HPLC检测器大全
高效液相色谱法所用的检测器
高效液相色谱法所用的检测器
高效液相色谱法通常使用以下检测器：
1. 紫外光吸收检测器（UV检测器）: 这是最常用的检测器之一。
它利用样品分子在特定波长下吸收的紫外光的数量来检测分离出来的化合物。
2. 荧光检测器:此检测器利用分离出来的化合物的荧光强度来检测分离出来的化合物。
这可以使它有效地检测探测极小浓度的化合物。
3. 电导检测器: 此检测器通过检测样品中离子的电导率来检测分离出来的化合物。
这种检测器通常用于离子交换色谱。
4. 质谱检测器（MS检测器）：在某些情况下，需要识别和定量化合物。
在这种情况下，使用质谱检测器非常有用。
它将化合物的分子质量与一个反应谱库进行比较，以进行准确的定量和鉴定。
5. 折射率检测器（RI检测器）: 检测样品分子与溶剂的差异折射率。
该检测器对于不具有紫外吸收或荧光的化合物是很有用的。
不同液相检测器的区别
不同液相检测器的区别公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]高效液相色谱仪的常用检测器有哪几种，有什么区别高效液相色谱仪常用检测器种类及分析检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。
1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet_visibledetector,UVD)紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。
其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。
紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。
(1)紫外吸收检测器紫外吸收检测器常用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长，并安装一个光栅型单色器，其波长选择范围宽(190nm-800nm)。
它有两个流通池，一个作参比，一个作测量用，光源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出。
当组分进入测量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关。
局限：流动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。
(2)光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector，PDAD)也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。
它采用光电二极管阵列作为检测元件，构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描采集数据，得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。
hplc法测定蛋白所需要的仪器和试剂
hplc法测定蛋白所需要的仪器和试剂
HPLC法是一种常用的蛋白质分析方法，需要使用特定的仪器
和试剂。
本文将介绍HPLC法测定蛋白所需要的仪器和试剂。
一、仪器
1.高效液相色谱仪
高效液相色谱仪是HPLC法测定蛋白的核心仪器。
它由进样器、色谱柱、检测器和数据处理系统组成。
进样器用于将待分析的蛋白样品引入色谱柱，色谱柱则用于分离蛋白质，检测器则用于检测分离后的蛋白质峰，数据处理系统则用于处理并分析检测结果。
2.离心机
离心机用于将蛋白样品离心，去除悬浮在液体中的杂质。
3.超声波清洗器
超声波清洗器用于清洗色谱柱和其他实验器具，以保证实验结果的准确性。
4.微量分光光度计
微量分光光度计用于测定蛋白样品的浓度，以便进行标准曲线的绘制和样品浓度的计算。
二、试剂
1.缓冲液
缓冲液用于调节样品的pH值，以使其适合于HPLC分析。
2.色谱柱填料
色谱柱填料用于填充色谱柱，根据不同的实验需求可以选择不同的填料材料。
3.溶剂
溶剂用于溶解蛋白样品和制备缓冲液。
4.标准品
标准品用于绘制标准曲线，以便计算样品中蛋白质的浓度。
以上就是HPLC法测定蛋白所需要的仪器和试剂。
在进行实验前，需要根据实验需求选择合适的仪器和试剂，并严格按照操作规程进行实验，以保证实验结果的准确性。
hplc检测器种类及特点
hplc检测器种类及特点HPLC检测器种类及特点HPLC（高效液相色谱法）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于各个领域的实验室。
HPLC系统由多个部分组成，其中检测器是其中之一，用于监测样品在色谱柱中的分离和识别。
不同类型的HPLC检测器具有不同的特点和适用范围，本文将详细介绍一些主要的HPLC检测器种类及其特点。
紫外检测器（UV检测器）：紫外检测器是使用紫外线（UV）光源照射样品，并测量样品吸收/透射的紫外光强度的一种检测器。
这种检测器适用于大多数化学物质，因为大多数有机化合物和某些无机化合物（如金属离子）对紫外线具有吸收能力。
紫外检测器的工作原理是通过比较进样溶液和参比溶液对紫外光的吸收量来确定样品的存在和浓度。
UV检测器具有极高的检测灵敏度和广泛的线性范围，且对各种溶剂和化合物的稳定性较好。
然而，该检测器不能提供化合物的结构信息，因为它只是根据吸收强度进行检测。
荧光检测器：荧光检测器是在分离柱后的样品流中使用荧光探针，通过测量样品产生的荧光强度来检测化合物。
这种检测器适用于大多数有荧光性质的化合物，包括天然化合物、药物、色素等。
荧光检测器的工作原理是在激发光源（通常是紫外线）的作用下，分子从低能级跃迁到高能级，然后放射出荧光光子。
荧光检测器具有较高的检测灵敏度和特异性，且具有多通道检测的能力，可以同时测定多个组分。
然而，荧光检测器对环境和溶剂的要求比较高，并且需要选择合适的激发波长和荧光波长。
电化学检测器：电化学检测器是使用电化学技术进行检测的一种检测器。
电化学检测器可以测量样品中的电子转移反应、电荷转移反应、离子传递等电化学过程。
常见的电化学检测器有电导检测器（CD）和安培检测器（AD）。
电导检测器是通过电荷传递反应量测样品离子浓度的一种方法，适用于带电离子和非离子。
安培检测器则是通过测量样品中电流强度来识别化合物的一种方法，适用于具有可测电流的化合物。
电化学检测器具有非常高的选择性和灵敏度，能够检测到微量的化合物，但它们对电极的选择和维护要求较高。
HPLC中常用的检测器
能会掩盖前期脱洗的色谱峰
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注意事项: a: 洗脱液的组成一定要恒定，不能使用梯度洗脱。 b: 不能使检测池带压工作，在与其它检测器串联使用时应放在最
后。 c: 流速要恒定，泵的流速波动要小于0.5％，使用往复泵时要用阻
尼装置。 d: 温度要恒定，恒温控制要达±10-4℃,在使用时预热时间要充足
，否则基线漂移十分严重 。
通用型检测器 约有80％的分析样品具有紫外吸收,可以使用这种检测器检测。
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优点: a: 灵敏度高，检测下限约为 10-6 g／ml b: 线性范围广 C: 对温度和流速不敏感，适于进行梯度洗脱
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限制: a: 没有紫外吸收的物质不能检测 b: 应尽可能选择在检测波长下没有背景吸收的流动相 (限制了一些 一些截止波长在200~300nm之间的良好溶剂的使用 )
阵列的每一单元有一只光敏二极管和一只与之并联的电容器． 光电二极管紫外检测器n个单元同时检测，从而使采样时间减 少到普通的１／Ｎ．使用２１１个二极管的阵列元件，最快时，每 １０ms可完成一次测量．每秒中可以收集２００００～１００００ ０个数据．
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与普通UV-VIS检测器不同之处:
a: 普通UV-VIS检测器是先用单色器分光，只让特定波长的光进入 流动池。 而二极管阵列UV-VIS检测器是先让所有波长的光都通过流动池，然 后通过一系列分光技术，使所有波长的光在接受器上被检测.
率乘以各自的摩尔浓度之和． 溶有样品的流动相与流动相本身之间折射率之差就表示样品
在流动相中的浓度．原则上，凡是与流动相折射指数有差别的样品 都可以测定它的浓度．
通用型检测器 (浓度检测器 ) 检测限可达１０－６ ～１０－７g/ml
高效液相色谱仪组成及检测器种类
高效液相色谱仪组成及检测器种类HPLC主要由四个核心组成部分：溶剂系统、进样系统、分离柱和检测器。
下面将详细介绍HPLC的组成部分及常见的检测器种类。
1.溶剂系统：溶剂系统是HPLC的基础部分，主要由溶剂瓶、溶剂泵和混合器组成。
溶剂系统的主要功能是提供流动相，使待分离物质在分离柱中迅速传递，并保持色谱的稳定。
常见的溶剂选择有水、有机溶剂（如甲醇、乙醇）和酸碱溶液等。
2.进样系统：进样系统主要由进样装置和进样口组成。
进样系统的主要功能是将待测样品溶液精确地进样到分离柱中，进行分离分析。
常见的进样方式有手动进样、自动进样和微量进样等。
3.分离柱：分离柱是HPLC用于分离待测物质的核心部分，其主要作用是将混合物中的化合物按照其化学性质进行分离。
分离柱通常由不同类型的填料填充而成，包括反相色谱柱、离子交换色谱柱、凝胶过滤柱等。
根据填料粒径的不同，分离柱可以分为常规柱和超高效柱。
4.检测器：检测器是HPLC中用于检测分离柱中物质浓度的装置。
根据不同的原理和应用要求，常见的HPLC检测器包括：(1) 紫外可见检测器（UV-Vis Detector）：紫外可见检测器是HPLC常用的检测器之一，主要通过测量样品在紫外或可见光区域的吸收来确定成分的浓度。
该检测器具有灵敏度高、通用性强、操作简单等特点。
(2) 荧光检测器（Fluorescence Detector）：荧光检测器主要通过测量分析物在激发光源作用下发射出的荧光信号来确定成分的浓度。
该检测器具有灵敏度高、选择性好、检测限低等特点，广泛应用于药物分析、环境分析、食品安全等领域。
(3) 折射率检测器（Refractive Index Detector）：折射率检测器主要通过测量分析物引起的溶剂折射率变化来确定成分的浓度。
该检测器适用于不含色团的非极性物质的检测，具有灵敏度较低、通用性强的特点。
(4) 质谱检测器（Mass Spectrometer）：质谱检测器将柱前的液相分离与质谱技术相结合，可实现化学物质的分离和结构表征。
各种液相色谱检测器介绍
各种液相色谱检测器介绍各种液相色谱检测器介绍液色迷人/紫外吸收检测器ultraviolet absorption detector紫外吸收检测器ultraviolet absorption detector 简称紫外检测器（UV），是基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测器。
因为大部分常见有机物质和部分无机物质都具有紫外吸收性质，所以该检测器是液相色谱中应用最广泛的检测器，几乎所有液相色谱仪都配置了这种检测器。
它不仅有较好的选择性和较高的灵敏度，而且对环境温度、流动相组成变化和流速波动不太敏感，因此既可用于等度洗脱，也可用于梯度洗脱。
其检测灵敏度在mg/L至mg/L范围。
可见光检测器visible light detector可见光检测器visible light detector 又称分光光度检测器，是基于溶质分子吸收可见光的原理设计的检测器。
能够直接采用可见光检测的溶质不是很多，而且多数灵敏度也不高，但采用具有高摩尔吸光系数的有机试剂（配位体和螯合剂）作为衍生化试剂进行柱前或柱后衍生操作的衍生化光度检测法是相当有用的，特别是在金属离子配合物液相色谱中的应用是相当成功的。
低压梯度low-pressure gradient低压梯度low-pressure gradient 又称外梯度，是在低压状态下完成流动相强度调整的梯度装置。
只需一个高压泵，与等度洗脱输液系统相比，就是在泵前安装了一个比例阀，混合就在比例阀中完成。
因为比例阀是在泵之前，所以是在常压（低压）下混合之后再增压输送到色谱柱的。
蒸发光散射检测器克服常见的HPLC检测难题虽然阵法光散射检测器(Evaportive light Scattering,ELSD)已经开发生产15年，但是对于许多色谱工作者来说，它仍是一个新产品。
第一台ELSD是由澳大利亚的Union Carbide研究实验室的科学家研制开发的，并在八十年代初转化为商品，八十年代以激光为光源的第二代ELSD面世。
仪器分析技术w6202-2高效液相谱仪常用检测器的分类及工作原理和应用
高效液相色谱仪常见检测器分类及工作原理和应用
主讲教师：长春职业技术学院 王磊
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检测器的分类 常用检测器的工作原理及应用
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检测器的分类
高效液相色谱仪常用检测器分类及工作原理和应用
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高效液相色谱仪常用的检测器
主要特点
池体积可制作的很小，检测后不破坏杨品， 可用于制备
灵敏度比紫外检测器高，噪音低，线性范围 宽，适用梯度洗脱及制备色谱；紫外吸收大 的溶剂不能做流动相
易受背景荧光、pH和溶剂的影响，适用于痕 量分析
可检测所有物质，不适合微量分析
蒸发光散射检测器 ELSD 纳克级激光计数检测器NQAQ
任何挥发型低于流动想的样品均能 被检测
高效液相色谱仪常见检测器分类及工作原理和应用
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常见检测器的工作原理及应用
荧光检测器的应用
环境中的污染物
– 多环芳烃(PAH)，多酚， 氨基甲酸酯等
食品、饮料 – 食品中的毒素；例如：黄 曲霉毒素
– 染料 – 维生素及衍生氨基酸 生物技术及制药
多环芳烃（PAH）
H3C CH3
CH3
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常见检测器的工作原理及应用
荧光检测原理
原理：发荧光的化合物吸收光使其分子达 到激发态，当其返回到基态时发射光的现象即 荧光。
检测过程：由光源发出的光，经激发光单 色器后，得到所需波长的激发光。经过样品池 被样品吸收，并使其被激发后发射出荧光。再 经选择发射波长的单色器分光后，单一波长的 发射光波被送至检测器进行检测，吸光强度与 激发光强度成正比。
紫外可见吸收检测器
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检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。
1.紫外可见吸收检测器（ultraviolet－visible detector，UVD）
紫外可见吸收检测器（UVD）是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。
其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。
紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。
（1）紫外吸收检测器
紫外吸收检测器常用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长，并安装一个光栅型单色器，其波长选择范围宽（190nm～800nm）。
它有两个流通池，一个作参比，一个作测量用，光源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出。
当组分进入测量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关。
局限：流动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。
（2）光电二极管阵列检测器（photodiode array detector，PDAD）
也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。
它采用光电二极管阵列作为检测元件，构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描采集数据，得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。
由此可及时观察与每一组分的色谱图相应的光谱数据，从而迅速决定具有最佳选择性和灵敏度的波长。
单光束二极管阵列检测器，光源发出的光先通过检测池，透射光由全息光栅色散成多色光，射到阵列元件上，使所有波长的光在接收器上同时被检测。
阵列式接收器上的光信号用电子学的方法快速扫描提取出来，每幅图象仅需要10ms，远远超过色谱流出峰的速度，因此可随峰扫描。
2．荧光检测器（fluorescence detector，FD）
荧光检测器是一种高灵敏度、有选择性的检测器，可检测能产生荧光的化合物。
某些不发荧光的物质可通过化学衍生化生成荧光衍生物，再进行荧光检测。
其最小检测浓度可达0.1ng／ml，适用于痕量分析；一般情况下荧光检测器的灵敏度比紫外检测器约高2个数量级，但其线性范围不如紫外检测器宽。
近年来，采用激光作为荧光检测器的光源而产生的激光诱导荧光检测器极大地增强了荧光检测的信噪比，因而具有很高的灵敏度，在痕量和超痕量分析中得到广泛应用。
3. 示差折光检测器（differential refractive Index detector，RID）
示差折光检测器是一种浓度型通用检测器，对所有溶质都有响应，某些不能用选择性检测器检测的组分，如高分子化合物、糖类、脂肪烷烃等，可用示差检测器检测。
示差检测器是基于连续测定样品流路和参比流路之间折射率的变化来测定样品含量的。
光从一种介质进入另一种介质时，由于两种物质的折射率不同就会产生折射。
只要样品组分与流动相的折光指数不同，就可被检测，二者相差愈大，灵敏度愈高，在一定浓度范围内检测器的输出与溶质浓度成正比。
4. 电化学检测器（elec）chemical detector，ED）
电化学检测器主要有安培、极谱、库仑、电位、电导等检测器，属选择性检测器，可检测具有电活性的化合物。
目前它已在各种无机和有机阴阳离子、生物组织和体液的代谢物、食品添加剂、环境污染物、生化制品、农药及医药等的测定中获得了广泛的应用。
其中，电导检测器在离子色谱中应用最多。
电化学检测器的优点是：
①灵敏度高，最小检测量～般为ng级，有目可达pg级；
②选择性好，可测定大量非电活性物质中极痕量的电活性物质；
③线性范围宽，一般为4～5个数量级；
④设备简单，成本较低；
⑤易于自动操作。
5. 化学发光检测器（c。
iluminescence detector，CD）
化学发光检测器是近年来发展起来的一种快速、灵敏的新型检测器，因其设备简单、价廉、线性范围宽等优点。
其原理是基于某些物质在常温下进行化学反应，生成处于激发态势反应中间体或反应产物，当它们从激发态返回基态时，就发射出光子。
由于物质激发态的能量是来自化学反应，故叫作化学发光。
当分离组分从色谱柱中洗脱出来后，立即与适当的化学发光试剂混合，引起化学反应，导致发光物质产生辐射，其光强度与该物质的浓度成正比。
这种检测器不需要光源，也不需要复杂的光学系统，只要有恒流泵，将化学发光试剂以一定的流速泵入混合器中，使之与柱流出物迅速而又均匀地混合产生化学发光，通过光电倍增管将光信号变成电信号，就可进行检测。
这种检测器的最小检出量可达10-12g。
6.蒸发光散射检测器（EvaporativeLight-scatteringDetector，ELSA）
ELSA是通用型检测器，可以检测没有紫外吸收的有机物质，如人参皂苷、黄芪甲苷等。
优势：
1) 可检测挥发性低于流动相的任何样品；
2) 流动相低温雾化和蒸发，对热不稳定和挥发性化合物亦有较高灵敏度；
3) 广泛的梯度和溶剂兼容性，无溶剂峰干扰；
4) 辅助载气提高了检测灵敏度，保持检测池内的清洁，避免污染；
5) 高精度雾化和蒸发温度控制，保证高精度检测；
6) 可与任何HPLC系统连接。
ELSD与几种常用的检测器之间的对比
ELSD UV RID MS
应用范围通用有光吸收的化合物通用通用
响应质量相关化学相关折光度相关质量相关
灵敏度高高低高
未知物检测能不能能能
流动相影响/梯度不影响本底影响影响不影响
基线稳定性好较好差好。