果糖 1,6- 二磷酸醛缩酶(Fructose 1,6 bisphosphate aldolase ,FDA )试剂盒说明书
果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(FBA)检测
迪信泰检测平台
果糖-1,6-二磷酸醛缩酶（FBA）检测
果糖1,6-二磷酸醛缩酶（Fructose 1,6 bisphosphate aldolase, FBA）是糖酵解、糖异生、磷酸戊糖途径及光合作用中参与卡尔文循环的重要酶，催化果糖1,6-二
磷酸可逆的裂解为磷酸二羟丙酮和3-磷酸甘油醛，广泛存在于动植物及微生物体内，在各种逆境胁迫下表现不同的响应，能与细胞骨架结合，参与微管的聚合，细胞的内吞和膜泡运输，同时还参与了病原菌的侵染过程。
迪信泰检测平台采用生化法，结合相应的试剂盒，可实现高效、精准的果糖-1,6-
二磷酸醛缩酶的活性变化。
此外，我们还提供其他光合作用类的检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定果糖-1,6-二磷酸醛缩酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关参数（中英文）。
3. 图片。
4. 原始数据。
5. 果糖-1,6-二磷酸醛缩酶活性信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
果糖_1_6_二磷酸酶AMP变构抑制剂的研究进展
果糖-1, 6-二磷酸酶AMP变构抑制剂的研究进展李占梅1, 2, 别建波1, 宋宏锐2, 徐柏玲1*(1. 中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所, 北京 100050; 2. 沈阳药科大学制药工程学院, 辽宁沈阳 110016)摘要: 果糖-1,6-二磷酸酶(fructose-1,6-bisphosphatase, FBPase)是肝葡萄糖异生路径中的一个限速酶, 催化果糖-1, 6-二磷酸水解为果糖-6-磷酸。
抑制FBPase的活性, 可减少内源性葡萄糖的生成, 降低血糖水平, FBPase 抑制剂是潜在的新型治疗Ⅱ型糖尿病的药物。
本文综述了近年来FBPase一磷酸腺苷 (adenosine monophosphate, AMP) 变构抑制剂研究的最新进展。
关键词: 果糖-1, 6-二磷酸酶; FBPase抑制剂; 糖尿病中图分类号: R916 文献标识码:A 文章编号: 0513-4870 (2011) 11-1291-10 Recent advance in the discovery of allosteric inhibitors binding to theAMP site of fructose-1, 6-bisphosphataseLI Zhan-mei1, 2, BIE Jian-bo1, SONG Hong-rui2, XU Bai-ling1*(1. Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100050, China;2. School of Pharmaceutical Engineering, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China)Abstract: Fructose-1, 6-bisphosphatase (FBPase), a rate-limiting enzyme involved in the pathway of gluconeogenesis, can catalyze the hydrolysis of fructose-1, 6-bisphosphate to fructose-6-phosphate. Upon inhibiting the activity of FBPase, the production of endogenous glucose can be decreased and the level of blood glucose lowered. Therefore, inhibitors of FBPase are expected to be novel potential therapeutics for the treatment of type II diabetes. Recent research efforts were reviewed in the field of developing allosteric inhibitors interacting with the AMP binding site of FBPase.Key words: fructose 1, 6-bisphosphatase; FBPase inhibitor; diabetes糖尿病是一种多基因调控的慢性代谢性疾病, 主要表现为持续的高血糖及糖尿。
果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(FBA)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法
果糖-1,6-二磷酸醛缩酶（FBA）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC2270规格：50T/48S产品简介：果糖1,6-二磷酸醛缩酶（Fructose1,6bisphosphate aldolase，FBA）（EC4.1.2.13）是糖酵解、糖异生、磷酸戊糖途径及光合作用中参与卡尔文循环的重要酶，催化果糖1,6-二磷酸可逆的裂解为磷酸二羟丙酮和3-磷酸甘油醛，广泛存在于动植物及微生物体内，在各种逆境胁迫下表现不同的响应。
果糖1,6-二磷酸醛缩酶催化果糖1,6-二磷酸生成3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮，在磷酸丙糖异构酶和α-磷酸甘油脱氢酶作用下催化NADH和磷酸二羟丙酮生成NAD和α-磷酸甘油，340nm处吸光值的变化可反映果糖1,6-二磷酸醛缩酶活性的高低。
试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计、分析天平、低温离心机、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、漩涡震荡仪、超声破碎仪、冰盒。
产品内容：提取液一：液体60mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后4℃保存。
试剂四：液体20μL×1瓶，4℃避光保存。
临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存。
试剂五：液体200μL×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
操作步骤：一、粗酶液的提取：①总FBA酶：组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液一）充分冰浴匀浆，然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
果糖16二磷酸酶
果糖-1,6-二磷酸酶（Fructose-1,6-bisphosphatase，简称FBPase）是一种催化反应的酶，它能够催化果糖-1,6-二磷酸向果糖-6-磷酸的转化，这是糖异生途径中的一个重要反应。
在糖异生途径中，FBPase参与到糖原的合成过程中。它的作用是将糖异生途径中的中间产物果糖-1,6-二磷酸转化为果糖-6-磷酸，这是糖异生途径中的最后一个步骤。这个反应需消耗ATP，同时也是一个可逆反应，可以被果糖-6-磷酸逆转。
可治性罕见病—果糖1,6一二磷酸酶缺乏症
可治性罕见病—果糖1，6一二磷酸酶缺乏症一、疾病概述果糖一1，6一二磷酸酶缺乏症(fructose -l，6- bisphosphatase deficiency)是一种罕见的遗传代谢病，呈常染色体隐性遗传。
目前尚不清楚其发病率，至今报道约100余例。
该病的致病基因是位于染色体9q22的FBP1基因。
当该基因发生突变，导致肝脏果糖一1，6一二磷酸酶缺乏或活性低下时，可造成1，6一二磷酸果糖转化为6-磷酸果糖的途径出现障碍，影响糖异生过程，造成果糖、乳酸、甘油等上游糖异生底物的堆积[1-3]。
二、临床特征该病的临床表现主要为发作性低血糖、高乳酸血症、代谢性酸中毒和酮症等，可致新生儿或婴儿死亡[4]。
发热、感染、进食不足及应激状态等常为本病发作的诱因。
本病也可在摄人大量果糖或蔗糖（1g/kg体重）后发作，静脉输注果糖或甘油有致命危险。
患儿发病年龄一般为生后1天～4岁。
由于乳糖由乳糖酶分解成葡萄糖和半乳糖的过程不受果糖一1，6一二磷酸酶的影响，婴儿常在断奶后才出现症状，发作期代谢紊乱较易纠正，而发作间期正常[5]。
最常见的首发症状为呕吐，其次为嗜睡、呼吸和心率增快等，血生化检查除低血糖、乳酸酸申毒外，还可伴有肝损害、凝血酶原时间延长等[6]。
三、诊断血生化检查显示低血糖、高乳酸血症、代谢性酸中毒，多伴有酮症。
发作期血、尿代谢筛查可发现糖异生底物堆积，可显示乳酸、3-羟基丁酸、甘油和3一磷酸甘油等的异常升高。
肝活检检测果糖一1，6一二磷酸酶的酶活性可确诊。
因肌肉组织中含有与肝脏不同的另外一种同工酶，本病患者在肌肉的活性并不下降，因此肌肉活检组织的酶活检测结果对本病无诊断价值。
在疾病的非发作期，甘油、果糖或丙氨酸负荷试验及禁食试验可诱发代谢紊乱，有助于疾病诊断，但并非确诊手段且存在一定危险，故不作为首选诊断方法。
仅在当临床及生化检测均高度支持本病，而基因检测和酶活性测定均正常的情况下，这种功能试验可尝试使用[5]。
果糖-1,6-二磷酸酶缺乏症
十分秀气
基本介绍
本病果糖-1,6-二磷酸酶缺乏症是一种先天性糖代谢紊乱疾病，是一种少见病。此酶催化1,6 二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和无机磷，在糖异生代谢过程中起重要作用。患儿慢性反复发作 性病程，临床表现为腹泻、呕吐、拒食后出现软弱及嗜睡，并出现抽搐，均为非特异性症 状， 血生化检查提示严重低血糖、高乳酸血症、代谢性酸中毒、酮症，提示存在能量代谢障碍。
检查，表现如早期低血糖表现、过度通气、反复呕吐、 生长发育落后等等，辅助检查血生化可见酸中毒、低血糖等。确诊需要依靠肝、小肠粘膜果糖1,6-二磷酸酶的活性。
治疗
关于本病治疗，坚持长期食用含果糖、脂类、蛋白质低的食物，少量多餐，避免低血糖，出 现低血糖时，首先发作期应积极治疗低血糖，如果患儿有低血糖症状，应口服或静脉注射葡萄糖。 急性严重低血糖需静脉推注葡萄糖，之后持续快速静脉滴注葡萄糖液维持，如同时合并代谢性酸 中毒而未给予碳酸氢钠，但在输注葡萄糖后酸中毒得到快速纠正，维持治疗旨在避免饥饿，尤其 是在感染和发热时，主要措施有增加喂养次数、食用生玉米淀粉，必要时可使用胃管持续喂养。 另本病患儿禁静脉用甘油果糖、果糖二磷酸钠等制剂。
临床表现
本病小儿在婴儿期可出现过度通气、呕吐、生长发育落后、肝脏增大、肌张力和生理反射降 低。部分患儿在出生后2天内出现低血糖和酸中毒，此病也可由于心脏疾病、应激等刺激急性发 作。
部分本病患者短时间内发病，出现呕吐、腹痛、出冷汗，甚至昏迷和惊厥等低血糖症 状， 若不及时终止这类食物患儿则出现食欲不振、腹泻、体重不增， 以及肝大、黄疸、水肿和 肾小管损害等，严重者可发生急性肝功能衰竭、肝硬化、出血倾向。
果糖-1,6-磷酸酶
病因
本病病因目前尚不明确，果糖-1,6-二磷酸酶是糖原异生的关键酶，果糖-1，6-二磷酸酶是 糖异生途径中的关键催化酶，在葡萄糖异生过程中，不同的糖异生底物在多种 酶 的 作 用 下 转 化 为 1， 6-二 磷 酸 果 糖，之后水解为 6-磷酸果糖和无机磷，进而完 成糖异生的下游步骤， 该酶的缺陷导致 1，6-二磷酸果糖向 6-磷酸果糖转化障碍， 影响糖异 生底物向葡萄糖的转化，导致胰高血糖素抵抗性低血糖，同时造成果糖、乳酸、丙酮酸、丙氨酸 及甘油等上游糖异生底物的堆积。
果糖-1,6-二磷酸酶
果糖-1,6-二磷酸酶果糖-1,6-二磷酸酶（Fructose-1,6-bisphosphatase，简称为 FBPase）是一种参与葡萄糖代谢的酶，存在于几乎所有真核生物、许多原核生物以及一些病毒中。
它是Gluconeogenesis（糖异生）途径中的一个重要酶，负责将2分子果糖-1,6-二磷酸（FBP）水解为2分子磷酸果糖（F6P），从而使糖异生途径前进。
该酶是糖异生途径和糖原合成途径中的限速酶之一，在空腹时，肝脏中糖异生途径占主导地位，FBPase的活性是肝脏维持正常生理状态所必需的。
结构与功能FBPase 主要由 3 个结构域构成：N 端结构域、中间结构域和 C 端结构域，这些结构域在进化过程中具有高度的保守性。
N 端结构域含有磷酸化酶催化所需的脯氨酸残基，是酶催化和调节的关键区域。
中间结构域含有两个反向同构的催化中心，这些催化中心使 FBPase 能够高效地水解两个 FBP 分子，从而生成两个 F6P。
C 端结构域则对物质基础进行分类和整合，为 FBPase 酶学和生物学特性的整合提供基础。
FBPase 对许多环境因素，如 pH 值，离子强度和温度等，均表现出高度的敏感性。
稳定剂和抑制剂都能够显著地影响酶的活性。
对于细胞与机体内的 FBPase 来说，该酶的调节显得尤为重要。
急性调节通常由磷酸化和解磷酸化等化学修饰实现，而长期调节则主要由基因表达调控实现。
FBPase 的磷酸化和解磷酸化磷酸化和解磷酸化修饰对于 FBPase 的调节非常重要。
当细胞需要进入糖异生途径时，活性化的酶被磷酸化，并透过蛋白水解酶4的参与，磷酸化 FBPase 的活性在糖异生途径的起始阶段被激发，以产生更多的葡萄糖。
与此相反，当细胞需要停止进行糖异生途径时，F6P 是其调节的关键物质，彼时解磷酸化的 FBPase 更方便形成稳定的 F6P/FBP 催化活性平衡，从而使糖异生途径的前进效率下降。
改变 FBPase 的活性和构象调整代表了一种非常快速和可靠的方式，调整葡萄糖代谢产物的浓度，从而使细胞适应外界环境的需求。
果糖-1,6-二磷酸(FDP)含量检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4197
果糖-1,6-二磷酸（FDP）含量检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：UPLC-MS-4197可见分光光度法规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液一液体30mL×1瓶4℃保存提取液二液体5mL×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1支4℃保存试剂三液体15mL×1瓶4℃保存试剂四液体40mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前加入1mL蒸馏水，充分溶解后待用，用不完的试剂4℃保存，4℃保存一周；2、标准品：临用前加入1176μL蒸馏水充分溶解，配制成50μmol/mL果糖-1,6-二磷酸标准溶液。
产品说明：果糖1,6-二磷酸（fructose-1,6-diphosphate,FDP）是糖酵解过程中的一种重要的中间产物，对多种酶具有调节作用，具有改善细胞能量代谢、增加能量利用、抗心律失常及抗组织过氧化等作用，广泛应用于临床医药。
醛缩酶催化果糖1,6-二磷酸裂解，产物与2,4-二硝基苯肼在酸性介质中反应生成2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈红棕色，在540nm处有特征吸收峰。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1.组织：按照质量（g）：提取液一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.16mL提取液二，4℃，12000g离心10mi n 后取上清待测。
果糖-1,6- 二磷酸( Fructose-1,6 Diphosphate ,FDP )试剂盒说明书
货号：MS2207 规格：100管/96样果糖-1,6-二磷酸（ Fructose-1,6 Diphosphate ，FDP）试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：果糖1,6-二磷酸是机体内的高能代谢物和代谢调控剂，是糖酵解途径的重要中间体，广泛存在于动植物和微生物体内，能影响细胞内钾离子的浓度，改善葡萄糖和其他能量底物的代谢，促进组织氧的释放，广泛应用于临床医药制剂。
测定原理：醛缩酶催化果糖1,6-二磷酸降解，产物与DNPH缩合成紫红色物质，在540nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。
试剂组成和配制:试剂一：液体110mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体0.4mL×1支，4℃避光保存。
试剂三：液体4mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体16mL×1瓶，4℃保存。
样品处理:1.组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清待测。
2.细胞：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清待测。
3.液体：直接检测。
测定操作:第1页，共2页计算公式:a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y= 0.6971x+0.0012，R2=0.99831．按照质量计算FDP（mg/g 鲜重）= (△A-0.0012) ÷0.6971÷（W÷V样总）= 1.43×(△A-0.0012)÷W2．按照细胞数量计算FDP（mg/104 cell）= (△A-0.0012) ÷0.6971÷（细胞数量÷V样总）=1.43×(△A-0.0012)÷细胞数量3．按照液体体积计算FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.6971= 1.43×(△A-0.0012)W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mLb.用96孔板测定的计算公式如下标准曲线：y= 0.3486x+0.0012，R2=0.99831．按照质量计算FDP（mg/g 鲜重）= (△A-0.0012) ÷0.3486÷（W÷V样总）= 2.87×(△A-0.0012)÷W2．按照细胞数量计算FDP（mg/104 cell）= (△A-0.0012) ÷0.3486÷（细胞数量÷V样总）= 2.87×(△A-0.0012)÷细胞数量3．按照液体体积计算FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.3486= 2.87×(△A-0.0012)W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL注意事项:最低检出限为1.72 mg/L。
果糖1,6-二磷酸盐
果糖1,6-二磷酸盐
果糖1,6-二磷酸盐（fructose-1,6-bisphosphate）是一种生物分子，是糖酵解途径中的重要中间产物。
它的分子式为C6H14O12P2，分子量为340.116 g/mol。
果糖1,6-二磷酸盐在糖酵解途径中的作用是将葡萄糖分解成两个三碳分子的丙酮酸。
它是糖酵解途径中的关键中间产物，也是糖酵解途径中ATP生成的重要来源。
在糖酵解途径的第三步，果糖1,6-二磷酸盐被酶类催化分解成为两个三碳分子的丙酮酸和磷酸二酯。
果糖1,6-二磷酸盐的研究历史可以追溯到20世纪初。
1905年，德国生物化学家Emil Fischer首次发现了果糖1,6-二磷酸盐的存在，并研究了它在糖酵解途径中的作用。
此后，随着生物化学和分子生物学的发展，人们对果糖1,6-二磷酸盐的研究也越来越深入。
近年来，果糖1,6-二磷酸盐在医学和生物技术领域的应用也越来越广泛。
例如，研究人员利用果糖1,6-二磷酸盐的特殊性质，开发出了一种新型的生物传感器，可以用于检测血液中的葡萄糖浓度。
此外，果糖1,6-二磷酸盐还被广泛应用于生物制药和生物能源等领域。
总之，果糖1,6-二磷酸盐是糖酵解途径中的重要中间产物，具有重要的生物学意义和应用前景。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
货号：MS2210 规格：100管/96样果糖 1,6-二磷酸醛缩酶（Fructose 1,6 bisphosphate aldolase，FDA）
试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
植物叶绿体中果糖1,6-二磷酸醛缩酶是光合作用中参与calvin循环的重要酶。
催化果糖1,6-二磷酸和景天庚酮糖1,7-二磷酸的合成反应，在各种逆境胁迫下表现不同的响应。
测定原理：
果糖1,6-二磷酸醛缩酶催化果糖1,6-二磷酸生成3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮，在磷酸丙糖异构酶和α-磷酸甘油脱氢酶作用下催化NADH和磷酸二羟丙酮生成NAD和α-磷酸甘油，340nm处吸光值的变化可反映果糖1,6-二磷酸醛缩酶活性的高低。
自备实验用品及仪器：
天平、震荡仪、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。
试剂组成和配制：
提取液一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加2 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加2 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：液体2mL×1瓶，4℃避光保存。
酶液提取：
①总FDA酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液一，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g离心10min，取上清测定。
②胞浆和叶绿体FDA酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5～10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液一），冰浴匀浆后于4℃，200g离心5min，弃沉淀，取上清在4℃，8000g离心10min，取上清用于测定胞浆FDA酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g离心10min，取上清测定叶绿体中FDA酶活性。
建议测定总FDA酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的FDA，则按照步骤②提取粗酶液。
测定操作：
1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.取微量石英比色皿/96孔板，依次加入100μL试剂一，20μL试剂二，20μL试剂三，20μL
第1页，共2页
试剂四，20μL试剂五，20μL粗酶液，充分混匀，记录340nm处10s的吸光值A1和310s 的吸光值A2，△A=A1-A2
计算公式：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FDA（nmol/min/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr （2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FDA（nmol/min/g 鲜重）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W （3）按照细胞数量计算
酶活单位定义：每104个细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FDA（nmol/min/104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总) ÷T
= 321.54×ΔA÷细胞数量
（4）按照液体体积计算
酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FDA（nmol/min/mL）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷V样÷T=321.54×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，
5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
b.用96孔板测定的计算公式如下
（1）按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FDA（nmol/min/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×Cpr) ÷T= 643.08×ΔA÷Cpr （2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FDA（nmol/min/g 鲜重）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643.08×ΔA÷W （3）按照细胞数量计算
酶活单位定义：每104个细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FDA（nmol/min/104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总) ÷T
= 643.08×ΔA÷细胞数量
（4）按照液体体积计算
酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
FDA（nmol/min/mL）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷V样÷T= 643.08×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
第2页，共2页。