新生儿溶血病的实验室检查
新生儿溶血病实验室诊断及换血治疗
疑问
• 母亲D？ • 患儿母亲为弱D， • 误检为D阳性
• 治疗
D抗原分类
• D：常见的D抗原，普通抗-D血清、盐水法即可检出
• 弱D：D抗原数量减少或D抗原部分抗原表位缺失， 需用不同厂家的抗D血清，用盐水法和抗人球蛋白 法确认
• Ddel:需用吸收放散的方法确认
• 增强D
弱D检测
• 人类红细胞血型系统：30种不同的血型抗原 系统，240个以上的血型抗原
•
效价上升且>1:32
• 羊水胆红素测定：
•
妊娠28-30周抽羊水测定胆红素，在450nm处OD >0.15
• B超：胎儿及胎盘有无水肿
新生儿期诊断
• 临床表现：贫血、黄疸、水肿、肝脾肿大、
•
胆红素脑病等
• 外周血检测： • Hb、Ret、Hct、TBIL\DBIL、血型、Rh因子
• 脐血/新生儿血型抗体检测
谢谢 聆听
AB型(Rh+/-)血浆
ABO+Rh溶血 Rh血型同母亲的O型洗涤RBC
AB型(Rh+/-)血浆
* 情况紧急或血源困难时，也可采用ABO血型同患儿的Rh阳性血
HDN换血者用血质量要求
• 供血者两年内所有病原微生物检查阴性 • 要求用CMV（-）血
• 除粒细胞制剂外，所有成分血都应去除白细 胞
病例
Hb(g/L)
119
108
195
TB(mmol/L)
372
314
238
DB(mmol/L)
354
289
232
治疗
• 光疗、白蛋白、丙种球蛋白
• 换血： • O型RhD阴性洗涤红细胞 4U • +AB型RhD阴性冰冻血浆 250ml
[医学]新生儿溶血病及临床用血的选择
![[医学]新生儿溶血病及临床用血的选择](https://img.taocdn.com/s3/m/a5a1fe63a32d7375a41780d0.png)
影响ABO新生儿溶血病发病的因素
IgG抗A（B）抗体量与溶血程度有一定的相关性， 但并非绝对，影响ABO新生儿溶血程度的其他因 素有：
新生儿A、B抗原强弱 血型物质的含量 胎盘的屏障作用 IgG抗体亚型的不同： IgG1， IgG3强
IgG2， IgG4弱
Rh新生儿溶血病
Rh系HDN是由于母婴Rh血型不合所致的Rh免疫 抗体作用于胎儿红细胞造成的高胆红素血症。 此病一般影响第二胎以后的胎儿，而第一胎常常 不受影响
ABO系的HDN比Rh系HDN黄疸轻， 出现也较晚，在出生后第2~5天出现，易 被误诊为生理黄疸。 Rh系HDN黄疸出现 较早，出生后数小时即出现，且逐渐加深
HDN实验室检查
通过血清学检查可了解： 1 母婴血型是否不合。 2 母亲血清是否存在与患儿红细胞相对应的IgG性质的抗体。 3 患儿红细胞是否被来自母亲的IgG抗体所致血清学检查对新生儿溶血病的诊断有重要意义。
HDN实验室检查
一．对标本的要求：
1．标本采集时机：出生后5天内采集静脉血。 （脐血标本不宜作为检测标本，尤其对ABO新生儿HDN，容
易出现无临床意义的阳性结果。新生儿出生5天以后采集的 血样，检出阳性结果机会减少。） 2. 标本血量的要求：静脉血3ml→干燥管→ 送检。 3. 当怀疑存在ABO以外溶血时（如Rh不合HDN），还应同 时采集母亲血液4~5ml→干燥管。
• 抗I、抗H、抗Lea、Leb、P1等属IgM性质抗体， 不能通过胎盘，故不会产生HDN。
ABO新生儿溶血病
ABO系HDN是由于母婴ABO血型不合，母体的 IgG抗A或抗B经过胎盘进入胎儿血循环破坏胎儿红 细胞所引起。
此病多见于O型母亲所生的A型或B型婴儿，与O 型母亲含有IgG抗A（B）抗体有关。A（B）型母亲 所生的B、A、（AB）型婴儿仅少数发生溶血病
新生儿溶血病(HDN)的免疫血液学实验
3.与产前HDN检查有关的几个临床问题
妊期抗体突然猛升、猛降 ABO,Rh不合同时存在, ABO不合有”保护”作用, “外祖母” 效应, Rh HDN 可第一胎发病
二.产后检查
#2022
放散试验 热放散
注意:
对临床,三项试验(直抗,游离,放散)只报告结果(阴/阳性),但要按上面格式记录存底 三项试验(直抗,游离,放散)均可用 卡 操做,
中和血清100ul, 加夫红细胞悬液50ul: 作聚凝胺 如果有凝集, 妻中和血清倍比稀释, 加夫红细胞悬液, 作聚凝胺或AHG试验,测IgG ABO 抗体效价
(四) 注意:
夫未来检查, 或夫为AB型, 怎么办? 可用试管法, 也可用 HDN 卡 试验
01
第一章
3.HDN 产前检查不属急诊 4.IgG ABO 抗体太高者,慎报!:
1.ABO HDN
单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。您的内容已经简明扼要，字字珠玑，但信息却千丝万缕、错综复杂，需要用更多的文字来表述；但请您尽可能提炼思想的精髓，否则容易造成观者的阅读压力，适得其反。正如我们都希望改变世界，希望给别人带去光明，但更多时候我们只需要播下一颗种子，自然有微风吹拂，雨露滋养。恰如其分地表达观点，往往事半功倍。当您的内容到达这个限度时，或许已经不纯粹作用于演示，极大可能运用于阅读领域；无论是传播观点、知识分享还是汇报工作，内容的详尽固然重要，但请一定注意信息框架的清晰，这样才能使内容层次分明，页面简洁易读。如果您的内容确实非常重要又难以精简，也请使用分段处理，对内容进行简单的梳理和提炼，这样会使逻辑框架相对清晰。
五.临床特点
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新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准检测流程
HDN换血治疗中血液及血型选择标准
❖ 二、ABO、Rh（D）血型鉴定
❖⒈ 选用经国家批准且批批检测合格的 单克隆抗-A、抗-B、抗-D(IgM)和A、B 型标准试剂红细胞。
❖⒉ ABO血型鉴定：母亲血样做正反定型； 患儿血样只做正定型。推荐使用试管法 和微柱凝胶血型卡，不推荐使用纸片或 玻片法。
HDN换血治疗中血液及血型选择标准
HDN产前免疫血液学试验检测标准
❖ （1）第一次检测，一般可在妊娠第1216周进行，以此作为抗体基础水平。如 果检测到ABO以外抗体，或高效价的IgG 抗A（B）抗体，建议每月复查一次。
❖ （2）第二次检测在妊娠28-30周做，以 后每隔2-4周重复测定一次，了解抗体 增加速度。抗体效价上升快，提示HDN 的可能性大。
❖ 二、证实患儿血清中是否有来自于 母亲的抗体；
❖ 三、患儿红细胞是否被来自母亲的 免疫性抗体所致敏。
HDN产后免疫血液学试验检测标准
❖ 一、标本要求 ❖ ⒈ 采样时间建议： ❖ （1）可疑ABO不合HDN患儿血清学
检查最好在出生后1-7天之内； ❖ （2）可疑Rh等其他血型系统血型
不合应在出生后尽早为好。
❖ 二、试剂与设备（查看Word文件） ❖ 三、检测方法 ❖ ⒈ 产妇血样检测： ❖ 同《HDN产前免疫血液学试验》孕妇血
样检测条目。 ❖ ⒉ 患儿血样检测： ❖ （1）红细胞：ABO正定型、RhD血型
HDN产后免疫血液学试验检测标准
❖ 说明：新生儿ABO定型，多数专家 认为反定型没有意义。
❖ （2）红细胞直接抗人球蛋白试验 （DAT）：
国内外进展 ❖⒉ 研讨：
（1）研讨内容： ① 样本采集 ② 实验项目及操作 ③ 结果判定或解释
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程1、目的：规范血液免疫学产前检查操作，确保试验过程及结果的准确性与可靠性。
2、范围：本规程适用于实验室血液免疫学产前检查试验操作。
3、职责：经授权的血型实验室试验人员负责血液免疫学产前检查试验过程及报告的发出。
4、原理孕妇和丈夫ABO血型不合（O/A、O/B、O/AB、A/B、A/AB、B/A、B/AB）时，孕妇体内的IgG抗A（B）可能会引起新生儿溶血病的发生。
本试验通过检测孕妇血清中有无IgG性质的抗A（B）抗体及其效价（应用巯基试剂破坏IgM抗体，检测IgG抗体效价）即可预测ABO系HDN发生的可能性。
应用筛选红细胞可检测孕妇血清中是否存在不规则抗体，如果存在，应用谱细胞进行抗体鉴定，确定抗体的特异性，进一步检测非ABO系新生儿溶血病。
5、所需设备、材料或试剂：37℃恒温水浴箱、细胞洗涤离心机、抗-A抗-B血型定型试剂（单克隆抗体）、抗-D RH血型定型试剂（单克隆抗体）、凝聚胺介质试剂、抗人球蛋白试剂（抗-IgG、C3d）、（A、B、O）型标准红细胞悬液（2—5%）、商品化筛选细胞、谱细胞、2—ME试剂、12×75mm试管、塑料滴管。
6、检测环境条件：温度：18—25℃；湿度：30—70%7、标本要求7.1标本接收在接收标本时，应尽可能的了解、核对、记录患者的相关资料，包括受血者姓名、年龄、性别、临床诊断、输血史、用药史、妊娠史、标本编码等；7.2检验人员收到被检者产前检查申请按照申请单内容在试管上做标记(用记号笔在试管上标明被检者姓名、性别)，保留申请记录。
7.3按照要求进行血液采集。
将采好的血液沿试管壁注入已标识的抗凝试管中，反复颠倒混匀，放入2-8℃冰箱待用。
并填写《外来标本交接记录》及相关记录。
7.4标本的种类与数量：产前检查需送夫妇血样，血样均需抗凝（EDTA抗凝），女（母）5ml，男3ml。
7.5标本的保存与处理：完成所有试验内容后，要仔细核对实验结果，发出实验报告后，将实验所用的标本原始送检管存于2-8℃冰箱内至少7天以便进行查找和核对，之后交由单位相关部门统一处理。
新生儿溶血的诊断标准
新生儿溶血的诊断标准新生儿溶血的诊断标准主要包括以下几个方面：1. 症状诊断：如果新生儿出现贫血、黄疸、肝脾肿大等症状，应考虑新生儿溶血的可能性。
特别是当母亲是O型血，父亲是AB型血，或者母亲是Rh阴性血（熊猫血），父亲是Rh阳性血时，更应考虑新生儿ABO溶血或Rh 溶血的可能。
2. 血型检查：如果母子血型不合，可能存在新生儿溶血。
例如，母亲是O型血，父亲是AB型血，新生儿是A型或B型血，就可能发生ABO溶血。
3. 实验室检查：实验室检查包括改良Coombs试验和抗体释放试验等。
如果这些试验中有一项阳性，即可确诊新生儿溶血。
同时，血常规检查也可能发现白细胞偏高或正常，血红蛋白偏低，肝功明显升高，网织红细胞升高，以及抗人球蛋白试验阳性等表现。
4. 产前诊断：对于既往有不明原因死胎、流产、新生儿中毒黄疸史的孕妇及其丈夫，应进行ABO、Rh血型检查，不合者进行孕妇血清中IgG抗A或抗B检测。
如果孕妇血清中IgG抗A或抗B>1:64，提示有可能发生ABO溶血病。
Rh阴性孕妇在妊娠16周时应检测血中Rh血型抗体做为基础值，以后每2-4周检测一次，当抗体效价上升时，提示可能发生Rh溶血病。
5. 其他症状：新生儿溶血病还可能导致胎儿水肿，主要发生在Rh溶血病中。
在胎儿期有大量红细胞破坏，患儿全身水肿、苍白、皮肤瘀斑、胸腔积液、腹水、心音低、心率快、呼吸困难、肝脾肿大。
胎盘也明显水肿，胎盘重量与新生儿体重之比可达1∶(3～4)，严重者可发生死胎。
综上所述，新生儿溶血的诊断需要综合考虑临床症状、血型检查和实验室检查结果。
如有疑虑，请及时就医咨询专业医生。
新生儿溶血病 (2)
2、新生儿ABO及Rh血型鉴定:试管法。
（1）取试管4支，分别注明抗A、抗B、抗 A,B和抗D;
（2）分别加入抗体试剂，1滴;
（3）每支试管加入患儿5%红细胞悬液1滴;
（4）3400rpm离心15s，轻轻摇动试管观 察结果。
3、直接抗球蛋白试验: 阳性对照：IgG抗D致敏的O型红细胞悬液 阴性对照：正常人O型红细胞悬液
50μl
25μl
3
50μl
25μl
37℃孵育15min，以1030rpm离心10min。观 察结果。
ABO-HDN游离试验结果判断
Ac Bc Oc +- - ++++/- +/- + -- -
意义 存在游离的抗A抗体 存在游离的抗B抗体 存在游离的抗A、抗B抗体或抗A,B抗体 存在游离的ABO血型系统以外抗体 没有游离抗体
新生儿溶血病检测的结果判断
直抗试验 游离试验 释放试验
-
-
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+
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+
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+
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+
+
结论 不能证实为由血型抗体引
起的新生儿溶血病 可疑为新生儿溶血病 可疑为新生儿溶血病 证实为ABO新生儿溶血病 证实为ABO新生儿溶血病 证实为ABO新生儿溶血病 证实为ABO新生儿溶血病 证实为ABO新生儿溶血病
4. 释放试验的特点是敏感度高，由于释放试 验制备的抗体比直接抗球蛋白试验参与的 抗体量多2个数量级，因此有较高的敏感度， 是三项试验中敏感度最高的试验，因此该 试验阳性是判断新生儿溶血病最有利的证 据。
336例新生儿溶血三项试验检测结果分析
336例新生儿溶血三项试验检测结果分析摘要】目的：了解高胆红素血症患儿的新生儿溶血病（HDN）发病情况。
分析常备溶血三项试验诊断HDN的临床价值。
方法：对2013年1月～2014年6月我院新生儿科收治的336例疑似HDN患儿的临床资料进行回顾性分析。
结果：抗体释放试验诊断HDN百分率为70.08%，直接抗人球蛋白试验为23.51%，游离抗体试验为47.92%。
直接抗人球蛋白试验和游离抗体试验诊断HDN敏感性仅为29.73%和61.39%，易漏诊。
0～2dHDN检出率为79.54%，3～5d为16.22%。
A型血患儿发生HDN百分率为82.86%，B型血患儿为70.81%，二者差异显著（P<0.05）。
结论：与抗体释放试验诊断HDN相比，直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验有漏诊风险。
抗体释放试验是诊断HDN主要依据。
临床对有症状或怀疑HDN患儿应在出生48h内进行检测。
【关键词】新生儿溶血病；溶血三项试验【中图分类号】R72 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）04-0117-01新生儿溶血病（HDN）并发黄疸较轻时与生理性黄疸相似。
实验室溶血三项试验（直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验、抗体释放试验）检测是区分HDN与生理性黄疸的重要手段，其中抗体释放试验可用于HDN的确诊[1]。
为进一步了解我院高胆红素患儿HDN发病率及溶血三项试验诊断HDN的临床价值，本研究回顾性分析了336例疑似患HDN的高胆红素患儿的溶血三项试验结果并对其进行分析，现报道如下。
1.资料与方法1.1 一般资料2013年1月～2014年6月我院新生儿科母婴血型不同且患高胆红素血症、疑似HDN患儿336例，年龄1～29d，男 158例，女 178例，其母亲血型均为O 型。
患儿出生天数0～2d、3～5d、6～9d、>10d的人数分别为248例（73.81%）、73例（21.72%）、5例（1.49%）和10例（2.98%）。
新生儿溶血
可以证实为 ABO 新生儿溶血病 可以证实为 ABO 新生儿溶血病 可以证实为 ABO 新生儿溶血病 可以证实为 ABO 新生儿溶血病
检测母亲体内的抗体，进一步确定新生儿溶 血的原因。
检测患儿体内的抗体，是为了判断新生儿溶 血的程度，为临床治疗提供依据。
同时，也可能存在ABO合并其他不规则 抗体而导致的新生儿溶血病。
光照疗法：蓝光能加速非结合胆红素分解为无毒无 色的水溶性双吡咯物质，经胆汁和尿很快排出。蓝 光照射是降黄的有力措施，能减少换血的次数，但 不能替代换血，应定时检查胆红素。
药物治疗：主要药物为苯巴比妥。可诱导肝细胞的 酶系统活性，增加结合以及摄取和排泄胆红素的能 力，也可用尼可刹米或二者联用。
2.按标记各管分别加入2%～5%（A、B、O）指示 红细胞1滴，混匀，置于37℃水浴箱中孵育（致敏） 1h后，肉眼观察各管有否凝集，如某管出现凝集， 说明该管有相应盐水抗体，不必继续下面试验；
3.取上述不凝集管，各管用生理盐水洗涤3次（洗涤 方法同婴儿标本处理），吸尽盐水，各管加多特异 性抗球蛋白试剂2滴，混匀，以1000×g离心15s， 肉眼观察结果。
婴儿红细胞抗体释放试验（乙醚放散）：
1.取洗涤后婴儿压积红细胞12ml于试管中，加等量生理盐水和双 份乙醚，用玻璃纸封口，颠倒混合10min因乙醚沸点低，其间注 意放气动作轻柔。
2.待红细胞全部破坏后，打开封口； 3.以2000×g离心5min，离心后分为三层，取下层深红色层液体
放散液转移入另一试管中； 4.将其置于37℃水浴箱孵育30min，让乙醚充分挥发； 5.取12支试管，编号同谱红细胞，第12管编为自身。均匀加入放
3.各管加入多特异性抗球蛋白试剂2滴，混匀， 1000×g离心15s;
新生儿溶血病设计
新生儿溶血病(HDN)实验室检查一、父母及新生儿血型鉴定目的：研究父母、新生儿血型与新生儿溶血病的关系原理：用已知的IgM类特异抗体与受检红细胞在室温条件下、盐水介质中反应，根据红细胞是否出现凝集来测定受检者细胞膜上有无与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定受检者的血型。
器材：小试管、记号笔、试管架、离心机、玻片、显微镜试剂：标准抗A、抗B血清、单克隆IgM型RhD抗血清（商品试剂）生理盐水标本：抗凝静脉血或末梢血实验步骤：制备受检者5%红细胞生理盐水悬液：抗凝血离心或红细胞自然沉降后取管底下层的红细胞大约10滴于小试管中，加入生理盐水2ml，充分混匀红细胞与生理盐水。
2500r/min离心3min后弃上清液，重复洗涤3次。
自管底吸取1滴压积红细胞加入19滴生理盐水混匀，此即为5%的红细胞生理盐水悬液。
1、玻片法（1）取洁净的玻片1块，用记号笔画出小格，标明A、B、D（2）在玻片已标记的区域内滴加抗A、抗B血清、RhD抗血清各1滴（3）在滴加抗血清的小格中分别加入受检者5%红细胞生理盐水各1滴；不断轻轻转动玻片，使抗血清与红细胞充分混匀，持续约1~5min（4）观察并判断结果肉眼观察有无凝集或溶血反应，再用低倍镜观察，判断阴性、阳性和阳性强度。
2、试管法（1）取小试管3支，分别标记A、B、D（2）分别滴加抗A、抗B血清、RhD抗血清于相应标记的试管中（3）分别滴加受检者5%红细胞生理盐水悬液1滴于试管中，混匀（4）以1000r/min离心1min（5）观察并判断结果取出试管，先观察上层清液有无溶血现象，再将试管轻轻摇动使沉于管底的红细胞浮起，肉眼观察有无凝集及凝集强度。
注意事项：1、器材：所用器材必须干燥洁净、防止溶血；为避免交叉污染，试管、尖滴管均一次性使用。
2、试剂：分型血清质量性能应符合合格实际要求。
3、标本：受检红细胞标本新鲜，无细菌污染。
4、标准抗血清从冰箱取出待其平衡致室温后在使用，用毕后应尽快放回冰箱保存，减少细菌污染。
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精品文档在我国诊断新生儿溶血病的实验室检查主要是三项试验（直接抗球蛋白试验、游离抗体试验、放散试验），
直接抗球蛋白试验主要检测新生儿红细胞是否被来自母亲IgG抗A（B）所致敏；游离抗体试验是患儿血清的IgG抗A（B）来自母亲，如果新生儿血清中发现与其红细胞不配合的IgG抗A(B)时，表明婴儿体内有抗体，可能受害；
放散试验采用的是试管抗球蛋白技术和微柱凝胶技术，
用放散液与标准ABO型红细胞反应，（与O型红细胞反应视做阴性对照）均无凝集者，表明未查出抗体，
A型新生儿红细胞放散液只与标准A型红细胞凝集，表明放散液检出抗-A，而B 型新生儿红细胞放散液只与标准B型红细胞凝集，表明放散液检出抗-B，
而A型新生儿红细胞放散液与标准B型红细胞凝集或B型新生儿红细胞放散液与标准A型红细胞凝集,表明放散液中检出抗-A，B。
我们采用微柱凝胶技术对我院541例母婴血型不合且有严重的新生儿黄疸或高胆红素血症患儿的血标本进行了三项试验，结果表明：ABO母婴血型不合新生儿溶血病（HDN）171例，其中OA115例，OB56例。
ABO溶血病因红细胞的抗体结合较少，直接抗球蛋白试验常为阴性或弱阳性，血清游离抗体阳性，抗体释放试验阳性。
Rh溶血病直接抗球蛋白试验强阳性，游离抗体强阳性，抗体释放试验强阳性。
我院新生儿科对溶血严重的患儿及时进行了换血治疗（ABO溶血采用O型洗涤红细胞+AB 血浆的血液，Rh溶血采用ABO血型同患儿，Rh血型同母亲的血液）微柱凝胶技术用于新生儿溶血病的检测，方法简便、快速、判断结果标准，可成为医院实验室常规检测方法。
实验室能为临床快速准确提供试验报告，有利于患儿的早期诊断、早期治疗，对提高新生儿健康水平有很重要的意义。
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