结核分枝杆菌的形态染色.
结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis)
Derivative,PPD
BCG-PPD
结核菌素试验
原理: IV超敏反应 材料: 旧结核菌素；纯蛋白衍生物 方法: 前臂皮内注射
结果: 硬结直径 <0.5cm（－）; 0.5-1.5 cm（+）; ≥1.5cm（+++) 应用: 诊断 ;特异免疫功能测定; 细胞免疫功能测定
结核菌素试验的意义
1. 阳性： ① 感染过结核，或接种过BCG，但不一定患病。 ② 强阳性者可能为活动性结核。 ③ 其它非典型分枝杆菌，如奴卡菌属等。 2．阴性： ① 感染初期。 ② 严重结核病患者或患有其它传染病。 ③ 机体免疫功能低下，特别是细胞免疫功能低下。 ④ 老年人。
一、生物学性状
（一）形态与染色 Ｇ＋棒状杆菌，有异染颗粒
（二）培养特性 需氧或兼性厌氧，吕氏血清斜面生长快、异染颗粒
明显，分离培养用亚碲酸钾血平板，吸收元素碲还原为 单质碲，菌落黑色。抑制杂菌。 （三）抵抗力：
耐冷、干燥、磺胺、庆大霉素、卡那霉素，但对湿 热、常用消毒剂、青、红、氯敏感
结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis)
结核病的世界流行状况
由于全球结核病发病呈日渐上升的趋 势，WHO于1995年起将每年的3月24日 定为“世界防治结核病日”。回升原因：
⑴ 预防及治疗不规范 ⑵ 耐药率上升 ⑶ AIDS、吸毒、酗酒、贫困 ⑷ 高危人群的流动及移民
结核分枝杆菌
(Mycobacterium tuberculosis)
1882年RobertKoch (德国)发现其为结核 病病原体
1886年Lenmann与Nenmann命名为结 核分枝
杆菌，简称结核杆菌
一、生物学性状
结核分枝杆菌
耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多
二、致病性和免疫性
（一）致病物质
1. 脂质：磷脂（phosphatide） 索状因子 (cord factor） 硫酸脑苷脂 (sulfatide) 蜡质 D (wax-D脂质：
磷脂：能促进单核细胞增生,增强菌体蛋白质的 致敏作用,抑制蛋白酶对病灶组织的溶解,形成 干酪样坏死；使炎症中的巨噬细胞转变为类上 皮细胞，从而形成结核结节。
疫功能低下者；艾滋病；肿瘤；用过免疫抑制剂 者。
5. 实际应用
(1) 选择接种BCG对象，了解BCG接种是 否成功
(2) 流行病学调查 (3) 婴幼儿结核病诊断的参考 (4) 细胞免疫功能的测定
四、微生物学检查法
1．采集标本（痰液） 集菌（4g/L NaOH处理15min）
2. 涂片镜检：抗酸染色法 3. 分离培养（罗氏培养基，3-4周） 4. 动物试验（豚鼠） 5. 快速诊断
结核分枝杆菌
(M. tuberculosis)
• 分枝杆菌属的主要特点：
– 直或微弯曲，分枝状生长 – G+,但不易着色:细胞壁含有大量脂质 – 又称抗酸杆菌 (acid-fast bacilli)
常用抗酸染色鉴定，呈抗酸染色阳性
• 分枝杆菌属细菌种类繁多，可分为：
– 结核分枝杆菌 – 牛分枝杆菌 – 麻风分枝杆菌
索状因子：抑制白细胞游走引起慢性肉芽肿。 蜡质D：具有佐剂作用,可激发机体产生迟发型
超敏反应。 硫酸脑苷脂：使细菌在吞噬细胞中长期存活。
2.蛋白质
与蜡质D结合产生迟发型超敏反应,并 引起组织坏死病理过程及全身中毒症状, 促进结核结节形成。
(二)所致疾病
所致疾病
结核病 以肺结核（痨病）常见
5.50结核分枝杆菌生物学形状
③蜡质D(wax D):可激发迟发型超敏反应。 ④硫酸脑苷脂(sulfatides): 能抑制巨噬细胞吞噬体与溶酶体融合。
抑制吞噬溶酶体融合
3. 菌体成分及作用 (2)蛋白质： 结核菌素:引起迟发型
超敏反应 ★
超敏反应
(3)多糖:中性粒细胞增多 (4)核酸:rRNA,特异性细胞免疫 (5)荚膜
结核分枝杆菌 Mycobacterium tuberculosis
郭霍 我国结核杆菌感染人数居世界第二位
结核分枝杆菌1 ——生物学性状
学习内容
1. 形态染色 2. 培养特点 3. 菌体成分及作用 4. 抵抗力 5. 变异性
1. 形态染色
细长略弯曲,抗酸阳性 ★
结核分枝杆菌
抗酸染色
2. 培养特点 ★
馋,懒,丑 馋:营养要求高(罗氏培养基) 懒:生长缓慢 丑:菌落干燥粗糙
罗氏培养基
菌落
3. 菌体成分及作用
(1)脂质： ★
①磷脂:刺激单核细胞增生,抑 制蛋白酶分解,使病灶组织溶解 不完全,形成结核结节和干酪样 坏死。 ②索状因子:破坏线粒体膜, 抑制白细胞游走,引起慢分及作用
4. 变异性 易产生形态,毒力,耐药变异
Assignment
1. 结核分枝杆菌为何生长缓慢？ 2. 该菌菌落为何粗糙？菌落粗糙程度与细 菌的毒力之间是否有关联？
真诚感谢上述所用图片的所有作者！！
Thanks for your attention！
4. 抵抗力 三耐
四怕
• 耐干燥 • 耐酸碱 • 耐一般消毒剂
• 怕湿热 • 怕紫外线 • 怕乙醇 • 怕抗痨药
5. 变异性
• 毒力变异： 牛结核杆菌经13年230代培 养,制成卡介苗BCG(减毒活
结核分枝杆菌的鉴定要点
结核分枝杆菌的鉴定要点结核分枝杆菌是一种引起结核病的病原体，它有着很高的致病性和感染性。
为了正确认识和鉴定结核分枝杆菌，以下是一些重要的鉴定要点：1. 镜检-结核分枝杆菌可以通过显微镜下观察到。
使用酸性染色法，如抗酸染色和荧光染色可以使细菌显现出红色（抗酸染色）或绿色（荧光染色）。
2. 培养-分枝杆菌在固体或液体培养基上生长缓慢，通常需要2-6周的时间才能形成可见的菌落。
固体培养基上的菌落呈干燥而扁平的形态，有橘黄色的色素。
液体培养基上的培养物通常呈黄绿色或橙黄色。
培养时应该注意对临床样本进行适当的稀释以避免过多的其他细菌的干扰。
3. 生化鉴定-利用一系列特殊的生化试剂，可以鉴定结核分枝杆菌的生化反应。
这些试剂包括硝基硝酸盐、尼龙红、呋喃四羧酸等。
结核分枝杆菌在这些试剂的作用下具有独特的反应形式，可以通过观察颜色变化或者气体产生等判断。
4. 分子生物学鉴定-利用PCR（聚合酶链式反应）及其变体技术，可以对结核分枝杆菌的特定基因进行检测和鉴定。
这些特定基因包括IS6110序列和16S rRNA基因等。
分子生物学鉴定方法通过特定的引物和核酸杂交可以迅速、准确地确认分枝杆菌的存在。
5. 药敏试验-由于结核分枝杆菌对抗结核药物的敏感性存在变异，药敏试验可以帮助确定分枝杆菌的抗药性。
该试验通过将分枝杆菌分离株培养在含有不同抗结核药物浓度的培养基上，观察菌落的生长情况，从而确定其对抗结核药物的敏感性。
总之，结核分枝杆菌的鉴定是一项复杂而关键的工作。
通过镜检、培养、生化鉴定、分子生物学鉴定和药敏试验等多种方法的综合应用，可以准确、快速地确定结核分枝杆菌的存在及其特性，为结核病的诊断和治疗提供有力的依据。
结核分枝杆菌的抗酸染色原理
结核分枝杆菌的抗酸染色原理一、简介结核分枝杆菌是引起结核病的主要病原体，对其进行准确快速的检测具有重要意义。
抗酸染色是一种常用的方法，能够直接观察到结核分枝杆菌的存在和形态特征。
二、抗酸染色的原理抗酸染色是通过特殊的染色方法，使结核分枝杆菌在显微镜下呈现红色或紫色，而其他非酸酸杆菌则呈现蓝色。
2.1 理论基础结核分枝杆菌具有特殊的细胞壁结构，其细胞壁主要由脂质和脂酸构成，其中包含大量的酚类脂质，这种脂质能够抵抗常规染色方法中的酸性染料。
2.2 染色原理抗酸染色采用的是富尔曼-韦尔染色法，主要包括以下几个步骤：1.制备菌液：从患者的痰液或其他病变部位采集样本，制备结核分枝杆菌的菌液。
2.固定：将菌液涂在玻璃片上，用火焰烘烤使其固定。
3.酸性染料染色：将固定的菌液涂上红色的酸性染料，如碱性红或苏木精。
4.脱色：用酸醇溶液洗去多余的染料。
5.革兰染色：用紫色的革兰染料染色。
6.脱色：用醇洗去多余的染料。
7.固定：用盐酸醇固定染色。
8.洗净：用水洗净玻璃片。
9.干燥：让玻璃片自然干燥。
10.镜检：将染色好的玻璃片放在显微镜下观察，结核分枝杆菌呈现出红色或紫色。
三、抗酸染色的应用抗酸染色广泛应用于结核病的诊断和治疗过程中。
3.1 诊断结核病通过抗酸染色，医生可以直接观察到患者样本中是否存在结核分枝杆菌，从而判断是否患上结核病。
3.2 监测结核治疗效果在治疗结核病的过程中，通过定期进行抗酸染色检测，可以评估患者的结核菌负荷，判断治疗是否有效。
3.3 检测结核菌耐药性结核分枝杆菌的耐药性是结核病治疗的重要指标之一。
抗酸染色方法可以辅助判断结核菌对抗结核药物的敏感性，从而指导药物的选择和调整。
四、抗酸染色的优缺点抗酸染色方法虽然在结核病的检测中具有一定的优势，但也存在一些局限性。
4.1 优点•简单快速：整个染色过程只需几分钟，可以在短时间内完成。
•直观可靠：直接观察到红色或紫色的结核分枝杆菌，确保结果准确可靠。
结核分枝杆菌
（1）原发感染
结核分枝杆菌 侵入肺泡 被肺泡中 吞噬细胞吞噬 在吞噬细胞内繁殖 导致 巨噬细胞裂解释放出的细菌 释放出大量细 菌在肺泡内引起渗出性炎症即为原发性灶。细菌 随淋巴管到达肺门淋巴结，引起淋巴结肿大称原 发综合征 感染3-6周，机体产生特异性细胞免疫，同 时也产生迟发超敏反应
机体免疫力低下时，原发感染灶恶化，结核 分枝杆菌经气管淋巴道或血流播散，形成全身性 粟粒性结核 。 当机体抵抗力强时，使感染灶形成结核结节。 淋巴结病灶逐渐纤维化和钙化，不治自愈。但病 灶内常有一定量的细菌长期潜伏，不断刺激机体 产生免疫。也可成为以后内源性感染的来源
2 肺外感染 结核杆菌可经血液循环引起肺外感染， 如脑、肾、结核，痰被咽入可引起肠结核、 结核性腹膜炎等。一般认为血中播散的大 多是L细菌
(三) 免疫性 人类对结核分枝杆菌的感染率甚高，但发病率 不高。这表明人体对结核分枝杆菌有相当强的 免疫力。 （1）结核的免疫为有菌免疫或称传染性免疫 。这种免疫系指结核分枝杆菌(或BCG) 进入机 体后使机体对细菌再次入侵有免疫力；而当细 菌或其成分从体内彻底消失后机体的免疫力也 随之消失。遗传因素决定对结核病的易感染性 ， HLA-Bw15为易感个体。
（三）抵抗力 结核分枝杆菌因细胞壁含有大量脂类，故对 理化因素抵抗力较强。耐干燥，在干燥的痰内 可存活6-8个月。含有结核分枝杆菌痰液的尘埃 经8-10d仍有传染性。此菌对化学消毒剂的抵抗 力也较一般细菌强，在3%HCl或6%H2SO4中不被杀 死。因此常用于处理有杂菌污染的检材，以便 进行分离培养。对湿热敏感，60℃30min可杀死 细菌；在70%-75%乙醇中数分钟即被杀死 ，对 紫外线敏感
病原生物学-结核病防治基础研究(下)
目
CONTENCT
录
• 结核病的病原学基础 • 结核病的流行病学基础 • 结核病的临床基础 • 结核病的预防和控制策略 • 结核病防治的未来展望
01
结核病的病原学基础
结核分枝杆菌的生物学特性
形态与染色特性
结核分枝杆菌呈细长或略带弯曲的杆菌，革兰氏染 色阳性。
耐药性控制
深入研究结核杆菌的耐药机制，通过基因编辑技术对结核杆 菌进行定向改造，降低其耐药性，同时加强耐药结核病的监 测和防控，防止耐药菌的传播。
新型诊断技术和方法的研发
快速诊断技术
开发敏感度高、特异性强、快速简便 的新型诊断技术，如基于免疫学、分 子生物学和生物信息学的诊断方法， 提高结核病的早期诊断率。
02
结核病的流行病学基础
结核病的全球分布和流行趋势
全球结核病负担
全球约有1000万结核病患者，每年约 有150万人因结核病死亡。
流行趋势
近年来，全球结核病发病率呈下降趋 势，但耐药结核病病例不断增加，成 为全球公共卫生威胁。
结核病的传播途径
空气传播
结核病患者咳嗽、打喷嚏或说话时，带有结核菌的飞沫被释放到 空气中，健康人吸入后感染。
接触传播
与结核病患者密切接触，如共用餐具、毛巾等生活用品，也可能 感染结核菌。
结核病的易感人群
免疫力低下人群
老年人、儿童、孕妇、身体虚弱或长期患病的人，以及免疫系统受损的人，如艾滋病患者、接受免疫抑制剂治疗 的人等。
特定职业人群
医务人员、社会工作者、监狱工作人员等，由于长期接触结核病患者，也属于易感人群。
生长条件
需氧兼性厌氧，最适生长温度为37°C，最适pH值为 6.5~6.8。
结核分枝杆菌的生物学特性
结核分枝杆菌的生物学特性结核分枝杆菌，简称结核杆菌，1882年RObeu Koch所发现，列人分枝杆菌属，是家畜、野生动物、禽类及人类结核病的病原菌。
1、形态与染色特性在动物病灶内的结核杆菌菌体正直或微弯曲，长1.5~4.0um，宽0.2~0.5um。
有时菌体末端具有不同的分枝，有的两端钝圆，无鞭毛，无荚膜和无芽孢，没有运动性。
单在，成双,间或成丛排列。
在人工培养基上，由于菌型、菌株和环境条件不同，可出现多种形态，如近似球形、棒状或丝状。
在电镜下观察本菌具有复杂结构：由微荚膜、细胞外壳的三层结构、胞浆膜、胞浆、间体、核糖体及中间核质构成。
本菌为革兰氏阳性菌。
由于结核分枝杆菌细胞壁中含有大量脂质而不易着色,一般苯胺染料难以着色。
若用加热或媒染剂处理使之染色后，可以抵抗盐酸．酒精的脱色作用。
齐-尼二氏对结核杆菌的抗酸染色法就是根据这个道理进行的，因为结核杆菌中含有脂类，染料一旦进入细胞内部很难脱出。
用上述方法染色，结核杆菌被染成红色，而其他非杭酸性菌和细胞杂质均呈蓝色。
2、培养特性本菌为严格需氧菌；最适生PH6．5~6．8，最适生长温度为37~37.5℃。
营养要求较高，培养常用罗氏培养基，内含蛋黄、甘油、天门冬素、马铃薯、无机盐及抵制杂菌生长的孔雀绿等物质。
本菌生长速度很慢，尢其是初代分离。
繁殖一代需18～24小时，分离培养需经2～4周才可见米黄色菜花状菌落生长。
在改良罗氏培养基上培养需4~6周结核杆菌对营养要求极高，必须在含有血清、鸡蛋、甘油、马铃薯及某些无机盐的特殊培养基上才能良好地生长。
初代分离培养，更是如此。
在固体培养基上菌落呈灰黄白色，干燥颗粒状，显著隆起，表面粗糙皱缩、菜花状的菌落。
在液体培养基内，于液面形成粗纹皱膜，培养基保持透明。
若加入吐温80于培养基中．可使结核杆菌呈分散均匀生长。
3、生化特性结核杆菌不发酵糖类，能产生过氧化氢酶。
对人致病的结核分枝杆菌现一般认为有人型、牛型、非洲型。
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