Trizol总RNA抽提试剂盒
TRIZOL说明书
trizol 中文说明书trizol 试剂是一种从组织及细胞中提取总rna的专用试剂。
这种试剂是一种酚和硫氰酸胍的单相溶液，是将chomczynski 和sacchi发明的一步rna提取法的改进。
在样品匀浆或分析过程中，trizol 试剂可在分裂细胞及溶解胞膜的同时保持rna的完整。
在匀浆后加入氯仿，可将溶液分为水相和有机相。
rna均在水相中。
吸取水相加入异丙醇，得到rna沉淀。
去除水相后，样品中的dna及蛋白质可通过进一步连续的沉淀而得到。
中间相加入乙醇可沉淀dna而有机相加入异丙醇则能沉淀出蛋白质。
dna的再纯化可能对标化样品的rna产量有作用。
2．这一技术可以用于人，动物，植物或细菌株的微量组织（50—100mg）及细胞（5×106），也可以用于大量检材（≥1g）及细胞(﹥107).该方法简便易行,可用于同时检测大量样品,全部过程1小时内可以完成.用trizol 试剂分离的rna 没有dna及蛋白质成分.这种rna可用于northern印迹分析,斑点杂交,多聚(a)+检出及vitro转移, rna酶蛋白分析及分子克隆.用于pcr反应时,当两个引物位于同一外显子时应用扩增特异dna酶i处理提取出的rna.3． trizol 试剂可用于分子量从大到小的各种rna的提取.例如,大鼠肝脏提取出的rna,经琼脂糖凝胶电泳,eb染色后可显现出7kb和15kb的大分子量的rna谱带(包括mrna和hnrna), 位于～5kb(28s)和～2kb (18s)的两条主要的核糖体rna谱带及大小在0.1kb-0.3kb之间的低分子量rna(trna,5s).分离出的rna当溶于双蒸水中时a260/280为1.6-1.8之间.每毫克组织所能提取的rna量约为:肝和脾,6-10μg;肾,3-4μg;骨骼肌和脑,1-5μg;胎盘,1-4μg.从1×106培养细胞中提取的rna量约为:上皮细胞,8-15μg;成纤维细胞,5-7μg.需要但未提供的试剂:1. 氯仿2. 异丙醇3. 75%乙醇(depc处理水配制)4. 无rna酶水或0.5%sds溶液(制备无rna酶水:将水倒进无rna酶的玻璃容器中,加入depc至0.01%(v/v)放置过夜后高压灭菌). sds溶液必须用depc处理后高压灭菌的水配制.rna分离提取步骤:1．匀浆a. 组织每50-100mg组织加入1ml的trizol 试剂后用匀浆机或玻璃棒匀浆。
Trizol法提取RNA实验步骤及原理(新手详细注释版)
Trizoｌ法使用步骤一、分离纯化得基本原理研究基因得表达与调控时常常要从组织与细胞中分离与纯化ＲＮA。
ＲNA质量得高低常常影响cＤNA库,ＲT-PCＲ与Ｎorthern Ｂloｔ等分子生物学实验得成败。
Ｔrizol就是一种新型总ＲNＡ抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出得核酸酶。
二、用户需自备得试剂与材料无水乙醇、氯仿、Ｇlycｏgen(可能需要)、 1、５ｍｌ Eppeｎｄｏrf管(ＲNase-frｅe)、 Tips(ＲNase－free)三、准备工作RNａse酶非常稳定,就是导致ＲNＡ降解最主要得物质。
它在一些极端得条件可以暂时失活,但限制因素去除后有迅速复性。
用常规得高温高压蒸气灭菌方法与蛋白抑制剂都不能就是ＲＮase完全失活。
它广泛存在于人得皮肤上,因此,在与RＮA制备有关得分子生物学实验时,必须戴手套。
RNase得又一污染源就是取液器,根据取液器制造商得要求对取液器进行处理。
一般情况下采用用ＤEPC（焦炭酸二磷脂,一种ＲＮａse抑制剂)配制得7０％乙醇擦洗取液器得内部与外部,基本达到要求。
取ＲＮａｓｅ－free得物品时必须戴手套。
1、料制品得处理尽可能使用无菌,一次性塑料制品，已标明RNasｅ-Fｒee 得塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。
对于国产塑料制品,原则上都必须处理方可使用。
处理步骤如下:1)在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEＰＣ使DEＰC得终浓度为０、1%。
注意:DEP Ｃ为剧毒物,活性很强，小心在通风柜中使用。
2)处理得塑料制品放入一个可以高温灭菌得容器中,注入ＤEPC水溶液,使塑料制品得所有部分都浸泡到溶液中。
3)在通风柜中室温处理过夜。
4)将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中,用铝箔封住含已ＤEＰＣ水处理过得塑料制品得烧杯,高温高压蒸气灭菌至少30分钟。
5）烘箱用合适得温度烘拷至干燥。
置于干净处备用。
2、璃玻与金属物品250°C烘烤3小时以上。
天漠科技 总RNA提取试剂盒说明书
总RNA提取试剂盒(配合TRIZOL使用)Catalog No. TR205-50 (50次反应含DNaseI)TR205-200 (200次反应含DNaseI)TR205-50N (50次反应无DNaseI)TR205-200N (200次反应无DNaseI)Highlights∙适用于从细胞，组织，酵母菌，植物，细菌或生物液体（任何TRIZOL或类似产品可以裂解的样品）中提取到总RNA（含microRNA）。
∙无需进行相分离，无需使用氯仿，无需沉淀过程。
∙提取到的RNA不含DNA,并可应用于Q-PCR，高通量测序等实验。
∙整个过程仅需10分钟。
Ver.1.0.9产品组成:50200RNA洗涤液1 室温40 ml 160 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNA洗涤液2室温12 ml 48 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇DNase I -20℃ 300μl x 1管（5U/μl） 300μl x 4管（5U/μl）DNA消化液室温 4 ml 16 mlRNase-free H2O 室温 6 ml 30 ml2号柱室温50个200个收集管（2ml）室温50个200个特性:1.样品来源：TRIZOL等类似试剂裂解的样品。
2.样品范围：≥17核苷酸。
3.RNA纯度：高质量的RNA可应用于高通量测序等敏感的下游实验。
4.RNA结合量：每个柱子可最多结合50μg的RNA。
试剂制备RNA洗涤液在使用之前一定要配好，添加好乙醇后在试剂瓶上做好标记！！！添加10ml或40ml的无水乙醇（95-100%）到40ml或160ml的RNA洗涤液1中。
添加48ml100%的乙醇（或52 ml95%的乙醇）到12ml的RNA洗涤液2添加192ml100%的乙醇（或208 ml95%的乙醇）到48ml的RNA洗涤液2操作步骤:整个操作步骤是由2个步骤组成：（I）样品裂解匀浆（I I）样品纯化（I）样品裂解匀浆此步骤主要参考TRIZOL等类似裂解试剂说明书的裂解液用量，以下给出我公司提供的可完美替换TRIZOL的TRIcom试剂用量作为参考。
真核细胞RNA提取方法与原理---Trizol试剂盒抽提法
邱逸敏 12级生物技术
一、研究背景
二、方法及原理
1、研究背景
1.1 RNA研究的重要性 DNA，RNA和蛋白质是三种重要的生物 大分子，是生命现象的分子基础。 DNA的 遗传信息决定生命的主要性状，而mRNA在 信息传递中起很重要的作用。其它两大类 RNA，rRNA和tRNA，同样在蛋白质的生物 合成中发挥不可替代的重要功能。因此 mRNA、rRNA、tRNA在遗传信息由DNA传 递到表现生命性状的蛋白质的过程中举足 轻重。
RNA提取流程－－ RNA的纯化及获得
RNA纯化要求
1 纯化后不应存在对酶(如逆转录酶)有抑制作用物质
2 排除有机溶剂和金属离子的污染
3 蛋白质、多糖和脂类分子等的污染降低到最低程度 4 排除DNA分子的污染
2.2 RNA提取的注意事项 2.2.1 杜绝外源酶的污染 一：严格戴好口罩，手套。 二：实验所涉及的离心管，Tip 头，移液器杆， 电泳槽，实验台面等要彻底处理。 三：实验所涉及的试剂/溶液，尤其是水，必 须确保 RNase-Free。
7. 室温晾干，加入30-50ul的 DEPC H 2 O 溶解， 检测。
RNA检测方法－紫外分光光度法
纯度（ OD260/OD280 ）
紫外分光光度计进行测量（选择正确的稀释倍数，确保 OD260 值在0.1~1.0之间） OD260/OD280< 1.7 OD260/OD280 > 2.0 说明有蛋白的污染 说明纯度很好
2、方法及原理
2.1 RNA的提取流程
1、样本前处理 2、细胞裂解 3、 RNA的纯化及获得
RNA提取流程－－ 样品前处理注意点
选择新鲜血液，不得超过4小时
Trizol法提取总RNA Protocol
Trizol法提取总RNATrizol法是一种常用的RNA提取方法，其原理是基于氯仿-异硫氰酸胍的试剂，能够迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。
通过将样品与Trizol试剂混合，可以裂解细胞并释放出RNA。
然后加入氯仿进一步抽提RNA，并通过离心分离出上清液中的RNA。
最后通过乙醇沉淀和洗涤得到纯化的RNA。
所需试剂和耗材1.Trizol试剂：用于细胞裂解和RNA的释放。
2.氯仿：用于抽提RNA。
3.无水乙醇：用于洗涤沉淀的RNA。
4.DEPC水：用于制备无RNA酶的水。
5.1.5ml Eppendorf管：用于RNA的存储。
6.Tips：用于吸取无RNA酶的水和Trizol试剂。
实验仪器1.台式高速离心机：用于离心分离RNA。
2.涡旋振荡器：用于混合样品和试剂。
3.移液器：用于吸取试剂和样品。
4.无菌微量离心管：用于样品和试剂的存储。
5.无菌手套：用于防止RNA酶的污染。
准备工作1.在实验前需要将实验区域和所有实验用具进行清洁和消毒，以避免RNA酶的污染。
2.使用Trizol试剂前需仔细阅读说明书，并确保按照说明书的要求进行操作。
3.为避免RNA酶的污染，需要穿戴无菌手套进行实验操作。
实验方法1.准备无菌的DEPC水，加入DEPC水至10ml，然后加入10μl的氯仿，充分混匀后放置备用。
2.在无菌的1.5ml Eppendorf管中加入100μl的Trizol试剂，加入10μl的氯仿，充分混匀后加入步骤1中制备好的DEPC水-氯仿混合液100μl，再次充分混匀后放置备用。
3.将样品加入到步骤2中制备好的溶液中，充分混匀后加入氯仿，再次充分混匀后进行高速离心，分离出上清液。
4.将上清液转移至新的离心管中，加入等体积的无水乙醇，充分混匀后进行高速离心，收集沉淀的RNA。
5.用70%乙醇洗涤沉淀的RNA，去除残留的乙醇和盐类，最后将RNA沉淀干燥后重新溶解在水中或指定的缓冲液中。
注意事项1.在加入氯仿之前，不要洗涤细胞，以免降解mRNA。
TRIzol-法提取血液总RNA
TRIzol 法提取血液总RNA
一、所需试剂、耗材
1. 0.1% DEPC-DDW;
2. 5ml, 2ml, 1.5ml灭菌离心管；
3. TRIzol；
4. 氯仿；
5. 异丙醇；
6. RNase-free water；
7. 70% DEPC-EtOH;
8. 检测用胶盒等
二、操作步骤
1. 取经过DEPC-DDW泡过，且灭菌烘干的7 ml 离心管；
2. 在0.5 ml小鼠全血（4C）中加入3 ml的TRIzol，震荡摇匀，室温静置5 min；
3. 将上述混合液体转移到灭菌的2 ml离心管中，12000 rpm 4℃离心5 min；
4. 将上清液移至新的1.5 mL离心管中；
5. 加入0.2 ml的氯仿，震荡摇均匀，室温静置5 min；
6. 12000 rpm 4℃离心15 min；
7. 将上清液移至新的1.5 ml离心管中，加入等体积-20C预冷的异丙醇，
-20C静置10 min；
8. 12000 rpm 4℃离心10 min；
9. 向沉淀中加入1 ml 70% DEPC-EtOH清洗沉淀;
10. 12000 rpm 4℃离心15 min;
11. 弃上清液保留沉淀，室温干燥10 min；
12. 加入30 μl RNase-free DDW 溶解RNA沉淀；
13. OD值检测（OD260/OD280=1.8-2.0）以及1% agrose gel检测（5ul）；
14. -80℃保存。
28S
18S
5.8S。
TRIpure LS 总RNA抽提试剂操作方法及步骤说明书
TRIpure Reagent LS液体样本总RNA提取试剂目录号：RN02试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成(RN0201) (RN0202)TRIpure LS（4℃避光）50 ml 100 ml储存事项：TRIpure LS在室温下能稳定保存12个月。
尽管如此，为达到最佳效果，我们建议保存在2~8°C的环境下。
重要提示：本品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。
如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。
使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。
如果不小心接触，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。
注意事项：1.样品用TRIpure LS匀浆后，如果不即刻加入氯仿之前，，置于-70°C下可放置一个月以上。
保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2-8°C可以保存一周，-20°C条件下可以保存1年。
RNA半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，Northern Blot等。
2.若下游实验对DNA非常敏感，建议用RNase free DNase I（货号：RN45）对RNA进行处理。
3.自备试剂：氯仿、异丙醇（新开封或提取RNA专用）、75%乙醇(用DEPC处理过的水配制)、RNase free water或者DEPC处理过的水。
4.本公司生产TRIpure Reagent LS质量优异，可以完美替代Invitrogen的TrizolReagent LS。
提取质量和下游实验完全一样。
RNA抽提操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）提示：用TRIpure LS抽提RNA时要戴手套和护眼罩。
避免接触皮肤和衣服。
在化学通风橱完成操作。
避免呼吸道吸入。
如无特殊说明，所有的操作应该在15~30°C 的室温条件下。
1.匀浆a.生物液体：每0.25ml液体样品(血清，血浆，脑脊液等等)加入0.75ml TRIpure LS，用加样枪吹打液体样品几次以帮助裂解样品中细胞。
Trizol法提取细菌总RNA
实验三法提取细菌总一、实验原理主要物质是异硫氰酸胍，它可以破坏细胞使释放出来地同时，保护地完整性.加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层.存在于水样层中.收集上面地地水样层后，可以通过异丙醇沉淀来还原.无论是人、动物、植物还是细菌组织，法对少量地组织( )和细胞(×)以及大量地组织(≧ )和细胞(>)均有较好地分离效果.试剂操作上地简单性允许同时处理多个地样品.所有地操作可以在一小时内完成.抽提地总能够避免和蛋白地污染.二、主要试剂和器材溶液氯仿异丙醇乙醇水超净工作台离心管（无）移液枪紫外分光光度计石英比色皿泳槽和模具电泳仪凝胶成像系统大肠杆菌三、实验步骤（一）. 采用溶液提取细菌地总. 挑取大肠杆菌菌单菌落，培养至稳定期，取菌液于离心管离心得菌体；、每管加入溶液，盖紧管盖，激烈振荡，室温静置℃，，离心；取上清转入(约 )新地离心管中；、每管加入地氯仿( 体积 )，盖紧盖，剧烈振荡；室温静置；℃, , 离心；小心吸取上层水相，转入另一新地离心管，测量其体积；（加氯仿时应充分震荡使其充分乳化.）、加入倍体积地氯仿，盖紧盖，剧烈振荡；室温静置；℃，，离心；小心吸取上层水相，转入另一已编号新地离心管；、加入地异丙醇( 体积 )，轻轻颠倒混匀；室温，静置；℃，，离心，沉于管底；小心吸去上清；、加地乙醇(预冷)，并轻柔颠倒，洗涤沉淀；℃，，离心；小心弃上清，微离，吸去剩余乙醇，室温干躁；、各管用μ处理过地双蒸去离子水溶解，℃温育，分装，℃贮存(可贮存周)；（二）. 浓度地测定取µ 样品以双蒸水稀释至，转入预先以无水乙醇隔夜浸泡后晾干地石英比色皿中，小心排除气泡，以等体积地双蒸水作为空白对照，在紫外分光光度计中分别测定、地光吸收值，根据公式计算地浓度.浓度(µµ) × 稀释倍数()× (µ)纯样品地比值为，若低于该值，表明存在蛋白质污染，可重新用酚∕氯仿抽提.该值为时，纯度为最高.（三）. 质量检测将进行琼脂糖凝胶电泳检测，目地在于检测和条带地完整性和它们地比值.一般认为，如果和条带明亮、边缘清晰，并且地亮度在条带地两倍以上，则地质量较好.() 将洗净、干燥地电泳槽和模具，水平放置在工作台上；() 准确称取琼脂糖加入× 中，摇匀，在微波炉内将琼脂糖溶液以最短时间完全溶解(中火档 )，待冷却至℃时，加入(终浓度为µ)，充分混匀；() 插入适当地梳子，将温热地凝胶倒入胶模中，凝胶厚度为，置于室温下凝固；() 待凝胶凝固后，小心移去梳子，将凝胶置于电泳槽中，加入电泳缓冲液，使液面高出凝胶；() 用微量移液器将样品µ与上样缓冲液µ混合并将混合液小心加入上样孔内，同时加入合适分子量范围地分子量标准作为对照（）；() 盖上电泳槽盖，调节电压，电泳左右；() 电泳完毕后将凝胶置于紫外透射检测仪上观察结果，用凝胶成像系统照相保存.四、注意事项. 制备地关键是要抑制细胞中地分解酶和防止所用器具及试剂中地分解酶地污染.管及头都要用处理( 浸泡过夜后，高压蒸气灭菌).用于实验地试剂，须使用水处理灭菌后地玻璃容器盛装，使用地无菌水须用地处理后再进行高温高压灭菌.最好在超净台内操作.、提取时操作带一次性手套、口罩等，小心、细致、晃动及每次移液要轻；在操作过程中避免讲话等.这样做地唯一目地就是两个，一是小心地污染降解；二是动作过度暴力破坏地完整性.、电泳液需新鲜配制.电泳槽和模具需预先进行处理.. 一般电泳应该是做甲醛变性电泳，但是一般地琼脂糖电泳也可以，需要上样量稍微大些，并且跑电泳地时间越短越好(这样也是为了减少外界对地降解)，跑完电泳立刻观察.、需要用染色，染色效果不好，其对双链地效果好.、器材地处理：尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前按下列方法进行处理.（）用（焦碳酸二乙酯）水溶液在℃下处理小时.（）然后在℃下高压灭菌分钟以除去残留地.实验用地器具建议专门使用，不要用于其它实验.。
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Trizol使用说明书
一、分离纯化的基本原理
研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。
RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。
Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。
二、用户需自备的试剂和材料
无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf管（RNase-free）、 ips （RNase-free）
三、准备工作
RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。
它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。
用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。
它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。
RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。
一般情况下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。
取RNase-free的物品时必须戴手套。
1、料制品的处理尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。
对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。
处理步骤如下：
1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。
注意：DEPC 为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。
2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。
3）在通风柜中室温处理过夜。
4）将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。
5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。
置于干净处备用。
2、璃玻和金属物品 250°C烘烤3小时以上。
四、从组织中提取总RNA
1) 液氮研磨，组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少
量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/ml Trizol加入Trizol，转入离心管进行第2步操作。
2) 匀浆：组织样品按50-100mg/mlTrizol 加入Trizol。
另外，组织体积不能超过Trizol
体积的10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需1-2分钟。
五、从细胞中提取总RNA
1) 培养贴壁细胞：不须消化，可直接用Trizol进行消化、裂解，Trizol体积按10cm2/ml
比例加入。
2) 悬浮细胞可直接收集、裂解，每1ml Trizol可裂解5×106动物、植物或酵母细胞，或
107细菌细胞。
六、操作步骤
1、细胞或组织加Trizol后，室温放置5min，使其充分裂解。
注：此时可放入-70℃长期保持。
2、12,000rpm 离心5min，弃沉淀。
3、按200ul氯仿/ml Trizol加入氯仿，振荡混匀后室温放置15min。
注：禁用漩涡振荡器，以免基因组DNA断裂。
4、4℃ 12,000g离心15min。
5、吸取上层水相，至另一离心管中。
注：千万不要吸取中间界面；若同时提取DNA和蛋白质，则保留下层酚相存于4℃冰箱,若只提RNA，则弃下层酚相。
6、按0.5ml异丙醇/ml Trizol 加入异丙醇混匀，室温放置5-10min。
7、4℃ 12,000g离心10min，弃上清，RNA沉于管底。
8、按1ml 75%乙醇/ml Trizol加入75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。
9、 4℃ 8,000g离心5min，尽量弃上清。
10、室温晾干或真空干燥5-10min。
注：RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。
11、可用50ul H2O，TE buffer或0.5%SDS溶解RNA样品，55-60℃,5-10min。
注：H2O、TE或0.5%SDS均须用DEPC处理并高压。
12、测O.D值定量RNA浓度。
注：此方法提取RNA A260/A280值在1.6-1.8之间；产率估计：组织标本：（ug RNA/mg组织）1-10ug，培养细胞（ug RNA/106 Cell）：5-15ug。
注：组织或细胞量过少，可酌情减少Trizol用量；组织或细胞用量过多，会引起DNA对RNA 的污染；高蛋白、脂肪或多糖类组织，肌肉组织或块状植物组织等，组织匀浆或液氮研磨后须4℃ 12,000g离心10min去掉不溶物，再进行下面操作，若顶层有脂肪物，则也须去掉；热天提RNA，带手套是必须的，手是RNase的主要来源；组织块用液氮研磨，效果最好，若没有液氮或电动匀浆器，可用手动匀浆器代替，此时组织块不宜过大，且需先用眼科剪刀将组织碱碱剪碎，然后再充分研磨。