老脑痴呆动物模型
失眠动物模型的建立
VD 是指各种脑血管病引起的获得性智能障 碍综合 征。
• • • •
AD的病因与发病机制尚不明确，可能原因有： 基炎铅胆 因症中碱 突免毒能 变疫假假 学学说 说 说说 等
60~ 90 岁的老年人群中患病率随年龄的增长呈指数 增长,每隔5.1 岁即增加一倍,可见衰老肯定是AD 的危险 因素之一。
兔脑内血管发达程度与人 脑类似,但兔大脑皮层部分 不发达。
鼠脑体积小,抗手术打击能力差,不常见临 床上的症状如呼吸困难、癫痫、意识障碍 难等在小动物中却很常见，且难以恢复,使 其神经功能障碍难以评定。但价格便宜,来 源充足，品种较纯,制作模型简单,生存率高。
鸡大脑发达, 有人估计,其实 验价值和某些哺乳动物相似。 但这方面研究较少,其应用 价有待进一步验证。利用其 建立学习和记忆模型快、记 忆保持的测定及脑内注射容 易、重复性好、来源丰富、 价格便宜、易管理。
（2）化学损毁模型： ①乙酰胆碱M受体阻断剂动物模型：大鼠腹腔内注射胆碱能拮抗剂，引起
胆碱能系统功能障碍。 评价：可造成认知障碍，但其主要是可逆性阻断突触后的乙酰胆碱M受体，
缺乏AD特殊病理特征。 ②兴奋性毒素损毁动物模型：如使用兴奋性神经毒素如红藻氨酸、使君子
氨基酸等注入大鼠Meynert基底核建立痴呆模型。 评价：有记忆损害功能，但无神经元斑块及NFT的组织病理学改变。且对乙
3.中枢神经元胆碱能损毁动物模型 原理：用物理、化学、外科手术等来损毁胆碱能神经元或切断
胆碱能神经通路。
（1）物理损毁模型：采用电、热等手段损伤大鼠Meynert基底核，使皮质乙 酰胆碱量减少，造成动物记忆障碍、抑郁行为等。
评价：所得模型大鼠脑内不同分区组织中单胺氧化酶B活性与青年组比较没 有显著性升高，故该模型尚欠用的转基因动物模型制备的简单程序如下: ( 1) 引物的设计或靶基因的制备; ( 2) 重组靶基因注入受精卵; ( 3) 植入假孕受体; ( 4) 检测与评价。
老年性痴呆动物模型研究进展
A new target for antihepatof ibrosis:N a+/H+exchangersCHEN Hou2Chang,L IU Y ong2G ang(Dept of Pharm acology,the Fi rst M ilitary Medical U niversity,Guangz hou 510515)ABSTRACT Na+/H+exchangers(N HE)are vital transmembrane proteins involved in multiple cellular functions including the regulation of intracellular p H, the control of cell volume and the onset of prolifera2 tion,differentiation and apoptosis of cells,hence as2 sociated with liver fibrosis due to mediating hepatic stellate cell(HSC)activation and collagen synthesis effects induced by cytokines and oxidative stress. N HE is expected to be a new important target for an2 tihepatofibrosis.KEY WORDS Na+/H+exchanger;liver fibrosis老年性痴呆动物模型研究进展丛伟红 刘建勋(中国中医研究院西苑医院实验研究中心,北京 100091)中国图书分类号 R749116;R2332;文献标识码 A 文章编号 100121978(2003)0520497205摘要 老年性痴呆(Alzheimers disease,AD)是以老年斑和神经纤维缠结为特征的一种进行性、退行性神经系统疾病。
阿尔茨海默病的非转基因动物模型概述
阿尔茨海默病(Alzheimer ’s disease,AD)又称老年性痴呆,是老年人群中发病率最高的神经退行性疾病。
其临床症状表现为短期记忆衰减、视觉空间技能损害、思维钝化、注意力无法集中、语言功能障碍及人格变化等,给患者及其家庭带来沉重的负担。
AD 的主要病理特征包括:胞外β淀粉样蛋白(amyloid β-protein,A β)异常沉积形成老年斑、胞内过度磷酸化的Tau 蛋白聚集形成的神经原纤维缠结(neurofibrillary tangle,NFT),以及神经元丢失[1]。
AD 的发生受多种因素影响,而年龄是AD 发病的首要危险因素,随着年龄的增长,AD 的患病率成倍增加[2]。
2022年的统计数据显示,全球有5000万AD 患者,仅美国65岁的老年群体患者就达650万人,相关花销预计将超过3000亿美元[3]。
目前,AD 发病假说众多,但是发病机制不明确,且尚无有效治疗药物,特别是针对中重DOI:10.16605/ki.1007-7847.2022.03.0128阿尔茨海默病的非转基因动物模型概述收稿日期:2022-03-25;修回日期:2022-09-21;网络首发日期:2022-10-24基金项目:深圳市基础研究学科布局项目(JCYJ20180507182417779)作者简介:邓云松(1997—),男,广东深圳人,硕士研究生;*通信作者:肖时锋(1984—),男,江西吉安人,博士,副研究员,主要从事阿尔茨海默病的机制和药物研究,Tel:*************,E-mail:*************.cn 。
邓云松,邹妙湛,肖时锋*(深圳大学生命与海洋科学学院,中国广东深圳518060)摘要:阿尔茨海默病(Alzheimer ’s disease,AD)是一种由多种因素引发、在临床上表现为不可逆认知功能下降的神经退行性疾病。
AD 是当今世界所有国家均面临的一大挑战,其包括遗传型和散发型,其中95%以上的患者为散发型。
血管性痴呆(VD)动物模型制作及方法
血管性痴呆(VD)动物模型制作及方法一、双侧颈总动脉阻断模型(Model of occlusion of bilaterial carotis communis artery)(1)复制方法雄性大鼠，体重为250～300g。
以水合氯醛(按350～400mg/kg体重的剂量)经腹腔注射麻醉后仰卧位，剃除颈部毛发，手术区域皮肤消毒。
颈部正中切口，钝性分离双侧颈总动脉，用1号线将其行结扎。
缝合切口后再行局部消毒，小心放回笼内(每笼一只待其完全清醒)。
局部伤口缝合前，可用庆大霉素3～5滴滴入局部伤口内防止感染。
术后正常饲养12周，自第13周起可开始分组给药治疗。
行为学检验可采用穿梭箱法和Morris水迷宫分析系统，进行定位航行实验和空间探索试验。
(2)模型特点术后的1～3周，陆续有动物死亡发生，其死亡率在20％～40％，因此需根据实验情况增加手术动物的总数。
(3)比较医学该模型由于阻断了双侧颈总动脉，造成了脑部急性供血不足，随后可通过基底动脉和基底动脉环血流调节以及逐渐形成的侧支循环所改善，但海马区达不到正常脑供血水平，形成慢性大脑缺血，模拟了人类由于血管粥样硬化使头颈动脉逐渐狭窄所致的慢性大脑供血不。
水迷宫实验显示，动物的定位航行和空间探索能力均降低，痴呆率达80％左右。
该模型可用于研究痴呆脑组织的形态及病理生理变化机制，也可用于判定某些治疗手段和药物的效果。
二、双侧颈总动脉、椎动脉阻断模型(Model of occlusion of bilaterial carotis communis artery with vertebral artery)(1)复制方法雄性大鼠，体重为300～350g。
以水合氯醛(按350～400mg/kg体重的剂量)经腹腔注射麻醉后俯卧位固定于立体定位仪上，剃除颈部毛发，手术区域皮肤消毒。
行背侧颈部正中切口，逐层钝性分离暴露双侧第1颈椎横突小孔，用直径0.5mm的电凝针烧灼双侧翼小孔内的椎动脉，造成闭塞。
老年痴呆症(AD)小鼠模型的建立及中药金银花治疗效果的实验研究
能力降低；中药复方制剂通过排铝、提高抗氧化能力治疗后对老年痴呆症有明显疗效。
关键词：铝；老年痴呆症；乙酰胆碱酯酶；抗氧化能力
一、 引言
老年痴呆症（ ＡＤ） ，又称阿尔茨海默病，是一组病因未明
ｍｉｎｕｍ Ａｌ ３＋ ｉｎ ｍｉｃｅ （ ｘ±ｓ）
组别
谷丙转氨酶（ Ｕ ／ Ｌ）
脑铝 Ａｌ ３＋（ ｎｇ ／ ｍＬ）
正常组
４０．５８±２１．８２
１０９．００±２７．３３ ★★
５８．０６±２２．１１
模型组
治１组
１３．７０±２．３１
４４７．００±３７６．４３
６０．３３±１６．５０
治２组
１８５．７１±３１．５５
小鼠取脑，称脑重量，制成脑匀浆，离心取上清，分别测定脑中乙酰胆碱酯酶（ ＡｃｈＥ） 、超氧阴离子自由基（ ） 清除率、谷胱甘肽
等含量。 结果：正常组、模型组、治疗 １ 组、治疗 ２ 组依次为，脑乙酰胆碱酯酶（ ＡｃｈＥ） 活力：０．６０±０．０９、０．５５±０．１０、０．６７±０．１２、０．７８
±０．１４（ Ｕ ／ ｍｇ．ｐｒｏｔ ） ，Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１ 差异有统计学意义；模型组明显降低；超氧阴离子自由基（ ） 清除率％ ：２１．４５±６．０１、７．９６±
综 述
按试剂盒说明书；清除率测定利用比色法。 铝含量，用电极
法测定；丙二醛测定，硫代巴比妥酸（ ＴＢＡ） 反应比色测定其
含量，因此又称（ ＴＢＡ） 法。 具体操作按试剂盒说明书。
（ 三） 统计学处理
·１７４·
二苯乙烯苷对多种老年性痴呆动物模型的影响及其作用机制
降低海马区神经元 Ａ Ｐ Ｐ和 ［ ｝ ＿ 分泌酶表达 ，减少皮层和海马 Ａ ｐ 含量 ，减少颞 叶皮层淀粉样斑块
家药监局新药 临床研究批件 ，目前正在进行治疗轻中度 Ａ Ｄ的 ２ 期临床试验 。 此外 ，我们还发现 Ｔ Ｓ Ｇ在体外试验和体 内试 验 中均具有抑制 ａ － ｓ ｙ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｉ ｎ过表达和聚集 的 作用 ，而且在 自然衰老小 鼠中发现 Ｔ Ｓ Ｇ能够改善学 习记忆功能和运动功能 ，可作用在多个脑
２ ０ １ ３ 年 第 三 十卷 第 二
二苯 乙烯苷对 多种 老年性痴呆动物模型 的影 响及 其作用机制
李林 张兰 张如意 王蓉 孙芳玲 张丽药物研 究 室 ，神经 变性 病教 育部 重点 实验 室
阿尔茨海默病 （ Ａ Ｄ ）是一种多因素相关的复杂性疾病 ， 仅针对单靶点或单致病途径的药物 不易取得好的疗效 。而且通常干预时机太晚 ，当诊 断出痴呆 时患者脑 内已有 大量 神经元死亡 。 因此 ，应 当针对多靶点、多途径治疗 ，同时将治疗时机提前到痴呆发生前 ，才有可能在 Ａ Ｄ的药
区 ，包括 抑 制 海 马 、大脑 皮 层 及 纹 状 体 ￣ － ｓ ｙ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｉ ｎ过 表 达 和 聚 集 ，增 加 海 马 、纹 状 体 的 突 触
连接区域数量 ，并使线粒体超微结构维持正常 ；增强海马 、纹状体 的 Ｃ ａ ＭＫ Ｉ Ｉ 磷酸化活性 ，增
强突触素和 Ｐ Ｓ Ｉ ） － ９ ５ 表达 ，提高 ｓ ｙ ｎ ａ ｐ ｓ ｉ ｎ Ｉ 磷 酸化活性 ，从而有效提 高突触 可塑性 。这些结果 提示 ，Ｔ Ｓ Ｇ除 了治疗 Ａ Ｄ以外 ，还具有治疗帕金森病痴呆 、路易体痴呆 的前景 。
老年痴呆动物模型研究进展 PPT
3.2化学损毁模型
致神经变性和老年斑形成，从而制备AD动物模型。
9、自然衰老的动物模型
• 一般采用老年啮齿类及非人灵长类动物。 • 实验结果显示:老年小鼠和大鼠脑中Ach E活性比对照组显著升高,Cha T活
性明显降低,M受体结合容量也显著降低,说明老年小鼠和大鼠脑内胆碱能 系统活性较低,类似于AD患者脑内胆碱能系统的表现。 • （缺点：只是部分模拟与正常衰老有关的神经生化改变）
• 由于AD受遗传及环境共同影响，因此在转基因模型的基础上，再施 加中枢胆碱能损害、自身免疫损伤等其他致病因素，将产生更接近人 类AD病理及发病过程的模型，从而将对AD治疗及药物的筛选开发起 到推动作用。
8、与免疫有关的AD动物模型
• 近年来的研究表明，与自身免疫系统衰退有关，如老年斑 中Aβ标记和免疫球蛋白链相似， 因而可以利用提取抗原-抗体复合物沉积形成淀粉样核心导
• 兴奋性毒素损伤Meynert基底核(NBM)所致的AD动物模型 • NBM主要由中枢胆碱能神经元组成,同时NBM发出纤维投射到大
脑皮质广泛区域及嗅球。NBM损伤被广泛用于制作AD模型。 • 有的学者使用化学物质注入动物脑基底核，从而破坏胆碱能神
经元建立起AD模型（如鹅膏蕈氨酸（ibotenic acid,IBO）、海 人酸），结果显示模型鼠出现脑神经细胞退行性病变。
7、转基因AD动物模型
• 学者研究发现APP（myloid beta（A4）precursor protein） 基因突变会导致AD发生。
老年痴呆动物模型研究进展
毒性。该研究为进一步理解神经元细胞在神经退行性疾病过程 中的死亡提供 了重要信息 ，并为
１ ０
神经退行性疾病严重危害人类健康 。但导致各种 神经退行性疾病发生 的细胞与分子机制还 不十分清楚 ，而对于这些疾病还缺乏有效 的治疗药物 和诊 断方法 ，因此急需寻找参与疾病的新
基 因蛋 白并 阐明其作用机理 ，为疾病诊治提供新的靶标。
阿尔茨海默病 （ Ａ １ ｚ ｈ ｅ ｉ ｍ ｅ ｒ ’ ｓ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ，Ａ Ｄ ）是最常见的神经退行性疾病 。大量证据表明 Ａ ８ 的过度生成是 引发 Ａ Ｄ的关键原因 ，而 ｔ ａ ｕ 蛋 白的高度磷酸化也参 与了 Ａ Ｄ和其他一些神经退 行性疾病的发生 。因此鉴 定能 够影 响 Ａ ｐ 产生 和 ｔ ａ ｕ蛋 白磷 酸化 的新基 因蛋 白，具 有 重要 意 义 。我们应用 随机 同源基 因干扰技术 （ Ｒ ａ ｎ ｄ ｏ ｍ Ｈ ｏ ｍｏ ｚ ｙ ｇ ｏ ｕ ｓ Ｇ ｅ ｎ ｅ ｐ ｅ ｒ ｔ ｕ ｒ ｂ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ，Ｒ Ｈ Ｇ Ｐ ）寻 找 并鉴定出一个 能够影响 Ａ 生成 的新基 因 Ｒ ｐ ｓ ２ ３ ｒ ｇ ｌ ，发现过表达 Ｒ Ｐ Ｓ ２ ３ Ｒ Ｇ Ｉ 蛋 白会 同时 降低 Ａ Ｉ ３ 产生和 ｔ ａ ｕ 蛋 白磷 酸化 。该过程是 由于 Ｒ Ｐ Ｓ ２ ３ Ｒ Ｇｌ 与腺 苷酸环化酶相互作 用后引起蛋 白激 酶Ａ（ Ｐ Ｋ Ａ） 活 性 升 高 ，进 而 抑 制 Ｇ Ｓ Ｋ － ３活 性 所 致 。在 动 物 模 型 上 的 研 究 证 实 过 表 达 Ｒ Ｐ Ｓ ２ ３ Ｒ Ｇ １ 可 以缓解 Ａ Ｄ的疾病症状 。因此 Ｒ Ｐ Ｓ ２ ３ Ｒ Ｇ １ 及其介导的信号通路可能是治疗 Ａ Ｄ的
和脑脊液 中的生物标记物检测和基 因分析 以及药 物干预等将成 为脑 小血管病研 究者未来 的工
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一种新的老年痴呆动物模型组员：***摘要建立一种新的老年痴呆(AD)小鼠模型,AD及其治疗药物的研究。
选用NIH小鼠,腹腔注射D2半乳糖120mg/kg和亚硝酸钠90mg/kg,每天1次,连续60d,制备老年痴呆动物模型。
通过水迷宫试验,脑组织匀浆蛋白质含量、乙酰胆碱酯酶(AchE)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定,脑组织病理切片HE染色和刚果红染色,比较老年痴呆模型小鼠和正常小鼠的差异。
与对照组比,模型组小鼠的逃避潜伏期明显增加(P<0101),脑内蛋白质含量没有明显差异,脑内AchE活性增加(P<0101),SOD活性下降(P<0101);模型组小鼠出现触须脱落,大脑皮层出现类老年斑病理改变,海马和大脑皮层神经元变性坏死。
D2半乳糖和亚硝酸钠合并制备的老年痴呆模型在一定程度上模拟了AD的发病特点,可作为AD及其治疗药物研究的一种新模型。
关键词阿尔茨海默病;学习记忆;超氧化物歧化酶;老年斑老年痴呆(AD)缺乏有效治疗手段的原因之一在于与人类 AD相似的动物模型未能真正建立起来,现有的AD模型大多只针对AD病理的某一方面,只能模拟AD 诸多病理变化中的一个侧面,相对AD的多因素发病和错综复杂的病理过程来说均有较大的差距。
因此,建立能够在行为以及组织病理方面较好地模拟AD的动物模型是AD研究的热点之一,将有助于推动AD发病机制的研究和治疗药物的筛选。
已有许多文献报道,小鼠、大鼠皮下注射或腹腔注射D2半乳糖可造成亚急性衰老模型,注射亚硝酸钠则可造成全身多脏器的缺血缺氧,导致学习记忆成绩下降 ,我们将二者结合起来,用D2半乳糖使青年小鼠在较短的时间内呈现出自然衰老小鼠的特征;用亚硝酸钠造成脑缺血缺氧,影响其学习记忆能力;通过行为学试验、脑内相关指标的测定、脑组织病理检查等方法来研究这种模型与人类AD的相似程度.1 材料和方法1.1 实验动物和主要试剂 NIH小鼠购自第一军医大学实验动物中心,合格证号:粤检证字第2000A037号。
蛋白定量(双缩脲法)测定试剂盒(批号20010801)、乙酰胆碱酯酶(AchE)活性测定试剂盒(批号20011105)和超氧化物歧化酶(SOD)活性测定试剂盒(批号20011109),均购自南京建成生物工程研究所。
D2半乳糖(生化试剂)上海试剂二厂产品,批号991215。
亚硝酸钠(分析纯),汕头市光华化学厂产品,批号20001020。
1.2 小鼠AD模型的建立雌性NIH小鼠40只,20～24g, 每组20只,随机分为空白对照组和AD模型组。
造模方法为:小鼠每日腹腔注射D2半乳糖120mg/kg 和亚硝酸钠90mg/kg,连续60d;空白对照组腹腔注射等体积生理盐水。
1.3 水迷宫试验自动记录水迷宫装置为80cm×50cm×20cm的茶色有机玻璃槽(中国医科院药物所研制),内设起点、终点(台阶)和多处盲端,水深9cm,水温腹有诗书气自华24℃～27℃,记录小鼠从起始点放入至找到台阶的时间(寻找潜伏期),若超过120s则以120s计。
给药完毕后第1天,各组小鼠进行训练,使其找到台阶;第2～4天加长路程,记录各组小鼠的寻找潜伏期。
1.4 脑内相关指标的测定行为学试验结束后,每组取10只小鼠禁食12h,断头处死,取全脑(嗅脑除外),置玻璃匀浆器中,加入预冷生理盐水制成10%(g/ml)脑匀浆,3000r/min离心10min,取上清液置冰浴中,测定蛋白含量和AchE、SOD活性,按试剂盒说明书所述步骤操作,取样量均为50μl。
1.5 病理检查各组余下小鼠腹腔注射戊巴比妥钠60mg/kg麻醉,仰卧固定于手术台上,剪开胸腔,暴露心脏,用生理盐水和4%多聚甲醛进行心脏灌注固定,至四肢僵直为止,取全脑和颊部皮肤组织置4%多聚甲醛溶液中固定24h,石蜡包埋切片,常规HE染色和刚果红染色。
1.6 统计方法数据以平均值±标准差表示,使用SPSS810 统计软件处理,用t检验进行统计学分析。
2 结果2.1 水迷宫实验结果见表1。
可见模型组小鼠的寻找潜伏期始终明显长于对照组,表明模型组小鼠的学习记忆能力下降。
表1 小鼠水迷宫逃避潜伏期测定结果(s,x±s)组别 n 第2天第3天第4天空白对照组 18 75.4±29.8 51.8±27.0 34.6±12.6模型组 17 100.4±31.5 91.9±40.2 73.4±27.1与空白对照组比:1)P<0105,2)P<0101;2.2 小鼠脑内生化指标测定结果两组间的蛋白质含量没有显著差别,模型组AchE活性比空白对照组明显升高,模型组 SOD活性比空白对照组明显降低。
表2 小鼠脑内蛋白含量、AchE活性、SOD活性的测定结果(x±s)组别蛋白含量 (mg/ml) AchE活性(μmol/mg) SOD活性(nU/mg)空白对照组 3.33 0.735±0.054 23.3±2.5模型组 3.19 0.29±0.076 15.9±1.42.3 病理检查结果脑组织切片显示,对照组海马和皮层神经细胞染色均一、结构完整,细胞膜、核膜清晰。
模型组海马可见明显散在的或连续的神经细胞变性坏死,表现为胞浆深染、核固缩、胞膜核膜界限不清晰;严重的出现点状中断,在大脑皮层也可见较多变性坏死的神经细胞,偶尔可见类老年斑结构,这些可能是其行为上出现障碍的病理基础。
腹有诗书气自华实验过程中,模型组小鼠在约40d时出现普遍的触须脱落。
颊部皮肤组织切片显示,对照组小鼠触须的毛囊饱满、圆整,内部结构层次丰富,被毛排列致密整齐;而模型组的毛囊则出现萎缩、塌陷,由于触须的脱落,毛囊内出现明显的空洞,被毛排列稀疏、不规则。
3 讨论D2半乳糖造成动物的老化效应早有报道,青年小鼠长期注射D2半乳糖后,由于其代谢产物半乳糖醇不能被进一步代谢而堆积在细胞内,影响渗透压,导致细胞肿胀,代谢紊乱,体内活性氧水平升高,细胞膜脂质受损,以致产生机体多器官、多系统的功能衰退,这些变化均与老龄小鼠相似。
D2半乳糖还会引起脑神经元的一系列退行性变化,包括神经元数目减少,脑组织中SOD活性下降,MDA脂褐素水平升高,表现为学习记忆能力下降。
因此我们给青年小鼠腹腔注射D2半乳糖60d,造成亚急性衰老模型来模拟AD发生于老年人的特点。
目前常采用1次腹腔注射亚硝酸钠120mg/kg造成小鼠的记忆巩固障碍模型,亚硝酸盐大量进入机体后,可使正常的血红蛋白变为高铁血红蛋白,失去携带氧的功能,引起组织缺氧,导致大脑意识和行为上出现障碍。
我们对此做了适当的改进,将剂量调整至死亡率较低的90mg/kg,并连续腹腔注射 60d,通过较长时期的反复脑缺氧,造成动物学习记忆能力的明显下降。
行为学试验结果显示,随着训练次数的增加、训练时间的推移,空白对照组小鼠的寻找潜伏期迅速缩短,表明正常小鼠很快熟悉水迷宫环境并找到终点,而模型组小鼠的寻找潜伏期居高不下,表明模型组小鼠的学习记忆功能受损。
Ach是中枢胆碱能神经系统重要的神经递质,它由胆碱乙酰化转移酶(ChAT)催化合成,乙酰胆碱酯酶(AchE)催化分解。
迄今为止,多数研究表明AD患者脑内ChAT和AchE活性降低,Ach含量不足,导致中枢神经系统功能障碍,学习记忆能力下降。
但有关AD动物模型脑内AchE活性变化的报道却不尽一致,有的降低,有的升高,主要是因为不同的作者采用的AD动物模型有很大差别,有的采用D2半乳糖和AB合并造模,有的仅用东莨菪碱一次腹腔注射造成动物学习记忆障碍。
此外,AchE活性测定方法的不同对结果可能也有一定影响。
我们的研究结果显示,AD模型组小鼠脑内AchE活性增高 (P<0101)。
由于AchE活性的异常增高,造成脑内神经递质Ach被大量水解,含量下降,导致中枢神经系统功能障碍,出现学习记忆和认知能力下降。
研究表明,AD患者脑组织中总 SOD、Mn2SOD和Cu/Zn2SOD活性均明显低于正常脑组织 ,血清和脑脊液SOD水平也比对照组低,而脂质过氧化物 (LPO)水平则明显升高,这提示AD的发生发展与自由基有密切的关系。
体内过多的氧自由基能攻击损害神经细胞膜,干扰细胞内酶系统的正常功能,造成神经细胞老化和变性,最终导致AD发生。
我们的实验结果与上述报道相近,模型组小鼠脑内SOD活性明显降低(P<0101),因此其清除氧自由基的能力下降,神经元受损,从而造成小鼠的认知功能减退。
脑组织病理检查显示模型组小鼠大脑皮层和海马均出现变性坏死的神经细胞,皮层偶尔可见类老年斑结构,这与AD患者脑内出现的病理变化类似。
由于中枢神经细胞一般是不可再生的,因此这种病理变化必然影响到脑内信息的传递和处理,从而使动物在行为、认知和学习记忆上出现障碍。
此外,在实验过程中出现了罕见的触须脱落现象,触须是小鼠特化的硬毛,是大脑的感觉器官,对于动物确定方位起着特别重要的作用。
腹有诗书气自华在结构上表现为毛囊周围的神经与血管比一般的被毛丰富。
因此,造模小鼠腹腔注射促使衰老的D2半乳糖和导致缺血缺氧的亚硝酸钠后出现触须的缺失,这提示动物脑内可能出现了某些变化,这种效应是由D2半乳糖引起的,还是由亚硝酸钠引起的,或是二者共同作用造成的,其机制有待进一步探讨。
综上所述,D2半乳糖和亚硝酸钠合并制备的AD模型呈现了整体衰老、学习记忆能力减退、脑内AchE活性增加、SOD活性下降、皮层和海马神经元变性坏死、类老年斑形成等特性,在一定程度上模拟了AD的发病特点。
鉴于AD发病的多因性,我们提出运用各种合理的干扰因素,从整体老化、中枢胆碱能神经系统受损、脑内AΒ和NFT形成等各个方面来最大程度地模拟人类AD,现有的工作便是朝这一目标进行的初步探索。
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