无沉淀方可使用。
3、衰老细胞β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH条件，不能在CO2培养箱中进行孵育显色，否则会影响染色工作液的pH，导致染色失败。
动物细胞β半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说
动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂是一种旨在使用化学方法，快速有效地裂解动物细胞，通过高速离心，获得澄清细胞裂解悬液，在β-半乳糖苷酶反应体系里，以人工合成的二恶二酮类化合物作为发光底物，水解所产生的发光产物，通过发光探测仪（Luminometer）测定其相对冷光单位（RLU）的变化，以此进行测算酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
广泛应用于基因组学、蛋白质组学和其它分子生物学研究。
其适用于转基因后的活体细胞外源性以及衰老细胞内源性半乳糖苷酶活性分析。
产品即到即用，性能稳定，参数优化，操作简便、高度敏感。
技术背景大肠杆菌的标志基因Lac Z编码β-半乳糖苷酶（β-galactosidase ；β-gal），在其催化作用下，半乳糖可从乳糖的水解作用中得到。
β-半乳糖苷酶非常稳定，对蛋白水解降解作用抗性强，且容易测试。
因此β-半乳糖苷酶成为目前最常用的报告基因，以评价载体转染的效果。
在衰老细胞内，显示β-半乳糖苷酶活性。
甲氧基二恶二酮氯代金刚烷苯基吡喃半乳糖苷（3- (4-methoxyspiro [1, 2-dioxetane-3, 2'- (5'-chloro) tricyclo [3.3.1.13,7]-decan]-4-yl-phenyl -ß-D-galacto pyranoside），是一种二恶二酮（dioxetane）类发光底物，以替代乳糖，在β-半乳糖苷酶（pH7.8）的催化下，去糖基化后，产生二恶二酮，进而在多聚苯甲基乙烷乙烯基苯甲氯化铵和荧光素钠（poly (benzyldimethylvinylbenzyl) ammonium chloride and sodium fluorescein）的启动反应作用下，同时pH调整到12，由此二恶二酮分解，发出冷光，在冷光仪（475nm波长）下，检测发光信号，来测定β-半乳糖苷酶的活性。
β-半乳糖苷酶酶活力测试系统及pSV-β-半乳糖苷酶载体
1) 什么是β-半乳糖苷酶酶活力测试系统？用β-半乳糖苷酶对照载体转染细胞后，可用β-半乳糖苷酶酶活力测试系统直接，方便地测试β-半乳糖苷酶酶活力。
β-半乳糖苷酶载体可用着阳性对照载体，测试哺乳细胞的转染效率。
细胞抽提物与提供的溶液及底物ONPG共保温（硝基苯吡喃半乳糖,o-nitrophyl-B-D-galactopyranoside）。
用分光光度计或ELISA读数仪测定光度数。
应在420nm处测定吸收。
2) β- 半乳糖苷酶酶活力测试系统的一般活力范围？用分光光度计，β-半乳糖苷酶酶活力的标准曲线的范围是0到9个毫单位。
用ELISA读数仪，β-半乳糖苷酶酶活力的标准曲线的范围是0到5个毫单位。
3) β- 半乳糖苷酶酶活力测试系统应保存在哪种温度，保存期是多久？酶应保存在4o C，β-半乳糖苷酶在-20o C冰冻后，会失活。
碳酸钠应在室温保存。
2×测试溶液应保存在-20o C。
如操作得当，系统所有组份从购买之日起在12个月内有效。
4) β- 半乳糖苷酶的酶活力单位是如何定义的？1个单位的β-半乳糖苷酶的酶活力定义为：每分钟，37o C, pH7.5时，水解1微摩尔的ONPG成硝酸苯酚及半乳糖。
用银染序列DNA测序系统需要额外的装备吗？额外的装备包括：热循环仪、SigmaCote溶液（Sigma 目录号SL-2）、无核酸酶的纯水（目录号P1193）、冰乙酸、震荡器和旋转平台、比测序胶大的聚乙烯盒。
5) 为什么β-半乳糖苷酶酶活力测试系统要提供报告基因裂解溶液？报告基因裂解溶液可使β-半乳糖苷酶，氯霉素乙酰转移酶（CAT）及荧光素酶的测试能用一种细胞抽提物完成。
在多种细胞株中的测试表明，β-半乳糖苷酶在报告基因裂解液中的活力比用冻/融法制备的抽提物的活力更高。
6) 用荧光素酶细胞培养裂解试剂制备的细胞抽提物是否能用于测试β-半乳糖苷酶酶活力？可以用细胞培养裂解试剂（CCLR）制备的细胞抽提物测试β-半乳糖苷酶活力。
β-半乳糖苷酶活性测定方法
β-半乳糖苷酶活性测定方法β-半乳糖苷酶活性测定（β-galactosidase assays）1、将过夜培养的菌液按1%接种量到新鲜培养基中培养，待OD600至0.6时取出，放置于冰上；（或可检测不同OD600时，菌的酶活性）2、取50-100μl 菌液至1.5 ml 的离心管中，加370-420μl Z buffer；3、加20 μl 氯仿和10 μl 0.1% SDS，振荡混匀，裂解细胞，放置于冰上30分钟；4、向离心管中加入100 μl 浓度4 mg/ml 的ONPG，混匀后立即置于30℃反应30-60分钟；5、待颜色变黄后，加入250 μl 1 M Na2CO3中止反应，准确记录变色反应的时间；6、取200μl上清，测定420 nm 和550 nm 处的吸光度；7、计算β-半乳糖苷酶酶活力：Miller Units = 1,000×[(OD420－ 1.75×OD550)] / (t×V×OD600)，其中，OD420和OD550----显色后的反应液读数；OD600----用于显色分析的培养液的细菌密度；t ----显色反应时间(单位min)；V ----用于显色分析的培养液体积(单位ml)。
Z buffer (总体积100 ml)：Na2HPO4·12H2O 100mM 3.5814 gNaH2PO4·H2O 40mM 0.624gKCl 10mM 0.07455gMgSO4·7H2O1mM 0.0246gβ-mercaptoethanol 5.4μl / ml 540μl加水到总体积90 ml，待试剂溶解后调pH 至7.0，最后定容到100 ml，4℃储存。
Substrate solution(总体积10ml)----现用现配Na2HPO4·12H2O 60mM 0.215 g NaH2PO4·H2O 40mM 0.0624g ONPG 4mg/ml 0.04g终止液（100ml）：Na2CO3 1M 10.6g。
β-半乳糖苷酶染色(组织染色)
β-半乳糖苷酶染色（组织）检测原理：一般认为绝大多数正常细胞仅有有限的分裂能力，在不能分裂后就进入衰老(senescence)状态。
此时细胞仍然是存活的，但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。
衰老的细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂，并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊，不同于一些损伤诱导的细胞休眠，也不同于细胞生长接触抑制的情况。
衰老细胞通常体积变大，并表达在pH6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)。
细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式，同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。
由此以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物。
从而在光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞。
操作步骤：（1）将石蜡组织切片置于65°C恒温箱，烤片1h左右。
（2）脱蜡：二甲苯I 10min→二甲苯II 10min →梯度酒精（由高到低）各5min。
（3）1×PBS 洗涤3次，每次 5min。
注：对于冷冻切片直接按照以下步骤进行。
（4）加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于 15min。
（5）1×PBS 洗涤3次，每次 5min。
（6）加入适当量的染色工作液。
（7）37℃孵育过夜，最好把整个切片浸泡在染色工作液中。
注：37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。
（8）1×PBS 洗涤3次，每次 5min。
（9）脱水：梯度酒精（由低到高）各5min → 二甲苯I 10min→ 二甲苯 II 10min。
（10）加上封片液封片后4℃可以保存较长时间。
（11）普通光学显微镜下观察。
光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞。
注：所用试剂按照β-半乳糖苷酶染色试剂盒说明配制。
β-半乳糖苷酶染色试剂盒市面上有很多种，但检测方法几近相同，具体还是要参照相应的试剂说明书来操作。
Elabscience
（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®β-半乳糖苷酶(β-GAL)比色法测试盒β - G alactosidase (β –GAL) Activity Assay Kit产品货号：E-BC-K631-M产品规格：96T(40 samples)检测仪器：酶标仪(390-410 nm)使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
用途本试剂盒适用于检测血清(浆)、动植物组织以及细胞样本中的β-半乳糖苷酶的活力。
检测原理β-半乳糖苷酶能够催化底物硝基苯基吡喃半乳糖苷生成硝基苯酚，硝基苯酚在400 nm有最大吸收峰，通过测定在单位时间内吸光度值的变化量来计算β-GAL的酶活。
本试剂盒检测组织或细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用本公司BCA试剂盒(货号E-BC-K318-M)进行测定。
提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。
对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。
所需自备物品仪器：酶标仪(390-410 nm，最佳检测波长400 nm)、离心机、恒温箱(37°C) 试剂：双蒸水试剂准备①检测前，所有的试剂平衡至室温。
②试剂二工作液配制：每瓶试剂二加入2 mL试剂一，在90-100°C水浴锅中加热溶解，冷却至室温待用；未用完部分可2-8°C保存7天。
③1 mmol/L标准品溶液配制：试剂五用双蒸水稀释，按体积比1：19进行稀释(按需配制)，2-8°C保存7天。
④不同浓度标准品的稀释：样本准备①样本处理血清(浆)样本：直接测定，若样本浑浊，可10000×g离心10 min后取上清使用。
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β-半乳糖苷酶（β-GAL）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
货号：BC2580
规格：50T/24S
产品内容：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入5mL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体80mL×1瓶，4℃保存。
标准液：液体1ml×1支，4℃保存，5μmol/ml对硝基苯酚溶液。
产品说明：
β-GAL(EC3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷键水解，此外还具有转半乳糖苷的作用。
β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量，还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解，释放自由的半乳糖。
β-GAL分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。
自备用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提
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取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；15000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取
液），进行冰浴匀浆。
15000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、标准液的处理：用蒸馏水将标准液稀释至200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/ml.
二、测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）：
试剂名称（μL）测定管对照管标准管
试剂一200
蒸馏水200
试剂二250250
样本5050
迅速混匀，放入37℃准确水浴30min
标准液500
试剂三100010001000
充分混匀，400nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定-A对照。
每个测定管需设一个对照管。
三、β-GAL活性计算：
根据标准管的吸光度（x，减去浓度为0的标准管OD值）和浓度（y，nmol/ml）建立标准曲线，将△A带入标准曲线中，计算样品生成的产物量（nmol/ml）。
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL活力(nmol/h/mg prot)=(y×V反总)÷(V样×Cpr)÷T
=20×y÷Cpr
需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
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（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL活力(nmol/h/g鲜重)＝(y×V反总)÷(W×V样÷V样总)÷T
=20×y÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-GAL活力(nmol/h/104cell)=(y×V反总)÷(500×V样÷V样总)÷T
=0.04×y
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
V反总：反应体系总体积，0.5mL；
V样：加入反应体系中样本体积，0.05mL；
V样总：加入提取液体积，1mL；
W：样本质量，g；
500：细胞或细菌总数，500万；
T：反应时间，0.5h。
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