山东省青岛平度华阳中学人教版高二生物选修三课件：221动物细胞培养和核移植技术(共35张PPT)

2、营养
葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因
子、微量元素（合成培养基）+动物血清等
3、温度和PH
4、气体环境
P46 为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血 清？
❖ 血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其 中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。
❖ 氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其 中有些氨基酸动物细胞本身不能合成（称为必需氨 基酸），必须由培养液提供。
传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出， 配制成细胞悬液，分装到两个或两个以上的 培养瓶中继续培养，称为传代培养。
★3、过程
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 ...
剪碎、用胰蛋白酶处理（或胶原蛋白酶）
单个细胞
加培养液
细胞悬液
原代培养
细胞贴壁，出现接触抑制
用胰蛋白酶处理 分瓶传代培养 10代细胞
传代培养
50代细胞
■选动物胚胎或幼龄个体的器官. 或. . 组织做 动物细胞培养材料的原因：
因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强， 分化程度低。
■目前使用的或冷冻保存的正常细胞 通常在10代以内的原因：
以保持正常二倍体核型 （或10代以内的细胞遗传物质不改变）。
4、动物细胞培养的条件
P46【讨论】 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，
克隆动物DNA主要来自于供体细胞核，但其 核外还有少量的DNA，即线粒体中的DNA是来 自于受体卵母细胞。所以用体细胞核移植方法 克隆的动物并不是供核动物完全相同的复制。
1.受体：减数第二次分裂中期的次级卵母细胞 。
a．卵母细胞体积 大 ，便于 操作 ； b．卵黄 多 ， 营养物质 丰富； c．易激发 细胞核 全能性的表达。
1、用胰蛋白酶分散细胞，由此可说明细胞间的物质 主要是什么成分？
主要是蛋白质(胶原蛋白等)。 2、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？那将动物组织分散 成单个细胞时要注意什么问题呢？
能，应注意时间的控制 3、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？
不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此 环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.28.4)的活性较高。
A．细胞系 C．原代细胞
B．细胞株 D．传代细胞
2、动物细胞工程技术的基础是 ------（ D ）
A.动物细胞融合 B.单克隆抗体
C.胚胎移植
D.动物细胞培养
问题
我们能否利用类似植物组织培养获 得完整植物体的方法培养动物细胞， 使其发育成一个完整的个体？
不能，高度分化的植物细胞仍保持着全能性，而 动物细胞的全能性会随细胞分化程度的提高逐渐受 到限制，分化潜能逐渐变弱。
■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易 于贴附。
强调二：接触抑制
细胞在贴壁生长过程 中，随着细胞分裂，数量 不断增加，最后形成一个 单层，此时细胞间相互接 触，细胞分裂和生长停止， 数量不再增加。
细胞的接触抑制
瓶壁上的细 胞层数是：
一层 （或单层）！
原代培养：人们通常将动物组织消化后的初 次培养称为原代培养。一般培养的第1代细胞 与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ课前准备
• 阅读课本图2-16和2-21
• 学案导学p27
回顾：
❖ 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？
植物组织培养 植物体细胞杂交
问题探讨 动物细胞培养技术
怎样才能获得大量的自体健康皮肤？
1、动物细胞培养概念：
就是从动物机体 中取出相关组织， 将它分散成单个 细胞，然后,放在 适宜的培养基中， 让这些细胞生长 和繁殖。
动物体细胞分化 程度高，恢复其 全能性十分困难
4.体细胞核移植的过程（高产奶牛）
高产 奶牛 牛
体细胞
乙牛
MⅡ卵 母细胞
无性生殖
克隆牛
培养
细胞核移植 重组 细胞
去除核 显微操作法
去核卵 母细胞
注入
代孕母牛丙
移植
物理或化学方法激活
早期 胚胎
胚胎移植
问题
利用体细胞核移植方法生产的克隆动 物，是对体细胞供体动物进行了 100%的复制吗？为什么？
2、原理：细胞增殖
★3、过程
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 ...
剪碎、用胰蛋白酶处理（或胶原蛋白酶）
单个细胞
加培养液
细胞悬液
细胞贴壁，出现接触抑制
用胰蛋白酶处理 分瓶传代培养 10代细胞
50代细胞
无限传代
强调一：细胞贴壁过程
■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就 贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。
根据你所学的内环境的知识，讨论以下问 题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？
充足的营养供给、适宜的温度、适宜的pH和气体环境。
2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？
无菌、无毒的环境。
4、动物细胞培养条件
1、无菌、无毒的环境
离体培养的细胞对 微生物和有毒物质 没有防御能力
（添加一定量的抗生素？定期更换培养液？）
（添加一定量的抗生素？定期更换培养液？）
2、营养
葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因 子、微量元素（合成培养基）+动物血清等
3、温度和PH
温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境
CO2 作 用？
O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
课堂反馈练习
1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是 --------------------（A ）
❖ 血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子； 血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因 子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴 附。
❖ 因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增 殖，一般需添加10%～20%的血清。
4、动物细胞培养条件
1、无菌、无毒的环境
离体培养的细胞对 微生物和有毒物质 没有防御能力
无限传代
细胞株：传代细胞一般能传到10-50代，遗 传物质一般不会发生改变，叫细胞株。
细胞系：传代50代以后又出现细胞生长停 滞状态，部分细胞遗传物质发生了改变， 能连续传代，获得不死性，叫细胞系。
▲细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物 质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑 制，容易传代培养。
P44思考
二、动物核移植技术和克隆动物
1、定义： 动物核移植是将动物的一个细胞 的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母 细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这 个新的胚胎最终发育为动物个体.
2、原理： 动物细胞核具有全能性
3、分类： 胚胎核移植、体细胞核移植。
胚胎细胞分化程 度低，恢复其全 能性相对容易。