关于新病毒鉴定的研究进展

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病毒生物学研究中的新进展

病毒生物学研究中的新进展

病毒生物学研究中的新进展病毒是由核酸和蛋白质组成的微生物,目前已知的病毒种类超过5000种。

它们既可以污染动植物,也可以影响人类健康,因此病毒研究一直是人们关注的焦点。

研究病毒有助于预防和治疗疾病,也可以为人类探索新型生命体系提供帮助。

随着技术的快速发展,病毒生物学研究也取得了新的进展。

1.新的病毒发现虽然已经有很多病毒被已知,但随着研究的深入,还有很多未知的病毒在不断被发现。

近年来,科学家们利用基因测序等技术,在水土、动物和人体等多个领域发现了新的病毒。

例如,2019年在中国湖北发现的新型冠状病毒(COVID-19)的发现,引起了全球对病毒的关注和研究。

2.病毒的进化研究病毒也有其自身的进化规律,研究病毒的进化可以帮助人们了解其分布、演化和适应性等特征。

随着DNA和RNA测序技术的不断完善,科学家们可以通过测定病毒的基因组序列比较病毒的演化历程和关系。

目前,病毒分类标准也在不断完善,使得病毒研究更加精确和规范。

3.病毒的传播途径研究了解病毒的传播途径对于预防和控制疫情十分重要。

在病毒研究中,科学家们继续探索各种传播途径,例如气溶胶、食品、母婴传播等。

对于病毒的传播途径的深入了解,可以帮助制定有效的防控措施,预防疫情的产生和流行。

4.病毒与宿主相互作用研究病毒在宿主中生存和复制,必须与宿主细胞发生相互作用。

因此,病毒研究也需要研究病毒与宿主的相互作用规律。

从宿主免疫系统、细胞信号转导等角度出发,分析病毒与宿主交互的过程,有助于理解病毒感染宿主的机制,并为疫苗设计和抗病毒药物开发提供启示。

5.病毒抗药性的研究与很多细菌不同,病毒存在很强的变异和适应性,这使得抗病毒药物的研发和使用越来越具有挑战性。

因此,在病毒研究中,一直致力于探索病毒抗药性的机制。

通过分析病毒的遗传变异、药物靶点的结构和功能等方面,研究人员可以研发出更加稳定和具有广谱性的抗病毒药物,达到更好的治疗效果。

综上所述,随着科技的不断进步,病毒生物学研究已经迎来了新的进展。

新型冠状病毒肺炎患者实验室检测指标研究进展

新型冠状病毒肺炎患者实验室检测指标研究进展

预防医学论坛2020年12月第26卷第12期Prev Med Trib, Vol. 26,No. 12,Dec. 2020• 957 ••综述•新型冠状病毒肺炎患者实验室检测指标研究进展*程惠玲1,房元勋2,张丽(通讯作者Y1.山东第一医科大学第一附属医院/山东省千佛山医院,山东济南250014;2.山东农业工程学院,山东济南250100摘要:新型冠状病毒肺炎(COVICM9)患者实验室检测指标在C C)Vir>19诊断及治疗有重要作用。

实时荧光RT-PCR病毒核酸检测及基因测序为疑似病例确诊的病原学证据;病毒特异性Ig M和Ig G抗体联合及动态监测,为病毒核酸检测假阴性结果的有效互补。

感染从普通型进展为重型、危重型过程中,患者出现肝功、心脏功能及肾功的异常比例及程度逐渐增高,如谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶,超敏肌钙蛋白I、尿素及肌酐进行性升高、低白蛋白血症等。

重症感染者伴随炎症加重,甚至“炎症风暴”发生,外周血中性粒细胞计数、中性粒细胞与淋巴细胞比值增加,单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的百分比急剧下降;淋巴细胞数量进行性减少但过度激活;同时“炎症风暴”相关细胞/趋化因子增高,如:^"-2、IL-6、IL-7、IL-10、G■CSF、IP10、M CPl、M丨P lA和TNF-a进行性升高;其他炎症指标如C反应蛋白、血清淀粉样蛋白A、铁蛋白和降钙素原,随着病情进展呈逐步升高趋势。

重症感染及炎症,触发凝血功能紊乱,血浆二聚体进行性升高是患者重症/危重症预警信号,大于1Hg/m l是住院患者死亡独立危险因素。

COVII>19患者,特别是年长,或伴有高血压、糖尿病及心血管疾病患者,宜动态监测,提前预防,降低重症发生。

关键词:严重急性呼吸综合征冠状病毒;新型冠状病毒肺炎;实验室检测中图分类号:R511 文献标识码:A文章编号:1672 —9153(2020)12 —0957 —05新型冠状病毒肺炎(Coronavirus virus disease 2019,COVII>19)由严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2, SARS-CoV-2)感染引发,SARS-CoV-2传染性强,传 播快,疫情对人类生命健康构成了重大威胁。

关于新型冠状病毒的研究进展

关于新型冠状病毒的研究进展

关于新型冠状病毒的研究进展自2019年12月底新冠肺炎疫情爆发以来,全球科学家们一直在进行大规模的病毒研究,以便更好地了解病毒的特性和传播方式,开发有效的疫苗和治疗方法。

近来,关于新型冠状病毒的研究取得了许多成果,让我们一起来了解一下吧。

病毒结构和生物学特性新型冠状病毒属于正黏病毒科,它是一种基因组为单股正链RNA的病毒。

病毒包裹着蛋白质外壳,外壳透过纤维状突起与细胞表面结合。

新冠病毒的RNA基因组长度为29.9 kb,编码了4个结构蛋白和16个非结构蛋白。

新冠病毒感染的主要靶细胞是人体上呼吸道上皮细胞。

病毒通过ACE2(肺泡上皮细胞特异性受体酶),进入人体细胞,并迅速繁殖和复制自身。

病毒传播途径和传染性新冠病毒可以通过空气飞沫和结膜接触传播。

呼吸道分泌物中的病毒含量与感染者的严重程度有关。

感染初期便有病毒分泌,最高峰为发病时期。

感染者病程中,病毒分泌时间长短不同。

轻型病例分泌时间一般2-3周,重型病例可超过4周。

根据之前的研究,病毒的潜伏期为2至14天之间,潜伏期结束后可能出现发烧、喘息、呼吸急促、咳嗽等症状。

因为症状轻微或没有症状,一些患者患病的情况可能会被忽略,从而导致病毒的广泛传播。

病毒变异和基因突变近来,人们开始关注病毒变异。

研究人员发现,新冠病毒在一定程度上发生了变异,这可能会影响病毒的传播能力、感染力和治疗效果。

然而,目前还没有发现病毒变异对病毒的治疗和预防产生显著影响。

此外,新冠病毒RNA存在突变现象,这种基因突变可能会影响其传播及人群之间感染力的差别性,但目前还没有确定和讨论基因突变和病毒的传播能力及感染力之间的关系。

病毒疫苗和抗体治疗由于新冠病毒的危害性和迅速传播的特点,全球科学家们正在积极寻找有效的治疗方法。

其中,疫苗研究受到广泛关注。

目前,多家公司正在开发和测试不同类型的新冠病毒疫苗,其中一些已通过临床试验的初步测试,结果显示一定的效果。

至于疫苗的批准和发布时间,则需要由相关机构进行评估和批准。

病毒学研究进展及应用

病毒学研究进展及应用

病毒学研究进展及应用自从病毒诞生之后,它就成为了人类不断研究的重点,近年来,随着科技的不断发展,病毒学研究也日新月异,得到了一系列重要的进展。

本文将从四个方面来探讨这些进展以及对人类生活的影响。

一、病毒学研究的创新方法针对以往病毒研究方法的一些局限性,科学家们不断探索创新方法,从而更好地研究病毒。

其中,最重要的方法之一就是新兴高通量测序技术。

该技术可以在较短的时间内快速测定病毒的基因序列,并帮助科学家研究病毒的传播方式、适应性等方面,为疾病控制和管理提供了科学依据。

此外,新兴纳米技术也为病毒研究提供了新的思路,例如可以使用纳米材料识别、追踪和杀死病毒,能够更快速、更安全、更有效地防治疾病。

二、病毒基因组学的发展病毒基因组学是近年来研究病毒的重要途径之一,也是病毒学研究的基础。

病毒基因组学通过深入研究病毒基因组特征和与寄主的相互作用,能够为病毒防治提供有效的理论和科学基础。

近年来,科学家们已经识别出了许多新型病毒,例如经典的SARS和MERS病毒,并对这些病毒进行了全面研究,使得人们对这些传染病有了更深入的认识。

病毒基因组学的发展也带来了更准确的病原体诊断技术。

通过对比病原体基因组序列和样本基因组序列,可以快速检测出病原体,有助于将其控制在最早的阶段,以避免疫情的扩散。

三、病毒学在疾病治疗中的应用近年来,病毒在疾病治疗中的应用获得了越来越多的关注。

病毒治疗能够根据病原体的特点、致病机制等方面,针对性地进行治疗,给患者带来更加精确的治疗方案,同时不必担心药物对人体的毒副作用。

例如,病毒治疗已被广泛应用于癌症治疗领域中,科学家们对一些具有靶向特异性的病毒进行了研究,能够直接攻击肿瘤细胞,帮助患者抑制肿瘤细胞的增殖。

此外,病毒治疗还被广泛地应用于免疫疗法领域,有助于提高人体免疫力,以实现更好的治疗效果。

四、病毒学对疫苗研究的贡献疫苗是对付病毒的最有效途径之一,而病毒学对疫苗研究的贡献是不可忽视的。

随着病毒基因组学和疫苗技术的不断发展,目前已经成功开发出了一系列针对病毒的新型疫苗。

新发传染病鉴定技术研究进展

新发传染病鉴定技术研究进展

-专家论坛-新发传染病鉴定技术研究进展罗正汉,汪春晖,张锦海东部战区疾病预防控制中心传染病防控一科,南京210002摘要:近年来,人与野生动物日益频繁的接触,再加上病原微生物本身不断的变异和进化,导致新发传染病(emerging infectious diseases,EIDs)的发生呈持续增长态势,暴发频率不断增加,给全球公共卫生带来极大威胁与挑战。

在下一次新发传染病暴发之际,希望能通过合理运用相关技术方法准确快速回答“病原体是什么”、“病原体来自哪”两大问题,从而及时有效预警并从源头控制新发传染病的大流行。

对当前新发传染病病原体的鉴定技术进行归纳介绍,并探讨各种技术的优劣势以及各自应用领域。

关键词:新发传染病;病原体鉴定技术;技术优劣势中图分类号:R183文献标识码:A文章编号:1006-2483(2021)02-0001-06DOI:10.3969/j.issn.1006-2483.2021.02.001Research progress on identification technology of emerginginfectious diseasesLUO Zhenghan,WANG Chunhui,ZHANG JinhaiCenter for Disease Control and Prevention,,Eastern,Theater Command,Nanjing210002,ChinaCorresponding author:ZHANG Jinhai,Email:ahoi@Abstract:In recent years,the increasingly frequent contact between humans and wild animals,coupled with the continuous mutation and evolution of pathogenic microorganisms,has led to a continuous increase and frequent outbreaks in emerging infectious diseases(EIDs),which has posed big threats and challenges to the global public health.On the occasion of the next outbreak of EIDs,it is hoped that the two major questions of"what is the pathogen"and"where does the pathogen come from"can be answered accurately and quickly through the rational use of relevant technical methods,so as to timely and effectively warn and control the outbreak of EIDs from the source.This article summarizes the pathogen identification and traceability analysis techniques of current emerging infectious diseases,and discusses the advantages and disadvantages of various technologies and their respective application fields.Keywords:emerging infectious diseases(EIDs);pathogen identification technology;cons and pros of technology新冠肺炎作为新发传染病,是全球公共卫生面临的重大挑战,而且绝对不是人类面对的最后一次疫情。

新型冠状病毒检测方法的研究进展

新型冠状病毒检测方法的研究进展

新型冠状病毒检测方法的研究进展一、本文概述新型冠状病毒(COVID-19)自2019年底爆发以来,对全球公共卫生带来了前所未有的挑战。

疫情的快速传播和广泛影响,使得对新型冠状病毒的有效检测方法的需求变得极为迫切。

本文旨在概述新型冠状病毒检测方法的研究进展,包括传统的实验室检测方法、快速现场检测方法以及新兴的生物技术检测方法等。

我们将重点讨论这些方法的原理、优缺点以及在疫情防控中的应用前景。

通过深入了解这些检测方法的研究进展,我们期望能够为疫情防控提供更加准确、快速和有效的手段,为保护人类健康做出贡献。

二、传统检测方法在新型冠状病毒检测领域,传统检测方法主要包括病毒分离培养、血清学检测以及基于PCR的核酸检测等。

这些方法各有特点,并在疫情初期对病毒的研究和诊断中发挥了重要作用。

病毒分离培养是检测新型冠状病毒的经典方法。

通过采集疑似感染者的呼吸道样本,如咽拭子、痰液等,将其接种在特定的细胞培养皿中,观察病毒的生长和复制情况。

这种方法可以直观地检测到病毒的存在,但其操作复杂,耗时较长,且对实验条件要求较高,因此在实际应用中受到一定限制。

血清学检测是通过检测患者血清中特异性抗体来诊断新型冠状病毒感染的方法。

抗体通常在病毒感染后一段时间内产生,因此该方法多用于回顾性诊断和群体筛查。

常见的血清学检测包括免疫荧光、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。

这类方法具有较高的灵敏度和特异性,但抗体的产生需要一定时间,对于早期感染者的诊断存在局限性。

基于PCR的核酸检测是目前应用最广泛的新型冠状病毒检测方法之一。

PCR技术通过特异性引物扩增病毒核酸片段,从而实现对病毒的快速、准确检测。

该方法具有较高的灵敏度和特异性,且检测时间短,适用于大规模筛查和早期诊断。

然而,PCR检测需要专业的实验室设备和操作人员,且存在假阳性和假阴性的可能。

尽管传统检测方法在新型冠状病毒检测中发挥了重要作用,但由于其各自的局限性,如操作复杂、耗时较长、灵敏度不高等问题,难以满足快速、准确、高效的检测需求。

新型冠状病毒的研究进展及病理特征

新型冠状病毒的研究进展及病理特征

新型冠状病毒的研究进展及病理特征冠状病毒是自然界广泛存在的一种病毒,是单股正链RNA病毒。

目前已知感染人的冠状病毒有7种,分别是HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV(引发重症急性呼吸综合征)和MERS-CoV(引发中东呼吸综合征)、严重呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2,引发新型冠状病毒肺炎COVID-19)。

冠状病毒感染曾引起SARS和MERS两次瘟疫爆发,此次病毒是以前从未在人体中发现的新型冠状病毒毒株。

1.新型冠状病毒的命名、生物学特征SARS-CoV-2是一种具有强烈传染性的新型冠状病毒,2019年12月在中国武汉出现,其传染性高且广泛,通过基因测序等手段在感染者体内发现该病毒,2020 年 1 月 12 日,世界卫生组织(WHO)把该病毒命名为“2019 新型冠状病毒”(2019-nCoV),2020年2 月 8 日,我国卫健委将该病毒引起的肺炎命名为“新型冠状病毒肺炎”,2月11 日WHO将该病毒性肺炎命名为 COVID-19(Corona Virus Disease 2019),此时,国际病毒学分类委员会( ICTV)的冠状病毒研究小组将该病毒命名为“严重急性呼吸综合征冠状病毒-2”(SARS -CoV -2)。

冠状病毒最初是从鸡身上分离,病毒颗粒直径约80 ~ 120 nm,呈椭圆形或球形,有包膜,包膜上有棘突,不同种类的冠状病毒棘突不同,病毒表面的刺突使病毒看似日冕[1]。

冠状病毒基因组长度为 27 ~ 32 kb,5' 端有甲基化帽状结构,3' 端有poly(A)尾,是基因组最大的RNA病毒。

2.新型冠状病毒的检测新型冠状病毒可进行核酸检测、抗原抗体检测、病毒分离等,其中核酸检测应用最广泛。

(1)核酸检测:通过对患者体液进行检测,包括血液、痰液等标本进行病毒核酸检测[2]。

但有部分感染者检测结果可出现假阴性,需要重复检测。

植物病毒的分析鉴定研究

植物病毒的分析鉴定研究

植物病毒的分析鉴定研究植物病毒是影响植物健康、生长和产量的主要因素之一,因此对植物病毒的分析鉴定研究具有重要的意义。

本文将从植物病毒的基础知识入手,探讨植物病毒的分析鉴定技术及其研究进展。

一、植物病毒基础知识植物病毒是一类在植物体内繁殖和引起病害的微生物,其主要通过昆虫、螨、人为和自然接触等途径传播。

植物病毒对植物的感染会导致植物体内产生异常反应,破坏植物生长和发育,致使植物产量下降,品质降低甚至死亡。

植物病毒的基因组包括RNA和DNA两种类型,大多数植物病毒仅含单一的RNA或DNA分子。

这些分子具有较小的大小和简单的结构,通常包括若干个基因区域,分别编码植物病毒所需的酶、蛋白和其他重要的蛋白。

二、植物病毒分析鉴定技术1. ELISA技术ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种简单、快速、特异性高的检测技术,在植物病毒的诊断和鉴定上具有重要的应用价值。

该技术通过特异性抗体与植物病毒抗原结合并检测出来。

ELISA技术的优势在于能够快速且准确地鉴定百余种植物病毒,并且可以实现高通量检测。

2. PCR技术PCR(聚合酶链式反应)是一种灵敏、专一性高的分子生物学技术,主要用于检测和分离植物病毒DNA或RNA片段,实现植物病毒的鉴定和分析。

PCR技术具有快速、准确、高灵敏度和高特异性的特点,被广泛用于植物病毒的检测和分析上。

3. RT-PCR技术RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)是基于PCR技术原理的一种逆转录方法,用于检测植物病毒的RNA序列,并将其转录为对应的DNA序列,进而进行PCR检测。

RT-PCR技术具有快速、灵敏、特异性高等优点,广泛应用于快速检测和鉴定植物病毒。

三、植物病毒分析鉴定研究进展植物病毒分析鉴定一直是植物病理学领域的研究热点。

目前,随着现代分子技术的不断推进,已经有了许多新的植物病毒鉴定和检测方法。

1. 新型分析方法近年来,针对植物病毒的检测和鉴定已经出现了许多新的分析方法。

比如固相穹顶射流质谱法、电感耦合等离子体质谱法、石墨烯纳米传感器等。

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关于新病毒鉴定的研究进展The progress in the research about the identification of novel virus【摘要】:随着新型病毒不断被发现,新病毒的鉴定对于治疗、预防和控制病毒感染起着重要的作用。

本综述首先从形态学的角度阐述如何鉴定新病毒,包括了病毒的分离和培养,以及电子显微镜观察。

但仅仅形态学上的鉴定是不足够的,需要结合分子生物学的手段。

目前最常用分子生物学的手段是构建系统进化树,这不仅可以了解病毒的核酸和氨基酸序列,而且可以阐明病毒的起源及其变异。

【关键词】:新病毒,鉴定,形态学,分子生物学Abstract: Along with continuous discovery of novel virus, how to efficiently identify them plays an essential role in the treatment, prevention and control of virus infection. Firstly, this review will describe how to identify novel virus morphologically, includingthe isolation and culture of virus as well as observation throughtransmission electron microscopy. However, evidence from morphology is not enough for virus identification. Therefore, it is necessary to combine it with molecular biological means. So far, Phylogenetic trees has become the most popular molecular biological way used to virus identification, which can illustrate the sequence of nucleic acid and amino acid as well as the origin and gene variation of virus.Key word: novel virus, identification, morphology, molecular biology近年来,随着人类活动范围的增大以及交流的增多,陆续出现人类感染新型病毒的情况,由于人类对新型病毒缺乏免疫力,其感染会对人类健康造成很大的威胁,严重者甚至威胁患者生命。

因此,快速准确鉴定新型病毒不仅有利于临床上确定有效的治疗方法,更有助于公共卫生机构采取有效措施切断传播途径,降低其对人群的威胁。

本综述将从形态学和分子生物学这两个方面展开论述,讨论关于新病毒鉴定的研究进展。

1.形态学首先我们要明确新型病毒的感染病例,病毒感染常见的症状是发热,中性粒细胞减少,淋巴细胞升高,病情严重者会出现高热,严重的身体不适,恶心,呕吐,腹泻,明显的出血倾向,白细胞减少,严重的血小板减少,凝血功能异常等[1, 2]。

但由于感染的症状不具有特异性,需要相应的辅助检查,当辅助检查无法确定病原体时,我们就要警惕是否是新型病毒感染,应马上开展以下措施来明确病原体。

1.1分离病毒首先收集患者标本,如血清,组织标本,鼻咽拭子,尿液,粪便,痰液等,然后按照相应的方法处理标本,标本采集后应立即冷冻保存并迅速送到实验室。

最后向标本加入1000μ/mL青霉素,1000μ/mL链霉素,2000r/min离心30min,取上清作病毒的分离培养[3]。

1.2病毒培养1.2.1鸡胚培养法鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的动物病毒的培养方法,此方法可用于多种病毒的分离、培养,毒力的滴定,中和试验以及抗原和疫苗的制备等。

病毒分离一般使用10天大小的无菌鸡胚[4]。

鸡胚培养的技术比组织培养容易成功,也比接种动物容易,无饲养管理及隔离等特殊要求,而且鸡胚一般无病毒隐性感染,同时它的敏感范围很广,多种病毒均能适应,因此,鸡胚培养法是常用的一种培养动物病毒的方法。

1.2.2乳鼠接种法选择健康的3-5日龄乳鼠,在无菌条件下,用0.25ml 的微量注射器脑内接种,每份样品接种一窝(至少5只),每只乳鼠脑内接种0.02ml,或同时腹腔接种0.03ml/只。

每日观察小鼠的发病情况, 一般观察7-14天。

观察期内若未出现乳鼠发病,将乳鼠解剖取脑、肺组织,研磨成10%的组织悬液,接种乳鼠,连续盲传3代[5]。

1.2.3细胞培养法将处理好的标本接种于长成单层细胞上,37℃吸附1h,然后吸出标本液,加含有2% 小牛血清的细胞维持液,置37℃CO2培养箱培养。

每天观察细胞变化,连续观察10天。

若不出现细胞圆缩,脱落等细胞病变现象,则进行盲传, 连续盲传3代,若连续盲传3代后无病变则弃去,重新培养[3, 5]。

常用的病毒培养细胞种类有:Vero, Vero E6,MDCK,Hela,Hep-2,HEL, DH82, L929,HP和蜱细胞系ISE6等。

病毒可在细胞上生长并使细胞出现明显病变,说明这些细胞是该病毒的允许性细胞,不能支持病毒增殖的是非允许性细胞[3]。

2003年中国爆发SARS(SevereAcuteRespiratorySyndromes,SARS)疫情,该病是由一种新型冠状病毒引起的,患者标本的SARS 冠状病毒分离均在P3级生物安全实验室中进行,该病毒的允许性细胞为V ero、RD、VeroE6、Hep-2细胞,待其长成单层后,接种患者病毒标本1 mL,每天观察细胞病变。

培养数天后,当细胞病变达+++~++++,收取细胞液,置-80℃保存[6]。

1.3电子显微镜观察电子显微镜,又称投射电镜,可明确病毒颗粒在细胞内的定位,病毒的形状,直径,胞膜的结构等。

1.3.1电镜负染色检查电镜负染色检查可以观察病毒颗粒,来确定其形态、直径以及其胞膜结构。

收集分离病毒感染的细胞培养液,以6.1%、pH7.2的戊二醛固定液与培养液按1: 1比例混合固定后,以3%磷钨酸溶液负染色,透射电镜观察[5]。

Yu XJ等利用电镜负染观察在中国新发现的本雅病毒[2]。

通过观察病毒的形态特征,可以对其种属进行推断,例如在电镜下观察到SARS 的病原体是冠状病毒,提示可以从冠状病毒着手开展对SARS病毒的研究。

1.3.2 超薄切片电镜观察超薄切片电镜观察可以了解病毒在细胞的定位以及感染细胞内细胞器的形态变化。

取感染细胞,用3.1%、pH7.2戊二醛固定,1/15mol/L,pH7.2磷酸盐等渗缓冲液洗涤3次,1%锇酸固定后,梯度乙醇脱水,Epon812包埋,常规超薄切片,醋酸铀-柠檬酸铅双染色,透射电镜观察[5]。

祝庆余等利用超薄切片观察SARS冠状病毒,发现病毒颗粒主要分布在胞浆的内质网池、胞浆空泡内和细胞外,多聚集成堆。

感染细胞可见内质网扩张,线粒体肿胀、嵴溶解,细胞核染色质凝聚,边集[5]。

潘欣等将SARS冠状病毒感染的Vero E6细胞行超薄切片电镜观察,亦在粗面内质网池和小泡中查见病毒颗粒,细胞外的颗粒则成群黏附在细胞膜表面,负染色电镜观察证实,病毒颗粒直径约80nm-140nm[7]。

2.分子生物学形态学上基本认为是病毒,然后进行分子生物学检测,进一步鉴定病毒,提取病毒的基因DNA或RNA,针对特定的基因片段设计随机引物,利用PCR扩增基因片段,进行基因的序列测序,拼接,分析。

常用的分子生物学方法有构建系统进化树。

2.1系统进化树系统进化树(英文:Phylogenetic tree)是表明具有共同祖先的各物种间演化关系的树,是一种亲缘分支分类方法。

在树中,每个节点代表其各分支的最近共同祖先,同时可通过给出分支层次或拓扑图形,反映物种之间的进化距离。

进化树可用来评价基因或蛋白在进化过程中的演变和亲缘关系,粗略估计不同类群生物之间的进化关系[8, 9],分析基因组的易变区和保守区[10],还可以确定插入片段,病毒是否发生基因重组,发现替代位点以及替代位点的重组。

另外,进化树可以更清楚地阐明病毒在人群间流行和跨宿主传播的基本规律,为预防、控制和预报病毒发生和流行提供新的理论支持[11]。

2.1.1病毒基因片段的提取分离培养病毒后,首先提取病毒的基因。

目前,很多生物公司都有病毒基因提取的试剂盒,利用试剂盒可以快速有效地提取病毒的基因。

2.1.2基因片段的扩增对于RNA病毒,提取病毒RNA,进行逆转录,得到cDNA,设计随机引物利用PCR 扩增cDNA。

而对于DNA病毒,提取病毒DNA,作为PCR模版,针对基因片段设计引物,制定扩增体系,扩增出特异的产物。

扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳观察结果。

然后利用相关的试剂盒提取跑胶产物。

接着对所有PCR产物进行DNA测序,得出病毒基因的编码信息。

同时也可将测序结果发送至美国国立生物信息中心和欧洲生物信息所的国际网站进行BLAST和ClustalW分析,进一步验证测序结果[8]。

2.1.3收集基因序列数据在获得新型病毒的序列后,还要收集同类型相关病毒的序列数据,以进行种系分析。

常用的基因数据库有GenBank,European Nucleotide Archive(ENA)。

从上述数据库中下载相关病毒的基因序列,张文彤等建议除了收集编码信息外,还应该收集其采集年代、采集地点、宿主类型等流行病学信息[11]。

张家敏等在鉴定新型冠状病毒时从GenBank下载了200多个SARS冠状病毒和SARS样冠状病毒全基因组,在构建系统进化树时,他们去除一些重复的、不完善的或基本一致的序列,分析病毒间的同源性[12]。

另外,邱国华等进行中国丙型肝炎病毒的进化树分析后发现片段测序分析与全基因序列分析可能在进化树分析结果上有一定差距,序列越长,所取序列数量越多,进化树分析误差越小,越能反映出真实的基因型[13]。

2.1.4基因片段的编辑基因片段的编辑需要软件来完成,常用的软件有DNAStar,Clustal。

使用上述软件进行如进行序列对齐,截取对应目的基因(特征基因)的部分进行编辑核酸序列工作。

2.1.5绘制和分析系统进化树基因片段编辑完成后,接着进行多序列比较,进而建立系统进化树[8]。

常用的软件有Clustal,DNAstar,Phylip,ARB,MrBayes,BAMBE,PAUP,TreeView,Phylowin,fastDNAml,SEMPHY,PALM等。

分析进化树的算法有①矩阵法②简约法③最大似然法④后验概率法。

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