miR-200a通过调控HIF-1α与VEGF通路调节鼻息肉上皮细胞增殖及凋亡作用研究
微小RNA-200a对肺癌细胞增殖影响及抑癌基因功能分析
微小RNA-200a对肺癌细胞增殖影响及抑癌基因功能分析谢悦;董礼文;王军;李雄伟【期刊名称】《中国现代医生》【年(卷),期】2018(056)031【摘要】目的分析miRNA-200a对肺癌细胞增殖影响及抑癌基因功能影响.方法Real-time PCR对正常肺支气管上皮细胞16HBE、肺癌细胞SK-MES-1、NCI-H520、A549及25例非小细胞癌癌旁组织与癌组织内miR-200a表达量检测,CCK-8法检测肺癌A549细胞增殖活性受miRNA-200a影响状况,生物信息学对miRNA-200a靶基因进行预测,双荧光素酶联合Western blot及Real-time PCR检验YAP1受miRNA-200a调控影响.CCK-8法检测肺癌549细胞受YAP1增殖影响.结果肺癌细胞株SK-MES-1、NCI-H520及A549内miR-200a表达量均低于正常细胞株16HBE,差异有统计学意义(P<0.05).miR-200a mimics组内A549细胞在48、72及96 h时其吸光度均低于Mimics-NC,差异有统计学意义(P<0.05).肺癌A549转染siRNA-NC或者siRNA-YAP1后,PCR检测显示siRNA-YAP1内YAP1 mRNA表达量为(0.37±0.06),siRNA-NC内YAP1 mRNA表达量为(1.03±0.07),差异有统计学意义(P<0.05);Western blot显示siRNA-YAP1内YAP1蛋白表达量比siRNA-NC低;siRNA-YAP1内YAP1细胞吸光度在48、72及96 h时均低于siRNA-NC,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-200a对肺癌细胞增殖的抑制作用主要是经过靶向作用YAP1基因来实现的,进而在肺癌内起到抑癌功能.【总页数】5页(P20-24)【作者】谢悦;董礼文;王军;李雄伟【作者单位】杭州市中医院浙江中医药大学附属广兴医院胸心外科,浙江杭州310000;杭州市中医院浙江中医药大学附属广兴医院胸心外科,浙江杭州 310000;杭州市中医院浙江中医药大学附属广兴医院胸心外科,浙江杭州 310000;杭州市中医院浙江中医药大学附属广兴医院胸心外科,浙江杭州 310000【正文语种】中文【中图分类】R734.2【相关文献】1.中央型肺癌与周围型肺癌抑癌基因P53表达,细胞增殖动力学研究 [J], 杨勤2.上调微小RNA-200a表达对非小细胞肺癌紫杉醇化疗敏感度的影响及其机制 [J], 王亚飞;宋小天;宋长亮;张磊;万良刚;杜雪菲3.基因间长链非编码RNA152靶向微小RNA⁃103a⁃3p对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭迁移的影响 [J], 夏凡; 解梅; 彭小东; 鄢雯影; 贺金奇; 于倩; 陈宇; 廖岩森4.葛根素联合γ突触核蛋白-微小RNA对肺癌H1299细胞增殖凋亡的影响 [J],邹华兰;曾健梅;冷兴强;钟晶宇5.微小RNA-645靶向IFIT2对幽门螺杆菌感染胃癌细胞增殖和侵袭的影响微小RNA-645靶向IFIT2对幽门螺杆菌感染胃癌细胞增殖和侵袭的影响 [J], 陈德薇;张新星因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HIF-1α小干扰RNA抑制血管瘤内皮细胞VEGF表达的开题报告
HIF-1α小干扰RNA抑制血管瘤内皮细胞VEGF表达的开题报告一、研究背景与意义血管瘤是一种血管系统发育异常而导致的肿瘤，多见于儿童和青少年，对患者的生活质量和身心健康造成很大威胁。
在血管瘤的病理生理过程中，血管内皮细胞(play a critical role，)发挥了重要的作用。
VEGF作为内皮细胞分泌的最重要的血管生成因子，在血管瘤的发生和生长过程中起着至关重要的作用。
HIF-1α是血管生成过程中的关键调节因子之一，它可以调节VEGF的转录和表达，并且是VEGF的中心调控分子。
因此，抑制HIF-1α的表达可能是抑制血管瘤生长和远程扩散的一个有效手段。
但是目前对于HIF-1α在血管瘤中的作用机制还不完全清晰。
因此，本文旨在通过利用小干扰RNA(small interfering RNA)的技术，抑制HIF-1α的表达，进一步研究HIF-1α在血管瘤内皮细胞VEGF表达中的作用机制，为血管瘤的治疗和防治提供新思路。
二、研究内容和方法研究内容：1. 使用小干扰RNA技术下调HIF-1α的表达；2. 检测下调HIF-1α对血管瘤内皮细胞VEGF表达的影响；3. 探索HIF-1α下调对血管瘤细胞增殖和迁移能力的影响。
研究方法：1. 构建质粒载体：根据HIF-1α基因序列设计靶向siRNA并克隆到siRNA表达载体中；2. 将质粒载体进行质粒提取，购买内皮细胞分离鉴定的血管瘤细胞系。
3. 转染：通过细胞转染，将HIF-1α siRNA引入到细胞内。
4. qRT-PCR和 Western blot检测HIF-1α表达的下调效果。
5. 检测VEGF mRNA和蛋白表达的变化。
6. MTT实验检测细胞增殖能力的变化，Transwell实验检测细胞迁移能力的变化。
三、预期结果和意义1. 成功构建质粒载体并成功转染内皮细胞，HIF-1α siRNA可以成功下调HIF-1α的表达。
2. 下调HIF-1α的表达对血管瘤内皮细胞VEGF mRNA和蛋白表达均有明显抑制的效果。
miR-29a通过调控Plexin-A1抑制胶质瘤U87细胞增殖并促进凋亡的机制分析
miR-29a通过调控Plexin-A1抑制胶质瘤U87细胞增殖并促进凋亡的机制分析杨寒;宁波【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2024(37)4【摘要】目的:探讨miR-29a调控胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的分子机制。
方法:qPCR法检测人脑正常胶质HEB细胞与胶质瘤U87细胞中miR-29a和神经丛蛋白A1(Plexin-A1)的mRNA水平,免疫印迹法检测两组细胞中神经丛蛋白A1的蛋白质水平;将胶质瘤U87细胞分为3组,对照组不处理,miR-NC组转染阴性mimic,miR-29a组转染miR-29a-3p mimic;qPCR法检测3组胶质瘤U87细胞中miR-29a的表达情况,CCK8法检测miR-NC组和miR-29a组细胞增殖能力,qPCR法检测miR-NC组和miR-29a组细胞中Plexin-A1的mRNA表达水平,免疫印迹法检测miR-NC组和miR-29a组细胞中Plexin-A1的蛋白表达。
结果:qPCR法和WB法结果显示:与HEB细胞相比,胶质瘤U87细胞中miR-29a低表达(P<0.001),Plexin-A1的mRNA(P<0.05)和蛋白质(P<0.05)均高表达;qPCR 结果显示:转染后miR-29a组细胞较miR-NC组的miR-29a表达量显著升高(P<0.001),miR-NC组较对照组miR-29a水平未改变(P>0.05);CCK8、流式细胞学结果显示:与miR-NC组相比,miR-29a组细胞相对增殖能力降低(P<0.05)、细胞凋亡率增加6.52%(P<0.05);qPCR和WB结果显示:与miR-NC组相比,miR-29a组细胞中Plexin-A1的mRNA(P<0.05)和蛋白质均降低(P<0.01)。
结论:miR-29a-3p可能通过调控神经丛蛋白A1的表达抑制胶质瘤增殖,促进凋亡。
vegf和hif-1α的机制通路
vegf和hif-1α的机制通路VEGF（血管内皮生长因子）和HIF-1α（低氧诱导因子1α）在调节血管生成和细胞对缺氧的适应性中发挥重要作用。
下面我将从多个角度来解释它们的机制通路。
首先，让我们从VEGF的角度来看。
VEGF是一种信号蛋白，它在血管生成中起着关键作用。
VEGF可以通过激活内皮细胞上的VEGF 受体来促进血管内皮细胞的增殖和迁移，从而促进新的血管形成。
此外，VEGF还能够增加血管通透性，促进血管内皮细胞的存活和增殖。
这些作用使得VEGF在血管生成和修复过程中至关重要。
接下来，我们来看HIF-1α的机制通路。
HIF-1α是一种转录因子，它在细胞对缺氧的适应性中发挥作用。
在缺氧条件下，HIF-1α蛋白得以稳定，并且与HIF-1β亚基结合形成活性的HIF-1转录因子复合物。
这个复合物能够结合到DNA上的HRE（缺氧响应元件），从而促进一系列基因的转录，包括VEGF。
这样，HIF-1α通过调节一系列基因的表达来帮助细胞适应缺氧环境。
此外，VEGF和HIF-1α之间还存在相互作用。
在缺氧条件下，HIF-1α的稳定和活性增加，导致VEGF的表达增加，从而促进血管生成和细胞对缺氧的适应性。
这种相互作用使得VEGF和HIF-1α在调节血管生成和细胞缺氧适应性中协同作用。
总的来说，VEGF和HIF-1α在调节血管生成和细胞对缺氧的适应性中发挥着重要作用。
它们通过不同的机制通路，包括VEGF促进血管生成和HIF-1α在缺氧条件下的转录调节，相互作用来维持机体的正常功能。
对于这两个因子的深入研究有助于我们更好地理解血管生成和缺氧适应的分子机制，为相关疾病的治疗提供理论基础。
HIF-1α在感染性疾病中相关机制的研究进展
HIF-1α在感染性疾病中相关机制的研究进展
阿慧;严桥路;何连福
【期刊名称】《临床医学进展》
【年(卷),期】2024(14)3
【摘要】本文综述了缺氧诱导因子1α (HIF-1α)在感染和宿主免疫反应中的多方面作用。
包括HIF-1α在宿主免疫反应和感染防御中的作用、在抗感染中炎症因子的诱导、免疫代谢调节,及其在炎症、氧化应激细胞凋亡、糖酵解代谢途径中作用等。
通过综述更好地理解HIF-1α在感染性疾病中的重要作用。
为进一步深入研究提供依据。
【总页数】8页(P1184-1191)
【作者】阿慧;严桥路;何连福
【作者单位】大理大学临床医学院大理;大理白族自治州人民医院呼吸与危重症医学科大理;大理大学第一附属医院呼吸与危重症医学科大理
【正文语种】中文
【中图分类】R73
【相关文献】
1.HIF-1及相关信号通道在糖尿病视网膜病变中的研究进展
2.HIF-1在鼻息肉和鼻咽癌发生机制中的研究进展
3.缺氧诱导因子-1(HIF-1)在鼻咽癌发病机制中的研究进展
4.HIF-1α调控恶性肿瘤糖代谢的相关机制及研究进展
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
围手术期糖皮质激素对鼻息肉组织miR-200a、HIF-1α、VEGF表达的影响
．２９０７．
围手 术 期 糖 皮 质 激 素 对 鼻 息 肉组 织 ｍｉＲ一２００ａ、 ＨＩＦ一１ Ｏｔ、ＶＥＧＦ表 达 的影 响
雍 军 新疆 医科大 学第一医院耳鼻喉科（乌鲁木 齐 ８３００５４）
【关键词】 鼻息肉；糖皮质激素 ；ｍｉＲ一２００ａ；缺氧诱导因质 激 素作 为 临 床 上 一种 常见 抗 炎 药 物 ，鼻 腔 局 部用药 能 有效 降 低 炎 症 因 子 ，对 嗜 酸性 粒 细胞 活性 抑制 ，有研 究 … 表 明糖 皮 质 激 素 抑 制 鼻息 肉可 能机 制为 降低 鼻息 肉组 织 中转化 生长 因子 （ＴＧＦ）表 达 。有研 究 表 明 ｍｉＲ 一２０ｂ与 调 控 缺 氧诱 导 因 子 一１ （ＨＩＦ一１ ｏ１）、血 管 内皮 生 长 因子 （ＶＥＧＦ）相 互 调 控 ，正 常 环 境 中 ｍｉＲ 一２０ｂ高 表 达 对 后 两 者 表 达调 控 ，而 缺 氧 环 境 中 后 两 者 高 表 达 对 ｍｉＲ 一２０ｂ 表达 调 控 。但 未 见关 于 ＨＩＦ一１０／．经 由 ｍｉＲ 一２００ａ 调控 鼻 息 肉组 织 ＶＥＧＦ表 达 及 血 管 生 成 的相 关 报 道 。本研 究 分 析 鼻 息 肉组 织 ｍｉＲ 一２００ａ、ＨＩＦ一１ 及 ＶＥＧＦ表 达 ，以 及 围 术 期 糖 皮 质 激 素 对 ｍｉＲ 一 ２００ａ、ＨＩＦ一１ 及 ＶＥＧＦ表达的影响 ，探讨鼻息 肉发 病机 制 、糖皮 质激 素治 疗 可能机 制 ，以为 临床 鼻息 肉 诊 治提供 新 的方 向。
【摘要】 目的 探讨 围术期糖皮质激素对鼻息肉组织 ｍｉＲ一２００ａ、缺氧诱导 因子 一１ ０【（ＨＩＦ一１Ｏｔ）、血管 内皮生 长 因子 （ＶＥＧＦ）表 达的影 响 。方法 按 随机数 字 法将 ９０例 鼻 息 肉患 者 分为 激 素组 与 非 激 素组 ，各 ４５ 例 ，均择 期行 鼻 内镜手 术 ，激素 组给 予 围术 期糖 皮质 激 素 干预 ，非激 素组 则 未使 用 ，比较 两组 的 临床 疗 效 ；选 择 来 源于 同期 行单 纯鼻 中隔偏 曲矫 正 术 ３０例 患者 的 下 鼻 甲黏 膜 组 织 为 对 照 组 ，测 定 比较 各 组 组 织 ｍｉＲ 一 ２００ａ、ＨＩＦ一１Ｏｔ及 ＶＥＧＦ表 达 ，且行 Ｓｐｅａｒｍａｎ相 关性分 析 。 结果 激 素组 治 疗 总有 效 率 显 著 高 于非 激 素 组 ， 术后 ６个 月复 发率 显著低 于非激素 组 （Ｐ＜０．０５）；与 治疗 前 比较 ，两 组 治疗 后 鼻 息 肉组 织 ｍｉＲ一２００ａ显 著 上 调 ，ＨＩＦ一１ ｏ【及 ＶＥＧＦ表达 均显 著 下调 ，差异 有统计 学意义 （Ｐ＜０．０５），且激 素 组 治疗后 上述 指标 均 显 著优 于 非激素 组 （Ｐ＜０．０５）；ＨＩＦ一１ 与 ＶＥＧＦ呈 正相 关（Ｐ＜０．０５），与 ｍｉＲ一２００ａ呈 负相 关 （Ｐ＜０．０５）。结论 围 术期糖 皮质 激素 干预 可能通 过上调 ｍｉＲ一２００ａ表 达 ，下调 ＨＩＦ一１ 及 ＶＥＧＦ表 达 以增 强鼻 息 肉鼻 内镜 手 术 效果 ，显 著降低 术后 复发 率 。
miR-200a对肾小管上皮细胞转分化的调控作用
miR-200a对肾小管上皮细胞转分化的调控作用龚艺;周宝尚;陈华;张璟【期刊名称】《中国临床药理学与治疗学》【年(卷),期】2016(21)2【摘要】目的:探讨miR-200a对TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞间质转分化的影响。
方法:体外培养肾小管上皮细胞(HK-2),TGF-β_1(终浓度为10 ng/m L)作用12、24、48 h,采用qPCR检测miR-200a的表达,qPCR和Western Blot检测上皮转分化相关蛋白E-cadherin和ɑ-SMA的mRNA和蛋白表达;用agomir和antagomir分别转染细胞,其中转染agomir后用TGF-β_1诱导肾小管上皮细胞,qPCR、Western Blot和细胞免疫荧光检测E-cadherin和ɑ-SMA的mRNA 和蛋白表达情况。
结果:在TGF-β_1诱导下miR-200a的表达随着时间逐渐降低(P<0.05),E-cadherin表达呈降低趋势(P<0.05),ɑ-SMA表达逐步上调(P<0.05);agomir使miR-200a表达明显升高(P<0.05),antagomir使miR-200a 表达降低(P<0.05);与转染NC-miRNA相比,agomir在mRNA和蛋白水平上调E-cadherin的表达(P<0.05),下调ɑ-SMA的表达(P<0.05);antagomir则抑制E-cadherin的表达(P<0.05),增加ɑ-SMA的表达(P<0.05),细胞免疫荧光表达情况与蛋白水平相符。
结论:miR-200a能减弱TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞转分化。
【总页数】6页(P139-144)【关键词】miR-200a;上皮间质转分化;转化生长因子β1【作者】龚艺;周宝尚;陈华;张璟【作者单位】第三军医大学新桥医院肾内科【正文语种】中文【中图分类】R692;R965.2【相关文献】1.肾小管上皮细胞转分化在肾间质纤维化过程中的作用及其调控机制研究进展 [J], 罗健华2.缺氧诱导因子1α调控内皮素1表达在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用[J], 唐琳;李慧;张娜娜;陈慧娟;房豫东;王刘伟;刘章锁3.黄芪通过c-met调控TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化 [J], 肖敏;李会娟;谢席胜;樊均明4.肾小管上皮细胞转分化的调控机制及药物干预作用 [J], 王俊然;郑素勤5.PPARγ通过PTEN调控AKT/FAK通路影响高糖条件下肾小管上皮细胞转分化[J], 严瑞;杨雨星;刘玲伶;王圆圆;陈烨;郭兵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
miR-200a靶向调控AP-2γ表达抑制神经母细胞瘤SK-N-AS细胞增殖
miR-200a靶向调控AP-2γ表达抑制神经母细胞瘤SK-N-AS细胞增殖高顺利;王立忠;刘海英;刘丹莉【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2016(044)002【摘要】Objective To investigate whether miR-200a suppresses cell proliferation by targeting AP-2γexpression, and reveal molecular mechanism that miR-200a functions as a tumor-suppressor in neuroblastoma cells. Methods Dual-luciferase reporter gene assay was employed to examine the effect of miR-200a on AP-2γpromotor luciferase activity. Neu-roblastoma cells were transfected with miR-200a mimics, and the expressions of AP-2γmRNA and protein were detected by RT-PCR and Western blot assay. The effects of AP-2γdown-regulation on cell proliferation were observed after AP-2γshRNA was transfected into neuroblastoma cells. Neuroblastoma cell proliferation was detected by MTS assay after being co-transfected with miR-200a mimics and AP-2γplasmid. Results Results showed that miR-200a could inhibit proliferation of neuroblastoma cells at cell viability (66.33 ± 5.13) compared with that of control group (100 ± 0), and also miR-200a can bind to the 3'untranslated region of AP-2γpromotor and inhibit its luciferase activity with an inhibit ratio at (0.624±0.051). AP-2γmRNA and protein expressions were significantly down-regulated when miR-200a wasover-expressed in neuroblas-toma cells. Furthermore, results showed that shRNA-mediated down-regulation of AP-2γthat suppressed the cell prolifera-tion of neuroblastoma at (62.5±2.4) by comparing with the control group (100±0). Moreover, restoring AP-2γexpression re-versed the effect of miR-200a with a cell viability suppression at (92.4±1.4). Conclusion miR-200a suppresses cell prolif-eration by targeting AP-2γexpression in neuroblastoma cells.%目的明确miR-200a具有靶向调控转录因子活化蛋白(AP)-2γ表达而抑制神经母细胞瘤细胞增殖的能力,进一步揭示miR-200a抗瘤的分子机制.方法通过双荧光素酶报告基因分析检测miR-200a对AP-2γ3'UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-200a模拟物转染神经母细胞瘤细胞,利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)方法检测AP-2γ表达水平的改变;将AP-2γshRNA转染SK-N-AS细胞,MTS细胞增殖活性检测分析干扰AP-2γ表达对神经母细胞瘤细胞增殖能力的影响;将AP-2γ重组质粒与miR-200a 模拟物共转染神经母细胞瘤细胞,通过MTS检测细胞增殖能力.结果 miR-200a处理组细胞活性(66.33±5.13)与对照组的(100±0)相比,细胞增殖受到明显抑制(F=114,P<0.05).与未转入的相对荧光素酶活性(0.982±0.119)相比,miR-200a转染明显抑制AP-2γ的3'UTR驱动的荧光素酶活性(0.624±0.051).且miR-200a模拟物明显降低神经母细胞瘤细胞中AP-2γ的mRNA和蛋白表达水平;此外,与对照组相比,shRNA干扰AP-2γ表达能明显抑制SK-N-AS细胞的增殖(62.5±2.4),它能部分模拟miR-200a的抑制增殖能力.最后,发现过表达AP-2γ能部分逆转miR-200a对SK-N-AS细胞的增殖抑制作用(92.4±1.4).结论 miR-200a通过靶向下调AP-2γ表达而抑制神经母细胞瘤细胞的增殖.【总页数】4页(P162-165)【作者】高顺利;王立忠;刘海英;刘丹莉【作者单位】湖南衡阳,南华大学附属第一医院儿科 421001;湖南衡阳,南华大学附属第一医院儿科 421001;湖南衡阳,南华大学附属第一医院儿科 421001;湖南衡阳,南华大学附属第一医院儿科 421001【正文语种】中文【中图分类】R748【相关文献】1.过表达miR-489-3p通过靶向调控MCM2抑制肺癌细胞增殖、促进细胞凋亡的分子机制 [J], 张明晖;孙雅丽;赵妍;牛意;白玉勤2.miR-125a-3p靶向负调控PLK4抑制神经母细胞瘤细胞增殖及其机制探讨 [J], 魏伟;李菊花;朱航;杜建慧;杨慧;吴莹3.miR-34 a靶向调控SOX7表达抑制垂体腺瘤细胞增殖 [J], 张笑天;张莉莉;孙苏安4.抑制miR-21-5 p表达通过靶向FOXP2调控肺癌细胞增殖和凋亡 [J], 崔艳红;张轩斌;赵江;金博;李克芳;张伟杰5.靶向转录因子AP-2的Decoy核酸对肿瘤细胞增殖的抑制作用 [J], 王雪根;叶青;陈武领;冯莹;韦策;刘晖;欧阳平凯因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
miR-200a通过调控HIF-1α与VEGF通路调节鼻息肉上皮细胞增殖及凋亡作用研究雍军;哈再古丽·贾汉;李林格;张华;冯娟;赵琦;尼力帕尔·阿力木【摘要】目的探讨miR-200a通过调控低氧诱导因子-1α(HIF-1 α)与血管内皮生长因子(VEGF)通路调节鼻息肉上皮细胞的增殖及凋亡作用.方法鼻息肉上皮CNE 细胞分别转染miR-200a模拟物及对照模拟物,采用qRT-PCR法检测miR-200a 表达水平,采用MTT法与Tunel试验测定细胞增殖及凋亡作用,采用Western blot 法测定HIF-1 α与VEGF表达水平.结果 qRT-PCR检测显示经过转染,在miR-200a表达水平上,实验组较对照组、空白组升高约37.82倍.转染48 h后,实验组的活细胞显著低于对照组与空白组;细胞凋亡率方面,实验组和对照组以及空白组对比差异均有统计学意义(P＜0.05);转染48 h后,经过Western blot检测得出,在HIF-1α和VEGF表达水平方面,实验组比对照组、空白组明显降低(P＜0.05).结论 miR-200a可通过激活HIF-1α与VEGF通路,限制鼻息肉上皮细胞的增殖能力,提升凋亡能力,进而影响鼻息肉细胞生物行为.【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2019(054)005【总页数】4页(P740-743)【关键词】miR-200a;低氧诱导因子-1α;血管内皮生长因子;鼻息肉;细胞增殖【作者】雍军;哈再古丽·贾汉;李林格;张华;冯娟;赵琦;尼力帕尔·阿力木【作者单位】新疆医科大学第一附属医院耳鼻喉科,乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院耳鼻喉科,乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院耳鼻喉科,乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院耳鼻喉科,乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院耳鼻喉科,乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院耳鼻喉科,乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院耳鼻喉科,乌鲁木齐830054【正文语种】中文【中图分类】R765鼻息肉(nasal polyps，NP)是在鼻腔中形成的一种良性肿物，尽管不是致命性疾病，可是发病率极高，表现出的症状为头痛、鼻塞等，能够对患者的生活与工作造成严重困扰[1-2]。
这几年，研究[3]显示，鼻息肉是不同细胞因子共同参与、具有延续性的炎症反应产物，通过在患者鼻腔内使用糖皮质激素，能够减少分泌的炎性细胞因子；其中鼻息肉上皮细胞不断增殖，对组织损伤进行修复，确保上皮细胞保持完整的屏障结构，并且让鼻息肉组织的环境保持稳态[4-5]。
微小RNA(microRNA，miR)作为一类新型基因调控分子，与鼻息肉的发生发展密切相关。
微小RNA(miR)-200 家族包括5个成员，即miR-141、miR-200a、miR-200b、miR-200c以及miR-429，其中，miR-200a在1号染色体，当miR-200a过度表达会让恶性肿瘤细胞得到侵袭能力，然而miR-200a在鼻息肉中的功能和作用机制不是很确定[6-8]。
血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是在牛垂体形状细胞体外细胞培养分离并纯化的糖蛋白，能够增强内皮细胞具有的分裂增生能力，还可以提升毛细血管通透性[9]。
低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)是哺乳动物和人体内的核转录因子，HIF-1α在肿瘤细胞中可获得大量表达，可以激活PI3K/AKT/FRAP途径，从而调整细胞增殖与凋亡[10]。
该研究采取多种分子生物学方法，探讨了miR-200a通过调控HIF-1α与VEGF通路调节鼻息肉上皮细胞的增殖及凋亡作用，从而揭示miR-200a在鼻息肉中的分子作用机制。
1 材料与方法1.1 材料与试剂通过伦理审核，取人体鼻息肉上皮CNE细胞经伦理审核备案，鼻息肉上皮CNE细胞来源于新疆医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科鼻息肉手术患者，培养基为含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液，培养条件为37 ℃、5% CO2的孵箱；miR-200a模拟物和对照模拟物购自美国Ambion 公司；ECL系统购自美国Syngene公司；兔抗人β-actin单克隆抗体购自美国Abcam公司；兔抗人HIF-1α、VEGF单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司；脂质体转染试剂购自美国Invitrogen公司；MTT检测试剂盒购自美国Sigma 公司。
1.2 细胞增殖实验 CNE细胞分为3组，实验组与对照组选用脂质体转染试剂将CNE细胞瞬间转染miR-200a模拟物、对照模拟物，空白组不转染任何试剂，采用PCR检测仪验证其转染的效率。
把已转染的细胞株分别接种在密度为5 000个/孔的真空培养板，经过48 h培养，使用MTT试剂盒对细胞的增殖性进行测定，每个实验均重复接种至3个孔。
1.3 细胞凋亡实验使用Tunel试验进行细胞凋亡检测，这是原位细胞凋亡检测技术，可以利用DAB显色来表达凋亡细胞，并结合光学显微镜来检测凋亡细胞。
CNE细胞经过96孔48 h培养，吸取培养液，以4 ℃、1 000 r/min离心10 min，将沉淀取出，添加PBS重悬，再离心后提取，加入300 μl凋亡检测缓冲液，以单个象限的细胞数对细胞凋亡率进行测算，每个实验均重复接种至3个孔。
1.4 Western blot实验在miR-200a转染48 h后，提取细胞总蛋白，以BCA法检测蛋白浓度，接着分离蛋白，将其转移到PVDF膜，封闭并添加一抗β-actin、HIF-1α、VEGF，4 ℃过夜。
通过TBST对膜进行30 min清洗，添加二抗在室温下孵育1 h，再次用TBST洗膜30 min，添加ECL发光剂，最后使用电脑对发光进行扫描。
1.5 统计学处理采用SPSS 19.00软件进行分析，计量数据采用表示，多组间对比采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果2.1 3组转染效果、细胞增殖和细胞凋亡情况比较 qRT-PCR检测结果显示，miR-200a转染后，实验组与对照组及空白组比较，miR-200a的表达水平升高37.82倍，表明miRNAs mimics转染成功；转染48 h，实验组的活细胞比例显著低于对照组与空白组，细胞凋亡率显著高于对照组与空白组，差异均有统计学意义(P<0.05)。
见表1。
2.2 HIF-1α与VEGF表达对比转染48 h后Western blot检测显示，实验组的HIF-1α与VEGF表达水平均显著高于对照组与空白组(P<0.05)。
见图1、2和表2。
图1 HIF-1α蛋白的表达情况对比1：实验组；2：对照组；3：空白组图2 VEGF蛋白的表达情况对比1：实验组；2：对照组；3：空白组3 讨论在临床上，鼻息肉是发病率极高的炎性疾病，属于非瘤样肿物，一般是从筛骨脱落进入鼻腔，进而阻塞鼻腔，以及副鼻窦出现引流障碍[11]。
其病理特征是水肿基质中出现大量炎性细胞浸润，绝大多数鼻息肉主要为嗜酸性粒细胞，当前发病机制尚不确定，学术界普遍认同多因素发病这一观点[12]。
研究者总结出鼻息肉的主要形成过程：受各因素影响，鼻黏膜上皮发生断裂，使得纤维组织脱离；脱离的纤维组织出现表面皮化，进而形成小息肉；随后小息肉形成了中腺体；息肉进一步增生以及增长，最后完全形成息肉。
在鼻息肉形成及发展方面，上皮细胞发挥关键作用，通过持续增殖，从而修复组织损伤，使上皮细胞的屏障结构保持完整，并且让鼻息肉组织的环境保持稳态。
而且，上皮细胞效应进一步发展，还会导致上皮细胞对调节功能具有免疫作用，这种免疫作用跟炎症的刺激时间存在一定关联[13]。
表1 3组转染效果、细胞增殖和细胞凋亡情况比较指标空白组对照组实验组F值P 值ΔCt16.44±0.0116.53±0.0211.45±0.06*#185.541<0.0012-ΔΔCt1.001.0937.82活细胞比例(%)75.22±3.1998.29±2.11*100.00±0.00*117.843<0.001细胞凋亡率(%)0.52±0.114.29±1.44*17.20±2.49*#83.111<0.001与空白组比较：*P<0.05；与对照组比较：#P<0.05表2 3组HIF-1α与VEGF蛋白相对表达量对比指标空白组对照组实验组F值P值HIF-1α0.43±0.100.48±0.11*#1.76±0.22*#9.822<0.001VEGF0.89±0.210.93±0.18 *#5.79±0.22*#10.883<0.001与空白组比较：*P<0.05；与对照组比较：#P<0.05microRNA是内源基因编码的非编码小分子RNA，长度约22个核苷酸，通过跟靶mRNA的3′-UTR、编码区部分配对或完全配对，对蛋白质翻译进行抑制，或使mRNA降解，经过转录，负向调控的靶基因表达。
现代研究[14]表明miRNA 与疾病发生和发展关系密切，特异的miRNA表达谱可作为疾病预防和诊断的标志物。
miR-200家族在上皮细胞的形成过程中发挥重要作用，miR-200家族成员可以抑制上皮细胞形成过程，可抑制E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达。
本研究显示，在转染48 h后，实验组的活细胞显著低于对照组与空白组；细胞凋亡率方面，实验组和对照组以及空白组比较差异均有统计学意义(P<0.05)，这说明miR-200a 的表达水平与鼻息肉细胞增殖能力呈负相关性，与凋亡能力呈正相关性，表明miR-200a可能参与鼻息肉细胞的调控。
在鼻息肉组织当中，上皮基底细胞存在多向分化的潜能，属于多能干细胞。
Fas-L在鼻息肉上皮基底细胞中表现为过度表达，而鼻息肉组织当中，淋巴细胞主要为T 细胞[15]。
HIF-1由α亚单位和β亚单位组成，α亚单位受氧调控，具有特异性，对HIF-1活性有着决定性作用。
当癌基因激活时或抑癌基因失活时，肿瘤细胞中的HIF-1α活性就会升高。
并且PI3K/AKT可因PTEN的负调控作用丧失而呈现高活化状态，从而诱导HIF-1表达上调[16]。
VEGF是一种同型二聚体糖蛋白，广泛分布于人的脑、眼、血浆、腹腔、肾、脾、肝、肺等组织中，对维持血管的正常形态和功能有积极作用。