肠道菌群检测
肠道菌群的鉴定
鉴别肠道菌群的实验方案一、仪器与试剂玻片，接种环，生理盐水，酒精灯，结晶紫溶液，卢戈氏染液，石炭酸-复红溶液，沙黄液，光学显微镜，二甲基氨基苯甲醛试剂，葡萄糖蛋白胨水培养基，甲基红试剂（甲基红0.02g，95%酒精60mL，蒸馏水40mL），6%α-萘酚酒精溶液，40% KOH，铵盐作为唯一氮源，并利用枸橼酸盐作为唯一碳源的培养基，层析滤纸，正丁醇，甲酸，1.5%乳酸，1.5%乙酸溶液，3%溴甲酚蓝酒精溶液，层析缸，需氧血琼脂平板，厌氧血琼脂平板，七叶苷培养基，胆汁七叶苷培养基，65g/L NaCl血清肉汤，PYR试剂，DNA琼脂平板，1 mol/L盐酸，MRS培养基，X-Gal。
二、实验步骤：1.观察（1）形态、染色和结构中等大小，两端钝圆的革兰阴性杆菌，无芽胞，医学教育`网搜集整理多数为周鞭毛（除外志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC无鞭毛），大多有菌毛，少数有荚膜或包膜。
（2）培养特性需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好。
（3）生化反应特点生化反应活泼。
乳糖发酵试验：肠道非致病菌+，肠道致病菌-（除外变形杆菌）。
肠杆菌科定科试验主要项目是革兰阴性杆菌、触酶阳性，氧化酶阴性，硝酸盐还原试验阳性2.革兰染色法（1）涂片：取玻片在火焰上稍微加温，以清洁纱布擦净，放置桌上，左手握培养皿，右手持接种环，用无菌接种环取生理盐水一滴，置于载玻片的中央，再用接种环在火焰上灭菌，待冷却后，取培养细菌少许与盐水混匀，直接取1~2环菌液作涂片即可，涂片应厚薄均匀。
接种环采菌后，要通过火焰灭菌才能放下。
（2）干燥：目的是是菌体水分慢慢蒸发，固定菌形。
涂片最好在室温中自然干燥，必要是将标本面向上，小心断续在弱火高处略烘，以助水分蒸发；但切勿紧靠火焰，以致标本烤枯，不堪检视。
（3）固定：手执玻片一端，标本面向上，在火焰外层快速地来回通过三次，共2-3秒，以玻片反面触及皮肤不觉过烫为度。
冷却后，染色。
目的是杀死细菌，是菌体与玻片粘附较牢以及改变对染料的通透性，因活的细菌一般不能使许多染料进入细胞。
肠道菌群检测评价的指标
肠道菌群检测评价的指标
肠道菌群检测评价的指标可以分为以下几个方面：
1. 菌群种类和数量：通过检测肠道内不同种类的菌群数量，可以了解肠道菌群的组成情况。
常见的肠道菌群种类包括双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌等。
2. 菌群多样性：菌群多样性是指肠道内不同菌群种类的数量和比例。
菌群多样性高的人肠道健康状况通常较好，反之则容易出现肠道问题。
3. 菌群平衡：菌群平衡是指肠道内不同菌群种类的数量和比例是否处于一个相对稳定的状态。
菌群平衡失调可能会导致肠道问题，例如菌群失调性腹泻等。
4. 菌群与宿主关系：通过检测肠道菌群与宿主之间的相互作用关系，可以了解肠道菌群对宿主健康的影响。
例如，肠道菌群可以通过产生短链脂肪酸等物质来促进肠道健康。
5. 肠道菌群与疾病关系：通过检测肠道菌群与某些疾病之间的关系，可以了解肠道菌群对疾病的影响。
例如，肠道菌群失调与炎症性肠病等疾病有关。
6. 肠道菌群与药物代谢：肠道菌群与药物代谢有密切关系，可以通过检测肠道菌群对药物代谢的影响来评估肠道菌群的健康状况。
例如，肠道菌群可以影响药物的吸收、分布、代谢和排泄等过程。
综合上述指标，可以全面评估肠道菌群的健康状况，为肠道菌群相关疾病的预防和治疗提供参考依据。
肠道菌群实验方法
肠道菌群实验方法
肠道菌群的实验方法主要包括样本采集、DNA提取、16S rRNA 基因测序和数据分析等步骤。
以下是一般性的肠道菌群实验方法：
1.样本采集：从被测对象的粪便样本中采集肠道菌群样本。
一般建议使用无菌容器收集新鲜粪便样本，并尽快冷冻保存在-80°C 的冰箱中以防止细菌的进一步生长和代谢变化。
2.DNA提取：从收集的粪便样本中提取细菌DNA。
DNA提取的方法可以采用商业化的DNA提取试剂盒，也可以使用传统的CTAB法或其他常规DNA提取方法。
提取的DNA应该是高质量的，不含有明显的污染物。
3.16S rRNA基因测序：使用PCR扩增细菌16S rRNA基因的特定区域。
常用的16S rRNA基因区域包括V3-V4、V4-V5等，选择适当的区域取决于研究的具体目的。
扩增后的PCR产物可以通过凝胶电泳或其他方法进行质检，然后进行文库构建和高通量测序。
高通量测序可以使用Illumina MiSeq、Illumina HiSeq等平台进行。
4.数据分析：对测序得到的原始数据进行生物信息学分析。
包括序列质控、序列去嵌合、OTU聚类、物种注释、物种多样性分析、群落结构分析等。
常用的分析软件包括QIIME、Mothur、RDP等。
根据分析结果可以得到肠道菌群的组成、丰度、多样性等信息。
需要注意的是，肠道菌群实验涉及到多个环节，每个环节都需要严格控制实验条件以确保结果的可靠性。
此外，样本的收集、处理和测序过程中应尽可能避免污染，以免影响最终结果的准确性。
1 / 1。
大肠菌群检测操作规范培训
大肠菌群检测操作规范培训一、引言大肠菌群是指肠道内的一类细菌，包括大肠埃希菌、变形杆菌、埃斯特菌、摩根氏菌等，是人体健康的重要指标之一。
大肠菌群检测是一种常见的临床检验项目，可以用于判断肠道菌群的平衡状况，对于排查肠道疾病、调节肠道菌群平衡等具有重要的临床意义。
本文旨在对大肠菌群检测相关的操作规范进行培训，以确保检测结果的准确性和可靠性。
二、前期准备1. 实验室环境准备：（1）实验室应当保持清洁整洁，操作台面应当有足够的空间进行操作。
（2）实验室空气应当流通良好，保持适宜的温度和湿度。
（3）实验室内应当配备必要的实验仪器和设备，如PCR仪、离心机、冰箱、显微镜等。
（4）实验室内应当配备必要的耗材和试剂，如离心管、移液器、试剂盒等。
2. 人员准备：（1）参与大肠菌群检测的工作人员应当接受相关的培训，了解操作规范和实验流程。
（2）工作人员应当穿着符合卫生要求的工作服和手套，避免交叉感染。
三、操作规范培训1. 样本采集：（1）样本采集应当在临床医生指导下进行，严格按照采集标本的要求进行操作。
（2）采集的样本应当尽快送交实验室进行检测，避免样本长时间保存导致细菌数量的改变。
2. 样本处理：（1）收到样本后，应当立即进行处理，避免样本受到外界污染。
（2）样本应当在无菌条件下进行离心、抽提DNA等处理工作，避免外来细菌的干扰。
3. PCR扩增：（1）PCR扩增是大肠菌群检测的关键步骤，应当严格按照PCR扩增试剂盒说明书进行操作。
（2）PCR扩增反应体系应当准确配制，避免试剂用量不足或过量导致扩增失败或者非特异性扩增。
4. 扩增产物检测：（1）扩增产物检测应当使用准确的方法，如琼脂糖凝胶电泳或者实时荧光定量PCR。
（2）扩增产物的检测结果应当与正对照和负对照比较，确保结果的准确性。
5. 数据分析：（1）检测结果应当由专门的人员进行数据分析，避免结果的误解和错误解读。
（2）对于阳性结果的样本，应当进行多次重复检测以确认结果的可靠性。
肠道菌群功能及检测技术研究
肠道菌群功能及检测技术研究摘要:肠道菌群的功能主要反映在其生物屏障效应、营养效应、免疫效应等方面，在动物的胃肠道中存在着大量的微生物，经过长时间的进化，它们形成了一个动态的微生物系统，肠道菌群和有机体之间的相互作用对动物本身非常重要。
肠道菌群的检测方法是研究肠道菌群的关键和难点，目前的主要技术是分离培养、质谱测定、宏观基因组测序等，本文总结了目前肠道菌群功能的相关研究结果和方法，对几种检测技术进行了比较和分析，预测了未来可能的研究和发展方向。
关键词肠道菌群；功能；检测；技术；研究；发展方向肠道菌群即肠道中的正常微生物，是一个由近千个微生物复杂生态系统组成，在对肠道微生物的研究中，科学家们发现了大肠杆菌，并指出了它对消化的影响，一些学者认为,酸奶中富含的乳酸菌可在肠道菌群中发挥作用，并减少肠道中变质细菌的生长。
然而，微生物菌株和菌株的相对含量有显著差异，主要影响因素包括生活环境、年龄、生理状态等，此外，饮食也是造成上述差异的一个重要原因，且它相对容易改变和控制【1】。
一、肠道菌群的功能1）生物屏障作用肠道菌群的生物屏障作用即指拮抗外来致病菌的作用，肠道菌群具有保护身体和抗外来致病菌的作用，肠道菌群的这种功能被人为地分为生物屏障和化学屏障，生物屏障是指正常肠道菌群在肠道中的殖民化，对外来致病菌的殖民化和占据有影响，使它不能定居在寄主中进行生长和繁殖。
化学屏障意味着肠道菌群的代谢产物可以影响外来致病菌，或减少它们在肠道中的定落【2】。
1.营养作用肠道菌群的营养作用体现在许多方面，可消耗病原菌生长所需的各种营养，抑制外来病原菌的生长繁殖，增强宿主对外来病原菌的抵抗力，使宿主更能吸收和利用各种营养。
肠道内的正常微生物可合成人类生长和发育所必需的各种维生素，它们还可以利用蛋白质残基合成必需的氨基酸，并参与碳水化合物和蛋白质的代谢，还可以促进铁、镁和锌等矿物元素的吸收。
3）免疫作用肠道是动物与外界环境接触最多的器官之一，也是体内最大的免疫器官，如出现菌群失调，身体的免疫障碍和屏障功能会减弱，也证明肠道菌群与身体免疫的关系密切。
肠道菌群检测
人体70%的免疫细胞分布在肠道，95%以上 感染性疾病与消化道有关 其他免疫、解毒系统，如肝、血液、淋巴
系统等，都需要肠道提供营养来生存
肠道具备独特的吸收、排泄、免疫功能，肠道健康决定人体健康！
肠道的健康和老化的速度，取决于肠道菌群的平衡度！
肠道菌群与菌群失衡
人的胃肠道内寄居着种类达千种、数量达亿万级的微生物， 这些微生物共同构成肠道微生态 有益菌、有害菌、中性菌按一定的比例组合，互相制约、 依存，在质和量上形成生态平衡 有害菌占优势（小肠细菌过度生长） 菌群平衡被打破 有害菌产生吲哚、胺类、氨、硫化氢等毒素 肠粘膜通透性增加 毒素通过血液循环进入全身各处 形成消化系统炎症 增加肝脏负担，引发皮肤暗黄、口臭、便秘等 长期积累形成消化系统溃疡、息肉 损害心脏、肾脏等，引发糖尿病、血液病等 消化系统癌症，如：大肠癌
大便硬，伴有厌食偏食。
肠道菌群基因检测项目 （样本为粪便 定量）
样本为粪便 检测原理
肠道菌群基因检测
提取粪便中的DNA，使用国际标准illumina的MiSeq和Hiseq测序系统 对样本DNA中细菌的16S核糖体RNA基因进行测序 16S rDNA是细菌基因组上编码核糖体小亚基中16S rRNA的DNA序列，具有高度 进化保守性和特异性，存在于所有细菌染色体基因中，约1.5Kb左右，既能体 现不同菌属之间的差异，又能利用测序技术较容易地得到其序列。
按要求吹1号采集袋
勿倒吸气
立刻
服用底物乳果糖
间隔15/30分钟
按要求吹2号采集袋
间隔15/30分钟
检测用时< = 5分钟
一口气吹到底
勿换气
按要求吹3号采集袋
间隔15/30分钟
<=18岁间隔15分钟
肠道菌群采集方法
肠道菌群采集方法
1.准备无菌容器：
-使用已经过严格消毒的塑料容器或专用的肠道菌群采集装置。
2.收集粪便样本：
-在排便前，准备好一次性无菌手套、无菌勺或便盆等工具。
-将容器置于马桶上方或者使用便携式的采集设备（如有电子便盆）以尽量减少环境和其他杂质污染。
-在排便过程中，使用无菌勺或便盆采集新鲜粪便样本，通常要求采集足够量的粪便（约几克到几十克，视具体情况而定）。
3.封装和保存：
-将采集到的粪便样本迅速放入无菌容器内，并确保容器密封良好，避免内容物泄露和外部环境对其造成污染。
-如需即时冷冻保存，应当尽快转移至-20℃至-80℃的超低温冰箱中。
-根据不同的实验目的和后续检测要求，可能还需要加入稳定剂或者缓冲液，以保持菌群活性或DNA稳定性。
4.样本运输：
-对于长途运输或储存较长时间的样本，可能需要使用专门设计的采样管，里面包含了能够稳定菌群DNA或RNA的裂解液和稳定液，确保在常温条件下也能较好地保留样本的微生物信息。
5.注意事项：
-在整个采集过程中，遵循无菌操作原则，避免手部接触粪便。
-记录采集时间、样本来源等信息，以方便后续数据统计和分析。
肠道菌群检测
肠道菌群检测简介肠道菌群是人体肠道内存在的一种微生物生态系统，其中包含各种细菌、真菌和病毒等微生物。
肠道菌群的平衡与人体健康密切相关，它在维持肠道功能、消化和吸收营养物质、调节免疫系统等方面发挥着重要的作用。
肠道菌群检测可以通过分析肠道中的微生物组成和数量来评估肠道菌群的健康状况，并为调整菌群平衡提供指导。
肠道菌群检测的方法1. 16S rRNA测序技术16S rRNA测序技术是一种用于鉴定细菌的方法，通过对细菌16S rRNA基因进行测序，可以确定细菌属种的多样性和相对丰度。
这种技术可以快速、高效地分析肠道菌群的组成，并提供宏观上的菌群结构信息。
2. 全基因组测序技术全基因组测序技术可以对肠道微生物进行更为详细的分析。
它不仅可以鉴定细菌种类和相对丰度，还可以预测微生物功能和代谢产物。
全基因组测序技术可以提供更全面、准确的菌群信息，并帮助找出不同菌群之间的相互作用。
3. 肠道菌群代谢产物分析肠道菌群代谢产物是肠道菌群与宿主相互作用的结果，对人体健康起着重要作用。
通过分析肠道菌群代谢产物，可以更直接地评估肠道菌群的功能，并帮助了解菌群与宿主之间的相互作用机制。
肠道菌群检测的意义1. 健康评估和疾病风险预测肠道菌群的失衡与很多疾病的发生和发展相关，如肠炎、肠易激综合征、自身免疫性疾病等。
通过肠道菌群检测，可以了解个体的肠道菌群健康状况，并预测患某些疾病的风险。
2. 调整肠道菌群平衡肠道菌群的失调可能导致多种健康问题，而调整肠道菌群平衡则可以改善健康状况。
通过肠道菌群检测，可以针对个体的具体情况制定相应的干预措施，如饮食改变、益生菌补充等，以优化肠道菌群的健康状态。
3. 个性化医疗和药物治疗肠道菌群的状态会对个体对药物的反应产生影响。
通过肠道菌群检测，可以了解个体对药物的代谢情况，从而指导个性化的药物治疗。
肠道菌群检测的注意事项1. 样本采集肠道菌群检测通常需要获取个体的粪便样本。
为了确保样本准确和可靠，应在样本收集前注意以下事项：•避免使用含有抗生素的药物一周内。
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应用案例
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男、27岁、身高183cm、体重只有61kg，想增加体重，尝 试了我们益生菌1号＋益生元，1号益生菌与益生元晚餐前 服用，一天一次，每次一条，正常饮食，一个月从61kg长 到67kg，调理了肠胃，吸收变强，体重自然上升。
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减肥
2号+益生元搭配使用：益生元晚餐餐前服用，一天一次， 一次一袋。2号睡前服用，一天一次，一次一袋，养成晨起 排便的规律。可以正常食用蔬果、肉类，保持适当的运动， 禁食高碳水化合物类，瘦身效果明显。
云南省第一人民医院 云南省
昆明医科大附属一院
福建省 山西省
漳州175 山西省儿童医院
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健康人群 健康管理
高危疾病 预警
查找 其他疾病
病因
评价 消化系统
亚健康
诊断 不明原因 消化系统
症状
查找 消化系统 慢性疾病
病因
器官：胃、小肠、大肠的全消化道 疾病：填补消化系统功能性疾病的诊断空白 菌群：弥补评价单一菌种感染的局限性
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乐观拾养益生元——肠动力
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幽门螺旋杆菌、艰难梭菌等
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结直肠癌、心脑血管疾病、Ⅱ型糖尿病等 ✓ 可有效评估6个月内的慢性疾病状态和发生风险
主要营养合成、代谢能力 呋喃类、喹诺酮类、大环内酯类等
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肠道菌群基因检测优势
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6-15种慢性疾病
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年龄：儿童、孕妇、青年、成年、老年
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阴性
保持健康规律的生活习 惯，保持健康饮食，坚 持锻炼，建议每隔12 个月复检一次
干预手段
轻度阳性
建议服用益生菌、益生 菌+益生元来改善症状
中度阳性
重度阳性
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临床推荐：抗生素+益 生菌+益生元+复检 （8-12周）
人体70%的免疫细胞分布在肠道，95%以上 感染性疾病与消化道有关 其他免疫、解毒系统，如肝、血液、淋巴 系统等，都需要肠道提供营养来生存
肠道具备独特的吸收、排泄、免疫功能，肠道健康决定人体健康！ 肠道的健康和老化的速度，取决于肠道菌群的平衡度！
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肠道菌群与菌群失衡
人的胃肠道内寄居着种类达千种、数量达亿万级的微生物， 这些微生物共同构成肠道微生态 有益菌、有害菌、中性菌按一定的比例组合，互相制约、 依存，在质和量上形成生态平衡
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医院
301医院
北京军区总医院
北京海淀医院 北京积水潭医院
中国人民解放军海军总医院
北京宣武医院
天津医科大学总医院 河北省中医院
南京军区总医院 苏州儿童医院
浙江省中医院、邵逸夫医院 南方医科大学南方医院
地区 河南省
医院
郑大一附院 郑大二附院 郑州人民医院 河南濮阳油田医院 河南泰康人民医院
上海 上海交通大学生命科学院 湖南省 中南大学湘雅医院
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注意事项
顾客来门店无便意，可以先指导 客户填写调查问卷和扫码绑定样 品编号，然后将盒子交给客户让 客户回家取样，再交还给门店
随排便随取样，无需空 腹、无需晨便
采样前先绑定检测编号
避免污染，不要取已掉 入马桶水中的粪便，不 要直接用无菌棉签在肛 门处取粪便，不要沾染 尿液
样本在保存液中可以常温 放置3个月，实验室收到样 本后会在12个工作日内出 具报告
有害菌占优势（小肠细菌过度生长） 菌群平衡被打破
有害菌产生吲哚、胺类、氨、硫化氢等毒素
肠粘膜通透性增加 毒素通过血液循环进入全身各处
形成消化系统炎症 增加肝脏负担，引发皮肤暗黄、口臭、便秘等
长期积累形成消化系统溃疡、息肉 损害心脏、肾脏等，引发糖尿病、血液病等
消化系统癌症，如：大肠癌
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生活常见症状
采集前准备
空腹8小时 禁酒12小时
按要求吹1号采集袋 立刻
服用底物乳果糖
间隔15/30分钟
按要求吹2号采集袋
间隔15/30分钟
按要求吹3号采集袋
间寄
36小时上传报告系统
精准干预
2-3个月复检
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检测用时< = 5分钟
<=18岁间隔15分钟 > 18岁间隔30分钟
美国再保险集团
整理出《中国城市癌症最新数据》显示：消化道癌症 是我国居民发病和死亡的主要负担！
公民肠道健康大调查
14581名受访者，94.81%的人表示有肠道健 康异常的表现。
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检测指标 氢气、甲烷、二氧化碳，检测精度ppm(百万分之一) 临床诊断 小肠细菌过度生长（SIBO）
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采集方法
勿倒吸气 一口气吹到底 勿换气
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案例分析
干预方案——
干预方案——
干预方案——
服用乐观拾养1号，3次/
日，1包/次，持续服用半
个月，症状未有明显改善；
遂增大剂量，3次/日，2
服用者——
包/次，半个月后水样便 消失，大便恢复正常条状，
男，47岁，肠炎多年。
其他症状缓解，服用者自
症状：腹胀、大便不成形、 我感觉良好，精神足，不
水样便、排便不尽感。
优势
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优势
国际上唯一采用Y型采气管，来区分死腔气体和肺泡气体 同时检测甲烷、氢气和二氧化碳，避免误差
P.S.氢呼气检测敏感性71.4%、特异性88.2%、准确性80.2%
无创无痛无放射性
吹气即可获得诊断，无创、无痛 底物属益生元食品，无放射性，儿童、孕妇也可无忧检测
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优势
地区
北京
天津 河北省 江苏省 浙江省 广东省
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顾客来门店到责任护士这领取采样 盒
打印三个检测ID（盒子、调查表、 封口袋）
客户填写调查问卷，扫码 绑定样品编号并开始取样
取完样后将保存液放入封 口袋同调查表一同放在盒 子里面交给责任护士
责任护士找到相应的负责 人将样本寄送到我们公司
寄送地址：浙江省杭州市余杭 区文一西路1508号创鑫时代广 场3栋A座11层
早餐前服用乐观拾养 1号，1次/日，1包/ 次，持续服用3天， 腹泻症状缓解，后续 调理1周，已完全恢 复正常。
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案例分析
干预方案——
服用者——
女，两岁半，3天排便一次， 大便硬，伴有厌食偏食。
服用乐观拾养2号，1次/日，半包/次， 持续服用3天，大便恢复正常，一天 排便一次，条状，偏软，停止服用2 号，改为乐观拾养3号1次/日，1包/ 次，乐观益生元1次/日，1包/次，宝 宝大便维持正常，且胃口增加，之前 追着喂饭还排斥，现在开始主动要饭 吃。
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便秘
腹泻
腹痛
腹胀
打嗝
烧心
消化不良
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肥胖
国内市场调查情况
3 2 1
生命时报
我国有3000多万人承受着慢性、顽固性肠道疾病的困 扰；每年有超过10亿人次出现腹泻或便秘症状
中国网络健康白皮书
中国肠胃病患者就有3.2亿，中老年人占70%以上，消 化性溃疡发病率10%，慢性胃炎发病率30%，另外66% 的人感染幽门螺旋杆菌
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乐观拾养益生菌系列产品优势
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4 乐观拾养案例分析
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应用案例
小孩湿疹
3号益生菌餐前服用，一天一次，一次一袋。一星期内湿疹 逐渐消失，湿疹完全消失后可持续吃益生菌，增强免疫力， 营养吸收能力等
女 3岁，脸上长了大片湿疹，吃了乐观拾 养3号益生菌一疗程，湿疹全好，上图为 湿疹好后，孩子父母咨询消息