邻菲罗啉分光光度法测铁离子
铁离子测定的几种方法
铁离子测定的几种方法（邻菲啰啉法）本方法采用邻菲啰啉分子吸收光谱法测定铁含量，本方法适用于含Fe0.02～20mg/L范围工业循环冷却水中铁含量的测定。
1 方法提要用抗坏血酸将试样中的三价铁离子还原成二价铁离子，在pH2.5～9时，二价铁离子可与邻菲啰啉生成橙红色络合物，在最大吸收波长（510nm）处，用分光光度计测其吸光度。
本方法采用pH4.5。
2 试剂和材料2.1 硫酸；2.2 硫酸铁铵[NH4Fe(SO4)2·12H2O2]；2.3 硫酸：1＋35溶液；2.4 氨水：1＋3溶液；2.5 乙酸—乙酸钠缓冲溶液(pH=4.5)：称取164g乙酸钠，溶于水，加84mL冰乙酸，稀释至1000mL；2.6 抗坏血酸：20g/L溶液；溶解10.0g抗坏血酸于200mL水中，加入0.2g乙二胺四乙酸二钠（EDTA）及8.0mL甲酸，用水稀释至500mL，混匀，贮存于棕色瓶中（有效期一个月）；2.7 邻菲啰啉溶液：2.0g/L；2.8 过硫酸钾溶液：40.0g/L，溶解4.0g过硫酸钾于水中并稀释到100mL，室温下贮存于棕色瓶中，此溶液可稳定放置14d。
2.9 铁标准溶液Ⅰ：1mL含有0.100mgFe,称取0.863g硫酸铁铵，精确至0.001g，置于200mL烧杯中，加入100mL水，10.0mL浓硫酸，溶解后全部转移到1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
2.10 铁标准溶液Ⅱ：1mL含有0.010mgFe，取1mL含有0.100mgFe的铁标准溶液Ⅰ稀释10倍，只限当日使用。
3 仪器和设备分光光度计：带有厚度为3㎝的吸收池。
4 分析步骤4.1 工作曲线的绘制分别取0mL（空白），1.00mL，2.00mL，4.00mL，6.00mL，8.00mL，10.00mL铁标准溶液Ⅱ于7个100mL容量瓶中，加水至约40mL，加0.50mL(1＋35)硫酸溶液，调pH接近2(可投加一小块儿刚果红试纸，试纸变蓝pH即为2.5)，加3.0mL抗坏血酸溶液，10.0mL 缓冲溶液，5.0mL邻菲啰啉溶液。
总铁离子的测定—邻菲啰啉分光光度法
总铁离子的测定—邻菲啰啉分光光度法1 原理亚铁离子在在pH值3～9的条件下，与邻菲啰啉（1，10—二氮杂菲）反应，生成稳定的橙红色络合物离子:3C12H8N2＋Fe2+→﹝Fe(C12H8N2)3﹞2+此络合离子在pH值3～4.5时最为稳定。
水中三价铁离子用盐酸羟胺还原为亚铁离子，即可测定总铁。
2 试剂2.1 1＋1盐酸溶液。
2.1 1＋1氨水。
2.3 刚果红试纸。
2.4 10%盐酸羟胺溶液。
2.5 0.12%邻菲啰啉溶液。
2.6 铁标准溶液的配制称取0.864g硫酸亚铁铵﹝(NH4)2Fe (SO4)2·12H2O﹞溶于水，加2.5mL硫酸，移入1000mL 容量瓶中，稀释至刻度。
此溶液为1mL含0.1mg/L铁标准溶液。
吸取上述铁标准溶液10mL，移入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，此溶液为1mL含0.01mg铁标准溶液。
3 仪器3.1 分光光度计。
3.2 3cm比色皿。
4 试验步骤4.1 标准曲线的绘制分别吸取含铁0.01mg/mL的铁标准溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，mL于6只50mL 容量瓶中，加水至约25mL，各加1mm长的刚果红试纸，在试纸呈蓝色时，各瓶加1mL10%盐酸羟胺溶液，2mL0.12%邻菲啰啉溶液，混匀后用1＋1氨水调节使刚果红试纸呈紫红色，再加1滴1＋1氨水，使试纸呈红色，用水稀释至刻度。
显色10min后于510nm处，用3cm 比色皿，以试剂空白作参比，测其吸光度。
以吸光度为纵坐标，铁离子毫克数为横坐标，绘制标准曲线。
4.2 水样的测定取水样50mL 于150mL 锥形瓶中，放入1mm 长刚果红试纸，用1＋1盐酸溶液调节使水呈酸性，pH ＜3，刚果红试纸显蓝色。
加热煮沸10min ，冷却后移入50mL 容量瓶中，加10%盐酸羟胺溶液1mL ，摇匀，1min 后，再加0.12%邻菲啰啉溶液2mL ，用1＋1氨水调节pH 值，使刚果红试纸呈紫红色，再加1滴氨水，试纸呈红色后用水稀释至刻度。
邻菲罗啉分光光度法测定铁
邻菲罗啉分光光度法测定铁邻菲罗啉分光光度法是一种常用的测定铁的方法。
邻菲罗啉，也称为邻二氮菲，是一种常用的螯合剂，可以与铁离子形成稳定的络合物。
下面将对这种方法进行详细的介绍。
一、实验原理邻菲罗啉分光光度法是一种基于络合反应的分光光度法，用于测定铁离子。
邻菲罗啉与铁离子形成稳定的络合物，该络合物的最大吸收波长位于530nm左右，因此可以通过测量该波长下的吸光度来测定铁离子的浓度。
二、实验步骤1.准备试剂和样品：邻菲罗啉溶液、铁标准溶液、缓冲溶液（PH=7）、去离子水、待测样品。
2.校准仪器：使用空白试剂校准仪器，确保仪器处于正常状态。
3.绘制标准曲线：分别取不同浓度的铁标准溶液于比色皿中，加入等体积的邻菲罗啉溶液和缓冲溶液，摇匀后静置片刻，记录各浓度下的吸光度。
以吸光度为纵坐标，铁离子浓度为横坐标绘制标准曲线。
4.测定样品：取适量待测样品于比色皿中，加入等体积的邻菲罗啉溶液和缓冲溶液，摇匀后静置片刻，测量吸光度。
5.计算结果：根据标准曲线计算待测样品中铁离子的浓度。
三、实验结果与分析1.结果记录：记录实验过程中各浓度下的吸光度和待测样品中铁离子的浓度。
2.结果分析：通过对比标准曲线和样品的吸光度值，可以得出待测样品中铁离子的浓度。
如果需要进一步分析，可以对实验数据进行处理和分析，例如计算相对误差、变异系数等指标，以评估实验结果的准确性和可靠性。
四、实验注意事项1.实验过程中要注意安全，避免直接接触皮肤或吸入粉尘。
2.试剂和样品应当存放在棕色瓶中，避免阳光直射和长时间暴露在空气中。
3.在绘制标准曲线时，要使用相同浓度的缓冲溶液和邻菲罗啉溶液，以确保实验条件的一致性。
4.在测定样品时，要保证样品的均匀性和稳定性，避免出现误差。
5.在计算结果时，要根据标准曲线进行线性回归分析，以得出准确的浓度值。
五、实验结论通过邻菲罗啉分光光度法测定铁离子的实验，可以得出待测样品中铁离子的浓度。
该方法具有操作简便、灵敏度高、准确度高等优点，适用于测定水中、土壤中或生物样品中的铁离子浓度。
邻菲罗啉分光光度法测定循环水中的铁含量
邻菲罗啉分光光度法测定循环水中的铁含量（0.02—20.0 mg/l）一、分析原理：用抗坏血酸将试样中的三价铁离子还原成二价铁离子，在PH 值2.5—9时，二价铁离子可与邻菲罗啉生成橘红络合物，在最大吸收波长510nm 处，用分光光度计测其吸光度。
二、试剂和材料：1.H2SO42.NH4Fe(SO4)·12H2O3.H2SO4,1＋35溶液4.氨水，1＋3溶液5.乙酸—乙酸钠缓冲溶液，PH=4.56.抗坏血酸，20.0g/L。
溶解10.0g抗坏血酸于200mL水中，加入0.2g EDTA及8.0mL甲酸，用水稀释至500mL，混匀，贮存于棕色瓶中（有效期一个月）。
7.邻菲罗啉，2.0g/L8.过硫酸钾，4.0g/L。
溶解4.0g过硫酸钾于水中并黧至100ml，室温下贮存于棕色瓶中，此溶液可稳定放置14天。
9.铁贮备溶液，1ml含有0.100mg铁。
10.铁标准溶液，1ml含有0.010mg铁。
取浓度为1ml含有0.100mg铁的铁贮备溶液稀释至10倍。
只限当日使用。
三、仪器和设备分光光度计，具有3cm比色皿。
四、测定步骤：1.工作曲线的绘制：分别取0.00、1.00 ml、2.00 ml、4.00 ml、6.00 ml、8.00 ml、10.00 ml含铁0.010mg/ml的铁标准溶液于七个100ml容量瓶中，加水至约40ml，加0.50ml 1＋35 H2SO4溶液调PH值接近2，加3.0 ml 20.0g/L抗坏血酸溶液、10.0 ml PH值为4.5的乙酸—乙酸钠缓冲溶液、5.0ml 2.0g/L邻菲罗啉溶液。
用水稀释至刻度，摇匀。
室温下放置15分钟，用分光光度计于510nm处，以试剂空白调零测吸光度。
以测得的吸光度为纵坐标，相对应的二价铁离子含量（㎍）为横坐标，绘制工作曲线。
2.测定：1)总铁的测定：a)试样的分解：取5取5.0—50.0ml试验溶液于100ml锥形瓶中，（体积不足50.0ml的补水至50.0ml），加1.0ml (1+35)硫酸溶液，加5.0ml过硫酸钾溶液，置于电炉上，缓慢煮沸15分钟，保持体积不低于20ml，取下冷却至室温，用氨水或(1+35)硫酸调PH值接近2，备用。
邻菲罗啉分光光度法测定铁[解析]
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邻菲罗啉分光光度法测定铁实验目的1.1 进一步了解朗伯-比尔定律的应用。
1.2 学会邻菲罗啉分光光度法测定铁的方法和正确绘制邻菲罗啉-铁的标准曲线。
1.3 了解分光光度计的构造及使用。
2 实验原理邻菲罗啉（又称邻二氮杂菲）是测定微量铁的一种较好试剂，其结构如下：在pH=1.5～9.5的条件下，Fe2+与邻菲罗啉生成很稳定的橙红色的络合物，反应式如下：=21.3，ε=11000。
此络合物的logK稳在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe3+还原为Fe2+：4 Fe3++2NH2OH═4 Fe2++N2O+H2O+4H+测定时，控制溶液酸度在pH=2～9较适宜，酸度过高，反应速度慢，酸度太低，则Fe2+水解，影响显色。
Bi3+、Ca2+、Hg2+、Ag+、Zn2+离子与显色剂生成沉淀，Cu2+、Co2+、Ni2+离子则形成有色络合物，因此当这些离子共存时应注意它们的干扰作用。
3 仪器和试剂3.1 可见分光光度计。
3.2 铁盐标准溶液的配制：A液（母液→0.1g·L-1）：准确称取1.4060g分析纯硫酸亚铁铵[(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O]于200mL烧杯中，加入50.0mL 1mol·L-1HCl，完全溶解后，移入250mL容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀。
B液（0.01g·L-1）：用25mL移液管，准确移取A液25.00mL，置于250mL的容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，备用。
3.3 乙酸-乙酸钠（HAc-NaAc）缓冲溶液（pH=4.6）：称取135g分析纯乙酸钠，加入120mL冰乙酸，加水溶解后，稀释至500mL。
3.4 ω=1%的盐酸羟胺水溶液，因不稳定，需临用时配制。
3.5 ω=0.1%的邻菲罗啉水溶液：先用少许乙醇溶解后，用水稀释，新近配制。
3.6 50mL容量瓶7个（先编好1、2、3、4、5、6、7号），10mL移液管（有刻度）1支，5mL移液管（有刻度）4支，5mL量筒1个，500mL烧杯1个，洗瓶1个，洗耳球1个，小滤纸，镜头纸。
铁(ⅲ)—邻菲罗啉光化还原分光光度法测定铁
邻菲罗啉光化还原分光光度法测定铁
一、试验原理及方法
首先，将样品加入菲罗啉光化还原剂，然后加热，使样品中的铁被还原成铁离子，并且形成一种可以吸收光的物质。
接着，将样品放入分光光度仪中，仪器会测量样品中铁离子的吸收光谱，从而计算出样品中铁的含量。
二、试验步骤
1. 将样品溶液加入到分析管中，添加足量的邻菲罗啉（1,10-二苯基膦），搅拌均匀；
2. 将分析管放入分光光度仪中，调节波长为510nm，记录原始吸光度；
3. 将分析管中的样品溶液加入还原剂（硫酸铜），搅拌均匀；
4. 再次将分析管放入分光光度仪中，调节波长为510nm，记录还原后的吸光度；
5. 计算吸光度差值，用标准曲线法计算出样品中铁的含量。
三、注意事项
1. 实验前，应先将试剂称量准确，并将试剂放入实验瓶中；
2. 将实验瓶中的试剂搅拌均匀，使其完全溶解；
3. 将实验瓶中的溶液放入分光光度仪中，调节好参数；
4. 将菲罗啉溶液加入实验瓶中，搅拌均匀；
5. 将实验瓶中的溶液放入分光光度仪中，测定光度值；
6. 根据光度值计算出铁的浓度；
7. 将实验瓶中的溶液放入烧杯中，加入还原剂，加热搅拌，使铁完全还原；
8. 将实验瓶中的溶液放入分光光度仪中，测定光度值；
9. 根据光度值计算出铁的浓度；
10. 将实验结果记录在实验报告中。
四、结果计算
计算铁的含量，需要用到以下公式：
含量（mg/L）=A/B×1000
其中，A为样品中铁的浓度，B为样品体积（单位为升）。
邻菲罗啉分光光度法测定溶液中的铁离子
一、 实验目的1、掌握邻菲罗啉分光光度法测定溶液中的Fe 2+2、学会分光度法确定配合物组成的测定方法3、掌握分光光度计的使用方法，进一步了解朗伯-比尔定律的应用 二、实验原理1、微量铁离子的测定最灵敏的方法便是邻菲罗啉法，因形成的配合物十分稳定所以重现性很好。
铁离子可与邻菲罗啉结合形成橙红色配合物在510nm 处有最大吸收，其反应方程如下：2、因为溶液中的Fe 3+也可与邻菲罗啉结合生成淡蓝色的配合物，所以一般采用加入盐酸羟胺的方法将其还原为Fe 2+4 Fe 3++2NH 2OH=4 Fe 2++N 2O+H 2O+4H +3、测定时，采用加入NaAc 的方法控制溶液酸度在pH=2～9较适宜，酸度过高，反应速度慢，酸度太低，则Fe 2+水解，影响显色。
三、实验步骤1、在分析天平上准确称取(NH 4)2Fe(SO 4)2•6H 2O(硫酸亚铁铵)0.0702（±0.0001）g，用10mL 的1:1的HCl 溶解于小烧杯中，完全转移到100mL 的容量瓶中，用蒸馏水定容，制得100mg/L 的贮备液。
2、取25mL 的贮备液加至10mL 1:1的HCl 中，在完全转移到250mL实验一：邻菲罗啉分光光度法测定溶液中的Fe 2+Fe2++NN 3=NN Fe32-的容量瓶中用蒸馏水定容至刻度线，制得10mg/L的Fe2+的标准溶液。
3、取7支干净的25mL比色管，按下如下表格依次加入试剂4、以0号管为参比，透光率（Transmittance）调零，黑体比色皿调百。
在波长510nm处测量各管的吸光度（Absorbance）记录至下表四、数据处理1、标准曲线绘制。
以铁离子浓度为横轴，吸光度为纵轴做六个标准点的标准曲线如例图所示2、在标准曲线上对应水样吸光度找到对应浓度，进而求得待测溶液的浓度。
（注意：比色管中溶液稀释过）。
邻菲罗啉分光光度法测定铁
邻菲罗啉分光光度法测定铁一、实验目的1、掌握邻菲罗啉分光光度法测定铁的原理和方法；2、学习分光光度法实验条件的选择方法，应用确定的条件测出待测试样中铁的含量；3、熟悉分光光度计的结构原理和使用方法（参阅附录1、2）二、实验原理分光光度法测定铁的理论依据是朗伯－比耳定律：当一束平行单色光通过单一均匀的、非散射的吸光物质溶液时，溶液的吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。
如果固定比色皿厚度测定有色溶液的吸光度，则溶液的吸光度与浓度之间有简单的线性关系，可根据相对测量的原理，用标准曲线法进行定量分析。
分光光度法的显色反应条件（酸度、显色剂用量、显色时间、显色温度等）和测量条件（测定波长、参比液的选择等）都是通过实验确定的。
用分光光度法测定铁的显色剂，常用的有邻菲罗啉（邻二氮菲）、磺基水杨酸、硫氰酸盐等。
其中邻菲罗啉法灵敏度高，选择性好，络合物十分稳定，故应用甚为广泛。
在pH＝3～9的溶液中，邻菲罗啉与Fe2+生成稳定的橙红色络合物：Fe2++3NN [(NN)3Fe]2+该络合物lgβ3＝21.3（20˚C），在510nm附近有最大吸收，摩尔吸光系数ε510＝1.1×104L · mol-1 · cm-1。
邻菲罗啉与Fe3+也生成3 : 1的淡蓝色络合物，lgβ3＝14.1。
因此，在显色前需用盐酸羟胺将Fe3+还原为Fe2+：2Fe3+ + 2NH2OH = 2Fe2+ + N2↑+ 2H2O + 2H+测定时，控制溶液酸度在pH＝3～9较适宜，酸度高时，反应速度慢；酸度太低，则Fe2+部分水解，影响测定。
通常在微酸性（pH＝5）溶液中显色。
本法选择性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO32－，20倍的Cr3+、Mn2+、V(v)、PO43－，5倍的Co2+、Cu2+等均不干扰测定。
三、试剂与仪器1、铁标准溶液（100μg/mL）：称取0.8634gNH4Fe(SO4)2· 12H2O（或0.7022g (NH4)2Fe(SO4)2· 6H2O）于洁净的烧杯中，加入100ml 2mol/L的盐酸，溶解后定量转移至1L容量瓶中，加水至刻线，摇匀；2、盐酸羟胺溶液：10％水溶液，两周内有效；3、邻菲罗啉溶液：0.1％水溶液。
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邻菲罗啉分光光度法测铁离子
一、主要仪器及试剂
1．邻菲罗啉溶液：0.12%水溶液；
2．盐酸羟胺溶液：10%水溶液；
3．1+1氨水
4．1+1盐酸
5．铁标准溶液：准确称取0.216g 硫酸铁胺(NH4Fe(SO4)2·12H2O)置于烧杯中，加少量水溶解，加0.625 mL 硫酸，定量转移到250ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
此溶液为1ml含0.1mg铁标准溶液。
吸取上述溶液10ml，移入100ml 容量瓶中用水稀释至刻度，此溶液为1ml含0.01mg铁标准溶液。
6．分光光度计带有厚度为3cm的比色皿。
7．1+1盐酸
8．刚果红试纸
二、测定步骤
1．绘制标准曲线：
分别吸取浓度为0.01mg/mL铁标准溶液为0.0、1.0、2.0、3.0、4 .0 、5.0mL 于6只50mL容量瓶中，加水至约25ml，各加1毫米长的刚果红试纸，在试纸呈蓝色时，各瓶加10%盐酸羟胺1mL，0.12%邻菲罗啉2ml,混匀后用1+1氨水调节使刚果红试纸呈紫色，再加一滴1+1氨水，使试纸呈红色，用水稀释至刻度，混匀。
10min后于510nm处，以空白溶液为参比，测定各溶液的吸光度。
以吸光度为纵坐标、铁的毫克数为横坐标绘制标准曲线。
2．总铁离子的测定：
吸取50mL水样于150mL锥形瓶中，放入1毫米长的刚果红试纸，用1+1盐酸调节使水呈酸性，P H＜3，刚果红试纸呈蓝色。
加热煮沸10分钟，冷却后移入50ml容量瓶中，加10%盐酸羟胺溶液1mL，摇匀，1分钟后再加0.12%邻菲罗啉2ml，用1+1氨水调节PH，使刚果红试纸呈紫色，再加一滴氨水，使试纸
呈红色后用水稀释至刻度，混匀。
10min 后于510nm 处，用3cm 比色皿，以试剂空白溶液为参比，测定溶液的吸光度。
三、计算
水样中总铁离子的含量X 为 X=1000 V m
mg/L
式中：m ——从标准曲线上查得的试样中含铁的毫克数，mg ；
V ——所取水样的体积，mL 。
循环冷却水中磷含量的测定方法 ZB/T G76 002-90
钼酸铵分光光度法
本标准参照采用国际标准ISO6878/1《水质、磷的测定、钼酸盐分光光度法》
一、主要仪器与试剂
1．分光光度计：带有厚度为1cm 的吸收池
2．硫酸：1+1、1+35、1+3溶液
3．抗坏血酸，20.0g/L 溶液
称取10g 抗坏血酸，精确至0.5g ，称取0.2g 乙二胺四乙酸二钠·2H 2O ，精确至0.01g ，溶于200mL 水中，加入8mL 甲酸，用水稀释至500
mL ，混匀，贮存于棕色瓶中（有效期一个月）；
4．钼酸铵：26g/L 溶液
称取13g 钼酸铵，精确到0.5g ，称取0.5g 酒石酸锑钾（KSbOC 4H 4O 6·1/2H 2O ）精确至0.01g ，溶于200mL 水中，加入230mL 硫酸溶液（1+1），混匀，冷却后用水稀释至500mL ，贮存于棕色瓶中（有效期二个月）；
5．过硫酸钾：40g/L 溶液
称取20g 过硫酸钾，精确至0.5g ，溶于500mL 水中，摇匀，贮存于棕色瓶中（有效期一个月）；
6．磷标准溶液：1mL含有0.02mgPO43-；
称取0.7165g预先在100~105℃干燥并已恒重过的基准试剂磷酸二氢钾，精确至0.0002g，溶于500mL水中，定量转移至1L容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
此溶液为1mL=0.5mg（PO43-）。
取此溶液20mL于500mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，此溶液为1mL=0.02mg（PO43-）。
二、测定步骤
1．工作曲线的绘制
分别取0（空白）、1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0mL磷标准溶液于9个50mL容量瓶中，依次向各瓶中加入约25mL水，2mL钼酸铵溶液，3mL抗坏血酸溶液，用水稀释至刻度，摇匀。
室温下放置10min。
在分光光度计710nm处，用1cm吸收池，以空白调零测吸光度。
以测得的吸光度为纵坐标，相对应的PO43-量（mg）为横坐标绘制工作曲线。
2．总磷含量的测定
取水样5~10mL于100mL锥形瓶中，加入1mL硫酸溶液（1+35），5mL过硫酸钾溶液，用水调整锥形瓶中溶液体积至约25mL，置于可调节电炉上缓缓煮沸15min至溶液快蒸干为止，取出后流水冷却至室温，定量转移至50mL容量瓶中，加入2mL钼酸铵溶液，3mL抗坏血酸溶液，用水稀释至刻度，摇匀，室温下放置10min，在分光光度计710nm处，用1cm吸收池，以不加试验溶液的空白调零测吸光度。
3．正磷酸盐含量的测定
取水样20mL于50mL容量瓶中，加2mL钼酸铵溶液，3mL抗坏血酸溶液，用水稀释至刻度，摇匀，室温下放置10min。
在分光光度计710nm处，用1cm 吸收池，以不加试验溶液的空白调零测吸光度。
4．总无机磷酸盐含量的测定
取水样10mL于50mL容量瓶中，加入2mL硫酸溶液（1+3），用水调整容量瓶中溶液体积至约25mL，摇匀，置于已煮沸的水浴中15min，取出后流水冷
却至室温。
用滴管向容量瓶中加入1滴酚酞溶液（1%），然后滴加氢氧化钠溶液(120g/L)至溶液显微红色，再滴加硫酸溶液（1+35）至红色刚好消失。
加入2mL 钼酸铵溶液，3mL 抗坏血酸溶液，用水稀释至刻度，摇匀，室温下放置10min 。
在分光光度计710nm 处，用1cm 吸收池，以不加试验溶液的空白调零测吸光度。
三、计算
以mg/L 表示的水样中总磷、正磷酸盐、总无机磷酸盐（以PO 43-计）含量（X ）计算： X=V m
×1000
式中：m ——从标准工作曲线上查得的总磷含量（以PO 43－计）mg.
V ——移取水样的体积，mL 。