抗氧化体内的评价方法
抗氧化——精选推荐
抗氧化5 汉⿇叶多糖抗氧化活性测定⽅法5.1 羟基⾃由基的清除能⼒测定羟基⾃由基清除能⼒的测定⽅法采⽤颜军等⽅法并略有改动。
基本操作步骤为：先配置10 mg/mL 的样品溶液，在10 mL 的⽐⾊管中加⼊不同体积的被测溶液后，加⼊5 mol/L 的过氧化氢2 mL ，5 mmol/L FeSO 4 2mL 后，迅速加⼊5 mmol/L ⽔杨酸-⼄醇溶液2 mL 后⽤去离⼦⽔定容到10 mL ，放⼊37°C 的⽔浴锅中反应45 min 后，在波长510 nm 处，⽤紫外分光光度计测量各待测液的吸光度。
因为样品本⾝也具有⼀定的吸光度，如果忽略就会造成误差，所以⽤4 mL 去离⼦⽔代替FeSO 4和⽔杨酸-⼄醇溶液。
同时以2 mL 去离⼦⽔代替待测样品溶液，测定在没有抗氧化剂的条件下，⽔杨酸络合物的吸光度。
使⽤Vc 作为阳性对照按上述⽅法测定羟基⾃由基的清除率。
羟基⾃由基清除率公式为式(5-1)：100×+=0210A A A A -(%)清除率式(5-1) 式(5-1)中，A 0为空⽩对照液的吸光度，A 1为加⼊样品后的吸光度，A 2为不加过氧化氢的样品溶液的本底吸光度。
HLPs 、HLP-A 和HLP-B 对羟基⾃由基的清除能⼒测定结果如图3-20所⽰。
由图3-20可知，汉⿇叶多糖对羟基⾃由基具有较强的清除能⼒，且随着汉⿇叶多糖浓度的增加，其清除能⼒也逐渐增加，当多糖浓度达到1 mg/mL 时，HLPs 、HLP-A 和HLP-B 均达到最⼤值，分别为89.92%、81.51%和92.84%；HLPs 、HLP-A 和HLP-B 的IC 50值分别为0.449、0.563和0.331mg/mL ，说明HLP-B 的清除效果最好，清除能⼒强弱⽐较得：HLP-B>HLPs>HLP-A 。
图5-1 HLPs,HLP-A 和HLP-B 对羟基⾃由基的清除率5.2 DPPH ⾃由基清除能⼒测定DPPH ⾃由基清除能⼒测定⽅法采⽤Yao 等⽅法并略有改动。
团体标准抗衰老——抗氧化评价方法总则(征求意见稿)【模板】
ICS号中国标准文献分类号团体标准T/ZGKSL 001-2019抗衰老——抗氧化评价方法总则（征求意见稿）Methods for antioxidant evaluation on anti-aging——General principles(Draft for comments)2020--XX-XX 发布2020-XX-XX实施中国抗衰老促进会发布抗衰老——抗氧化评价方法总则（征求意见稿）Methods for antioxidant evaluation on anti-aging——General principles(Draft for comments)目录前言 (1)1 范围 (2)2 规范性引用文件 (2)3 术语、定义和缩略语 (2)4 技术要求 (4)5 检测方法、检测原则及结果判定 (9)前言本标准参照《保健食品检验与评价技术规范》 (卫生部[2003]第43号）相关内容起草。
本标准由中国抗衰老促进会老龄工作委员会、国珍健康科技（北京）有限公司、新时代健康产业（集团）有限公司提出。
本标准由中国抗衰老促进会标准委员会归口。
本标准起草单位：国珍健康科技（北京）有限公司、云南爱尔发生物科技股份有限公司、新时代健康产业（集团）有限公司、云南爱尔康生物科技有限公司、北京信德生物医学研究院、合肥体如玉生物科技有限公司、内蒙红番生物科技公司。
本标准主要起草人：孙存普、张丽梅、张勇、洪波、魏景安、彭雪琴、石丽花、李颖、邢岩、魏文青、先宏、李林品、吴元德。
本标准由中国抗衰老促进会标准委员会负责解释。
本标准是首次发布。
抗衰老——抗氧化评价方法总则1 范围本标准规定了受试物抗氧化作用检测的基本原则和要求。
本标准适用于受试物抗氧化评价的方法选择和判定。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
抗氧化活性测定方法的比较
抗氧化活性测定方法的比较（一）人体衰老和多种疾病均与自由基有关，寻找天然抗氧化剂具有重要意义。
黄酮、多糖、多肽、酚类等生物活性成分均具有抗氧化活性，抗氧化活性的筛选方法可分为体外和体内2种测试体系。
体外：抗氧化活性可以用在特定条件下，样品对检测体系中自由基的清除能力、抗油脂过氧化能力及样品的还原能力、总抗氧化能力等来衡量和表征。
常用的方法有羟基自由基（·OH）清除能力法、1,1-二苯基苦基苯肼（DPPH法）、2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐（ABTS法）、超氧阴离子自由基法（O2-·）、邻苯三酚自氧化法、β-胡萝卜素漂白法、硫代巴比妥酸法、铁离子还原能力测定（FRAP法）、总酚测定法、ORAC法等方法。
体内：主要有DNA氧化损伤法、蛋白质氧化损伤法、线粒体氧化损伤法。
其中DPPH法和ABTS法操作较简单便捷，不需要特殊的检测设备，只在需固定时间下记下其紫外分光光度测量值后计算其自由基清除率，缺点是不同物质具有组成和结构的差异，与DPPH·、ABTS+·的反应速率不同，反应到达平衡的时间不同，将反应时间固定在某一值时，可能对抗氧化剂的抗氧化性评价带来错误的判断，且DPPH自由基会和其他自由基发生反应。
邻苯三酚自氧化法缺点是检测波长、缓冲液的组成及ｐＨ值、邻苯三酚浓度等关键测定条件存在着较大差异。
β-胡萝卜素漂白法的缺点是β-胡萝卜素本身有抗氧化活性，对样品活性的测定结果有影响。
FRAP法主要用于食品业，优点是简单易操作、可以重复，缺点是无法测定硫醇化合物的还原能力。
ORAC法是国际上通用的评价食品氧化的方法，缺点是仪器成分较复杂，检测成本较高。
目前普遍使用的体外抗氧化活性指标一般都采用分光光度法，使用分光光度计测量各种颜色成分含量的变化。
分光光度法操作较简单、便捷，不需要特殊的检测设备，只在需固定时间下记下其紫外-可见分光光度测量值后计算其活性大小，具有成本低、效率高、样品量少等优点。
抗氧化物活性测定方法总结
抗氧化物活性测定方法总结引言：抗氧化物活性测定在食品、医药、化妆品以及生命科学等领域具有重要应用。
目前，常用的抗氧化物活性测定方法主要包括化学法、生物法和物理法。
本文将对这几种方法进行总结。
一、化学法1.1.DPPH自由基法该方法是目前应用最广泛的抗氧化活性测定方法之一、通过DPPH自由基与抗氧化物发生反应，使DPPH自由基得以还原为无色溶液，测定溶液的吸光度来评估抗氧化活性。
1.2.ABTS自由基法该方法通过生成具有特定吸光度的ABTS自由基，评估抗氧化物对自由基的清除能力。
与DPPH自由基法相比，ABTS自由基法具有更高的灵敏度和稳定性。
1.3.羟自由基清除法该方法利用特定的化学反应，测定样品对羟自由基的清除能力，评估其抗氧化活性。
该方法适用于抗氧化物活性测定和体外抗氧化活性评价。
1.4.过氧化物清除法该方法测定样品对过氧化物的清除能力，通过测定生成的不稳定的自由基产物的分解速率，评估抗氧化活性。
该方法适用于测定生物样品的抗氧化活性。
二、生物法2.1.脂质过氧化抑制能力测定法该方法通过测定样品对脂质过氧化的抑制能力，评估其抗氧化活性。
常用的指标包括丙二醛生成量、硫代巴比妥酸反应物（TBA）生成量等。
2.2.DNA损伤保护能力测定法该方法通过测定样品对DNA损伤的保护能力，评估其抗氧化活性。
常用的指标包括DNA链断裂率、碱基损伤率等。
2.3.超氧化物歧化酶（SOD）活性测定法该方法测定样品中SOD的活性，评估其清除超氧自由基的能力。
常用的指标包括抑制率、相对酶活等。
2.4.过氧化氢酶（CAT）活性测定法该方法测定样品中CAT的活性，评估其清除过氧化氢的能力。
常用的指标包括催化剂浓度、酶单位等。
三、物理法3.1.相对电子自旋共振法该方法通过测定样品中的自由基产物的电子自旋共振信号的强度，评估抗氧化物的活性。
常用的指标包括g值、线宽等。
3.2.高温氧化法该方法利用样品在高温条件下的氧化反应，评估其抗氧化活性。
抗氧化功能评价方法
抗氧化功能评价方法
一、化学方法
1.自由基清除能力测定法：常见的方法有DPPH自由基清除法、ABTS 自由基清除法和超氧阴离子清除法。
这些方法通过测定样品对自由基的清除能力，间接反映了其抗氧化能力。
2.过氧化氢清除能力测定法：该方法通过测定样品对过氧化氢的清除能力，评价其抗氧化能力。
3.金属螯合能力测定法：该方法测定样品与金属离子的结合能力，反映了样品的抗氧化能力。
4.过氧化物酶活性测定法：该方法测定样品中过氧化物酶的活性，评价其抗氧化能力。
二、生物学方法
1.细胞实验法：该方法通过将样品加入细胞培养基中，观察其对细胞的保护作用，评价其抗氧化能力。
2.动物模型实验法：将样品通过灌胃、注射等方式给予动物，观察其对动物体内氧化损伤的保护作用，评价其抗氧化能力。
3.人体试验法：将样品通过口服、注射等方式给予人体，观察其对人体内氧化损伤的保护作用，评价其抗氧化能力。
三、综合方法
1.多指标评价法：综合考虑样品在化学方法和生物学方法中的多个指标，给予综合评分，评价其抗氧化能力。
2.生物传感器法：利用生物传感器对样品进行检测，通过测定信号的变化来评价其抗氧化能力。
3.分子生物学方法：通过测定样品中相关基因的表达水平和蛋白质的表达水平，评价其抗氧化能力。
以上仅为抗氧化功能评价方法的一部分，不同方法的选择应根据具体的研究目的和样品类型来确定。
在实际应用中，常常需要结合多个方法进行综合评价，以获得更准确的结果。
抗氧化功能评价方法
抗氧化功能评价方法1.自由基清除试验法：自由基清除试验法是通过测定物质对特定自由基的清除能力来评价其抗氧化能力。
常用的自由基包括DPPH（2,2’-二苯基-1-苦基肼）、ABTS （2,2’-氨基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)）、OH•（羟基自由基）、O2•-（超氧自由基）等。
这些自由基能与物质发生反应并转化为稳定的产物，从而评定物质的抗氧化能力。
2.铁螯合能力评价法：铁螯合能力评价法是通过测定物质与亚铁离子的络合反应来评价其抗氧化能力。
亚铁离子常常参与引发氧化反应的过程，在生物体内产生自由基，导致氧化应激。
物质能与亚铁离子发生络合反应，减少亚铁离子的可用性，降低氧化反应速率，从而发挥抗氧化作用。
3.过氧化物清除能力测定法：过氧化物清除能力测定法是通过测定物质对过氧化物的清除能力来评价其抗氧化能力。
过氧化物是一类活跃的自由基，对生物体产生氧化应激。
物质能够清除过氧化物，可以有效降低氧化应激反应，起到抗氧化作用。
4.DNA氧化损伤修复能力测定法：DNA氧化损伤修复能力测定法是通过测定物质对DNA氧化损伤的修复能力来评价其抗氧化能力。
DNA氧化损伤是氧化应激的一种重要反应，物质能够修复DNA中的氧化损伤，可以减轻氧化应激对细胞和组织的损害，从而发挥抗氧化作用。
5. Lipid peroxidation抑制试验法：Lipid peroxidation抑制试验法是通过测定物质对脂质过氧化反应的抑制能力来评价其抗氧化能力。
脂质过氧化是一种重要的氧化反应，能够导致脂质分子的氧化断裂，进而破坏细胞膜结构。
物质能够抑制脂质过氧化反应，可以保护细胞膜的完整性，发挥抗氧化作用。
以上是几种常见的抗氧化功能评价方法，通过这些方法可以客观地评价物质的抗氧化能力，为研发和筛选具有抗氧化活性的物质提供参考。
抗氧化
抗氧化自由基
01 自由基
03 物质 05 食物
目录
02 重要性 04 护肤品 06 评价方法
抗氧化是指抗氧化自由基的简称，英文Anti-Oxidant。人体因为与外界的持续接触，包括呼吸（氧化反应）、 外界污染、放射线照射等因素不断的在人体体内产生自由基。科学研究表明，癌症、衰老或其它疾病大都与过量 自由基的产生有关联。研究抗氧化可以有效克服其所带来的危害，所以抗氧化被保健品、化妆品企业列为主要的 研发方向之一，也是市场最重要的功能性诉求之一。
绿茶绿茶中含有茶多酚。多酚类的抗氧化作用因为能够消除活性氧，进而抑制维生素C的消耗，所以可以清 除体内自由基。同时还具有去油解腻、清新口气的功能。
营养专家帕特里克·霍尔福德说：“海藻和绿色的蔬菜富含叶绿素，叶绿素可以起到增强血液中血红细胞生成 的作用。”另外海藻中还富含各种酶、矿物质、维生素，不仅极具抗氧化性而且还具有清除人体垃圾的功能。
葡萄多酚：葡萄梗、籽、皮中多种成分组合起来的复合分子。除了葡萄中含有大量的葡萄多酚外，小蓝莓、 欧洲越莓、樱桃、红茶、绿茶、柠檬、大麦外壳中也存在这种成分，只不过葡萄中的含量最高，葡萄籽的含量在 葡萄中又居首位。葡萄多酚的作用主要原理就是对抗自由基，它可以和自由基相结合，使自由基失去攻击体内细 胞的能力。
番茄番茄中含有丰富的茄红素，茄红素具有抗氧化功能。
另外，番茄应怎样食用才能对抗氧化更有效呢？那便是熟吃。虽然经烹调或加工过的番茄(番茄酱、番茄汁、 罐装番茄)所含的维生素C会遭到破坏，但是茄红素的含量可增加数倍，抗氧化功能也更超强。
葡萄籽中的花青配糖体，其抗氧化能力是维生素C的20倍、维生素E的50倍。用葡萄酿成的红酒因经过发酵， 其抗氧化能力得以提高。因此，在吃葡萄的同时，再适量饮用些红酒，可以达到抗氧化的目的。
抗氧化能力的测定（精选4篇）
抗氧化能力的测定（精选4篇）以下是网友分享的关于抗氧化能力的测定的资料4篇，希望对您有所帮助，就爱阅读感谢您的支持。
DPPH抗氧化能力测定篇一DPPH.法测定绿原酸清除自由基能力2.1 待测液的制备将绿原酸(纯度56%)、维生素C和没食子酸分别配制成体积分数为0.1mg/mL的无水乙醇溶液。
2.1.1 绿原酸母液的配制称取9.0 mg绿原酸，定容到50ml，即可得到绿原酸的母液0.1mg/mL。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。
分别为mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml;mg/ml。
2.1.2 Vc母液的配制称取mg VC，定容到100ml，即可得到VC的母液。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。
分别为mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml。
2.1.3 没食子酸母液的配制称取mg 没食子酸，定容到100ml，即可得到没食子酸的母液。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。
分别为mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml。
2.1.4 DPPH母液的配制称取mg DPPH，用无水乙醇定容到100ml，即可得到DPPH的母液。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成至一定浓度的溶液。
CDPPH= mg/ml。
（建议用0.025mg/mL）2.2 DPPH.溶液的可见光谱以无水乙醇为对照，在分光光度计上对DPPH.溶液进行在440～600nm下扫描。
Amax= nm2.3 抗氧化活性测定DPPH.是一种稳定的自由基，它的乙醇溶液呈紫色，在可见光区最大吸收峰为nm。
当DPPH.溶液中加入自由基清除剂时，溶液颜色变浅，517nm处的吸光度变小，而吸光度变小的程度与自由基被清除的程度呈线性关系。
因此，可用来检测自由基的清除情况，从而评价某物质的抗氧化能力，其能力用清除率(Scavenging Rate,SR)来表示，清除率越大，抗氧化能力越强具体实验步骤及方法：精确吸取的DPPH.溶液2mL与2ml无水乙醇混合均匀后，以相对应的溶剂(4mL无水乙醇)为对照，用分光光度计测定上述溶液在nm处的吸光度值(A0)。
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抗氧化体内的评价方法张丽楠天津科技大学生物工程学院，天津300457摘要：抗氧化是抵抗集体氧化作用的过程，目前准确评价生物活性物质的抗氧化能力已经成了氧化与抗氧化研究领域的热点问题，为了更好地评价样品的抗氧化性，常用的评价方法分为体内和体外评价方法，本文主要介绍几种体内的评价方法。
关键词：抗氧化性；体内测定方法Evaluation of the antioxidant in the bodyZhanglinanBiological Engineering, Tianjin University of Science and Technology,Tianjin 300457Abstract:Anti-oxidation is the process of collective resistance to oxidation, antioxidant capacity currently accurate evaluation of bioactive substances have become oxidized and antioxidant research in the field of hot issues, in order to better evaluate the antioxidant activity of the sample, the commonly used evaluation methods into in vivo and in vitro evaluation methods, this paper describes several methods evaluated in vivo.Key words:antioxidant activity:Determination of in vivo methods抗氧化是抵抗集体氧化作用的过程，也是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。
越来越多的研究显示抗氧化是预防衰老的重要步骤，因为自由基或氧化剂会将细胞和组织分解，影响代谢功能。
因此，当生物体内产生了大量的自由基，平衡被破坏时，生物体就会生病，这样需氧生物在不断进化过程中，逐渐形成了一套完整的抗氧化系统。
基于不同原理的各种抗氧化活性检测方法已广泛用于抗氧化活性物质，这些方法虽然能够在不同的条件下反映抗氧化活性物质的多种功能特性，但也各有其局限性，目前常用的抗氧化活性检测方法主要基于以下机理：（1）样品对检测体系中脂类物质的氧化抑制能力反映被测物的抗氧化活性；（2）样品对检测体系中自由基的清除能力反映被测物的抗氧化活性；（3）测定样品的还原能力反映被测物的抗氧化活性。
[1]很据以上机理，抗氧化活性物质的检测方法分为体内评价方法和体外评价方法，本文针对当前该领域的发出状况，在总结前人的科研成果的基础上，简单的介绍几种体内评价方法。
1体内抗氧化防御系统需氧生物在不断进化过程中，逐渐形成了一套完整的抗氧化系统，包括预防性的、阻断性的和修复性的，也即一级和二级抗氧化防御系统；分别在不同水平发挥着防御作用。
一级抗氧化防御系统也称为初级抗氧化防御系统，分为抗氧化酶和非酶性抗氧化剂。
能够是自由基失效的化学物质称为“抗氧化剂或抗氧化酶”。
抗氧化剂或抗氧化酶是清除氧自由基或阻止、抑制氧自由基产生过氧化物的物质。
抗氧化酶系统包括超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽转硫酶、髓过氧化物酶、细胞色素C过氧化物抗坏血酸过氧化物酶等。
抗氧化非酶系统，也即抗氧化剂，包括两大类，一类是人体必需的抗氧化剂，包括维生素E、维生素C、类胡萝卜素、锌、硒、半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、组氨酸、铜蓝蛋白、转铁蛋白、乳铁蛋白等；另一类是人类非必需的抗氧化剂，如生物类黄酮、花色素、番茄红素和叶黄素等。
脂质、蛋白质和核酸是氧自由基攻击的主要靶点。
在正常情况下，虽然初级抗氧化防御系统通过各种抗氧化剂和抗氧化酶能有效地防止活性氧对靶分子的作用，但是由于细胞能不断地生成氧自由基，特别是在病理条件下以及衰老时活性氧的生成量大大增加，生成的活性氧特别是活性羰基超过了细胞抗氧化防御能力，由此引起蛋白质和DNA的氧化损伤。
为了对受损的蛋白质和DNA进行修复，机体形成了二级抗氧化防御系统，即所谓的抗氧化修复系统。
抗氧化修复酶如谷胱甘肽还原酶、蛋氨酸硫氧化物还原酶A等，在机体抗氧化损伤方面也起着重要作用，二级抗氧化防御系统的作用机制。
2体内抗氧化能力检测方法体内抗氧化能力评价主要借助氧化应激生物标志物的测定来判断生物活性物质对DNA氧化损伤、脂质过氧化、蛋白质氧化损伤、线粒体氧化损伤的保护程度，以及直接测定抗氧化防御系统抗氧化水平。
2.1DNA氧化损伤检测方法DNA氧化损伤是细胞凋亡的开始。
通过细胞以外的因素或细胞内的新陈代谢都可以产生活性氧ROS，活性氧（ROS）能损伤多糖类、脂质、蛋白质、DNA等多种生物大分子，会引发心血管疾病或神经系统疾病，至少两种老年疾病和癌症被证明是由活性氧ROS损伤DNA诱发的。
活性氧ROS损伤DNA，破坏机体正常的生理过程。
目前对DNA氧化损伤的检测可分为直接和间接两方面的检测，直接检测DNA损伤比较常用的方法是测量DNA单链断裂，即单细胞凝胶电泳法（SCGE）与质粒氧化损伤。
间接检测DNA氧化损伤较常用的指标是测定血清与尿中8-羟基脱氧鸟苷，正常情况下，8-羟基脱氧鸟苷在DNA修复机制的作用下被及时切除，形成8-羟基脱氧鸟苷随尿液排出体外。
所以血清与尿中8-OH-dG可作为DNA氧化性损伤的分子生物学标记物。
另外使用电化学法研究抗氧化剂与DNA之间的作用也很重要，可以从另一个角度解释抗氧化剂的作用机理。
[2]2.2蛋白质氧化损伤蛋白质的氧化损伤不仅包括对酶、受体和载体蛋白的损伤,而且还包括一些二次损伤,如:DNA 修复酶的损伤。
目前,蛋白质氧化使用最广的生物标志物是蛋白质羰基含量( Protein Carbonyl Content ,PCC) ,其传统的检测技术是使用二硝基苯肼的比色法,使用分光光度法或者酶联免疫吸附法(ELISA) 测定2 ,4 - 二硝基苯肼与蛋白质羰基反应生成的腙,来衡量蛋白质的损伤情况。
PCC 法是快速的检测方法,不需要特殊、昂贵的设备。
然而,蛋白质羰基含量并不是氧化应激的特异性生物标志物,而只是总体的粗略衡量。
蛋白质特异性的氧化应激标志物是3 - 硝基络氨酸,但是,3 - 硝基络氨酸的测定方法耗费时间,而且与PCC 相比它需要比较精密的分析设备。
[2]2.3线粒体氧化损伤在细胞内绝大多数氧分子是被线粒体内膜呼吸链蛋白酶消耗的，在呼吸链上产生的过氧化物，在一定条件下，会转变为过氧化氢，进而成为羟基自由基，使超氧歧化酶功能紊乱或者使线粒体的呼吸链紊乱。
会导致线粒体DNA（mtDNA）基因突变或者染色体端粒加速变短，从而影响人的寿命。
自由基可以产生于线粒体内并经常释放到胞浆。
线粒体中A TP的生产涉及到通过电子传递链上的质子在内膜运输。
最后的电子受体会消耗氧气分子，通常是生成了水分子，但在一个小又意义重大的百分比之内（1% ～2%），超氧阴离子会产生。
超氧阴离子会从线粒体带走额外电子，这会对mtDNA、线粒体膜、蛋白质造成损害。
如果造成太大的损失，细胞会发生凋亡。
细胞凋亡和线粒体外膜的表面蛋白Bcl-2有关。
自由基衰老学说指出，当线粒体由于自由基损伤，造成能量损失，细胞就会进入凋亡阶段。
由于线粒体膜易受过氧化物的攻击，所以针对保护线粒体的抗氧化活性检测可以采用脂质过氧化检测方法。
实验中必须精确分离线粒体膜，保证膜功能完整，尽量模拟出在细胞内的真实情况[2]2.4脂质氧化损伤硫代巴比妥酸法(TBARS) ,是最早用于人类与动物抗氧化研究,反映脂质氧化损伤的方法。
最初的TBARS 法相对简单,缺乏特异性,相对陈旧。
而改进后的TBARS 法由于使用了高效液相色谱法(HPLC) ,敏感度、特异度和重复性都明显提高了。
呼吸烃类的测定,也是一种被广泛使用的、非侵入性的体内评价脂质过氧化的方法。
只是由于在呼气收集、处理和分析中缺乏标准化方法,导致了结果的不稳定性。
氧化型的低密度脂蛋白(LDL) ,已被公认是氧化应激防御的生物标志物; F - 异前列烷是由自由基诱发花生四烯酸反应,之后在磷脂中生成的又一新的氧化应激生物标志物。
3讨论体内实验法接近生物体实际体系,而且比较灵敏,但周期长、成本大且实验繁琐，因此有其自身的局限性。
因此,在进行生物活性物质抗氧化能力评价的时候,为了保证评价结果的真实性与可靠性,应该遵从由体外到体内,由化学环境到生物环境逐级深入的原则。
在保证体外评价结果可靠的基础上,进行体内评价的动物实验,并在保证动物实验从设计到干预、最后结果科学性的基础上,再进一步人群实验,这是评价的最终阶段。
但是,在开展体内评价的时候,一定要注意到所评价物质的毒性和剂量反应。
[3] 实验以动物为模型，对其饲喂受试物，利用生化手段对其各项相关的生理指标进行测定，通过实验组与空白组各项指标的比较评价受试物在生物体内的抗氧化活性。
常见实验方法如下：选用清洁级大鼠或小鼠为对象，用受试物按实验研究计量及时间连续饲喂，完成后处死动物，根据实验目的取其血液或组织器官，测定其中的丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）及过氧化氢酶（CAT）等指标，同空白对照组比较，从而得出受试物在生物体内的抗氧化能力。
除采用健康动物测试外，体内实验还多采用人为制造的疾病动物为模型，研究天然产物对某一靶向疾病或组织的作用。
[4]总之，理想的抗氧化活性评价方法应具有以下特点：①原理明确；②操作简单；③可反映物质对绝大多数自由基的抑制或清除能力；④生物相关性良好参考文献[1]刘志东，郭本恒，王荫榆.抗氧化活性检测方法的研究进展[J].天然药物研究与开发，2008,20:563-567.[2]张明，冯璐璐.抗氧化活性评价标准与发展[J].安徽农学通报，2010,16（08）:33-34.[3]刘小兵，朴建华.营养与食品安全[J].中国食品卫生杂志，2008,20(5):440-443.[4]曾维才，石碧.天然药物抗氧化活性的评价的常见评价方法[J].2013,32（6）:1205-1213.。