植物蛋白质提取方法总汇
蛋白质提取方法(个人总结篇)
植物蛋白质提取方法汇总（本人经验总结）一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm 以上1小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm 以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。
裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M 的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5 min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
植物蛋白质提取方法总汇
植物蛋白质提取方法总汇一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入)，准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml2、甘油(Glycerol)75ml3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇)，摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时)，然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心(15℃8000rpm 以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准)，可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。
裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS 溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml)，使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：(1.5ml每1mlTRIPURE用量)倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：(2ml每1mlTRIPURE用量)振荡，置室温20min离心： 7500g，5 min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇 2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存(或可直接用于WESTERN BLOT)存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
植物总蛋白提取
一提取植物总蛋白（以植物花粉为例）：1.三氯乙酸法（TCA）/丙酮(acetone)提取花粉总蛋白质花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，用含10%TCA和1%DTT的acetone沉淀蛋白质，-20度2个小时(必要时过夜)，4度25000g离心20min后去上清，用含1%DTT的acetone溶液悬浮沉淀，-20度1个小时,再次离心去上清，将真空干燥的沉淀在等电聚焦缓冲液中(8M urea，20mmDTT,4%CHAPS,2%ampholyte,PH:3-10) 20度震荡1小时，20度25000g离心20min，收集上清，沉淀再次用IEF缓冲液离心收集上清，可为后续试验做准备。
2．苯酚（phenol）提取法花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，添加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）继续研磨5min,加提取缓冲液（0.1mol/L 8.8 Tr i s –HCl，5mmEDTA,20mmDTT,30%sucrose）。
将样本转移至离心管中，4度震荡30min，25000g离心10min，将上层的phenol层转移进另一个试管，将下边的水相层加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）及提取缓冲液，震荡，离心，将再次收集到的phenol与前边收集的混合，加5倍体积的0.1 M ammonium acetate in 100%methanol，在-20度震荡沉淀蛋白质，必要时过夜，4度 25000g离心10min，将沉淀用0.1 M ammonium acetate in 100%methanol及80% acetone各洗两次, 含10mmDTT的80% acetone再洗一次，在每一步中蛋白沉淀都要完全重悬— -20度震荡30min，4度 25000g离心20min，洗剂完成后，沉淀真空干燥，IEF buffer提取蛋白质，如方法1。
3．直接IEF buffer提取蛋白质直接IEF buffer提取蛋白质，花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，然后加入IEF buffer(8M尿素，20mmDTT,4%CHAPS，5mmEDTA，5mmTris base,2%ampholyte,PH:3-10).如方法1。
大豆蛋白提取方法
大豆蛋白提取方法
大豆蛋白是一种优质的植物蛋白质，具有丰富的营养价值和广泛的应用前景。
目前，大豆蛋白的提取方法主要包括水提法、盐酸法、异丙醇法、超声波辅助法等。
水提法是传统的大豆蛋白提取方法，其原理是将大豆粉浸泡于水中，通过搅拌和加热使蛋白质溶解于水中，随后通过离心、过滤、干燥等过程得到蛋白质粉末。
该方法简单易行，但提取率较低，且不易去除杂质。
盐酸法是一种酸解法，其原理是将大豆粉与盐酸混合，通过酸解使蛋白质溶解于水中，随后通过中和、沉淀、洗涤、干燥等工艺得到蛋白质粉末。
该方法提取率较高，但酸性条件容易破坏蛋白质结构，影响蛋白质的功能性。
异丙醇法是一种有机溶剂法，其原理是将大豆粉浸泡于异丙醇中，通过超声波和搅拌使蛋白质溶解于异丙醇中，随后通过过滤、洗涤、干燥等过程得到蛋白质粉末。
该方法提取率较高，但工艺复杂，成本较高。
超声波辅助法是一种新型的大豆蛋白提取方法，其原理是将大豆粉浸泡于水中，通过超声波的作用使蛋白质溶解于水中，随后通过离心、过滤、干燥等工艺得到蛋白质粉末。
该方法不仅提取率高，且可以获得较好的蛋白质功能性和组织结构，具有广泛的应用前景。
总之，不同的大豆蛋白提取方法各有优缺点，具体应根据产品的需要和工艺条件进行选择。
植物蛋白质提取方法
一、植物蛋白质提取1. TCA-丙酮法（1）称量一定量的样品置于液氮预冷的研钵中，加少许PVPP，反复加液氮研磨至粉末。
（2）研磨好的样品用10 倍体积（w/V）的10%的TCA-丙酮溶液悬浮，加入0.1 M PMSF、1 M DTT 至终浓度为1 mM PMSF、10mM DTT，超声5 分钟，于-20℃静置6 小时或过夜后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。
（3）沉淀用10 倍体积于样品的丙酮溶液重悬浮，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。
（4）重复步骤（3）一次。
（5）沉淀用10 倍体积于样品的乙醇/乙醚=1:1 洗，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。
（6）重复步骤（3）一次。
（7）取出沉淀真空干燥约5 分钟，除尽有机溶剂。
（8）按10mg 干粉末加200 微升裂解液的比例，加入1 mM PMSF、10mM DTT，超声5分钟，充分溶解1 小时，10℃，35000g 离心30 分钟，上清为所需的蛋白溶液。
（9）用Bradford 法测定蛋白样品的蛋白浓度。
（10）蛋白样品溶液小量分装，-80℃保存。
注意事项：（1）TCA 有利于去除酚类色素等物质，但不利于蛋白的抽提，使用浓度不宜过高，在后面丙酮处理中，尽量除去。
（2）蛋白样品保存：样品浓度不宜过高，建议将高浓度样品适度调整，为避免反复冻融应分装保存，长期保存用-80℃，短期保存用-20℃。
（3）1M DTT：0.1542g DTT 用1ml MilliQ 水溶解，-20℃保存。
（4）0.1M PMSF：0.0174g PMSF 用1ml 异丙醇溶解，-20℃保存。
不同组织的蛋白提取方法
不同组织的蛋白提取方法•相关推荐不同组织的蛋白提取方法不同组织的蛋白提取方法一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！或者用三氯醋酸—丙酮沉淀法，离子浓度小的1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3-204℃8000rpm以上13、的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上14、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000r pm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
二、组织：肠黏膜应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于BLOT存在的问题：加入1％SDS4度离心后又多了白色沉定，SDS左右。
植物蛋白质提取方法
植物蛋白质提取方法1.机械破碎法机械破碎法是最常用的蛋白质提取方法之一、这种方法使用高速离心或超声波破碎将植物细胞破碎，释放细胞内的蛋白质。
然后通过离心或过滤将残渣去除，得到植物蛋白质溶液。
2.酸碱提取法酸碱提取法是利用酸碱条件使植物细胞膜溶解，从而释放出蛋白质。
首先将植物材料切碎，然后浸泡在酸碱溶液中。
酸性条件下可溶解细胞壁，碱性条件下可溶解细胞质膜，从而释放蛋白质。
最后通过离心或过滤将杂质去除，得到纯化的植物蛋白质。
3.毛细管电泳法毛细管电泳法是一种利用电场和毛细管将植物蛋白质按照电荷和大小进行分离的方法。
首先将植物材料研磨成粉末，然后将粉末溶解在缓冲液中，再将溶液注入毛细管。
通过施加高电压，蛋白质会被带动在毛细管中移动，根据蛋白质的电荷和大小的不同，移动速度也不同，从而实现分离。
4.总蛋白质沉淀法总蛋白质沉淀法是一种简单且高效的蛋白质提取方法。
首先将植物样品研磨成粉末，然后加入缓冲液进行溶解。
接着加入有机溶剂如酒精或丙酮，使蛋白质沉淀。
将沉淀经过离心后，去除上清液，然后用溶液再次洗涤沉淀。
最后用适当的溶剂溶解沉淀，得到纯净的植物蛋白质。
5.亲和层析法亲和层析法是利用一些特定亲和剂与目标蛋白质之间的特异结合来分离纯化蛋白质的方法。
首先将亲和剂固定在其中一种固定相上，列入柱中。
然后将植物蛋白质样品加入柱中，目标蛋白质与亲和剂结合，其他杂质被洗脱。
然后调整条件，将目标蛋白质洗脱下来，得到纯化的植物蛋白质。
综上所述，植物蛋白质提取方法有多种选择，根据实际需求和植物材料的特性，可以选择合适的提取方法进行蛋白质的纯化。
这些方法都有各自的优缺点，需要根据具体的实验条件和目的进行选择。
植物蛋白提取
植物蛋白提取概述植物蛋白提取是一种研究领域，致力于从植物中提取纯度较高的蛋白质。
蛋白质是生命体中重要的组成部分，对于人类的健康和发展有着重要的作用。
植物蛋白提取技术不仅可以应用于食品工业，还可以应用于药物研发、生物学研究等领域。
提取方法1. 碱提取法碱提取法是最常用的植物蛋白提取方法之一。
它是通过将植物材料与碱性溶液进行混合，使蛋白质溶解在溶液中，然后通过离心等方法将蛋白质和其他杂质分离。
2. 酸提取法酸提取法与碱提取法类似，只是使用酸性溶液来溶解蛋白质。
酸提取法可以提取到一些碱性蛋白质，如谷蛋白等。
3. 酶解法酶解法是利用特定的酶将植物材料中的蛋白质降解为较小的分子量，然后再进行分离和纯化。
酶解法可以提取到一些难溶于水的蛋白质。
冷冻法是一种常用的非溶剂提取方法。
将植物材料冷冻后进行研磨，使细胞壁破裂，然后通过离心等方法将蛋白质和其他杂质分离。
提取步骤植物蛋白提取的一般步骤如下：1.准备植物材料：选择新鲜植物组织作为原料，并将其洗净去除杂质。
2.研磨处理：将植物样品研磨成细粉末。
3.溶解溶液：根据不同的提取方法选择合适的提取溶液，如碱性溶液、酸性溶液或酶解液等。
4.提取过程：将细粉末与提取溶液进行混合，并进行适当的搅拌或震荡，使蛋白质溶解在溶液中。
5.分离纯化：通过离心、过滤或电泳等方法将蛋白质和其他杂质进行分离。
6.蛋白质浓缩：将分离得到的蛋白质溶液进行浓缩，以提高蛋白质的纯度。
7.纯化蛋白质：利用离子交换层析、凝胶过滤层析或逆流色谱等方法对蛋白质进行纯化。
8.蛋白质质量分析：对提取得到的蛋白质进行质量分析，如电泳、质谱等方法。
植物蛋白提取技术具有广泛的应用领域，包括但不限于以下几个方面：1. 食品工业植物蛋白是一种重要的食品添加剂，可以用于增加产品的营养价值、改善质地和口感等。
植物蛋白提取技术可以提取大豆蛋白、豌豆蛋白等常用的植物蛋白原料，被广泛应用于肉制品、豆制品、蛋制品等食品加工工艺中。
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1、根据样品重量(1g样品加进3.5ml提取液，可根据材料不同适当加进)，预备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加进提取液中在冰上静置(3-4小时)。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
4、提取上清液，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml
1、1Mtris-HCl(PH8)45ml
2、甘油(Glycerol)75ml
3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g
这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！
氯醋酸—丙酮沉淀法
1、在液氮中研磨叶片
2、加进样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。
3、加进等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇)，摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时)，然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加进裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准)，可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放进-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。
裂解液：2.7g 尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的往离子水中(终体积为5ml)，使用前再加进1M 的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！
目的：WESTERNBLOT检测凋亡相关蛋白的表达
应用TRIPURE提取蛋白质步骤：
含蛋白质上清液中加进异丙醇：(1.5ml每1mlTRIPURE用量) 倒转混匀，置室温10min
离心：12000g，10min，4度，弃上清
加进0.3M盐酸胍/95％乙醇：(2ml每1mlTRIPURE用量)
振荡，置室温20min
离心：7500g，5min，4度，弃上清
重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次
沉淀中加进100％乙醇2ml
充分振荡混匀，置室温20min
离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀
1％SDS溶解沉淀
离心：10000g，10min，4度
取上清-20度保存(或可直接用于WESTERNBLOT)
存在的题目：加进1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2XBUFFER，然后煮5－10分钟，效果很好的。
1、200毫克样品置于冰上磨碎
2、加lysisbuffer，离心，10000rpm，4度，5min取上清
3、重复离心5min
lysisbuffer：ureanp-40ampholine2-mepvp-40
5蛋白质样品制备
秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等(1986)的方法进行。
100mg材料剪碎后加进10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加进1.5ml10%三氯乙酸(丙酮配制，含10mM即0.07%β-巯基乙醇)，混匀，-20℃沉淀1小时，4℃，15000r/min离心15min，弃上清，沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10mMβ-巯基乙醇)，再于-20℃沉淀1小时，同上离心弃上清，(有必要再用80％丙酮(含10mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真空抽干。
按每mg干粉加进20μl(可调)UKS液[9.5M尿素，5mM碳酸钾，1.25%SDS，0.5%DTT(二硫苏糖醇)，2%Ampholine(AmershamPharmaciaBiotechInc，
pH3.5-10)，6%TritonX-100]，37℃温育30min，期间搅动几次，28度(温度低，高浓度的尿素会让溶液结冰)16000r/min离心15min，离心力越大时间长一点越好！上清即可上样电泳。
或者-70度保存
(1)sample,液氮研磨
(2)装1.5mlcentrifuge用tube
(3)加1MKH2PO4K2HPO4700ul
(4)12000rpm,4度,10-15minite
(5)取上层液，蛋白质就在里面。