骨碎补检验方法验证方案汇总
3组易混商品药材的生药鉴别-2019年精选文档
3组易混商品药材的生药鉴别中药饮片质量的优劣与真伪，直接影响到临床疗效的发挥及患者的用药安全，近年来，中药材市场品种混乱，给消费者带来不便。
笔者对目前一些常见混伪品种药材的生药鉴别方法报道如下。
1 骨碎补与大叶骨碎补1.1 来源骨碎补来源于水龙骨科植物槲蕨Drynaria fortunei （Kunze） J. Sm.的干燥根茎。
大叶骨碎补（非正品）为骨碎补科植物大叶骨碎补Davallia formosana Hayata的根茎，在广西做骨碎补习用。
1.2 性状及显微鉴别骨碎补：本品呈扁平长条状，多弯曲，有分枝，长5～15 cm，宽1～1.5 cm，厚0.2～0.5 cm。
表面密被深棕色至暗棕色的小鳞片，柔软如毛，经火燎者呈棕褐色或暗褐色，两侧及上表面均具凸起或凹下的圆形叶痕，少数有叶柄残基及须根残留。
体轻，质脆，易折断，断面红棕色，维管束呈黄色点状，排列成环。
无臭，味淡，微涩。
大叶骨碎补：本品呈弯曲的圆柱形，表面红棕色至棕褐色，有纵沟纹、皱纹、和突起0.3～1 cm、直径0.3～0.7 cm的圆形叶痕；叶痕与茎夹角处常见有黄棕色鳞片。
断面坚实，有多数点状维管束排列成环，另有两个成新月形的较大的维管束排于中央，相互对映[1]。
2 茜草与大叶茜草（非正品）2.1 来源茜草来源于茜草科植物茜草Rubia cordifolia L 的干燥根及根茎。
大叶茜草来源于茜草科植物大叶茜草Rubia schumanniana Pritzel的干燥根及根茎。
2.2 性状及显微鉴别茜草：本品根茎呈结节状，丛生粗细不等的根。
根呈圆柱形，略弯曲，长10～25 cm，直径0.2～1 cm；表面红棕色或暗棕色，具细纵皱纹及少数细根痕；皮部脱落处呈黄红色。
质脆，易折断，断面平坦皮部狭，紫红色，木部宽广，浅黄红色，导管孔多数。
木栓细胞6～12 列，含棕色物。
皮层薄壁细胞有的含红棕色颗粒。
韧皮部细胞较小。
形成层不甚明显。
木质部占根的主要部分，全部木化，射线不明显。
骨碎补炮制方法与标准中药饮片炮制
骨碎补炮制方法与标准中药饮片炮制骨碎补炮制方法与标准【药材来源】骨碎补为水龙骨科植物槲蕨的干燥根茎。
全年均可采挖，除去泥沙杂质，干燥，或再燎去茸毛(鳞片)。
【古代炮制方法】南北朝刘宋时代有蜜拌润后蒸(《雷公》)的方法。
唐代有炒制、姜制(《理伤》)等方法。
宋代有火炮(《证类》)，盐水炒(《总录》)，爁去毛、酒拌蒸(《局方》)，酒浸炒、焙制(《妇人》)等方法。
明、清时代增加了炒黑(《普济方》)、炙制(《理例》)、蒸焙(《本草汇》)、酒炒(《增广》)等炮制方法。
【现代炮制方法】1.骨碎补：取原药材，除去非药用部位及杂质，洗净，润透，切厚片，干燥，筛去碎屑。
2.砂炒骨碎补：先将砂置热锅内，用武火加热，至灵活状态时，投入骨碎补，不断翻动，炒至鼓起，取出，筛去砂，放凉，撞去毛。
【饮片性状】骨碎补为不规则的厚片，周边密被深棕色至暗棕色的小鳞片，柔软如毛，经火燎者呈棕褐色或暗褐色，片面红棕色或淡红棕色，有小黄点呈圆圈状排列；质坚硬；无臭，味淡、微涩。
砂炒骨碎补为扁圆状鼓起的厚片，质轻脆，表面棕褐色或焦棕色，折断面淡棕褐色或淡棕色，气微，味微涩。
【质量标准】骨碎补水分不得过15.0%，总灰分不得过8.0%，按干燥品计算，含柚皮苷不得少于0.50%。
骨碎补饮片水分不得过14.0%，总灰分不得过7.0%。
【炮制目的】骨碎补味苦，性温。
归肾经、肝经。
具有补肾强骨，续伤止痛的功能。
用于肾虚腰痛，耳鸣耳聋，牙齿松动，跌仆闪挫，筋骨折伤，及外治斑秃、白癜风等。
骨碎补生品密被鳞片，不易除净，且质地坚硬而韧，不利于粉碎和煎煮出有效成分，故临床多用其炮制品。
经砂炒后，质地松脆，易于除去鳞片，便于调剂和制剂，有利于煎出有效成分，以补肾强骨，续伤止痛为主。
用于肾虚腰痛，久泻及跌打损伤、骨折疼痛等。
【应用选择】制用(1)肾虚腰痛：常与牛膝(酒浸)、肉苁蓉(酒浸)、炮附子等同用，具有补肾止痛的作用，用于肝肾风虚，上攻下注，筋脉拘挛，骨节疼痛，头面浮肿，手臂少力，腰背强痛，脚膝缓弱，屈伸不利，行履艰难，如骨碎补丸(《局方》)；若与熟地黄、山茱萸、牡丹皮等同用，用于肾虚腰痛、耳鸣、耳聋、牙痛及久泻，如加味地黄汤(《本草汇言》)；若与革薢(酒炒)、牛膝(酒炒)、当归(酒拌)等同用，用于妇人阳气虚弱，外寒侵袭，腰脚疼痛，腹胁拘急，如骨碎补散(《妇人》)。
骨碎补提取工艺的实验研究
总 k1 11.942 10.307 11.114 9.076
黄 k2 11.045 11.879 11.575 11.739
酮 k3 11.244 12.046 11.543 13.416
R 0.897 1.739 0.461 4.340
表 3 柚皮苷的方差分析
方差来源 偏差平方和 自由度 平均偏差平方和 F 比 显著性
摘 要：目的：优选骨碎补提取的最佳工艺条件。方法：以骨碎补中柚皮苷及骨碎补总黄酮的含量为指标，采
用 L9(34) 正交设计法对骨碎补的提取条件进行研究。结果：提取次数是骨碎补有效成分提取的关键因素 , 其次是
溶媒用量，提取时间和乙醇浓度为最次要因素。结论：最佳提取工艺条件是 14 倍量 55% 乙醇回流提取 3 次 ,2 h/ 次。
B
5.527
2
2.7635
4.149
C
0.398
2
0.199
0.299
D
28.745
2
14.3725 21.580 P<0.01
E
1.33
9
注：F0.05(2,9)=4.26，F0.01(2,9)=8.02。
柚皮苷的方差结果分析表明，因素 B因素 A、C 则
无显著性影响，影响强度依次为 D ＞ B ＞ C ＞ A，如
以柚皮苷的含量为指标，骨碎补的最佳提取工艺为
A3B3C2D3; 如以总黄酮的含量为指标，骨碎补的最佳 提取工艺为 A1B3C2D3，综合两种分析结果，因素 D 为 最重要影响因素，其次是因素 B, 因素 A 和 C 为最次
要因素。故确定最佳提取工艺条件应为 A3B3C2D3 或 A1B3C2D3。 2.5.2 验证与比较实验 称取 100g 砂烫骨碎补，按
内部沸腾法提取骨碎补多糖及其抗氧化活性研究
内部沸腾法提取骨碎补多糖及其抗氧化活性研究作者：梁家灿文慧香梁云贞来源：《安徽农业科学》2022年第14期摘要以骨碎补为试验材料，采用内部沸腾法来提取骨碎补中的多糖，并且测定骨碎补里提取出来的多糖的抗氧化活性，通过设置单因素试验和4因素3水平的正交试验，研究乙醇解吸液体积分数、乙醇解吸时间、水浴提取温度、水浴提取时间对骨碎补多糖提取率的影响。
结果表明，提取骨碎补中多糖的最佳条件为乙醇解吸液体积分数50%、解吸时间15min、水浴提取温度80 ℃、水浴提取时间4 min，在这个条件下的骨碎补多糖提取率为10.90%。
当骨碎补多糖质量浓度为0.5%时，其对DPPH自由基的清除率达74.8%，对羟基自由基的清除率达78.3%。
关键词骨碎补;多糖;内部沸腾法;抗氧化活性中图分类号 R 284;R 285文献标识码 A文章编号 0517-6611（2022）14-0153-03doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2022.14.037开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Study on Extraction of Rhizoma Drynariae Polysaccharide and Its Antioxidant Activity by Internal Boiling MethodLIANG Jia-can1，WEN Hui-xiang2，LIANG Yun-zhen3（1.School of Agriculture and Life Sciences，Kunming University，Kunming，Yunnan 650200;2.School of Chemistry and Chemical Engineering，University of South China，Hengyang，Hunan 421000;3.School of Chemistry and Biological Engineering，Guangxi Minzu Normal University，Chongzuo，Guangxi 532500）Abstract Taking Rhizoma Drynariae as the test material，the internal boiling method was used to extract the polysaccharides in Rhizoma Drynariae，and the antioxidant activity of the polysaccharides extracted from Rhizoma Drynariae was determined.The effects of ethanol desorption liquid fraction，ethanol desorption time，water-bath extraction temperature and water-bath extraction time on the extraction rate of Rhizoma Drynariae were studied by setting up single factor experiment and orthogonal experiment with 4 factors and 3 levels.The results showed that the optimal conditions for extracting polysaccharides from Rhizoma Drynariae were 50% ethanol desorption liquid fraction，15min desorption time，80 ℃ water-bath extraction temperature，and 4min water-bath extraction time.Under these conditions，the extraction rate of Rhizoma Drynariae polysaccharide was10.90%.When the mass concentration of drynaria polysaccharide was 0.5%，its scavenging rate for DPPH free radicals reached 74.8%，and the scavenging rate for hydroxyl radicals reached 78.3%.Key words Rhizoma Drynariae;Polysaccharide;Internal boiling method;Antioxidant activity骨碎補（ Davallia mariesii Moore ex Bak.）是一种比较常用的中药，具有补肾、强骨、止痛等功效，用于治疗耳鸣耳聋、牙齿松动、筋骨伤折、肾虚腰痛、跌扑闪挫等症状[1]。
骨碎补的入库验收的流程标准
骨碎补的入库验收的流程标准The process of receiving and inspecting bone fracture repairs in a warehouse is an essential part of ensuring the quality and safety of these products before they are distributed to the customers. It is crucial that the process is standardized and follows strict guidelines to prevent any defective or contaminated products from entering the market.骨碎补的入库验收流程对于保证产品质量和安全，确保客户安全至关重要。
因此，必须确保此过程标准化，遵循严格的规定，以防止任何有缺陷或污染的产品进入市场。
Firstly, upon the arrival of the bone fracture repair products at the warehouse, the receiving team should conduct a thorough inspection of the shipment. This includes checking for any visible damages to the packaging or products, as well as verifying the accuracy of the quantity received. This step is essential in identifying any potential issues with the products before they are accepted into the inventory.首先，在骨碎补产品到达仓库时，验收团队应对货物进行彻底检查。
骨碎补不同炮制品中总黄酮与柚皮苷的含量测定-精选文档
骨碎补不同炮制品中总黄酮与柚皮苷的含量测定骨碎补是较常用的中药，具有补肾强骨，活血续伤之功效。
骨碎补活性成分为柚皮苷等二氢黄酮类化合物［1,2］，为了考察不同炮制方法对骨碎补有效成分的影响，我们用分光光度法测定骨碎不同炮制品（生品骨碎补、砂烫骨碎补、酒骨碎补）中总黄酮的含量，用高效液相色谱法测定柚皮苷含量。
1 实验材料1．1 药品骨碎补购自湖北，经鉴定均为水龙骨科植物槲蕨Drymaria fortunei (Kunze)J.sm. 的干燥根茎。
1．2 炮制品生品：（1）除祛杂质，洗净，未去毛。
（2）鲜骨碎补洗净，除祛杂质，去毛。
砂烫骨碎补：取沙子置锅内，用武火加热后，加入净骨碎补或片，不断翻动，烫至鼓起时，取出，筛去沙子，撞去毛，放凉。
酒骨碎补：取去毛骨碎补片，加酒拌匀，用文火炒干为度，每骨碎补１００Ｋg，用酒或白酒１０Ｋg。
1．3 仪器7520型分光光度计，1050型液相色谱仪（惠普公司）；LA-204型电子天平（常熟市衡器厂）。
2、实验方法与结果2．1 总黄酮含量测定方法与结果标准曲线制备精密称取柚皮苷对照品4.9mg，置50ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，作为对照品溶液，再分别吸取对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，以甲醇为空白，在283nm处测吸收度，以吸收度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，经回归得标准曲线方程A=0.0292C-0.0577，r=0.9998，线性范围4.9~29.4μg.ml-1.2.2 骨碎补不同炮制品样品溶液制备及测定精密称取骨碎补各炮制品干燥粉末(经80℃干燥4小时,过40目筛)1 g,置索氏提取器中，分别用50毫升甲醇提取12小时，将提取液转移至100毫升容量瓶中，甲醇定容至刻度，精密吸取1毫升于25毫升容量瓶中，甲醇定容至刻度，于283纳米处测定吸收度，按回归方程计算总黄酮含量未去毛的骨碎补甲醇提取液中总黄酮的含量平均值却为4.1，其它四组数据的平均值都在5.0左右，数据相差的很大，可见骨碎补经去毛炮制可使总黄酮在甲醇提取液中的含量增加，从而提示我们经去毛炮制有利于有效成分的溶出。
HPLC法测定骨碎补及其习用品中柚皮苷的含量
Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法测 定 骨碎 补 及 其 习用 品 中柚 皮 苷 的 含 量
朱 常成 尹子 丽
１ ．昆药集 团股份有 限公 司 ，云南 昆明 ６ ５ ０ １ ０ ０ ；２ ．云南 中医学院 民族 医药 学院 ，云南 昆明 ６ ５ ０ ５ ０ Ｃ方法 以柚皮 苷力指 标 ，对骨 碎补及 其 习用品进行 柚皮 苷含 量测 定。方 法 ：色谱 柱 Ｃ １ ８
超声 处 理 （ 功率 ２ ５ ０ Ｗ，频 率 ３ ３ ｋ Ｈ ｚ ）３ ０ ｍ ｉ ｎ ，放 冷 ， 再称定重量 ，用 ７ ０ ％ 甲醇补足减 失的重量 ，摇匀 ，过 滤 ，滤 液 水 浴 挥 发 浓 缩 至 约 ｌ ｍ Ｌ ，用 甲 醇 定 容 至 ２ ｍ Ｌ ，摇匀 ，用 ０ ． ４ ５ ｔ ｍａ 微孔滤膜滤过 ，取续 滤液 。 ２ ． ４ 方法 学实 验 ２ ． ４ ． １ 标 准 曲线 的制作 取 柚皮 苷对 照 品适 量 ，精 密称定 ，加 甲醇溶解并定量稀 释制成 每 ｌ ｍ Ｌ含 ０ ． ６ ｍ ｇ 的溶液，作为对照品储备液 ， 分别精密移取对照品储 备液 ２ ． ５ 、４ 、５ 、６ 、７ ． ５ ｍ Ｌ置 １ ０ ｍ Ｌ量瓶 中 ，加溶 剂 稀释至刻度 ，摇匀 ，作为线性 溶液 。精密量 取各线性 溶液 １ ０ ，注入液相色谱仪，记录色谱图。由浓度 ｃ 对峰面积 Ａ 进行 线性 回归 ，结 果 线 性 方 程 为 ：Ｙ＝ １ 仪器 与材 料 ０ ． １ ６ ８ １ ｘ一２ ． ３ ３ ， ：０ ． ９ ９ ９ ３ 。结 果 表 明，柚 皮 苷 在 １ ． １ 仪器 Ｌ Ｃ一 ２ ０ １ ０ Ａ Ｈ Ｔ高效液相色谱仪 （ 日 本 １ ． ５ ３ ｔ ａ ｇ一 ４ ． ５ ９ １ ｘ ｇ内线性 良好 。 岛津 ） ；Ａ Ｌ ２ ０ ４ 电子 天 平 （ 梅 特 勒 一 托 利 多 仪 器 ２ ． ４ ． ２ 稳定 性实验 精 密吸取柚 皮苷对 照 品按上 述 （ 上 海 ） 有 限公 司 ） ；ＷＦ Ｚ—ｕ Ｖ一 ２ ４ ５ ０型紫 外 分光 相 同条件测定 ，分别 在 ０ 、１ 、２ 、４ 、８ 、１ ２ 、２ ４ ｈ进 光度 计 （ 日本 岛津 ） ；超声 仪 （ 上 海 冠 特超 声 仪器 样 １ Ｏ Ｌ ，测定 柚 皮 苷 峰 面 积 ，Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ５ ６ ％ ，表 有 限公 司 ） 。 明柚皮 苷 ２ ４ ｈ内稳 定性 良好 。 １ ． ２ 材 料 甲醇 为 色谱 纯 ，水 为双 重 蒸 馏 ，其 ２ ． ４ ． ３ 精 密度 实 验 取 线性 关 系项 下 柚 皮苷 对 照 他试 剂 均 为 分 析 纯 。柚 皮 苷 对 照 品 购 自北 京 北 纳 品溶 液 ，按上 述 相 同测定 条件 ，连续进 样 ６次 ，进 创联 生 物技术 研 究 院 （ 纯度 ＞ ／９ ８ ％） ；骨 碎 ｝ 及 其 样体 积 为 １ ０ １ ｘ Ｌ ，测 定结 果 Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ５ ７ ％ ，表 明仪 习用 品的 样 品 主 要 采 自云 南 省 各 个 分 布 区 ！材 料 器精 密 度 良好 。 均 由经云南 大学 陆树 刚教 授鉴 定 。 ２ ． ４ ． ４ 重 复性 取 同一 批 骨 碎补 习用 品 圆盖 阴 石 蕨药材 ６ 份 ，按供试 品制备方法制备 ，测定含量 ， ２ 方 法与 结果 测得重复性 ６份 Ｒ Ｓ Ｄ值为 １ ． ３ ４ ％ ，小于 ２ ％ ，表明 ２ １ 色谱条件 色谱柱： Ｋ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｌ Ｃ １ ８ Ｉ ： ４ ． ６ ｍ ｍ 该 方法 重 复性 良好 。 ． ４ ． ５ 中间精密度 另一名 实验人 员 ，在不 同 Ｅ ｔ 期， × ２ ５ ０ ｍ ｍ，５ １ ａ ￣ ｎ ） ；流动相 为乙腈 一 Ｑ ０ ８ ８ ％ 甲酸 水溶 液 ２ 采用不 同仪器及色谱柱对 同一批次骨碎 补进行 含量测 （ ２ ３ ． ３ ： ７ ６ ． ７ ） ；流速 ： Ｑ９ ｍ Ｌ ／ ｍ ｉ ｎ ；检测波长为最大吸收 定 ，２人 １ ２次 测 定 结 果 的 Ｒ Ｓ Ｄ值 为 １ ． １ ４ ％ ，小 于 波长 ２ ８ ３ ｎ ｍ；温度 ：３ ｏ℃。 ２ ． ２ 对照 品溶 液 的制 备 精 密 称 取柚 皮 苷 照 品适 ２ ％，表明本法精密度良好。 ． ５ 加样 回收 率 精密 称 取 已知含 量 的样 品约 １ ｇ 量 ，加 甲醇溶 解制成 每 ｍＬ含 柚皮 苷 ０ ． ３ ０ １ ｍｇ 对 照 ２ 品溶 液 。 （ 称取 ９份 ） ，分 别 按 柚 皮 苷 含 量 的 ５ ０ ％ 、１ ０ ０ ％、 ５ ０ ％的量加入各柚皮苷对照品 （ 每一浓度平行制 ２ ． ３ 骨碎补类药材供试品的制备 分别取骨 淬补及 １ 其习用品药 材 ，粉碎 ，取 约 ２ ｇ精密 称定 ，置 具塞锥 备 ３份） ，按供试品溶液制备方法制备加样 回收率 形瓶中 ，精密加入 ７ ０ ％ 甲醇 ２ ０ ｍ Ｌ ，密塞 ，称廷 重量 ， 样 品。分 别精 密量 取 １ ０ ｌ ， ｚ Ｌ进 样 ，计算 测 得 量 和 回
炮制骨碎补的提取及其柚皮苷的纯化研究
炮制骨碎补的提取及其柚皮苷的纯化研究马才敬;方谨;李玲玲;王允【摘要】目的建立测定骨碎补中柚皮苷含量的高效液相色谱法并优化炮制骨碎补的提取纯化方法.方法 Phenomenex C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水-冰醋酸(27:72:1).流速1.0 mL/min,测定波长283 nm,温度30℃.结果骨碎补浸膏以水(10倍,1.5 h,2次)、60%乙醇(10倍,1.5 h,2次)为溶剂提取,测得柚皮苷的含量分别为0.54%和0.56%.结论结合生产实际,选择水提醇沉.分离纯化选择加硫酸铵至饱和,乙酸乙酯(20倍,2次)萃取,蒸干.%Objective To establish a HPLC method for determining the naringin content and to optimize the extraction and purification method of processing Rhizoma Drynariae. Methods The HPLC method was adopted to measure the naringin content in Rhizoma Drynariae with the Phenomenex C18 column, the mobile phase of acetonitrile - water - glacial acetic acid(27 : 72 : 1), the flow rate of 1. 0 mL/min, the detection wavelength of 283 nm and the temp erature of 30 ℃. Results Rhizoma Drynariae extract was extracted with water (10 times, 1. 5 h, twice) and 60% alcohol (10 times, 1.5 h, twice) as solvent. The determined contents of naringin were 0.54% and 0.56% respectively. Conclusion Combined with production practice, aqueous extraction - alcohol precipitation may be selected. Separation and purification may select adding ammonium sulfate to saturation and extracting by ethyl acetate (20 times, twice), then drying by distillation.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2012(021)002【总页数】2页(P43-44)【关键词】高效液相色谱法;炮制骨碎补;柚皮苷;提取;分离【作者】马才敬;方谨;李玲玲;王允【作者单位】四川泰华现代中药所,四川,成都,618300;重庆邮电大学,重庆,400065;重庆邮电大学,重庆,400065;重庆邮电大学,重庆,400065【正文语种】中文【中图分类】R284.2;R282.71骨碎补为水龙骨科植物槲蕨 Drynaria fortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根茎，全年均可采挖，除去泥沙，干燥，或者再燎去茸毛(鳞片)。
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骨碎补检验方法验证方案
TS-56-001
安徽谓博中药股份有限公司
验证立项申请表
验证方案审批表
参加验证人员
安徽谓博中药股份有限公司
验证文件
一、简介
取净骨碎补或片，照烫法（通则0213）用砂烫至鼓起，撞去毛。
本品形如骨碎补或片，体膨大鼓起，质轻、酥松。
二、验证目的：
骨碎补检验质量标准收载在《中国药典》2015版一部, 为保证生产出的成品符合检验标准的要求,确认该检测方法是否适用于本公司生产的成品检验。
现对质量标准分析方法进行验证，确保检验结果的准确可靠。
三、验证范围
①、鉴别
②、含量测定
四、验证小组成员及职责
4.1验证小组成员
4.2人员职责
表1：
五、验证实施步骤
1、为了确保验证数据的准确可靠，采取以下几个先行保障措施
1.1仪器：己经过校正并在有效期内
1.2人员：均经过培训，熟悉方法及使用的仪器
1.3对照品：
1.4材料：均符合检验要求
1.5参考资料：
《中国药典》2015年版一部及四部
2、鉴别
2.1试验A：取本品粉末0.5g，加甲醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（1:12:2.5：3）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
2.2试验B：取甲醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml 使溶解，作为供试品溶液。
另取试验A项下对照品溶液，照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（1:12:2.5：3）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。
2.3检测结果:表2
2.4 验证标准:试验A供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
试验B供试品溶液在与对照品溶液相同的位置未显荧光斑点。
2.5检验结果评价
3、含量测定
照高效液相色谱法测定。
仪器：高效液相色谱仪，编号：
3.1专属性
3.1.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-醋酸-水（35:4:65）为流动相；检测波长为283nm。
理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。
流速：1.0ml/min；进样量：10μl。
3.1.2对照品溶液的制备：取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含柚皮苷60μg的溶液，即得。
3.1.3供试品溶液的制备：取本品粗粉约0.25g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇30ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.1.4空白溶液的制备：
直接取甲醇作为空白溶液。
3.1.5将结果填入下表。
表3 含量测定专属性试验表
3.1.6验证标准：供试品溶液中应呈现与柚皮苷对照品保留时间相同的色谱峰；空白溶液中在这点应无色谱峰。
3.1.7结果评价
3.2准确度
3.2.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-醋酸-水（35:4:65）为流动相；检测波长为283nm。
理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。
流速：1.0ml/min；进样量：10μl。
3.2.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。
3.2.3供试品溶液的制备：取3.1.3项下的供试品溶液，作含量测定用。
3.2.4取本品粉末(过三号筛)约0.25g，置50ml量瓶中，共称九份。
3.2.
4.1三份中分别加3.1.2项下的对照品溶液10ml，置50ml量瓶中，加甲醇30ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.2.
4.2三份中分别加3.1.2项下的对照品溶液20ml，置50ml量瓶中，加甲醇30ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.2.
4.3三份中分别加3.1.2项下的对照品溶液30ml，置50ml量瓶中，加甲醇20ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.2.5计算
回收率%=（C－A）/B×100%
式中A为供试品所含被测成分量；
B为加入对照品量；
C为实测值。
回收率限度要求：90~108
RSD限度要求3
3.2.6计算结果填入下表：
表5 含量测定柚皮苷加样回收率试验表
3.2.7结果评价
3.3精密度
3.3.1重复性（设操作人员A）
3.3.1.1色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-醋酸-水（35:4:65）为流动相；检测波长为283nm。
理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。
流速：1.0ml/min；进样量：10μl。
3.3.1.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。
3.3.1.3供试品溶液的制备：取取本品中粉约0.25g，精密称定，共称6份。
置锥形瓶中，
加甲醇30ml ，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml 量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.3.1.4计算
F 对＝
供试品峰面积×稀释倍数
含量= ×100% F 对×物重×（1﹣水份%）×1000
式中：A 对：平均峰面积
f 对：对照品稀释倍数 W 对对照品称重 S 对照品纯 度 F 对响应因子 F 对平均响应因子 3.3.1.5将计算的结果填入下表 表6 含量测定柚皮苷重复性试验表
3.3.1.6结果评价
3.3.2中间精密度（换一时间，换一操作人员，设操作人员为B ） 3.3.2.1色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-醋酸-水（35:4:65）为流动相；检测波长为283nm 。
理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。
流速：1.0ml/min ；进样量：10μl 。
A f W S
⨯⨯对对对
3.3.2.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。
3.3.2.3供试品溶液的制备：：取取本品中粉约0.25g ，精密称定，共称6份。
置锥形瓶中，加甲醇30ml ，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml 量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.3.2.4计算
F 对＝
供试品峰面积×稀释倍数
含量= ×100% F 对×物重×（1﹣水份%）×1000
式中：A 对：平均峰面积
f 对：对照品稀释倍数 W 对对照品称重 S 对照品纯 度 F 对响应因子 F 对平均响应因子 3.3.2.5将计算的结果填入下表
表7： 含量测定柚皮苷中间精密度试验表
A f W S
⨯⨯对对对
3.3.2.6结果评价
3.4耐用性
3.4.1以流动相的组成比例、同一规格的色谱柱为变动因素，得出测定结果不受影响的程度，为使方法用于常规检验提供依据。
3.4.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。
3.4.3供试品溶液的制备：取3.1.3项下供试品溶液作为供试品溶液。
3.4.4色谱条件1：以甲醇-醋酸-水（35:4:65）为流动相，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为250nm，流速：1.0ml/min；进样量：10μl。
3.4.5色谱条件2：流动相组分比例改变，其他条件不变。
⑴以甲醇-醋酸-水（55:4:45）为流动相，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为250nm，流速：1.0ml/min；进样量：10μl。
⑵以甲醇-醋酸-水（15:4:85）为流动相，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为250nm，流速：1.0ml/min；进样量：10μl。
3.4.6将数据整理，填入下表。
表8 含量测定耐用性试验表
3.4.7结果评价
六、验证的结果评价及建议
七、再验证周期：质量部门根据验证结果确定再验证周期。