六次甲基四胺银染色法在肾穿活检中应用
光波-微波辐射技术在肾小球基底膜六胺银快速染色中的应用研究
一
微波辐射原理 【 ２ － ５ ３ ， 对 传统六 胺银 染色方 法 进行 了改进 ， 明
肾穿刺活检技术对 肾脏疾病 的诊 断 、 治疗 和预后判 断具有 片放入 ５ ０ ｍｌ 带盖的立式染 色缸 中染液 ， ６ ２℃ ， １ 、 ５ ｈ左右 （ 组
， 蒸馏 水洗３ ｍｉ ｎ ×３次 ； （ ４ ） ０ ． ２ ％氯化 金 重要意义 ， 有关 资料 报道 ， 肾活检前后诊 断对 比分 析 ， 证 实肾脏 织变成棕褐色 时即可） 蒸馏水 洗 ３ ｍｉ ｎ×３次 ； （ ５ ） ５ ％硫 代 疾病临床诊断的修正率达 ３ ９ ％～６ ３ ％， 治疗方 案 的修 正 、 预后 显微镜下控制 调色 至满 意 ， ｍｉ ｎ ， 水洗 ； （ ６ ） 苏木素复染 ０ ． ５ ａｉ ｒ ｎ ， 自来水 冲洗 ； 估计修正率达 １ ７ ％－ －３ ６ ％。 肾穿刺 活检 推动 了肾脏病 理的迅 硫 酸钠 固定 ５ （ ７ ） 盐酸酒精快速分化 、 氨水返兰 ， 自来 水冲洗 ； （ ８ ） 常规 乙醇脱 速发展 ， 使肾脏病理学整体 知识 不断 更新 和提 高 ， 尤 其 是 六 胺
为５ 档 调节 ． 即高档 １ ０ ０ ％： ９ ０ ０ Ｗ， 中高 档 ８ ０ ％： ７ ２ ０ Ｗ， 中 档 ６ ０ ％： ５ ４ ０ Ｗ， 中低 档 ４ ０ ％： ３ ６ ０ Ｗ， 低档 ２ ０ ％： １ ８ ０ ｗ； 光 波 输 出 为单一光波管发光 ； 光 波／ 微 波 组 合 Ｉ为 ３ ０ ％ 的时 间微 波 输 出 ，
PASM-Masson染色法在肾穿刺活检特殊染色中的应用与体会
PASM-Masson染色法在肾穿刺活检特殊染色中的应用与体会李敏;姚梅宏;曾玲;郑智勇【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2014(030)006【总页数】2页(P693-694)【关键词】PASM-Masson染色;特殊染色;肾穿刺活检【作者】李敏;姚梅宏;曾玲;郑智勇【作者单位】南京军区福州总医院病理科,福州350025;南京军区福州总医院病理科,福州350025;南京军区福州总医院病理科,福州350025;南京军区福州总医院病理科,福州350025【正文语种】中文【中图分类】R361.2经皮肾穿刺活检病理诊断是当今肾脏病理学的重要组成部分，是肾脏疾病诊断必不可少的检查方法。
肾穿刺活检病理检查主要包括常规HE染色、特殊染色(PAS染色、PASM染色、Masson染色和刚果红染色)、免疫组化染色或免疫荧光染色以及电镜检查。
其中，特殊染色能直观地显示肾小球、肾小管、肾间质、血管及特殊蛋白的沉积等。
本科室总结20多年5万余例肾穿标本的染色经验，将PASM染色与Masson染色相结合［1］，简化步骤并取得优质的染色效果，有效提高临床标本的利用率，节省制片成本及劳动量，有助于临床病理诊断。
现将PASM-Masson染色法在肾穿刺标本特殊染色中的应用及注意事项介绍如下。
1.1 材料南京军区福州总医院病理科每年共接收肾穿刺活检标本约4 000例，常规行 HE、特殊染色(PAS、PASMMasson)、免疫组化染色及电镜检查。
1.2 试剂六胺银工作液的配制:蒸馏水20 ml+3%六次甲基四胺水溶液10 ml+5%硝酸银水溶液0.5 ml+5%四硼酸钠水溶液2.5 ml，试剂现配现用(3%六次甲基四胺水溶液和5%硝酸银水溶液于4℃冰箱保存)。
1.3 染色方法与步骤 (1)石蜡1 μm厚切片，常规脱蜡入水。
(2)2%过碘酸氧化15～20 min，流水稍洗，再用蒸馏水洗。
(3)浸入56～58℃预热的六胺银工作液中30～40 min，20 min后将切片移入新的六氨银工作液中继续染色至组织着色，蒸馏水洗2 min×3次。
微波改良肾穿刺活检六胺银染色
光抗体检测外 ， 高质 量 的六胺 银染 色 （ Ａ Ｍ） 法显示 肾基底 色； ￣结构显示不够清晰， ＰＳ 方 Ｂ＿ ｆ ｔ 背景着色严重， 出现银镜现象。 膜的改变 ， 在光镜下 观察基底 膜增厚 、钉 突” “ “ 、 双轨 ” Ｈ 等 Ｅ染 色难 以观察到 的改变 ， 对诊 断具有 重要 的价值 － 。我 科在 肾活 ｌ ｊ
・
６ ・ ６
中国中西医结合肾病杂志 ２ １ 年 １ ００ 月第 １ 卷第 １ １ 期
ｃ Ｉ ＷＮ， ｎ ａ ０ ０ Ｖ Ｉ １ Ｎ ． Ｊ Ｔ Ｊ ｕｒ ２ １ ， ｌ １ ， ｏ １ ａ ｙ ０ ．
ｍａａ，０ ２２ （０ ：２ —６ ７ ｔｌ ０ ，９ １ ）６ １ ２ ． ２
化 ，０ ７ ６ １ ）６ ８ ２ ． ２ ０ ，（ １ ：１ —６ １
３． ｒＭＲ ， ｈ ｅ Ｃｌ ｉ ｌ ｈ ｒｃｅｉｔ ｓｏ ｒｍｉ ｐｕ ｔｓｉ Ｄａ Ａｋ ｔｒＡ． ｉ ｃ ａａｔｒ ｉ ｆｕｅ ｃ ｒ ｒ ｕ ｎ ａｃ ｓｃ ｉ ｎ
ｄａ ｓ ａｉ ｔ． ｉｄ ｅ ｔ２ ０ ，９ １ ）１２ —１３ ． ｉｙｉ ｐｔ ｎｓＫ ｎ ｎｙＩ ，０６ ６ （０ ：７ ６ ７２ ｌ ｓ ｅ ｎ
讨 论
检标本制作过程结合六 胺银染 色 中组织 容易 出现过染 ， 间 、 时 六胺银染色对温度的要求是较 高的 ， 一般 在 ６ ０℃ ～６ ５℃ 温度较难控制等 问题 ， 采用微 波快 速处 理 的方 法进行 了改 进 ， 之间 ， ６ 在 ０℃以下组 织反应 的缓慢 ， 浸染 时 间长易脱 片 ， 液 染 介绍如下 。 易氧化变混浊 ； 温度过 高染液 容易 变混浊并 出现银镜 反应 ， 影
朱 国 良① 张 晓岚① 石麒麟 ①
肾穿刺活检光镜 观察 肾组 织病变 在进行 肾小 球疾病 诊断 维及 网状纤维均呈黑色 ， Ａ组结 构清 晰， 但 病变组 织基底 膜双 钉突现象显示清 晰 ， 背景无银 颗粒 沉积 ， 核蓝色 ， 胞 胞质 红 和分类 的工作 中起到很 重要 的作用 ， 实际应 用 中， 在 除免 疫荧 轨 、
微波在肾活检组织染色中的应用
微波在肾活检组织染色中的应用
肾活检组织病理(光镜)检查在肾活检病理诊断中具有重要价值，通过特殊染色可以显现标本中特殊的物质如基底膜、免疫复合物等，然而，常规的特殊染色制作比较费时，尤其是过碘酸六胺银（Periodic Acid-Silver Methenamine，PASM）染色，控制不好往往失败。
我们将微波辐射技术应用于肾活检组织的过碘酸Schiff反应（Periodic Acid-Schiff Reaction，PAS）及PASM染色中，证明具有快速省时，染色效果好，不易脱片等优点，现介绍如下：
1 材料和方法
1．1 材料肾组织(肾穿刺获得)，58℃纯净石蜡；松下NN-5208型微波炉（输出功率600W）。
1．2 试剂
1．2．1 Schiff液：同常规Schiff液配制。
1．2．2 环六亚甲基四胺-硝酸银液(贮备液)：
5%硝酸银20.0ml
3%环六亚甲基四胺液400.0ml
环六亚甲基四胺-硝酸银液(工作液)：
环六亚甲基四胺-硝酸银液(贮备液)45.0ml，5%硼砂液5.0ml 1．2．3 混合红染液：
变色酸2R（chicmolocps 2R）0.6g
亮绿SF 0.3g
蒸馏水100ml
磷钨酸0.8g
冰醋酸 1.0ml
1%酸性品红少许(需染片后确定)
1．3 方法
1．3．1 制片肾穿刺组织经升汞-苦味酸混合固定液固定后，常规酒精脱水、氯仿透明、石蜡浸透、包埋，切片厚2μm。
浅谈床旁即时检验的质量控制
周敏
杨琪
潘 涛
下 观察 到棕 色 变为棕 黑 色 。 自来水 洗 ２ｍｎ×３ 。 ⑥ ｉ 次 ⑦人 Ｍ ｓｏ 液 套 染 １ ｉ。⑧ １ ａｓｎ ５ｍｎ ％冰醋 酸分 化 １ｒ ｎ ｉ 。⑨ 自然 晾 ａ
干， 中性树 胶 封 固 。
２ 结 果
方法 ， 殊 染 色 能直 观地 观 察 到 肾 小 球 、 特 肾小 管 、 间 肾
术 ， 具 有 更 新 、 快 、 准 确 、 方 便 的 特 点 ， 医 院 它 更 更 更 在
急 诊 、 区医 疗 服务 以及 慢 性 病 患 者 的 自我 检 测 中都 发 社 挥 了重 要 作 用 。正 因 为Ｐ Ｃ Ｏ Ｔ目前 的广 泛 应 用 及 将 来 的 广 阔 发展 前 景 ， 质 量 管 理 （ｕ ｉ ａ ａｅ ｎ） 越 显 重 其 ｑ Ｍｔ ｍ ｎｇｍｅｔ就 ｙ 要 。１９ 年 美 国 临 床 实 验 室 标 准 化 委 员 会 （ Ｃ Ｌ ） 布 ９９ Ｎ Ｃ Ｓ公 了现 场 快速 检 验 质 量 管理 导则 ， 建 立 现 场 快 速 检 验 质 为 量 管理 系统 提 供 了基 础 。 场 快 速 检验 的质 量 管 理 应 包 现
括 以下 几 个 方 面 。
行 现 场 快 速 检 验 工作 。 ２ Ｐ Ｔ的质 量 管 理 系统 ＯＣ ＰＣ Ｏ Ｔ的 质量 管 理 系统 可借 鉴 常 规 实 验 室 质 量 管 理
的 成 熟 经 验 ， 据 现 场 快 速 检 验 的 特 点 ， 立 独 立 的 质 根 建
量 管 理 系 统 ， 一 次 的 检 验 过 程 ， 括 标 本 的 采 集 到 检 每 包
１ ％过 碘酸 氧化 １ ０～１ ｉ 蒸馏 水洗 ２ｍｉ ５ ｍｎ， ｎ×３ 。③ 入 塑 次
三种脱水程序在肾穿刺活检标本制片中的应用比较
三种脱水程序在肾穿刺活检标本制片中的应用比较韩福兰;汪家文;刘靖;刘应时;刘芳【摘要】目的：探讨肾穿刺组织最合适的脱水程序。
方法随机选取新鲜肾穿刺标本80例，每例取材3份，固定后按不同脱水程序分为3组：A组为新型超声结合水浴加温组、B组为常规大体标本脱水组、C组为小标本单独脱水组。
3组所做的切片均进行HE染色和特殊染色。
结果小标本单独脱水组，HE染色切片厚薄均匀平整，细胞染色鲜艳，无皱缩现象，对比度清晰，各项特殊染色着色鲜艳、定位准确，优于其余两组。
结论应用小标本快速脱水组制作的切片质量优良，完全满足肾组织临床病理诊断的需要，既缩短了制片时间，又提高了制片质量。
%To investigate the most suitable dehydration procedure of renal biosy tissues.Methods 80 renal biopsy specimens had been selected. Three small pickling tissues were cut from each case and were divided into three groups:Group A for fast ultrasonic processing technology, which combined with the water bath method. Group B for routine dehydration of large samples. Group C for dehydration program of small specimen. The three groups of sections were observed by HE staining and specialstaining.Results Rapid dehydration program of small specimen was better than the other two groups. In this group, all the HE and special staining slices were uniform and smooth, with bright staining, clear contrast and accurate positioning.Conclusion Rapid dehydration program of small specimens was the most suitable dehydration procedure of renal biosy tissues, which not only shortened the production time, but also improved the sample quality.【期刊名称】《佛山科学技术学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(000)004【总页数】5页(P9-13)【关键词】肾穿刺活检;HE染色;特殊染色;脱水【作者】韩福兰;汪家文;刘靖;刘应时;刘芳【作者单位】佛山市中医院病理科，广东佛山528000;佛山科学技术学院基础医学部，广东佛山528000;佛山科学技术学院基础医学部，广东佛山528000;佛山科学技术学院基础医学部，广东佛山528000;佛山科学技术学院基础医学部，广东佛山528000【正文语种】中文【中图分类】R361.2肾小球肾炎是临床常见病，肾穿刺活检有利其病理分型，以及确定其病变程度，被认为是该病诊断的金标准。
肾活检病理染色技巧探讨
伊红染色时间不足
适当延长伊红染色时间
PAS染色的常见问题
常见问题
解决办法
Schiff染液失效或染色 时间不足
配制新鲜染液，适当延长染 色时间，肉眼观察至切片 变 淡粉红色、立即入水。
冷配Schiff染液改良
称取碱性品红６ｇ入蒸馏水４２０ｍｌ，用磁力搅 拌器搅拌２．５－３ｈ至完全溶解，继续加入Ｎ盐 酸８０ｍｌ和偏重亚硫酸钠１０ｇ混合，搅拌２． ５－３ｈ至草黄色，避光室温静置１２ｈ后再加入 ５ｇ活性炭，搅拌后过滤至无色透明，置于４℃避 光保存。
脱片的常见问题
常见问题
解决办法
① 载玻片洗涤不洁、有油脂 ① 新鲜配制泡酸液，保证泡酸
② 捞片时，切片未摊平
时间
③ 烤片时间不足
② 将组织切片周围水份吸干
④ 温度不够，急于染色
③ 适当延长时间，升温
⑤ 染色过程中，水洗速度过快。④ 缓缓漂洗
⑤ 涂PLL（防脱片剂）
HE染色的常见问题
常见问题
解决办法
75%（10min × 2）~ 80% （10min × 2）~ 90%（10min ×2） ~ 95% (30min × 2)~ 100%（60min× 3）
脱水的常见问题
常见问题
解决办法
PASM
PASM
脱水时间过长 脱水梯度过大
根据室内温，适当缩短脱水时间 降低脱水梯度，避免梯度过大
组织透明
PASM染色的常见问题
常见问题
解决办法
银染过度 先目测，后在镜下严格控制染色时间
六氨银染液改良
3%六次甲基四胺水溶液25ml，加入2%四硼酸钠5ml ，加入5%硝酸银水溶液2.5ml，震荡至乳白色悬浊 液变为清亮透明，加入30ml蒸馏水，最后加入4% 硼酸5-7滴，混匀后过滤立即使用，如果不立即使 用放入4度冰箱避光储存（一般不能超过3天）。
影响肾穿刺活检六胺银染色的因素
Ｖｏ． ７ Ｎ ． ８ １２ ｏ ３ Ｐ． ７
２ ０ Ｏ１
影 响 肾穿 刺 活 检 六胺 银 染 色 的 因素
黎家华
三峡 大学 医学 院（ 湖北 宜 昌 ４ ３０ ） ４ ０ ２
【 关键词 】 肾穿刺活检 ； 六胺银 染色法 ； 响因素 影
【 中图分类号】３ ８２ Ｒ ７．１
醛 与银离 子发 生银 镜 反 应 ， 能较 好 的显 示 肾小球 毛 细血 管基底 膜 的情况 。在 日常作 肾组 织 六胺银 染 色
捞片时一步到位 ， ６ ℃温箱考 ２ ４ ， 在 ｏ — ｈ 使切片组织 充 分 的粘 附在 载玻 片上 。效 果 爽 佳 ， 没有 再 出现 脱
片现象 。
肾穿刺 取得 的活 检标 本 ， 固定 不及 时 ， 组织 产生 自溶 ； 或取 材后 没有 及 时 处理 ， 置 过 久组 织 干 涸 ； 放
固定时间短 ， 固定不 良等 ， 都会导致结构破坏 ， 染色 质 量欠佳 ， 能进 行正 确 的诊 断 。因此 ， 织 固定 的 不 组 好坏 是制 片 的关键 。新 取 出 的活检 标本 放在 纱布 上
上有 残余 的石蜡 ， ０５ 高 碘 酸 氧化 处 理 时 ， 能 用 ．％ 不 对 肾小球 毛 细血 管基 膜 进 行 有 效 的氧 化 ， 接 妨 碍 直 六胺 银染 色 。此 时 ： 及 时 更 换 新 的 脱 蜡 剂 。若 因 应
笔者就影响肾穿刺活检六胺银染色的因素作一
简述 。
１ 组织 固定不 良对 染色 的影响
用 生理 盐水将 血 冲 洗 干 净 ， 即放 进 固定 液 内进 行 立
固定 。
室温低而脱蜡效果不满意时， 我们采取的措施是 ： 置 于 ３ ℃ 温箱 内脱 蜡 、 长脱 蜡 时 间 和增 加 一 次 脱 蜡 ７ 延 （ ０ ｉｘ ３ ｎ ３次） 能达到较好 的脱蜡效果。 ｍ ，
肾小球基底膜改良PASM染色法
肾小球基底膜改良PASM染色法肾活检组织的PASM染色（六氨银染色法）对于观察肾小球系膜、基底膜的各种形态改变具有极重要的诊断价值，特别是对于观察膜性肾病基底膜的钉突形成、淀粉样变性肾病基底膜的双轨和多轨改变等是其他特殊染色所不可替代的。
新月体形成中的基底膜断裂、血管炎中的动脉内膜和弹力纤维的变化也应用PASM染色[1]。
目前PASM染色存在多种不同的方法，我们采用的是1%过碘酸和8%重铬酸钾双重氧化法，且在染液浓度、染色时间和染色温度上做了调整改良，取得了较好的效果，总结经验如下，供同行交流与参考。
1 材料与方法1.1 标本本院肾内科2010-2012年送检的肾穿刺活检组织标本674例，10%中性福尔马林溶液固定，全自动组织脱水机按活检小标本程序处理，石蜡包埋，切片厚3μm，70℃烤片30-40min。
1.2 试剂配制⑴贮备液：3%六次甲基四胺液500ml和2%硝酸银液100ml储存于4℃冰箱；5%四硼酸钠溶液100ml储存于室温。
⑵六胺银工作液：取3%六次甲基四胺液（乌洛托品）50ml加入2%硝酸银液6ml，此时溶液产生乳白色悬浊液，稍搅拌溶液变澄清，最后加入5%硼砂（四硼酸钠）4ml。
⑶1%过碘酸：高碘酸1ml；蒸馏水99 ml。
⑷8%重铬酸钾：重铬酸钾8g；蒸馏水100ml。
⑸0.5%偏重亚硫酸钠：偏重亚硫酸钠0.5g；蒸馏水100ml。
⑹0.2%绿化金溶液：市售氯化金1g/支，溶解于500ml蒸馏水。
⑺5%硫代硫酸钠：硫代硫酸钠5g；蒸馏水100ml。
1.3 染色方法⑴石蜡切片脱蜡至蒸馏水；⑵1%过碘酸溶液氧化20min；⑶蒸馏水洗30s；⑷8%重铬酸钾溶液氧化20 min；⑸蒸馏水洗30s；⑹0.5%偏重亚硫酸钠1min；⑺蒸馏水洗30s；⑻切片浸入六胺银工作液，置于62℃水浴箱内并逐渐升温至68℃，时间大约15-30min（光镜下控制染色强度）；⑼蒸馏水洗30s；⑽0.2%氯化金溶液调色1 min；⑾蒸馏水洗30s；⑿5%硫代硫酸钠溶液1min；⒀蒸馏水洗30s；⒁稍水洗，用Gill苏木素液淡染细胞核3-5min；⒂用自来水洗3-5min；⒃梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
肾组织石蜡切片3种特殊染色与免疫荧光染色在肾病理活检诊断中的应用价值
肾组织石蜡切片3种特殊染色与免疫荧光染色在肾病理活检诊断中的应用价值熊基玲【期刊名称】《当代医学》【年(卷),期】2022(28)16【摘要】目的探究肾组织石蜡切片3种特殊染色与免疫荧光染色在肾活检病理诊断中的应用价值。
方法选取2019年1月至2020年1月本院收治的120例肾病患者作为研究对象,所有患者均采用肾脏穿刺活检方式进行病理诊断,制作冷冻制片后进行免疫荧光检测,取得石蜡制片后分别进行六胺银染色法、甲醇刚果红染色法和Masson三色染色法,观察不同染色方法对各类肾病的病理诊断价值。
结果免疫荧光染色法对膜性肾病、狼疮性肾病的IgA、IgM、IgG、C3、Clq阳性检出率均明显低于六胺银染色法、甲醇刚果红染色法和Masson三色染色法(P<0.05)。
免疫荧光染色法对IgA肾病Clq分型的阳性检出率均明显低于六胺银染色法(P<0.05)。
免疫荧光染色法对IgA肾病IgM、IgG、C3分型的阳性检出率均明显低于甲醇刚果红染色法(P<0.05)。
免疫荧光染色法对IgA肾病IgM、IgG、C3、Clq分型的阳性检出率均明显低于Masson三色染色法(P<0.05)。
结论肾组织石蜡切片的3种特殊染色法应用于各类型肾活检病理诊断价值较高,免疫荧光染色法对IgA肾病的病理活检诊断价值较高,临床应推荐六胺银染色法、甲醇刚果红染色法和Masson三色染色法用于肾病病理诊断中。
【总页数】4页(P101-104)【作者】熊基玲【作者单位】九江市中医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.双重修复石蜡切片免疫荧光染色在肾活检组织中的应用2.石蜡切片免疫荧光染色在肾活检病理诊断中的应用3.免疫荧光和几种特殊染色在肾活检病理诊断中的应用4.免疫组织化学和免疫荧光染色在肾活检组织石蜡切片磷脂酶A2受体检测中的应用5.石蜡包埋肾组织免疫荧光染色在病理诊断中的应用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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六次甲基四胺银染色法在肾穿活检中应用
吴文长
【期刊名称】《现代医药卫生》
【年(卷),期】2003(019)011
【摘要】@@ 1六次甲基四胺银种类rn1.1 Gomori液[1]:(1)储备液:5%硝酸银5 ml,3%六次甲基四胺银(乌洛托品)100ml将上述两种溶液分装在4℃冰箱中保存.【总页数】1页(P1468-1468)
【作者】吴文长
【作者单位】涪陵中心医院,重庆,涪陵,408000
【正文语种】中文
【中图分类】R36
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1.自控微波技术在肾穿刺活检六胺银染色中的应用 [J], 张威;梁英杰;赖英荣
2.肾穿刺活检组织病理诊断中六胺银染色的改进 [J], 傅杭州;方庆全
3.自控微波技术在肾穿刺活检六胺银染色中的应用 [J], 张威;梁英杰;赖英荣
4.改良六胺银染色法在活检组织真菌检测中的应用 [J], 付琳琳; 鲁萍; 平金良
5.检测卡氏肺孢子虫的改良六亚甲基四胺银染色法 [J], 倪小毅;叶彬;陈雅棠
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