转化酶的测定
碳氮代谢测定
碳氮代谢测定谷氨酰胺合成酶（GS）和谷氨酸脱氢酶（GDH）是碳氮代谢的关键酶。
淀粉酶，转化酶，硝酸还原酶，谷氨酰胺合成酶活性测定原理谷氨酰胺合成酶（GS）是植物体内氨同化的关键酶之一，在ATP和M g 2+存在下，它催化植物体内谷氨酸形成谷氨酰胺。
在反应体系中，谷氨酰胺转化为Y-谷氨酰基异羟肟酸，进而在酸性条件下与铁形成红色的络合物，该络合物在540nm处有最大吸收峰，可用分光光度计测定。
谷氨酰胺合成酶活性可用产生的 Y-谷氨酰基异羟肟酸与铁络合物的生成量来表示，单位Mmol mg -1 protein h - 1。
也可间接用540nm处吸光值的大小来表示，单位A mg -1 protein h -1。
【仪器与用具】冷冻离心机；分光光度计；天平；研钵；恒温水浴；剪刀；移液管（2 ml、1ml）。
【试剂】提取缓冲液：0.05mol/L Tris-HCl，pH8.0，内含 2mmol/L Mg 2+，2mmol/L DTT，0.4 mol/L 蔗糖。
称取 Tris （三羟甲基氨基甲烷）1.5295g，0.1245g MgSO 4 7 H 2 0，0.1543g DTT （二硫苏糖醇）和34.25g蔗糖，去离子水溶解后，用0.05 mol/L HCl 调至 pH8.0，最后定容至 250ml ；反应混合液 A （0.1mol/L Tris-HCl 缓冲，PH7.4）：内含80mmol/L Mg 2+，20mmol/L谷氨酸钠盐，20mmol/L半胱氨酸和2 mmol/L EGTA，称取 3.0590g Tris，4.9795 gMgSO 4 7H 2 0, 0.8628g 谷氨酸钠盐， 0.6057g半胱氨酸，0.1920gEGTA，去离子水溶解后，用0. 1mol/L HCl调至pH7.4,定容至 250ml ；反应混合液B（含盐酸羟胺，pH7.4）：反应混合液A的成分再加入 80mmol/L 盐酸羟胺，pH7.4；显色剂（0.2mol/L TCA, 0.37mol/L FeCl 3 和 0.6mol/L HCl混合液）：3.3176g TCA （三氯乙酸），10.1021g FeCl 3 6H 2 0，去离子水溶解后，加5ml浓盐酸，定容至100ml；40mmol/L ATP溶液：0.1210g ATP溶于5ml去离子水中（临用前配制）。
高效液相色谱法测定酶转化液中d-苯丙氨酸
高效液相色谱法测定酶转化液中d-苯丙氨酸
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的鉴定和测定化合物的方法。
下面是一种用于测定酶转化液中d-苯丙氨酸的HPLC 方法：
仪器和试剂：
- 高效液相色谱仪
- C18色谱柱
- 紫外检测器
- 甲醇
- 0.1％磷酸溶液（pH 2.5）
步骤：
1. 准备样品：将酶转化液进行适当的前处理，如稀释或净化，以获得可测定d-苯丙氨酸浓度的样品。
2. 准备标准曲线：准备一系列浓度已知的d-苯丙氨酸标准溶液。
可以使用纯品的d-苯丙氨酸，或者通过其他方法制备。
3. 色谱条件设置：
- 使用C18色谱柱，柱温设定为适当的温度。
- 流动相使用甲醇和0.1％磷酸溶液（pH 2.5），以一定比例混合，并根据实验需要进行调整。
- 设定流速和检测器波长以最佳条件进行分析。
通常，流速为1 mL/min，波长为210 nm。
4. 注入样品和标准溶液：将样品和标准溶液分别注入色谱仪进行分析。
保证注入的样品和标准溶液体积足够小，以避免过度稀释。
5. 分析和计算：根据标准曲线和样品的峰面积，计算样品中的
d-苯丙氨酸浓度。
可以使用内标法或外标法进行定量。
根据不同的实验要求和仪器设置，上述方法可能需要进行调整。
在进行HPLC分析时，确保操作准确和安全，并按照相关的
实验室规定进行。
最新植物体内转化酶活性的测定
植物体内转化酶活性的测定转化酶又称蔗糖酶(β—D—呋喃型果糖苷一果糖水解酶)，是一种水解酶。
植物体的库组织中，一般含有较高活性的转化酶。
它能将植物体内的主要同化产物——蔗糖不可逆地水解为葡萄糖和果糖，为细胞的可溶性糖类贮库提供可利用六碳糖，以用于细胞壁、贮藏多糖及果聚糖的生物合成，并通过与呼吸作用偶联的氧化磷酸化产生能量。
所以，转化酶与植物组织的生长有密切关系，是衡量同化产物的转化和利用，植物细胞代谢及生长强度的指标。
【原理】转化酶可将非还原性糖的蔗糖水解为葡萄糖和果糖。
将从植物组织中提取的酶液与蔗糖溶液保温作用一定时间后，测定产生的还原糖的量来表示转化酶活性的大小。
在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质)，还原糖则被氧化成糖酸及其它产物。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度量呈一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线可求出样品中还原糖的含量。
通常，在测定过程中，溶液的pH对酶活性影响很大。
不同的酶及不同材料中同一种酶都有其最适的pH值。
转化酶有两个影响水解蔗糖能力的解离基团，一个PKa约为7，另一个PKa约为3。
不同植物材料的转化酶中这两个基团的含量不同，它们的最适pH也不同(最适pH在7.0左右的为中性转化酶，最适pH在7.0以下的为酸性转化酶)。
所以，在测定材料中转化酶的活性之前，首先要选择适宜的PH值。
【材料、仪器与试剂】1．材料：植物组织2．试剂：（1）提取缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl (PH7.0) 缓冲液，内含5 mmol/L MgCl2,2 mmol/L EDTA-Na2,2% 乙二醇，0.2%牛血清蛋白（BSA），2%PVP，5 mmol/LDTT 。
（2）透析缓冲液：25 mmol/L Tris-HCl (PH7.0) 缓冲液，内含2.5 mmol/L MgCl2,1 mmol/L EDTA-Na2,1% 乙二醇，1 mmol/L DTT。
血管紧张肽(素)转化酶动力学测定方法的探讨及其初步临床应用
患者 Ａ Ｅ活性为 （８７±１ ． ）Ｕ Ｌ 稍低于 正常对照组 ， 差异无统计 学意义 （ ０ ０ ） Ｃ ２ ． １４ ／ ， 但 Ｐ＞ ． ５ 。结论 捷、 精确 ， 可用于 自动化分析 ， 适宜临床常规应用 。Ａ Ｅ可作为评价肺部疾病的一项指标 。 Ｃ 关键词 ： 管紧张肽 （ ） 血 素 转化酶 ； 动力学法 ； 慢性 阻塞性 肺部疾病急性加重期 ； 肺癌
ｐｏｕｅＮ （ ［一ｕｙ］ ｃ ｌ １一—ｈ Ｆ Ｐ ｎｄｇ ｃ ｅｇ ｃ ｅ（ Ｇ） ｎｂｒ ｃ — ｄｕ ｙｒｘ ｅｂｆ ｒｐ ８２ ． ｒｄｃ 一３ ２Ｆ ｒ１Ａ ｒ ｏ ）ＬＰ ｅ（ Ａ ）ａ ｌ ｉ —ｌ ｉ Ｇ ｉ ｏ ｃａｉ ｓ ｉｍｈ ｄｏｉ ｕ ｅ（Ｈ： ．） ｙｙ ｙｎ ｙｎ ｉ ｄｏ ｄ ｆ
检验医学 ２ １ 年 １月第 ２ ０１ ６巷第 １期
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１ ９
文 章 编 号 ：６ ３８４ （ ０ １ ０ －０ ９０ １７ —６０ ２ １ ） １０ １ －４
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度 为 １０ｍ ＬＬ 批 内 、 间 平 均 变异 系数 （ Ｖ 分 别 为 ４０ ％ 、．０ ， 氏 常数 （ ｍ） ０ ０ ｍ ｌＬ ． ｍｏ／ ， 批 Ｃ） ．７ ５ ５ ％ 米 Ｋ 为 ．９ｍ ｏ 。正 常 对 照 ／ 组 Ａ Ｅ活性 为 （ １１ ８０ Ｕ Ｌ Ａ Ｃ Ｐ Ｃ ３ ． ±１ ． ） ／ ；Ｅ Ｏ Ｄ患 者 Ａ Ｅ活性 为 （２ ４±１． ） ／ ， 于 正 常 组 （ ＜ ．０ ） 肺 癌 Ｃ ２． ２６ Ｕ Ｌ 低 Ｐ ００ ０１ ；
蔗糖合成酶、酸性转化酶、碱性转化酶活力活力的测定
实验四蔗糖合成酶、酸性转化酶、碱性转化酶活力活力的测定参考一、实验意义和目的 (2)二、实验原理 (2)三、材料、设备与试剂 (3)四、实验步骤 (3)1.蔗糖合成酶活性测定实验 (3)2.转化酶活性测定 (4)五、实验结果与分析 (4)1.蔗糖合成酶活性测定.................................................................... 错误!未定义书签。
2.转化酶活性测定............................................................................ 错误!未定义书签。
六、误差分析........................................................................................... 错误!未定义书签。
一、实验意义和目的蔗糖作为植物体内主要的光合产物和运输物质，其代谢强弱对许多生理活动都会产生显著影响。
蔗糖合成酶(SuSy)是植物进行蔗糖代谢的关键酶之一,与植物细胞组织和骨架的构建、植株的生长发育和果实的成熟以及植物对逆境胁迫的响应等方面密切相关，在植物的生长发育和代谢活动中具有重要作用。
转化酶也是催化蔗糖降解的重要酶类，为细胞的可溶性糖类贮库提供可利用六碳糖，以用于细胞壁、贮藏多糖及果聚糖的生物合成，并通过与呼吸作用偶联的氧化磷酸化产生能量，还是控制淀粉合成的关键酶，测定转化酶活性对了解光合产物的贮存、转运及累积都有重要意义。
通过本实验要掌握三种酶的作用、酶活力测定的原理和方法、学习酶活力的计算方法，了解糖类水解。
二、实验原理1.蔗糖合成酶催化蔗糖的水解反应：蔗糖+UDP 果糖+UDPG。
2.转化酶催化蔗糖的水解反应：蔗糖+H2O—►葡萄糖+果糖。
根据催化反应所需的最适PH,可将转化酶分为两种：一种称为酸性转化酶，主要分布在液泡和细胞壁中，另一类转化酶称为碱性或中性转化酶，主要分布在细胞质中。
土壤活性测定实验报告
一、实验目的1. 了解土壤活性的基本概念和测定方法。
2. 掌握土壤酶活性的测定原理和操作步骤。
3. 通过实验，了解土壤酶活性与土壤肥力的关系。
二、实验原理土壤活性是指土壤中微生物、植物、动物等生物体及其代谢产物的综合活性。
土壤酶活性是土壤活性的重要指标，可以反映土壤中生物体的代谢能力和土壤肥力状况。
本实验通过测定土壤酶活性，了解土壤活性水平。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、过氧化氢酶、磷酸酶、脲酶、蛋白酶、转化酶、脱氢酶等试剂。
2. 实验仪器：恒温水浴锅、pH计、分光光度计、滴定管、移液管、烧杯、试管等。
四、实验方法1. 土壤样品的采集与处理采集不同类型土壤样品，过筛后，置于4℃冰箱中保存。
2. 土壤酶活性的测定（1）过氧化氢酶活性测定原理：过氧化氢酶催化过氧化氢分解，产生水和氧气。
通过测定氧气的产生量来计算过氧化氢酶活性。
操作步骤：①配制过氧化氢酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的过氧化氢酶反应液，加入一定量的过氧化氢，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用分光光度计测定反应液的吸光度，根据标准曲线计算过氧化氢酶活性。
（2）磷酸酶活性测定原理：磷酸酶催化磷酸苯二钠水解，产生酚和磷酸。
通过测定酚的产生量来计算磷酸酶活性。
操作步骤：①配制磷酸酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的磷酸酶反应液，加入一定量的磷酸苯二钠，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用分光光度计测定反应液的吸光度，根据标准曲线计算磷酸酶活性。
（3）脲酶活性测定原理：脲酶催化尿素水解，产生氨和二氧化碳。
通过测定氨的产生量来计算脲酶活性。
操作步骤：①配制脲酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的脲酶反应液，加入一定量的尿素，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用滴定法测定氨的产生量，根据标准曲线计算脲酶活性。
土壤微生物量及土壤酶活性测定方法
2 土壤微生物量测定土壤微生物量（MB）是指土壤中体积小于5x103叩3的生物总量，但活的植物体如植物根系等不包括在内］。
它通过调控土壤中能量和养分循环以及有机物转化，来反映土壤同化和矿化能力。
土壤微生物生物量包括土壤微生物生物量碳、土壤微生物生物量氮、土壤微生物生物量磷和土壤微生物生物量硫，但一般情况下土壤微生物生物量的大小以土壤微生物生物量碳来表示。
2.1熏蒸浸提法2.1.1原理利用不同的浸提剂，通过氧化滴定法来测定土壤浸提液中有机C、N和P提取的可溶性有机碳含量和微生物量C之间存在较稳定的比例关系。
2.1.2则定步骤1.根据土壤样品含水量，调节土壤含水量为田间持水量的50%，25 ℃下密封培养10 d，以保持土壤均匀和不同地方所得结果的可比性。
2.氯仿熏蒸24 h后，用真空泵反复抽气，直到土壤闻不到氯仿气味为止。
根据所测对象不同选择不同的提取剂浸提，振荡浸提30 min后，立即分析浸提液中所测对象的含量或放入-15 ℃下保存。
表1指出氯仿熏蒸浸提法测定不同土壤微生物量所选用的浸提剂及其条件。
表1姓熏薪髓喉土就生帽条件Table I F'E fcrdieneasuirm aitcondiocnsof soilm riobialbmass土情即鄢Detemiia血cfhdicaMr Eitatnt土觥生醯K(=D,3S 或D.45土觥物1小K国加士躺蜘M恻般注®拓牖腌雄魂航觥刎楠融脑机装痴螭定雕耐帕帆小麒眼3 土壤酶活性测定土壤酶活性均用风干土壤。
土壤转化酶活性和过氧化氢酶活性、脲酶活性、磷酸酶活性依次用硫代硫酸钠滴定法、高锰酸钾滴定法、靛酚蓝比色法和磷酸苯二钠比色法测定（关松荫,1986）3.1脲酶一一靛酚蓝比色法脲酶的活性可以用来表示土壤供氮能力（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。
高效液相色谱法测定血管紧张素转化酶抑制剂的活性
收稿日期:2004-02-30作者简介:吴琼英,女,博士研究生,研究方向为生物资源有效成分的分离与提纯.通讯联系人:马海乐,男,博士生导师,教授,Tel :(0511)5862362,E -mail :mhl @uj s .edu .cn .基金资助:江苏省高技术研究项目(项目编号:BG2003319).高效液相色谱法测定血管紧张素转化酶抑制剂的活性吴琼英, 马海乐, 骆 琳, 吴守一(江苏大学生物与环境工程学院,江苏镇江212013)摘要:建立了体外直接测定血管紧张素转化酶抑制剂活性的高效液相色谱分析方法。
以马尿酰-组氨酰-亮氨酸为反应底物,血管紧张素转化酶为催化剂,反应所生成的马尿酸为测定指标,未加酶抑制剂的反应为空白对照。
使用ZORBAX SB -C 18色谱柱(4.6mm i .d .×150mm ,填料粒径5μm ),柱温25℃,流动相为乙腈-超纯水(体积比为25∶75,各含0.05%(体积分数)三氟乙酸及0.1%(体积分数)三乙胺),流速0.5m L /min ,检测波长228nm 。
在马尿酸浓度为0.005～1.000mmol /L 时,马尿酸浓度与其峰面积呈良好的线性关系(r =0.9999),最小检测限为0.50μmol /L ;该方法对马尿酸的回收率为99.48%～105.64%,相对标准偏差(RSD )为2.20%(n =6)。
该方法可适用于血管紧张素转化酶抑制剂活性的体外测定,具有操作简便、精密度和准确性高的特点,为降血压药物的研制提供了方便可靠的检测手段。
关键词:高效液相色谱法;血管紧张素转化酶抑制剂;马尿酸中图分类号:O 658 文献标识码:A 文章编号:1000-8713(2005)01-0079-03De te rmination of Angiotensin Converting Enzyme InhibitorActivity by High Pe rformance Liquid ChromatographyWU Qiongying ,MA Haile ,LUO Lin ,WU Shouyi(College of B iolog y and Environment Eng ineering ,Jiang su University ,Zhenjiang 212013,China )Abstract :A high performance liquid chromatographic method to determine angiotensin -convertingenzyme inhibitor activity in vitro was established by using N -hippuryl -His -Leu tetrahydrate as the reaction substrate and hippuric acid as the reaction product .The chromatographic conditions were as follows :column ,ZORBAX SB -C 18(4.6mm i .d .×150mm ,5μm );column temperature ,25℃;mobile phase ,acetonitrile -distilled water (25∶75,v /v ,both containing 0.05%(v /v )trifluo -roacetic acid and 0.1%(v /v )triethylamine );flow rate ,0.5mL /min ;detection wavelength ,228nm .An excellent linearity over the range of 0.005-1.000mmol /L (r =0.9999)was observed .The detection limit was 0.50μmol /L .The recoveries of hippuric acid ware 99.48%-105.64%,with a relative standard deviation (RSD )of 2.20%(n =6).It is a simple ,precise and reliable as -say method for developing antihypertension drugs .Ke y words :high performance liquid chromatography ;angiotensin -converting enzyme inhibitor ;hippuric acid 血管紧张素转化酶(angiotensin Ⅰ-converting enzyme ,简称ACE )主要参与肾素-血管紧张素-醛固酮系统的调节。
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转化酶的测定
转化酶又称蔗糖酶，是一种水解酶，植物体的库组织中，一般含有较高活性的转化酶，它能将植物体内的主要同化产物——蔗糖不可逆的水解为葡萄糖和果糖，为细胞的可溶性糖贮库提供可利用六碳糖，以用于细胞壁、贮藏多糖及果聚糖的生物合成，并通过与呼吸作用偶联的氧化磷酸化产生能量，所以，转化酶与植物组织的生长有密切关系，是衡量同化产物的转化和利用、植物细胞代谢及生长强度的指标。
试剂：1、10%蔗糖溶液
2、葡萄糖标准液（500μg/ml）
3、0.05mol/l的磷酸缓冲液
4、（DNS）3，5二硝基水杨酸：将6.3g二硝基水杨酸和262 ml 2mol/l NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。
方法：1、酶的提取：1g样品剪碎后，用预冷的蒸馏水在冰浴中研磨成匀浆，定容至100ml，在冰箱中浸提3小时，4000转离心15分钟，上清液即为酶的粗提液。
2、酶活性的测定：吸酶液2ml，放入试管中，再加入pH6.0的缓冲液5ml及10%蔗糖溶液1ml，在37度水浴中保温30分钟，取出后立即按3，5二硝基水杨酸法测定还原糖的含量。
以煮沸酶液10分钟钝化酶的试管作对照。
3、还原糖标准曲线的制作及还原糖含量的测定
①标准曲线：取6支20ml刻度试管，编号，按下表配置不同浓度的葡萄糖标准液：
管号 1 2 3 4 5 6
葡萄糖原液量（ml）0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0
加蒸馏水量（ml） 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0
葡萄糖浓度（μg/ml）0 100 200 300 400 500 在上述各管中分别加入1.5ml 3，5二硝基水杨酸试剂，在沸水浴中加热5分钟，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，加蒸馏水定容至20ml，混匀，以1号管为空白，测540nm 波长下的OD值。
以OD值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线。
②酶反应液中还原糖的含量的测定：吸取2ml反应液，加入1.5ml 3，5二硝基水杨酸试剂，沸水浴中煮沸5分钟，冷却定容至20ml ，测定540nm波长下的OD值，查标准曲线得酶反应液中还原糖的浓度。
4、结果计算：
A=(N-N’)*V/(T*W*1000)
A：转化酶的活性(mg/gfw/h) N：酶反应液中还原糖的浓度(μg/ml)
N’：钝化酶反应液中还原糖的浓度(μg/ml) V：酶反应液的总体积
T：反应时间W：材料鲜重
转化酶的测定
方法：1、酶的提取：1g样品剪碎后，用预冷的蒸馏水在冰浴中研磨成匀浆，定容至100ml，在冰箱中浸提3小时，4000转离心15分钟，上清液即为酶的粗提液。
2、酶活性的测定：吸酶液2ml，放入试管中（以煮沸酶液10分钟钝化酶的试管作对照），加入pH6.0的缓冲液5ml及10%蔗糖溶液1ml，在37度水浴中保温30分钟，取出后立即吸取2ml加入1.5ml 3，5二硝基水杨酸试剂，沸水浴中煮沸5分钟，冷却定容至20ml ，测定540nm 波长下的OD值，查标准曲线得酶反应液中还原糖的浓度：Y（μg/ml ）=744.63*OD值
3、结果计算：
A=Y*V/(T*W*1000)（一般范围14~40mg/g/fw//h）
A：转化酶的活性(mg/gfw/h) Y：上式计算得酶反应液中还原糖的浓度(μg/ml)
V：酶反应液的总体积100ml
T：反应时间0.5h W：材料鲜重（fw）
一个处理3次重复所需试验台仪器：容量瓶(100ml)
刻度试管（20mlx4，1个对照），移液管（5mlx1，2mlx1，1 ml x1），研钵
试剂：10%(w/v)蔗糖溶液现用现配：称取10g加入用蒸馏水定容至100ml.。
葡萄糖标准液（500μg/ml）： 80度烘干葡萄糖0.05克蒸馏水定容100ml。
PH=5.4,5%的磷酸缓冲液: Na2HPO4·12.H2O0.448125g, NaH2PO4·2H2O 3.731125g,加水溶解定容至250ml..
（DNS）3，5二硝基水杨酸：将6.3g二硝基水杨酸和262 ml 2mol/l 或20.96gNaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚（即苯酚）和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。
预冷蒸馏水1000ml.
转化酶的测定
（一个处理，3次重复）
1g左右样品1份，剪碎
预冷的蒸馏水研磨成匀浆
蒸馏水定容至100ml
冰箱中浸提至少3小时
混均，倒入4个离心管，在 4000转离心15分钟
分别吸2ml上清液，放入4个试管
其中任选1个试管煮沸至少10分钟作对照，
此后（包括煮沸10分钟的对照试管）各试管加pH6.0的缓冲液5ml，10%蔗糖溶液1m
37度水浴中保温30分钟
取出后分别加入1.5ml 3，5二硝基水杨酸试剂，在沸水浴中加热5分钟取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温
加蒸馏水定容至20ml，
540nm比色（读数即为OD值）
转化酶的测定
10%(w/v)蔗糖溶液现用现配：称取10g加入用蒸馏水定容至100ml
葡萄糖标准液（500μg/ml）：葡萄糖标准液：80度烘干葡萄糖0.05克蒸馏水定容100ml。
PH=5.4,5%的磷酸缓冲液: Na2HPO4·12.H2O0.448125g, NaH2PO4·2H2O 3.731125g,加水溶解定容至250ml..
（DNS）3，5二硝基水杨酸：将6.3g二硝基水杨酸和262 ml 2mol/l 或20.96gNaOH溶液，加到500ml左右含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚（即苯酚）和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。
预冷蒸馏水1000ml.。