T-SPOT.TB实验结果，你真的会判读吗？
T-SPOT.TB阳性结果分析
T-SPOT.TB阳性结果分析T-SPOT.TB是IGRA（γ干扰素释放试验）的一种，主要用于MTB 感染的诊断，鉴于MTB感染包括潜伏性结核感染（LTBI）和活动性结核病（ATB），因此T-SPOT.TB在临床上的适应症即为这两种的辅助诊断。
目前临床上对于LTBI和ATB的关注度及处理方式有较大的不同，所以临床需要实验室提供其较明确的结果，在这种情况下，T-SPOT.TB（主要指T-SPOT.TB阳性结果）需要结合其他检查结果来达到临床需求。
目前T-SPOT.TB阳性结果可以从以下几个方面进行分析：1、患者存在结核中毒症状，影像学检查支持结核病诊断，临床排除其他疾病，考虑活动性结核病的诊断。
2、患者存在结核中毒症状，影像学等临床检查手段未发现结核病证据，临床排除其他疾病，考虑MTB感染状态，建议试验性抗结核治疗（既治疗，又诊断），观察疗效（临床症状），再做诊断。
3、患者不存在结核中毒症状，影像学显示病灶存在（钙化或陈旧性病灶），存在结核病史，考虑结核之前患过结核病，不代表目前为活动性结核。
4、患者不存在结核中毒症状，影像学等临床检查手段未发现结核病证据，考虑潜伏性结核感染。
根据发展为活动性结核病风险程度决定是否进行预防性抗结核治疗。
5、4种环境分枝杆菌的感染（海、堪萨斯、苏尔加、戈登分枝杆菌）也会造成T-SPOT.TB的阳性，上述四种情况仍未做出合理判断的可以考虑这中情况。
（我国未见大样本量的NTM病流行病学调查资料，但历年的结核病流行病学调查资料显示，NTM分离率1990年、2000年和2010年分别为4.9%，11.1%和22.9%）上述五种情况中，第1和第2种情况表明感染了MTB，且称活动状态，应积极治疗；第3和第4种情况提示体内有处于持留状态的MTB，两种情况较为稳定，需随访观察，高危人群，根据情况可以进行预防性治疗。
文章摘自《中华结核和呼吸杂志》2014年10月第37卷第10期。
T-SPOT.TB实验技术2015
结核病
• 结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染病。 结核菌能侵入全身各个器官，但80%发生在肺 部，常称肺结核。
•常见肺外结核： 淋巴结核（最常见）、结核性脑膜炎（最严
重）、结核性腹膜炎、肠结核、肾结核、附睾结 核、女性生殖结核（引起不孕不育）、骨关节结 核等。
3
结核病
• 分枝杆菌细菌学分类 1. 结核分枝杆菌复合群（MTC） 2. 非结核分枝杆菌（NTM） 3. 麻风分枝杆菌（M.leprae）
γ-干扰素释放试验原理（IGRAs)
γ-干扰素 检测阴性
γ-干扰素 检测阳性
TB抗原多肽
T细胞
活化T细胞
γ-干扰素
可以作为机体是否正处于被感染的指标，无论是否有临床症状。
T-SPOT ®.TB 实验方法学为酶联免疫斑点技术
（ELISPOT）
• ELISPOT方法结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术（即ELISA 技术），是公认的最灵敏的抗原特异性T细胞的体外检测技术。
含使用说明书，技术手册，MSDS文件，操 作指南等
T-SPOT.TB 辅助试剂及耗材
与试剂盒配套的辅助试剂（公司会选择性的与试剂盒配套赠送）
种类名称
规格
淋巴细胞分离液 200ml/瓶
1640培养液
500ml/瓶
AIM-V培养液 100ml/瓶
10×或1×的PBS 400ml/瓶
与试剂盒配比量（2盒试剂所配辅助试剂的量） 1瓶（天津灏洋或天津美德太平洋） 2瓶（天津美德太平洋或天津灝洋） 待定（天津美德太平洋） ——
离心后实际效果图
血浆 PBMCs层 淋巴细胞分离液
红细胞
分步操作——第二步 细胞洗涤
• 离心结束后，将分离出来的单 个核细胞层（PBMCs）取出至 新的15ml尖底离心管中； 注意：不要吸到底层的红细胞。
T—SPOT.TB试验对结核性胸膜炎患者的临床诊断价值
T—SPOT.TB试验对结核性胸膜炎患者的临床诊断价值目的研究T-SPOT.TB试验在结核性胸膜炎中的诊断价值。
方法我科2011年7月～2013年1月收治的确诊结核性胸膜炎患者53例为观察组，非结核性胸膜炎患者45例为对照组，分析两组的诊断结果。
结果T-SPOT.TB试验敏感性为88.68%，高于TST试验（45.28%）（P＜0.05）；T-SPOT.TB试验特异性为：82.22%、高于TST试验（57.78%）（P＜0.05）。
結论T-SPOT.TB试验较TST试验对结核性胸膜炎的辅助诊断有更高的敏感性和特异性，具有较高应用价值。
Abstract：Objective The diagnostic value of T-SPOT.TB test in the diagnosis of tuberculous pleurisy.Methods Our department in July 2011 to January 2013tuberculosis pleurisy patients 53cases as the observation group and non tuberculous pleurisy were 45 cases as control group，analysis the diagnosis results of two groups.Results TThe sensitivity of T-SPOT.TB was 88.68%，higher than TST test （45.28%）（P＜0.05），and the specificity of T-SPOT.TB was：82.22%，higher than TST test（57.78%）（P＜0.05）.Conclusion T-spot.tb test compared with TST test for the diagnosis of tuberculous pleurisy auxiliary diagnosis with higher sensitivity and specificity and has higher application value.Key words：Tuberculous pleurisy；Tuberculosis；Tuberculin test spot test of T cells结核性胸膜炎是最常见的一种胸膜炎症性疾病[1]，但其在临床上缺乏特异性表现，故结核性胸膜炎早期诊断有一定困难。
T-SPOT.TB在活动性结核与潜伏性结核感染中的诊断价值
中图 分 类 号 ４期 ·临床 科 研 分 析 ·
Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ在 活 动 性 结 核 与 潜 伏 性 结 核 感 染 中 的诊 断 价 值
活 动 性 结 核 需 要 满 足 以 下 的 几 点 标 准 ：首 先 需 要 涂 片 抗 酸 染 色 呈 现 为 阳性 ，同时 结 核 菌 培 养 阳 性 或 病 理 证 实 符 合 结 核 改 变 的 现 状 ；最 后 ，涂 片 的抗 酸 染 色 呈 现 阴 性 ，但 是 具 有 长 期 发 热 的 症 状 。这 些 症 状 现 实 了 非 结 核 患 者 具 有 以 下 的 特 点 ，几 项 的监 测 结 果 呈 现 为 阴性 。
张 志 安 （广东省 东莞 市厚街 医院感染 科 东莞 ５２３０００）
摘 要 ： 目的 ：探 析 Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ在 活 动性 结 核 与 潜 伏 性 结 核 感 染 的诊 断价 值 。方 法 ：收 集 ２０１５年 １月 ～ １２月 某 院 就 诊 的 疑 是 活 动 性 结 核 和 潜 伏性 结 核 感 染 患 者 ３５例 ，通 过抗 酸 染 色 、ＴＢ－Ａｂ、ＴＢ－ＰＣＲ、ＱＦＴ、Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ等方 法 进 行 检 测 ，并 对 活 动性 结 核 患 者 进 行 诊 断 和 追 踪 调查 ，对 健 康 体 检 者 案 例 进行 收 录其 有 无 与 结 核 患 者 接触 等 情 况 。结 果 ：结 核 组 的 Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ 的 阳 性 率 要 高 于 非 结 核 组 以 及健 康 对 照 组 。活 动 性 结 核 病诊 断所 得 到 的敏 感 度 分 别 为 ２２％ 、６７ 、７３ 、７５ 和 ８６ ，其 中 以 Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ敏 感 性 最 高 。结 论 ：Ｔ细 胞 免 疫 斑 点 对 肺结 核 的检 测 具 有 较 高 的 敏 感 和 特 异 度 ，而 且 这 种 较 高 的 敏 感 度 与 特 异 度 是 不 受 到 卡 介 苗 接 种 与 机 体 免 疫 功 能 的 影 响 的 。
例风湿科病人TSPOTTB检查结果分析及应用评价省年会
讨论
T-SPOT.TB是以特异性抗原为刺激源，应用酶联免疫斑点 技术(ELISPOT)诊断结核感染的新方法，文献报告对结核 感染的敏感性为93.4％，特异性为95.8％。多项研究均证 实了T-SPOT.TB实验监测结核敏感性强、特异性高，是快 速诊断结核的有效方法。
谢谢！
• 由于效应T细胞存活时间很短，而且具有特异 性，因此可以作为机体是否正处于被感染的指标， 无论是否有临床症状。
T-SPOT.TB检查在风湿科的应用
T-SPOT.TB是目前最敏感的检测抗原特异性T细胞的方法 之一，而且不受BCG接种的影响。可用于对结核高危人群 预测结核发病风险和对拟用TNF抑制剂患者进行结核排除 检查。
典型病例 2
张某，女，干燥综合征，胸片及肺部CT均诊断间质性肺 炎，但激素及免疫抑制剂治疗后病情反而进展，痰找结核 菌3次阴性而T-SPOT.TB检查阳性，给予抗结核治疗3月 后复查肺部CT原来的肺部病变完全消失，提示结核感染 也可以表现为间质性肺炎。
讨论
TST是长期以来用以快速诊断结核感染的唯一手段。然而 TST存在诸多缺陷：在易受结核感染的免疫力低下人群中， 其敏感性反而大大降低；结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)是 200多种蛋白的混合物，其中很多是非结核分枝杆菌及卡 介苗(BCG)的共同抗原成分，由于BCG是我国是法定接种 疫苗之一，在普遍接种BCG的地区造成非常高的“假阳性” 率。
T-SPOT.TB 结核感染T细胞斑点实验
全球最准确的快速结核感染检测
γ-干扰素释放实验（IGRAs）
γ干扰素 检测阴性
γ干扰素 检测阳性
TB 抗 原 多 肽
T细胞
活化T细胞
结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）临床研究进展
结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）临床研究进展2.保山市人民医院感染科云南保山 678000摘要：结核感染T细胞斑点实验作为临床上日益普遍的肺结核诊断方法，具有检测结果不受患者临床症状干扰，能排除接种卡介苗引发的假阳性结果，检测标本易于获得，操作简便、灵敏度高等优点，临床价值得到肯定；但是作为单纯的检测方法还存在不能确定结核发病阶段、发病部位及假阳性等问题，需要与其他检测方法联合应用才能提高检测效果；进一步运用该检测方法诊断结核性胸膜炎、结核性脑膜炎、非典型肺结核等结核相关疾病，提升疾病诊断的准确性。
关键词：肺结核；结核感染T细胞斑点试验；临床研究肺结核是一种肺部常见慢性传染性疾病，主要致病因素是结核分枝杆菌，我国在党和政府的领导下对结核病的防治取得了巨大成效，但近年来结核病防治形势不容乐观。
目前我国作为世界上30个结核病高负担国家之一，2019年新发结核病例83.3万人，结核病发病率为58/10万。
带菌患者为其重要的传染源，大多数肺结核患者病程呈慢性过程，主要表现有低热、盗汗、消瘦、乏力等全身症状及咳嗽、咯血等呼吸系统表现。
1.T-SPOT.TB的概念在疾病早期尽早尽快确诊对疾病治疗具有关键指导意义。
针对早期快速诊断，结核感染T细胞斑点试验，又叫作结核感染干扰素释放试验，该检查方法的机理在于：结核分枝杆菌入侵人体后，T淋巴细胞会相应地留下印记，然后分离出T淋巴细胞，再进行培养增殖，同时通过特异抗原对其进行作用，使其分泌γ干扰素，再经过免疫染色后，进行斑点计数，计算干扰素的量，推算抗原特异性细胞的频率,判断是否存在结核感染。
该检测方法的标本需要采集患者的静脉血，因此摆脱了传统痰涂片、痰培养法受痰标本质量影响的弊端，并且不受机体免疫力及卡介苗接种的影响。
此法得到国内外专家的普遍认同，可以辅助早期诊断。
2.传统检测方法的不足目前肺结核主要通过症状体征，借助辅助检查，综合考虑为诊断提供依据。
(原)T-SPOT检测结果的临床意义解读
一．T-SPOT阴性结果：阴性检测结果代表目前机体没有MTB特异抗原致敏的T淋巴细胞，即受检者目前未感染MTB。临床诊断上首选排除结核病的诊断，尤其是在结核病高发地区、免疫功能正常人群及无可靠依据诊断结核病时，在可能的诊断排序上，结核病应列在其他疾病之后。
结核中毒症状
既往结核病史
抗结核治疗史
无病灶
稳定病灶
活动病灶
临床诊断
干预措施
无
无
无
无
结核潜伏感染
随访/高危人群
预防治疗
有ห้องสมุดไป่ตู้
无
无
无
结核感染
诊断性治疗
无
有/无
有/无
有/无
陈旧结核病
随访观察
有
有/无
有/无
有/无
结核复发？？
随访观察/诊断性抗痨
有/无
有/无
有/无
有
复发/新病例
抗结核治疗
二．T-SPOT阳性结果：
临床诊断中常见的五种T-SPOT阳性的情况：
Tspot结核感染T细胞斑点试验的临床应用
“有反应性”结果表明样本中存在针对结核杆菌特异的效应T细胞 “无反应性”结果表明样本中可能不存在针对结核杆菌特异的效应
T细胞
二、结果的判断(影响因素分析)
既往结核病史或影像学提示陈旧性肺结核、有结核 密切接触史或高潜伏性结核感染率可使其诊断活动 性结核病的特异性降低。
一、T-SPOT.TB的原理
外周血T-SPOT即利用酶联免疫斑点技术 （ELISPOT）通过检测结核分枝杆菌特异性抗 原刺激后外周血单个核细胞释放的γ-干扰素来 检测抗原特异性 Ｔ淋巴细胞的应答反应，从而 判断结核感染状态。
每一个斑点代表一个分泌细胞因子的T细胞， 记数斑点数量可以获得外周血中结核致敏的T 细胞数量。
二、结果的判断
试验分四组：空白对照组、抗原组(ESAT-6和CFP-10)、阳性 对照组(植物血凝素PHA)。
通常正常结果，空白对照孔没有或有很少的斑点而PHA对照 孔斑点数超过20个。
空白对照孔斑点数超过10个时结果被认为是“不确定”。
当PHA对照孔斑点数少于20个时，检测结果被认为是“不确 定”。
二、结果的判断
如果抗原A和/或抗原B有应答，检测结果为“有反应性”，参照 以下标准：
空白对照孔斑点数为0-5个时且（抗原A或抗原B孔的斑点数）（空白对照孔斑点数）≥6；
空白对照孔斑点数为6-10个时且（抗原A或抗原B孔的斑点数） ≥2×（空白对照孔斑点数）；
检测结果为“无反应性”：不符合上述标准且PHA对照孔正常。 当PHA对照孔结果为“不确定”且抗原A和抗原B孔结果都为“无
有学者指出：
诊断活动性结核病患者外周血T-SPOT.TB斑点形成 细胞中位数为442SFCs/10^6 PBMC 。
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T-SPOT.TB实验结果，你真的会判读吗？
结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）是一种运用IGRA技术，检测被结核分枝杆菌特异的早期分泌靶抗原6（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP 10）分别刺激后释放γ-干扰素的效应T淋巴细胞，以辅助诊断结核感染的实验室检测技术。
如何判读T-SPOT.TB结果？T-SPOT.TB实验设有阴性对照孔、以植物血凝素（PHA）作为刺激原的阳性对照孔以及以ESAT-6和CFP 10作为刺激原的两个实验孔A和B；实验结果用每25万个外周血单个核细胞中斑点形成细胞（spot-forming cells，SFCs）的数目来判断阴阳性结果：当阴性对照孔斑点数0~5时，任意一实验孔的斑点数减去阴性对照孔斑点数大于等于6，结果判为阳性；当阴性对照孔斑点数6~10个时，任意一实验孔的斑点数大于等于阴性对照孔斑点数的两倍，结果判为阳性；
如果上述标准不符合且阳性对照孔正常时，结果则判为阴性。
T-SPOT.TB有“不确定”结果吗？当阴性对照孔斑点数超过10个或当阳性对照孔斑点数少于20个时为“不确定”结果，需要复查，除非两个抗原孔A、B根据结果判断标准可确定为“阳性”，此检测结果有效，即为阳性结果。
遇到“灰区”结果怎么办？当阴性对照孔斑点数为0~5个并且（A或B斑点数）减去（阴性对照孔斑点数）等于5~7时，此结果被认为是“灰区”。
如果得到“灰区”结果，不能认为是“不确定”结果，也就是说处在5，6，7个斑点的结果仍然是有效的结果，应该按照我们的“结果判读标准”来确定“阴性”或“阳性”。
应当利用所有可利用的相关临床信息进行判断，并跟其主治大夫进行沟通后再报结果，必要时可进行复查。
如何识别T-SPOT.TB特异性斑点？
一般来说，在手工放大镜、4倍物镜显微镜或USB电子放大镜下观察到结合在底膜上的紫色点，中间色深，周围有浅色晕的点才是实验结果的斑点；斑点计数仪是根据斑点颜色饱和度、直径大小和颜色梯度进行斑点的判读。
以上四种方式都可以用来辅助识别斑点。
以下
给出一些实例来判断斑点（蓝色圈出的斑点为有效斑点，红色圈出的斑点可以认为是无效斑点不应该计数上）。
例1：
例2：
阳性对照孔和阴性对照孔有什么意义？阳性对照孔和阴性对照孔作为T-SPOT.TB实验的质控，是判断实验结果是否有效的标准，每个病人都必须做阴性对照孔和阳性对照孔。
针对一个结果的阳性对照孔具有正常反应性，说明参与反应的细胞有正常的免疫功能，大部分人群对植物血凝素都是有反应的，可能会存在少数人群对植物血凝素不敏感导致阳性对照孔没有反应或反应弱。
特别指出，每个人对植物血凝素的敏感性不一样，因此即便实验中我们统一加入等量的细胞，每个人的做出来的阳性对照孔可能会有所不同，下面给出几个阳性孔的示例：
阴性对照孔正常则说明参与反应的细胞在没有外界刺激下是一个稳定的状态，不会有任何免疫应答反应，大部分人群阴性对照孔不会出斑点，也同样存在少数人在没有外界刺激的情况下细胞有反应而释放γ-干扰素，导致阴性孔出较多斑点，一般这种情况AB孔也会随之出较多斑点，至于出斑点的原因，目前尚未明确，具体原因还在收集统计中，下面给出几个阴性孔的示例：
阴性对照孔和阳性对照孔也具有指示整体实验情况是否正常的作用。
如果一批结果阴性对照孔都有较多斑点，很有可能实验过程中存在污染；如果一批结果阳性对照孔都没有斑点或斑点都较少，那需要怀疑细胞整体反应是否异常或者第二天是否出现操作失误等。
转载自TSPOT。