甘草提取物中甘草酸含量测定
甘草颗粒中甘草酸含量HPLC测定方法的建立
动物医学进展，２０２０，４１（１２）：７４ ７９ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ甘草颗粒中甘草酸含量ＨＰＬＣ测定方法的建立 收稿日期：２０１９ ０４ １３ 基金项目：２０１８年农业行业（国家）标准项目兽药国家标准制修订计划（２０１８Ｚ０１８） 作者简介：李 军（１９８２－），男，山西浑源人，副教授，硕士，主要从事中药制剂的开发及质量研究。
李 军１，杨 奇２，刘立轩１，李 敏２，冷晓红１，马春芳２，吴春燕２（１．宁夏职业技术学院宁夏中药材开发与利用工程技术研究中心，宁夏银川７５００２１；２．宁夏兽药饲料监察所，宁夏银川７５００１１） 摘 要：为完善甘草颗粒的质量标准，以Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）柱为色谱柱，甲醇 ０．２ｍｏｌ／Ｌ醋酸铵 冰醋酸（５６∶４４∶０．４）为流动相，流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２５０ｎｍ，进样量为１０μＬ的色谱条件建立了ＨＰＬＣ法测定甘草酸含量，并进行方法学验证。
结果表明，甘草酸色谱峰峰形良好，且与相邻峰良好分离；进样浓度在０．１ｍｇ／ｍＬ～０．５ｍｇ／ｍＬ（０．１μｇ～０．５μｇ）范围内，与峰面积呈良好的线性关系（狉＝０．９９９８）；精密度和稳定性等考察结果的相对标准偏差均小于２．０％；样品平均回收率为９７．９２％（ｎ＝６），ＲＳＤ为１．８７％。
建立的方法可靠，准确度高，重现性好，为完善甘草颗粒的含量测定方法提供了依据。
关键词：甘草颗粒；甘草酸；高效液相色谱；含量测定中图分类号：Ｓ８５３．７２；Ｓ８５９．２文献标识码：Ａ文章编号：１００７ ５０３８（２０２０）１２ ００７４ ０６ 甘草颗粒是由具有清热解毒、祛痰止咳作用的甘草制成的兽用制剂［１］，有良好的免疫调节、抑制病毒、保肝、抗炎及镇咳作用，甘草酸作为其最重要的活性成分之一，其药理作用包括抗炎、抗溃疡、抗肝毒素以及抗癌等［２］。
《中国兽药典》２０１５年版（第二部）中收载甘草颗粒为甘草浸膏经加工制成的颗粒，并收录了甘草颗粒的质量标准［１］。
甘草酸的微波提取与含量测定实验报告
甘草酸的微波提取与含量测定实验报告实验目的：
本实验旨在通过微波提取的方法提取甘草酸，并对提取物中甘草酸的含量进行测定。
实验原理：
甘草酸是一种具有丰富药用价值的天然产物，常见于甘草等植物中。
微波提取是一种高效、快速的提取方法，能够在较短的时间内从样品中提取目标成分。
实验步骤：
1.准备样品：将甘草酸含量已知的甘草药材研磨成粉末状。
2.称量样品：称取适量的甘草药材粉末，精确记录其质量。
3.加入提取溶剂：将甘草药材粉末与适量的提取溶剂（如乙醇）混合，待溶解。
4.微波提取：将混合物置于微波提取仪中，设置合适的提取条件（如温度、时间等），进行微波提取。
5.提取液浓缩：将提取液转移至烧杯中，通过蒸发或其他浓缩方法使其浓缩。
6.甘草酸含量测定：采用合适的分析方法（如高效液相色谱法）对提取物中的甘草酸进行测定，记录结果。
实验结果与讨论：
根据实验测定，我们成功提取到了甘草酸，并测定出其含量为X%。
这表明微波提取是一种有效的甘草酸提取方法。
在实验过程中，我们注意到微波提取的优点在于提取速度快、操作简便，同时提取效果也较好。
然而，仍需要进一步的研究来优化提取条件以获得更高的提取效率。
结论：
本实验通过微波提取的方法成功提取到甘草酸，并测定出其含量为X%。
这为进一步研究甘草酸的药用价值提供了基础数据。
微波提取是一种高效、快速的提取方法，值得在其他天然产物的提取中进行深入研究和应用。
甘草有效成分的提取分离实验方案
甘草有效成分的提取分离实验方案实验目的：通过对甘草中甘草黄酮、甘草酸和甘草多糖的提取分离，进一步理解他们的理化性质，并且初步掌握提取分离的方法。
实验原理：黄酮类化合物则泛指两个苯环（A环与B环）通过中央三碳相互联接而成的一系列化合物。
根据中央三碳的氧化程度、是否成环、B 环的联接位点等特点，可将该类化合物分为多种结构类型。
代表化合物有甘草黄酮、甘草素、异甘草素、甘草甙、异甘草甙、甘草查尔酮等。
甘草中已经发现的黄酮类化合物有一百多种，本实验只对其进行粗提，并且测定其总含量。
甘草酸是一类三萜类皂苷，主要以甘草酸钾、钙盐的形式存在，是甘草次酸的二葡萄糖醛酸甙，含量在4-20%之间；甘草酸水解脱去糖酸链变形成了甘草次酸。
超临界CO2萃取甘草总黄酮的萃取率是1. 35%，含量32. 45%，是索氏提取法提取甘草总黄酮的提取率的2.2倍，索氏提取溶剂用量是超临界CO2萃取的6倍。
本实验采取超临界CO2萃取法提取甘草黄酮。
【1】大孔树脂适于物质水溶液的分离纯化，超临界C02萃取提取的甘草总黄酮中乙醇含量过高，即使对萃取液进行浓缩处理，其中乙醇的含量仍然很高，所以大孔树脂的吸附、解吸附的效果不好。
萃取液浓缩近干加入水后，所要分离的物质析出变混浊，也不适合用大孔树脂进行分离纯化。
与大孔树脂层析比较，硅胶柱层析可以更有效的分离纯化甘草黄酮。
使用硅胶柱层析可以有效地使甘草黄酮类物质的含量达到55%以上，收率1. 12%，符合国家中药二类新药的原料要求。
【1】综合考虑，本实验选择硅胶柱层析对甘草黄酮进行分离纯化。
甘草酸和甘草次酸的极性比黄酮类物质的极性大，更易溶于极性大的低浓度乙醇中，采用85%乙醇作为夹带剂，使得在二氧化碳超临界萃取甘草黄酮类物质过程中，大部分甘草酸和甘草多糖仍然留在残渣中。
甘草提取物说明书
中文名称：甘草水提取物规格：含甘草酸不低于12%（HPLC法测定）。
产品形状：本品为棕褐色粉末。
易溶于热水；乙醇，味极甜。
产品用途：性状：本品为白色结晶粉末。
甘草甜素是甘草甜味的有效成分，是一种非常有前景的纯天然甜味剂，它具有甜度高（甜度大约为蔗糖80-300倍）、低热能、安全无毒和较强的医疗保健功效，是高血压、肥胖症、糖尿病、心脏病患者使用的最理想甜味剂，它可以弥补蔗糖精等甜味剂诱发上述疾病的弊端。
MDL号：MFCD00065194(3%26beta;,20%26beta;)-20-羧基-11-氧代-30-正齐墩果-12-烯-3-基-2-O-%26beta;-D-吡喃葡糖基-%26alpha;-D-吡喃葡糖醛酸用途说明本品具有特殊的甜味，其甜度约砂糖的280倍左右，从甘草中提取出来的甘草酸钠盐，即使稀释4000倍的水溶液也有甜味。
但直接作为食品的甜味剂，对某些食品不合适，一般可与砂糖，葡萄糖；糖稀等天然糖类并用或与糖精；甘氨酸；丙二醇等适当配合，方可获得较为可口的甜味。
在食品方面主要用途是：1.酱油除了可改善咸味以提高酱油固有味道外，可消除糖精的苦味，对化学调味剂有增效作用。
2.咸菜类与糖精并用腌制咸菜的卤法中，可消除糖精的苦味。
在腌制过程中，可克服少加糖而出现的发酵败；变色；硬化等缺点。
3.调味本品可添加腌渍调味液，调味粉或饮食时的临时调味，可增加甜味，得到敌视芭的咸味，季低其他化学调味剂的怪味。
4.豆酱腌制小酱鲱鱼采用本品可起到增加甜味；使味道均匀的作用。
在甘草提取的过程中，得到甘草酸铵溶解在含有讲学算量碳酸钠的水溶液中，减压浓缩即得甘草酸二钠（C42H60Na3O16）；甘草酸三钠（C42H59Na3O16）。
也用作食品添加剂，作为豆酱；酱油的甜味剂。
二钠盐对小鼠腹腔注射LD50为1.44克/公斤，三钠盐对小鼠皮下注射LD50为1.54克/公斤。
商品名称：甘草黄酮规格：含光甘草定不低于3.5%，HPLC测定。
HPLC法测定不同产地甘草中甘草酸的含量
【 ｙｗ ｒ ｓ ｌｏ ｃ ，ｌｃｒ ｉｃａｉ， Ｐ Ｃ。ｅ ｒ ｉａ ｏ Ｋｅ ｏｄ 】 ｉ ｒ ｅ ｇ ｙｒ ｚ ｃ Ｈ Ｌ ｄｔ ｎｔ ｎ ｃｉ ｙ ｈｉ ｄ ｅ ｍ ｉ
ｑ ａ ｔ ａｉ ｅ ａ ｓ ｙ ｕ ｉｇ ｅ ｔｒ ａ ｓ ｔｄ ｒ ｔ ｏ ． ｓ ｌ Ｔ ｅ ｌ ｅ ｒｏ ｌｅ ｒｈｚｅ ａ ｉ ｓ ｇ ｏ ｎ ｔ ｅ ｒ ｎ ｅ ｏ ． ６ ０ ～０ ８ ４ ｕ ｎｉ ｔ ｓａ ｓｎ ｘ ｅ ｌ ａ ａ ａ ｄ ｍｅ ｈ ｔ ｖ ｎ ｄ Ｒｅ ｕ ｔ ｓ ｈ ｉ ａ ｆｇｙ ｙ ｒ ｉｉ ｃｄ ｗａ ｏ ｄ ｉ ｈ ａ ｇ ｆ １ ３ ｎ ０ ． １９
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高效液相色谱法测定甘草颗粒中甘草酸的含量
２ １ ，５ ７ ：２～ ４ 张剑勇 ， ０ １４ （ ） ３ ３／ 等
高 效液 相色 谱 法 测 定 甘 草 颗 粒 中甘 草 酸 的含 量
张剑勇 ， 杨 ， 晓峰 罗 金
（ 贵州省兽药监察所 ， 贵阳 ５ ００ ） ５０ ３
［ 收稿 日 ］０ ０— ６ ０ ［ 期 ２ １ ０ —１ 文献标识码 ］ ［ Ａ 文章编号 ］０ ２ １８ （０ １ ０ — ０ ２— ３ ［ １０ — ２０ ２ １ ）７ ０ ３ ０ 中图分类号 ］８ ３ ７ ￥５ ．６
（７： ３： ） ｅ ｃ ｏ ａｅｅｇｈ ｗ ｓ２ ０ ｎ ．Ｔ ｅｌ ｅｒｒｎ ｅｗ ｓ０ ０ ２—１ ０ ０ ｍ ／ Ｌ ｏｒｌ ｉ ６ ３ １ ．Ｄ ｔ ｔ ｎ ｗ ｖｌ ｔ ａ ５ ｍ ｅｉ ｎ ｈ ｉ ａ ａｇ ａ ． ０ ｎ ． ０ ｇ ｍ ，ｃｒ ａ ｏ ｅｔｎ
［ 摘 要 ］ 建 立 了测定 甘 草颗粒 中甘 草酸 含 量 的高 效 液 相色 谱 检 测 法。 以甲醇 一 ． ｏ／ ０ ２ｍ ＬＬ醋 酸 铵 溶液 一冰 醋酸 （７：３： ） ６ ３ １ 为流 动相 ， 测 波长 为 ２ ０ｎ 检 ５ ｍ。样 品采 取流 动相超 声 提取 ， 高效 液相 色
效液相色谱仪及 Ｌ ｏ ｔｎ色谱管理软件 ； 国沃 Ｃｓ ｕ ｏ ｌｉ 美 特斯 ｗ ｔ ｓ６ ５高效 液相 色 谱 仪及 Ｅ ｐｗ ｒ ａｅ ２９ ｒ ｍ ｏ ｅ２色谱
管理软 件 ； 甲醇 、 醋酸 铵 、 醋酸 均为 分析 纯 。 冰 １２ 对 照 品及 试 验 样 品来 源 甘 草 酸 铵对 照 品 ， ． 中国药 品生 物 制 品检定 所 ， 号 １０３ 批 １７ １—２０ １ 。 ０６５ 甘 草 颗 粒 ： 品 １ 批 号 ２０００ ； 品 ２ 批 号 样 ： ０ ８ ８１ 样 ：
甘草酸的提取分离及鉴定实验反思
甘草酸的提取分离及鉴定实验反思甘草酸是一种重要的药用成分，具有抗炎、抗氧化、抗溃疡等多种药理活性。
因此，对甘草酸的提取分离及鉴定具有重要的研究意义。
本实验旨在探讨甘草酸的提取分离方法，并利用色谱技术对提取物进行定性与定量分析。
首先，我们采用了超声波辅助提取法来提取甘草酸。
该方法具有操作简便、提取效率高的优点。
在实验中，我们选择了甘草根作为原料，将其粉碎并混合乙醇溶剂，然后进行超声波提取。
超声波的作用能够破坏细胞壁，促进甘草酸的释放。
实验结果表明，超声波提取法能够有效地提取甘草酸，并且提取率较高。
接下来，我们进行了甘草酸的分离纯化实验。
由于甘草酸在溶剂中的溶解度较高，在大部分有机溶剂中均可溶解。
因此，我们选择了正己烷和乙醇为溶剂，并采用反应结晶法进行分离纯化。
实验中，我们将提取得到的甘草酸溶液慢慢加入冷却的正己烷中，通过结晶使甘草酸分离出来。
此方法能够有效地去除杂质，并得到较为纯净的甘草酸。
最后，我们利用色谱技术对提取物进行了鉴定。
我们选择了高效液相色谱（HPLC）进行分析。
通过比对标准品和提取物的保留时间及峰面积，我们能够定量分析甘草酸的含量。
实验结果显示，提取物中含有一定量的甘草酸，并且与标准品具有相似的色谱图谱。
整个实验中，我们遇到了一些问题。
首先，提取物中可能存在其他有机酸或杂质，导致甘草酸的纯度不高。
其次，色谱分析过程中，可能存在色谱峰重叠的问题，使得甘草酸的定量分析不够准确。
针对这些问题，我们可以进一步改进提取和分离的方法，以提高甘草酸的纯度和分析的准确性。
总之，通过本次实验，我们成功地提取分离了甘草酸，并利用色谱技术对其进行了鉴定。
通过实验反思，我们认识到了实验过程中存在的问题，并提出了改进的方向。
这些实验结果对于进一步研究甘草酸的药理活性及应用具有重要的指导意义。
HPLC双波长法同时测定甘草药渣提取物中甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素及甘草酸含量
HPLC双波长法同时测定甘草药渣提取物中甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素及甘草酸含量罗燕燕;刘效栓;肖正国;李喜香;李季文;毕映燕;张柏桃【摘要】目的建立甘草药渣提取物中甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素及甘草酸的测定方法.方法采用HPLC双波长法对甘草药渣提取物中的主要成分甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素和甘草酸进行定量分析.色谱柱为Symmetry C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-0.085％磷酸水(B)为流动相,采用梯度洗脱(0～8 min,81％B;8～35 min,81％→50％B;35～60 min,50％B),流速1.0 mL/min,进样量10μL,柱温为室温,双波长检测(λ1=237 nm,λ2=254 nm).结果甘草苷在0.0408～0.816μg、异甘草苷在0.0528～1.056μg、甘草素在0.0224～0.448μg、异甘草素在0.0212～0.424μg、甘草酸在0.0448～0.896μg范围内均呈良好的线性关系,平均回收率分别为98.69％、98.31％、99.10％、98.55％、99.14％,RSD分别为1.39％、1.29％、1.78％、2.14％、1.15％.结论本法准确可靠,专属性强,结果稳定,重复性好,可用于甘草药渣提取物中上述5种成分的测定.%Objective To establish a method for the simultaneous determination of liquiritin, isoliquiritin, glycyrrhizin, isoliquiritigenin and glycyrrhizic acid in licorice extract. Methods Liquiritin, isoliquiritin, glycyrrhizin, isoliquiritigenin and glycyrrhizic acid in licorice extract were determined by HPLC dual wavelength spectrophotometry. Symmetry C18 column (4.6 mm × 250 mm, 5 μm) was used. The mobile phase was acetonitrile (A) - 0.085％phosphoric acid water (B), ingradient elution mode (0–8 min, 81％ B; 8–35 min, 81％→50％ B; 35–60 min, 50％ B) with the flow rate of 1.0 mL/min.The sample size was 10 μL, and column temperature was roomtemperature. Dual wavelength detection, λ1=237 nm, λ2=254 nm. Results Liquiritin, isoliquiritin, glycyrrhizin, isoliquiritigenin and glycyrrhizic acid were linear in the ranges of 0.0408–0.816 μg, 0.0528–1.056 μg, 0.0224–0.448 μg, 0.0212–0.424 μg, and 0.0448–0.896 μg, respectively. The average recovery was 98.69％, 98.31％, 99.10％, 98.55％, and 99.14％, respectively; RSD was 1.39％, 1.29％, 1.78％, 2.14％, and 1.15 ％, respectively. Conclusion The method is accurate, reliable and specific. The results are stable with good repeatability. It can be used for the determine of above 5 components in licorice extract.【期刊名称】《中国中医药信息杂志》【年(卷),期】2017(024)012【总页数】4页(P64-67)【关键词】甘草药渣提取物;高效液相色谱法;双波长法;含量测定【作者】罗燕燕;刘效栓;肖正国;李喜香;李季文;毕映燕;张柏桃【作者单位】甘肃中医药大学药学院,甘肃兰州 730000;甘肃省中医院药学部,甘肃兰州 730050;甘肃省中医院药学部,甘肃兰州 730050;甘肃省中医院药学部,甘肃兰州 730050;甘肃省中医院药学部,甘肃兰州 730050;甘肃省中医院药学部,甘肃兰州 730050;甘肃省药品检验研究院,甘肃兰州 730070【正文语种】中文【中图分类】R284.1甘草为豆科甘草属甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草G.inflata Bat.、光果甘草G.glabra L.的干燥根和根茎，具补脾益气、清热解毒、止咳化痰、缓急止痛、调和诸药之功。
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编号:FZD0148 甘草提取物中甘草酸（Glycyrrhizic Acid）含量测定方法一、色谱条件
色谱柱：Zorbax SB-C18 15cm×4.6mm 5μm
流动相：乙腈:水:冰醋酸（33:73:4，V/V）
流速：1.0mL/min
柱温：25℃
检测波长：254nm
进样量：10μL
二、溶液制备
1. 对照品溶液制备精密称取干燥至恒重的甘草酸对照品约5mg 于50mL容量瓶中，加入流动相溶解定容。
避光保存。
2. 样品溶液制备精密称取甘草提取物约200mg于50mL容量瓶中，加入30mL流动相，超声60min溶解后，放置至室温，流动相定容，用0.45μm微孔滤膜过滤即得样品溶液。
三、样品测定
在上述色谱条件下，待仪器稳定基线平稳后进样测定。
甘草酸保留时间约为34min，用外标法计算含量。