抗链球菌溶血素O(ASO)测试：原理,步骤,解释和临床意义
SOP标准操作程序 ASO
SOP标准操作程序抗链球菌溶血素O(ASO)1 实验原理：病人样品，标准液或质控中的人体抗链球菌溶血素O(ASO)与包被有链球菌溶血素O 抗原的胶乳发生免疫反应，形成免疫复合物产生混浊。
病人样品产生的浊度与标准液或质控中抗链球菌溶血素O(ASO)标准产生的浊度来比较，进行计算。
2 标本的收集与处理：2.1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2. 抗凝剂：血清、肝素或EGTA血浆，标本最好不要溶血。
留取标本后请尽快分离血球血浆。
2.3 标本的稳定性：在室温条件下（15～25℃）可以稳定一周。
3 材料:3.1 材料：无需配制，开瓶即用，540nm试剂的空白吸光度超过1.2ABS试剂失效。
工作液：R1与R2按9：1混合,2-8℃可稳定20天。
标准品用1ml蒸馏水复溶，2-8℃稳定一个月。
3.2 试剂的贮存：3.2.1. 当保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。
3.2.2. 开盖后放于仪器中可以稳定30天。
3.2.3 开盖后避免污染。
3.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
4 抗链球菌溶血素O(ASO)（日立7600生化分析仪）标准样本标准A A )/(∆∆⨯=C ml IU C册或《7600A 使用说明书》中查到。
5 计算：*抗链球菌溶血素O(ASO)标准液浓度见瓶签。
6 试剂性能概要采用科美公司规定的参数进行测定，线性范围（或可报告范围）0-600U/L 。
7 超出线性范围（或可报告范围）的处理如样本中（ASO ）的浓度大于 600U/L 时，需对样本进行稀释后再测定，结果乘以稀释倍数。
8 方法的局限性胆红素≤20mg/dl,血红蛋白≤10g/L,甘油三酯≤1000mg/dl，RF≤2200IU/ml对测定无干扰。
一些药物等可能会产生干扰。
9 其他必须说明的内容9.1 胶乳试剂倒入缓冲稀释液前一定摇匀，并且尽量避免泡沫形成。
9.2 所有的试剂已进行乙肝表面抗原，丙肝抗体和抗艾滋病毒抗体检测（FDA方法），结果阴性。
抗链球菌溶血素O
抗链球菌溶血素“O”（ASO）测定试剂盒（胶乳凝集法）【产品名称】通用名称：抗链球菌溶血素“O”（ASO）测定试剂盒（胶乳凝集法）商品名称：抗链球菌溶血素“O”（ASO）测定试剂盒（胶乳凝集法）英文名称：Anti-streptomycin Reagent Kit（Slide Latex Agglutination Test）【包装规格】每包装盒为：胶乳液5ml；阳性对照0.5ml；阴性对照0.5ml【临床意义】对血清中ASO定性或半定量测定，做辅助诊断用。
【检验原理】本试剂胶乳液石油溶血素“O”和羧化聚苯乙烯胶乳共价交联而成的抗原胶乳。
ASO胶乳的灵敏度调整到200IU/ml，超过上述滴度即出现肉眼可见凝集颗粒，试用本试剂血清标本不需要稀释即可直接测定。
【主要组成成份】胶乳液成份：抗链球菌溶血素“O”胶乳、牛血清白蛋白、磷酸盐缓冲液阳性对照成份：羊抗SLO抗血清、牛血清白蛋白、磷酸盐缓冲液阴性对照成份：牛血清白蛋白、磷酸盐缓冲液不同批号试剂盒中的乳胶液、阳性对照和阴性对照不能混用。
【储存条件及有效期】储藏温度2-10℃，切勿冷冻。
有效期一年。
【适用仪器】手工操作【样本要求】经离心获得新鲜血清样本，贮存于2-8℃，48小时内使用，时间过长须冰冻贮存。
【检验方法】定性实验：试剂使用前，预置达室温；轻轻混匀胶乳试剂；核对阴性和阳性对照；在反应板孔中加一滴未稀释血清（50μl）；然后加一滴胶乳试剂在血清中；搅匀、轻轻摇动使其充分混和，二分钟后观察结果。
阴性和阳性对照同上法操作。
半定量实验：血清以生理盐水（0.9g氯化钠溶解于蒸馏水中，稀释至100ml）倍比稀释，可参照下法操作。
稀释倍1：2 1：4 1：8血清100μl生理盐水100μl 100μl 100μl→100μl→100μl标本量50μl 50μl50μlIU/ml ＞400 ＞800 ＞1600【参考值(参考范围)】正常参考范围：0-200IU/ml【检验结果的解释】凝集出现可判断样本中ASO＞200IU/ml阳性；无凝集出现可判断样本中ASO＜200IU/ml阴性。
ASO
一、目的：规范ASO测定的操作程序，确保ASO测定的结果准确二、适用范围：适用于血清标本的ASO测定三、方法原理：ASO-试剂用于以一种比浊速率法测定人抗链球菌溶血素O抗体浓度。
在此反应中，样品中的链球菌溶血素O抗体与有高度纯化重组链球菌溶血素O涂层的乳胶颗粒结合，导致凝集作用和光吸收变化。
SYNCHRON®系统将按比例自动把适量体积的样品和试剂分配到一个反应杯中。
抗链球菌溶血素-O所用的样品对试剂比例为1比50。
系统将监测340纳米的光吸收变化。
此光吸收变化与样品中的人ASO-抗体浓度成正比，SYNCHRON®系统依此并根据一条单点、线性校正曲线，用一种符合世界卫生组织规定的标准化校正剂计算并给出人ASO-抗体浓度。
化学反应方案四、分析参数：五、标本采集与处理：5．1 受检者的准备：空腹，采集前静坐5min，如有输液，应在停止输液3min后在另一侧肢体静脉采集。
5．2 静脉采血：除非是卧床病人，一般取坐位从肘静脉采血，使用止血带的时间不超过1min，穿刺成功后立即松开止血带。
5．3 抗凝剂：本室采用带分离胶的真空采血管，其中包含促凝剂。
5．4 标本处理：血标本应改尽快送到实验室，室温下放置20min后即可离心，可直接用分离胶管上机，加塞可在-4℃条件下保存3天，长时间保存要求分离出血清置-20℃冻存。
六、标本拒收标准：1）严重溶血、脂血2）标本标识不明3）采血量不足2ml七、试剂：本室采用BECKMAN COULTER公司的产品，为液体双试剂。
无须预处理。
未开瓶于+2°C至+8°C储存的ASO-试剂，储存期可达到试剂筒标签上标明的储存期限。
开瓶后，本试剂可保持稳定60天，除非失效日期已过。
储存温度高于+45°C ，对本试剂性能有不利影响。
不可冷冻。
八、校准品：为BECKMAN-COULTER 产品，SYNCHRON ®系统增强型校正剂5，开瓶后在2-8℃可保存20天。
ASO
速 离心 后 取血 清待 检 。采用 免疫 散射 比浊 法 测定 ＡＳ Ｏ滴 度 ， 正 常值 ＜２ ２ ３ Ｕ／ ｍＬ ¨ ｊ ． Ｊ 。本 研 究 选 用
Ｂ Ｎ１ Ｉ 特 种蛋 白分 析仪 （ 西 门子 公 司 ） ， 严 格按 标 准 规 程进 行 操 作 ；③ 抗 ＤＮＡ 酶 Ｂ 检测 ： 采用 微 量 中和法 ， 灭活血 清后 ３ 倍稀释 ， 加入 ＤＮＡ 酶 Ｂ抗 原温育 １ ５ ｍｉ ｎ ， 然 后 加 甲基 绿 一Ｄ Ｎ Ａ 底物 ， 置 入
平均 （ ６ ． ４ １ ±２ ． ５ ６ ） 岁 。各 组 患 者性 别 、 年 龄 等 资
料 比较 ， 差异 无 统计学 意 义 （ Ｐ＞０ ． ０ ５ ） 。
１ ． ２ 检 测 方 法
０ ． ０ ５ ） ， 且 检测 方法 不 同 ， 对 相 关溶 血 性链 球 菌 感
染 疾病 的检 测 阳性 率不 同 ， 见表 ｌ 。
儿 童感 染 Ａ 族链 球 菌 （ ＧＡ ｓ ） 后， 可 引起 上 呼
吸道感 染 、 猩红热 、 风 湿热 、 皮肤 感 染 、 肾小 球 肾炎
① 咽拭 子培养 ： 用 棉签 取 患 Ｊ Ｌ Ｎ喉 部分 泌 物 送检 ； ② ＡＳ Ｏ测定 ： 抽取 外周 静 脉 血 ３ ｍＬ， 经高
和 风湿 性 心 脏 病 等 。Ｇ ＡＳ感 染 后 可 产 生 多 种 外 毒 素和侵 袭 性 酶 ， 严 重 者 可导 致 中毒 性 休 克 综 合 征（ Ｔ Ｓ Ｓ ） ， 后 者 病死 率 高达 ２ ０ ％ ～３ ０ ％ｉ ，严重 危 及 患儿健康 和 生命 安 全 。Ａ族 溶 血性 链 球 菌感 染 后， 在 细胞 外 产 生 抗 链 球 菌 溶 血 素 Ｏ（ Ａ Ｓ ０） 和 抗 Ｄ Ｎ Ａ酶 Ｂ抗 体 ｌ ２ Ｊ 。测 定 血 清 中相 应 的 ＡＳ Ｏ等 抗 体 滴度 ， 能 为临床 明确诊 断 Ｇ Ａ Ｓ感染 提供依据 。
实验二 ASO试验
实验二抗链球菌溶血素“O”（ASO）试验
——胶乳凝集法
【实验目的】
1.掌握ASO试验的原理及临床意义
2.熟悉ASO试验的操作步骤和结果分析
【实验仪器、材料】
1. ASO测定试剂盒（胶乳液5ml、阳性对照0.5ml、阴性对照0.5ml）。
2.待测患者血清、生理盐水、移液枪、黑色方格反应板等。
【实验内容】
一、定性实验
1.冰箱中取出试剂，核对阴性和阳性对照，平衡至室温；
2.准备黑色反应板（3孔：待测血清标本/阳性对照/阴性对照），标记；
3.分别加一滴（50ul）未稀释血清样本、阳性对照、阴性对照；
4.各反应孔中加一滴胶乳试剂（用前颠倒混匀）；
5.搅匀、轻轻摇动使其充分混合，2分钟观察结果。
二、半定量实验
待测患者血清以生理盐水倍比稀释后，不同稀释倍数血清各取50ul，加入胶乳试剂观察结果。
血清稀释度和ASO滴度关系大致如下：
结果判断：
❖若胶乳颗粒凝集为阳性反应，可判断样本中ASO>200IU/ml；
❖胶乳颗粒不凝集仍保持均匀胶乳状者为阴性反应，可判断样本中ASO<200IU/ml；
❖1:2凝集为“+”，1:4凝集为：“++”，1:8凝集为“+++”，不凝集为“-”。
【实验结果】
1.定性实验
2.半定量实验
【结果分析、讨论】。
抗链球菌溶血素O（ASO）测定
抗链球菌溶血素O(ASO)测定1检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2原理ASO的测试建立在胶乳免疫测定法基础上，当血清中含有ASO时，它与R2中的SLO反应形成浊度，通过测量反应生成的浊度，并与标准的进行比较，可得出样本中ASO的浓度。
3标本要求3.1使用新鲜血清,不使用血浆.3.2在采集血液后2h分离血清.3.3 8h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.4试剂4.1试剂：本科使用浙江伊利康生物技术限公司的试剂盒. （浙食药监械（准）字2014第2400384号 YZB/浙 2314-40-2014）4.1.1试剂盒组成如下:R1：氯化铵缓冲液：0.2mmol/L叠氮钠：0.95g/LR2：抗链球菌溶血素“O”致敏胶乳液：适量叠氮钠：0.95g/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激作用和毒性，请勿直接接触皮肤及眼睛。
一旦接触，即用大量清水冲洗。
请勿吞服。
4.2 校准品：使用浙江伊利康生物技术限公司提供的ASO校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
抗链球菌溶血素O（ASO）测定（胶乳凝集法）
抗链球菌溶血素O（ASO）测定（胶乳凝集法）1.原理将S LO包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上，此致敏胶乳在与待测血清中的抗链球菌溶血素O（AS O）相遇时,即发生肉眼可见的凝集。
2.标本采集2.1采集前病人准备：受检者应空腹2.2标本种类：血清2.3标本要求：采集病人静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：2-8°C保存不应超过24小时，-20°C不应超过3个月，-70°C长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：密封，室温运输。
5.标本拒收标准：污染、标本量不足、脂血或严重溶血标本不宜作此项检测。
6.试剂6.1试剂名称：抗链球菌溶血素（ASO）测定试剂6.2试剂生产厂家：西班牙Bi oSy ste ms S.A.6.3包装规格：60Te st/Kit6.4试剂盒组成：ASO胶乳悬液，阳性对照血清，阴性对照血清。
6.5试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。
7.操作步骤7.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C）。
7.2分别吸取50μl阳性对照和阴性对照血清均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。
7.3吸取50μl待测血清均匀铺加在纸卡的另一圆圈中。
7.4加胶乳试剂50μl于上述血清中。
7.5处分混匀后立即摇动反应板，2分钟内于直射阳光下观察。
7.6如需定量测定，将标本用生理盐水进行对倍稀释后检测。
8.结果判断：定性：出现明显凝集者为阳性。
定量：出现明显凝集的最高稀释倍数×200IU/mL。
9.质量控制：每次测定均做阴阳对照，阴性对照不出现凝集物，阳性对照出现明显凝集。
10.参考范围：阴性或<200I U/m L11.临床意义：成人AS O>500单位有诊断意义。
A SO阳性常见于A族溶血性链球菌感染。
活动性风湿病人，不但ASO增高，并有血沉增快，CRP阳性及白细胞增多的特点。
急性肾小球肾炎也使增高。
aso和rf的检验及临床意义
A SO和R F的检验及临床意义董良菊(江苏省睢宁县李集中心卫生院，江苏睢宁221221)应用科技喃要】A SO(抗链球菌溶血素‘’了，)是A群溶血性链球菌的代谢产物。
它是一种具有溶血活性的蛋白质，能溶解人类和一些动物的红细胞；并具有抗原性，可刺激机体产生相应的抗体，称为A S O R．F(类风湿因子)是—种抗变性IgG的自身抗体。
本文介绍了这两种试剂的使用方法及临床意义。
窗体顶端窗体底端。
拱键溯A SO；t L FA S O(抗链球菌溶血素“0”)是A群溶血性链球菌的代谢产物，它是一种具有溶血活性的蛋白质，能溶解人类和一些动物的红细胞：并具有抗原性，可刺激机体产生相应的抗体，称为A Soo抗链球菌溶血紊“O”论SO)的测定可用于链球菌感染的诊断。
R F(类风湿因子)是一种抗变性I gG的自身抗体．主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液中，是一种抗人或动物I gG分子Fc片断的抗体。
它最易与人及动物的变性球蛋白或免疫复合物中的IgG结合，也可与自身I gG或异体IgG分子反应，并与其他抗原如核蛋白发生交叉反应，与天然IgG 结合的能力较差。
临床上常用于自身免疫性疾病的诊断。
A SO，RF的检验常用方法为胶乳凝集试验(Ia t e×a ggl ut i nat i ont e st，山m，是一种间接凝集试验，所用载体颗粒为聚苯乙烯胶乳，是～种直径为O．8um 大小的圆形颗粒，带有负电荷，可物理性吸附蛋白质分子，但这种结合牢固性差。
1试剂及方法1．1斌荆：扳链球茵溶血素‘‘o'’测定试剂盒类风湿因子测定试剂盒1．2原理A S O试剂是由溶血素“0”和羧化聚丙乙烯胶乳共价交联而成的抗原胶乳A SO灵敏度调整到2001U／m I，超过上述滴度即出现肉眼可见的凝集颗粒。
R F试剂是由纯化的人I gG和羧化聚丙乙：唏胶乳共价交联而成的抗原胶乳。
R F灵敏度调整到201U／m I，超过上述滴度即出现肉眼可见的凝集颗粒。
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什么是抗链球菌溶血素O（ASO）？
抗链球菌溶血素O（ASO或ASLO）是针对链球菌溶血素O产生的抗体，链球菌溶血素O 是由A组的大多数菌株以及C和G 组的许多菌株产生的一种免疫原性，氧不稳定的溶血毒素。
在链球菌感染的过程中，细菌的细胞外产物充当抗原，机体通过产生特异性抗体对抗原作出反应。
链球菌溶血素O（SLO）是几乎所有化脓性链球菌菌株产生的两种溶血素之一（另一种是链球菌溶血素 S）。
字母“ O”表示该毒素对氧气不稳定。
SLO毒素对心脏组织有直接的毒性作用。
在链球菌感染的过程中，SLO刺激特异性抗链球菌溶血素（ASO）抗体的产生，该抗体可在体外中和抗原的溶血特性。
ASO检测的临床意义
大于166 Todd单位（或> 200 IU）的抗链球菌溶血素滴度在成人中被认为是阳性测试，而成人的正常值小于166 Todd单位，这表明是阴性测试。
在研究链球菌后疾病，特别是急性链球菌后肾小球肾炎和风湿热中，ASO抗体滴度的测量很重要。
•超过80％的急性风湿热患者和95％的急性肾小球肾炎患者的ASO滴度升高。
•抗体水平在链球菌感染后的1-3周开始上升，在3-5周达到峰值，然后在6-12个月后又回落到微不足道的水平，因此阳性试验可以表明目前的，但最近的A，C，和G链球菌感染。
ASO测试
ASO测试通过血清学方法如乳胶凝集或载玻片凝集进行。
可以进行ELISA以检测确切的滴度值。
此处介绍的测试原理，步骤和解释均基于乳胶抗链球菌溶血素O（ASO）测试。
测试原理
ASO乳胶凝集是一种快速，简单的测试，用于定性和半定量测量人血清中抗链球菌溶血素-O抗体。
该方法基于与生物学惰性乳胶颗粒结合的链球菌外切酶与测试样品中的链球菌抗体之间的免疫反应。
已对试剂进行了调整，以使血清中存在200 IU / mL或更高的ASO滴度可以使胶乳颗粒明显凝集。
定性测试（筛选）
程序：
1.将所有试剂和标本置于室温。
2.将一滴（50微升）阳性对照和50微升患者血清放入载玻片上的不同圆圈中。
3.轻轻摇动ASO乳胶试剂，并在要测试和控制的样品旁边的每个圆圈上加一滴（45
µl）。
4.使用一次性搅拌器充分混合，将混合物铺展在整个测试区域，并轻轻倾斜载玻片。
用旋转器或用手搅拌约2分钟，并观察是否存在凝集。
结果与解释：
•阴性结果：
乳胶颗粒悬浮液在两分钟内没有凝集。
•阳性结果：
乳胶颗粒悬浮液会在两分钟内发生凝集，表明ASO含量超过200 IU / ml。
半定量检验
程序：
1.将待滴定的血清在0.9 g / L盐溶液中依次稀释（1：2、1：4、1：8等）。
2.在幻灯片上放一滴阳性对照。
出于比较或其他目的，请勿尝试稀释ASO阳性对照血
清，因为对照的实际滴度与未知血清的滴度之间不存在相关性。
3.将50 ml每种血清稀释液分别放在幻灯片上的连续圆圈中，并按照筛选方法进行。
结果与解释：
血清ASO滴度可以定义为显示阳性结果的最高稀释度。
样品中存在的大约ASO水平（IU / ml）可通过以下公式获得：
•ASO滴定度（IU / ml）=阳性反应最高稀释度x试剂灵敏度（200 IU / ml）
例如，如果凝集度达到滴度为1：4，则血清ASO的近似水平为4 x 200 = 800 IU / ml
测试的局限性
1.高度溶血和脂血的血清以及血浆会干扰测试。
2.在ASO抗体测试中偶尔会引起阳性反应（通常小于500 IU / ml）的非链球菌病包括
类风湿性关节炎，肺结核，肺炎球菌性肺炎，淋病和肝炎。
3.由于链球菌溶血素只是几种链球菌A型外切酶中的一种，因此ASO测试不会检测
到其他针对链球菌A型外切酶的抗体。