人端粒酶(TE)说明书含量48
端粒酶活性TRAP实时定量检测试剂盒产品说明书
号达到阈值所需的循环数为 Ct 值（参考图像如下）：其中 6 号为阴性对照
14. Ct 值作为端粒酶活性的计量单位 15. 用户可以使用 293 细胞（10，100，和 1000 细胞数）作为阳性对照，以此建立标准曲线：横座标（X
用于荧光定量pcr反应实验提示样品制备1细胞样品制备准备1个细胞培养6孔板的单孔细胞直至生长至80铺满率1用细胞刮脱棒刮落细胞转移到15毫升离心管放进微型台式离心机离心5分钟速度为3000g或6000rpm例如eppendorf5415小心加入xx微升预冷的裂解液reagenta混匀细胞颗粒群放进冰槽里孵育30分钟选择步骤放进4微型台式离心机离心5分钟速度为16000g或13000rpm例如eppendorf5415选择步骤小心移取上清液到新的15毫升离心管10
技术背景
端粒酶（telomerase）是一种核糖核蛋白酶（ribonuleoprotein），与人体细胞永生化（immortalization）和转 化（transformation）有关。端粒重复序列扩增方法（telomeric repeat amplification protocol；TRAP）是基于 多聚酶联扩增的敏感高效的体外端粒酶活性的检测技术。首先，非端粒单核苷酸引物作为端粒酶的底物而 持续延长产生六碱基差异的片段；然后，延长所获得的产物在非端粒单核苷酸引物和逆向引物的参与下进 行特异性扩增。SYBR 绿色荧光染料，作为 DNA 结合染料，可以和扩增子（amplican）上双链 DNA 的任 一小沟（minor groove）结合，而发出荧光信号。根据每一循环的荧光强度来确定扩增产物的产量，并用循 环阈值（threshold cycle；Ct）表示。TRAP 实时定量 PCR 技术十倍敏感于常用 TRAP 电泳技术，同时避免 二聚体产生的假阳性干扰。
人端粒酶逆转录酶--肿瘤免疫治疗新靶点
人端粒酶逆转录酶--肿瘤免疫治疗新靶点
庞建新
【期刊名称】《癌症（英文版）》
【年(卷),期】2003(022)008
【摘要】以人端粒酶逆转录酶(hTERT)这一新的肿瘤相关抗原为基础的肿瘤免疫研究正在兴起.来源于hTERT的抗原肽与MHC-I分子结合后递呈在多种肿瘤细胞膜表面,在正常人或肿瘤患者体内外激发细胞毒性T细胞(CTL)反应.体内外实验表明,CTL能识别hTERT抗原肽并以MHC限制性方式特异性杀伤TERT阳性的多种肿瘤细胞,而对体内极少数TERT阳性的正常细胞如造血干细胞或激活的T淋巴细胞没有影响.在活动性肿瘤病人体内进行的Ⅰ期临床试验结果进一步证实引起自身免疫反应的可能性极小.这些结果表明,以hTERT这一新的肿瘤抗原为靶点的肿瘤免疫学治疗及预防具有广阔的应用前景.
【总页数】3页(P893-895)
【作者】庞建新
【作者单位】第一军医大学药理教研室,广东,广州,510515
【正文语种】中文
【中图分类】R345;R730.5
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6-丙酮酰四氢蝶呤合酶(PTS)ELISA试剂盒说明书
6-丙酮酰四氢蝶呤合酶(PTS)ELISA试剂盒说明书本试剂仅供研究使用标本：体液6-丙酮酰四氢蝶呤合酶(PTS)ELISA试剂盒说明书试验原理：BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。
人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。
6-丙酮酰四氢蝶呤合酶(PTS)ELISA试剂盒说明书自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
6-丙酮酰四氢蝶呤合酶(PTS)ELISA试剂盒说明书操作注意事项1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9．按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
6-丙酮酰四氢蝶呤合酶(PTS)ELISA试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
大鼠端粒酶(TE)酶联免疫分析试剂盒 说明书
大鼠端粒酶（TE）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用!预期应用ELISA法定量测定大鼠组织匀浆或其它相关生物液体中端粒酶（TE）含量。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗TE抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗大鼠TE抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的TE呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为50ng/ml，做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别稀释成50ng/ml，25ng/ml，12.5ng/ml，6.25ng/ml，3.12ng/ml，1.56ng/ml，0.78ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml，临用前15分钟内配制。
如配制25ng/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）50ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml 样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3.样品稀释液：1×20ml。
4.检测稀释液A：1×10ml。
5.检测稀释液B：1×10ml。
6.检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。
稀释方法同检测溶液A。
8.底物溶液：1×10ml/瓶。
端粒酶
端粒酶科技名词定义中文名称：端粒酶英文名称：telomerase定义1：一种反转录酶，由蛋白质和RNA两部分组成核糖蛋白复合体，其中RNA是一段模板序列，指导合成端粒DNA的重复序列片段。
所属学科：免疫学（一级学科）；概论（二级学科）；免疫学相关名词（三级学科）定义2：一种自身携带模板的逆转录酶，由RNA和蛋白质组成，RNA组分中含有一段短的模板序列与端粒DNA的重复序列互补，而其蛋白质组分具有逆转录酶活性，以RNA为模板催化端粒DNA的合成，将其加到端粒的3′端，以维持端粒长度及功能。
所属学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；酶（二级学科）定义3：催化端粒中重复单元合成的一种核糖核蛋白酶。
所属学科：遗传学（一级学科）；分子遗传学（二级学科）本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布百科名片端粒酶-简介细胞中有种酵素负责端粒的延长，其名为端粒酶。
端粒酶的存在，算是把 DNA 克隆机制的缺陷填补起来，藉由把端粒修复延长，可以让端粒不会因细胞分裂而有所损耗，使得细胞分裂克隆的次数增加。
端粒酶让人类看到长生不老的曙光。
目录开发应用的艰辛历程最新研究端粒酶与结直肠肿瘤的关系定义应用国内相关研究端粒DNA功能和端粒酶功能及生物特性端粒酶-端粒学假说及研究开发应用的艰辛历程最新研究端粒酶与结直肠肿瘤的关系展开编辑本段定义端粒酶（Telomerase），是基本的核蛋白逆转录酶，可将端粒DNA加至真核细胞染色体末端。
端粒在不同物种细胞中对于保持染色体稳定性和细胞活性有重要作用，端粒酶能延长缩短的端粒（缩端粒酶短的端粒其细胞复制能力受限），从而增强体外细胞的增殖能力。
端粒酶在正常人体组织中的活性被抑制，在肿瘤中被重新激活，端粒酶可能参与恶性转化。
端粒酶在保持端粒稳定、基因组完整、细胞长期的活性和潜在的继续增殖能力等方面有重要作用。
细胞中有种酶负责端粒的延长，其名为端粒酶。
端粒酶的存在，算是把 DNA 克隆机制的缺陷填补起来，藉由把端粒修复延长，可以让端粒不会因细胞分裂而有所损耗，使得细胞分裂克隆的次数增加。
端粒酶
端粒酶抑制剂用于肿瘤治疗的研究新进展近年来，肿瘤细胞永生化的“端粒—端粒酶学说”已为越来越多的研究结果所证实。
端粒酶是唯一的一种以自身RNA序列为模板将端粒重复序列复制添加到染色体3′末端的核蛋白酶。
许多研究结果表明：人类85%～90%的肿瘤细胞的端粒酶活性呈阳性，端粒酶的激活及端粒长度的稳定与肿瘤、衰老的发生和发展有密切关系，针对端粒酶基因的调控可以通过抑制端粒酶的活性来抑制肿瘤的生长并促进其凋亡，具有对肿瘤细胞特异性的作用，是肿瘤靶向治疗的一个新的研究方向。
本文中对端粒、端粒酶的结构和功能，端粒酶活性的调控，端粒酶与肿瘤和衰老的关系，端粒酶抑制剂的最新研究进展以及在肿瘤等疾病治疗中的应用前景进行综述和分析，为进一步开发天然来源的端粒酶抑制剂、研发肿瘤靶向治疗新药提供参考。
1.端粒与端粒酶1.1端粒端粒（T elomers）为真核细胞染色体末端的一种特殊结构，由端粒DNA和端粒蛋白质组成，其DNA 含有大量的TTAGGG n串联重复结构，其功能是完成染色体末端的复制，防止染色体融合、重组和降解，起着保护染色体末段的作用。
端粒是线性DNA，它的末端会随周期性的复制而逐渐缩短。
Muller1于1938年首次发现这一结构并将其命名为端粒（T elomers）。
由于末端复制问题，细胞每分裂1次，端粒就缩短50～100，当端粒缩短到临界长度时，细胞就会出现衰老以致死亡，因此在正常真核细胞中，端粒可被看成是“生命的时钟”或“有丝分裂的计数器”2。
1.2端粒酶端粒酶(T elomerase) 是一种由RNA和蛋白质组成的特异核糖核酸蛋白复合体，具有逆转录的酶活性，能以自身的RNA为模板5’-CUAACCCUAAC-3’通过逆转录合成端粒重复序列并连接到染色体末端以补偿细胞分裂时端粒的缩短，使细胞获得无限增殖能力3。
端粒酶的主要功能是：①通过自身的RNA 模板、催化亚单位和辅助蛋白将端粒DNA 添加到染色体的末端；②维持和平衡端粒序列长度；③修复断裂的染色体末端4。
医学知识之端粒酶
端粒酶
端粒酶介绍：
端粒酶是一种由RNA和蛋白质组成的特殊反转录酶，与真核生物细胞DNA末端的端粒(一段特定的核苷酸序列及结构)的合成有关。
正常体细胞的端粒长度是随着细胞的分裂逐渐缩短的，端粒酶活性增强，可维持端粒的长度不缩短，使细胞永久增殖而癌变。
故端粒酶检测及其抑制剂可用于肿瘤诊断和治疗。
端粒酶正常值：
阴性。
端粒酶临床意义：
适应于各类肿瘤性疾病的诊断和鉴别诊断。
升高：肝癌(93.88OD/30μg蛋白质)、癌周围组织(24.09OD/30μg 蛋白质)。
小细胞肺癌早期即有端粒酶活性升高，非小细胞肺癌多于中晚期出现活性改变。
端粒酶注意事项：
1.注意防止实验室污染而出现假阳性或假阴性。
2.注意去除组织标本中含有的多聚酶抑制剂，减少假阴性。
3.闪烁分析技术、ELISA法、原位杂交法较TRAP法检测结果更可靠。
端粒酶检查过程：
暂无相关信息
【注意事项】
大家在用药的时候，药物说明书里面有三种标识，一般要注意一下：
1.第一种就是禁用，就是绝对禁止使用。
2.第二种就是慎用，就是药物可以使用，但是要密切关注患者口服药
以后的情况，一旦有不良反应发生，需要马上停止使用。
3.第三种就是忌用，就是说明药物在此类人群中有明确的不良反应，
应该是由医生根据病情给出用药建议。
如果一定需要这种药物，就可
以联合其他的能减轻不良反应的药物一起服用。
大家以后在服用药物
的时候，多留意说明书，留意注意事项，避免不良反应的发生。
本文到此结束，谢谢大家!。
瑞粒酶总述
瑞粒酶端粒(telomere) 和端粒酶(telom erase) 是近年来生命科学研究的热点之一，正常细胞在分裂过程中，因其染色体末端(端粒)DNA 不能完全复制而缩短，细胞经多次分裂后，端粒缩短达到危机点(crisis)，促发某一信号，使细胞逐渐失去增殖能力而衰老死亡。
端粒酶可延长染色体末端DNA，端粒酶的活化使细胞获得无限增殖能力。
基于此，有少数细胞(如永生细胞系) 及绝大多数恶性肿瘤细胞(85%) 可逃逸这一危机点。
因为在这些细胞中含有活化的端粒酶系统，从而使细胞获得无限增殖能力，使之永生化和恶变，因此，对端粒和端粒酶系统的研究，有助于阐明细胞衰老和恶变机制，对肿瘤的诊断、治疗以及抗衰老都具有重要的理论和实际意义。
一般认为，癌症是由多种突变的积累，破坏了细胞正常的生长调控而引起的，除了一些明确的病因外，有许多实验结果支持这样一种假说，即端粒酶的激活对许多恶性肿瘤细胞的形成是必需的，且肿瘤细胞与端粒酶活动增加之间存在相互激发的关系［1］。
这种显著的相关性提示: 在肿瘤细胞恶性状态的进展和维持中，端粒酶可能起到关键性的作用。
本文就端粒与端粒酶研究的最新进展作一综述，具体讨论了端粒的结构与功能，端粒酶在端粒合成与稳定中的作用，介绍了端粒酶活性的测定方法，细胞永生与端粒酶激活的关系，提出了通过抑制端粒酶活性来治疗癌症的可能性。
1 端粒(telomere)1.1 端粒(telomere) 的概念端粒是指真核细胞线性染色体末端的蛋白质-DNA特殊结构，即染色体末端DNA 序列的多个重复，其作用是保护和稳定染色体的末端，它由2～20kb 串联的短片段重复序列(TTAGGG) n 及一些结合蛋白组成。
四膜虫(单细胞生物) 端粒的结构是6 个核苷酸5′- TTGGGG - 3′序列的多次重复。
人类为5′-TTAGGG- 3′序列的多次重复。
随着细胞不断分裂，染色体复制次数增加，端粒DNA 序列进行性缩短。
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人端粒酶(TE)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：48T
38ng/L -1200 ng/L
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中端粒酶(TE)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人端粒酶(TE)水平。
用纯化的人端粒酶(TE)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入端粒酶(TE)，再与HRP标记的端粒酶(TE)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的端粒酶(TE)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人端粒酶(TE)浓度。
试剂盒组成
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，
然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。