最新高三生物pcr技术复习试题讲课教案
高三生物PCR技术复习试题一、知识回顾聚合酶链反应法(PCR法)：PCR技术可模拟细胞核内DNA复制的天然过程，可在3～4h内使目的基因扩增上百万倍，达到肉眼可见的量，不需要放射性同位素标记就能分析、检测基因，大大提高了基因检测的灵敏度。
具体过程：首先，把DNA加热，使双链分开；然后将人工合成的一段单链核苷酸即DNA引物，黏附到DNA单股螺旋上；之后按照引物就能够复制出DNA来，重复放大50次后就可以制成10亿个基因。
在PCR放大过程中的关键是利用耐热DNA聚合酶使少量的DNA在短期内即能扩增数百万倍，便于分析、检测。
二、试题精练1、PCR技术是一种DNA的扩增技术。
在一定条件下，加入模板DNA、DNA聚合酶、dATP、dCTP、dGTP、dTTP可以实现DNA的扩增。
据此判断不合理的是A．dATP在DNA扩增中可以提供能量，同时作DNA合成的原料B．dTTP完全水解后产物有胸腺嘧啶、磷酸、核糖C．DNA扩增过程未加解旋酶，可以通过先适当加温的方法破坏氢键，使模板DNA解旋D．CTP水解脱去两个磷酸基后是组成RNA的基本单位之一２、多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。
PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。
下列有关PCR过程的叙述中不正确的是：（）A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成C．延伸过程中需要DNA聚合酶、A TP、四种核糖核苷酸D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高3、下列有关PCR技术的叙述，不正确的是：（）A．PCR技术经过变形、复性、延伸三个阶段B．PCR技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等C．PCR技术需在体内进行D．PCR技术是利用碱基互补配对的原则4、PCR技术扩增DNA,需要的条件是( )①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸④DNA聚合酶等⑤mRNA ⑥核糖体A、①②③④B、②③④⑤C、①③④⑤D、①②③⑥5、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸460个）放入PCR仪中扩增4代，那么，在PCR仪中放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数至少应是A．640 B．8100 C．600 D．86406、对禽流感的确诊，先用PCR技术将标本基因大量扩增，然后利用基因探针，测知待测标本与探针核酸的碱基异同。
下图P表示禽流感病毒探针基因在凝胶的电泳标记位置，M、N、Q、W是四份送检样品在测定后的电泳标记位置，哪份标本最有可能确诊为禽流感（）A．M B．N C．Q D．W7、某考古学家在西伯利亚泰加林地区的冰中，发现了一种冰冻的已灭绝的巨大动物的肌肉。
他想了解该巨型动物的DNA与现今印度大象的DNA的相似性，于是做了如下检测工作，其中正确的操作步骤及顺序是①降低温度，检测处理后形成的杂合DNA双链区段②通过PCR技术扩增巨型动物和大象的DNA③把巨型动物的DNA导入大象的细胞中④在一定的温度条件下，将巨型动物和大象的DNA水浴共热A.②④③B.②④③①C.③④①D.②④①8.(8分)聚合酶链式反应(PCR技术)是在实验室中以少量样品DNA制备大量DNA的生化技术，反应系统中包括微量样品DNA、DNA聚合酶、引物、足量的4种脱氧核苷酸及ATP等。
反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板，故DNA数以指数方式扩增，其简要过程如右图所示。
（1）某个DNA样品有1000个脱氧核苷酸，已知它的一条单链上碱基A:G:T:C=1:2:3:4，则经过PCR仪五次循环后，将产生个DNA分子，其中需要提供胸腺嘧啶脱氧核苷酸的数量至少是个。
（2）分别以不同生物的DNA样品为模板合成的各个新DNA之间存在差异，这些差异是。
（3）请指出PCR技术与转录过程的三个不同之处：①。
②。
③。
答案：（1）32 6200（2分）（2）碱基（脱氧核苷酸）的数目、比例和排列顺序不同（2分）（3）PCR技术以DNA的两条单链为模板合成子代DNA，转录以DNA的一条单链为模板合成RNA；PCR技术的原料为脱氧核苷酸，转录的原料是核糖核苷酸；二者反应时的催化酶不同（或其它合理答案）9．（7分）资料显示，近十年来，PCR技术（DNA聚合酶链式反应技术）成为分子生物实验的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制的特性，在试管中进行DNA的人工复制（如下图），在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使分子生物实验所需的遗传物质不再受限于活的生物体。
请据图回答：（1）加热至94℃的目的是使DNA样品的键断裂，这一过程在生物体细胞内是通过酶的作用来完成的。
通过分析得出新合成的DNA分子中，A=T，C=G，这个事实说明DNA分子的合成遵循。
（2）新合成的DNA分子与模板DNA分子完全相同的原因是和。
（3）通过PCR技术使DNA分子大量复制时，若将一个用15N标记的模板DNA分子（第一代）放入试管中，以14N 标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制到第五代时，含15N标记的DNA分子单链数占全部DNA总单链数的比例为。
（4）PCR技术不仅为遗传病的诊断带来了便利，而且改进了检测细菌和病毒的方法。
若要检测一个人是否感染了艾滋病病毒，你认为可以用PCR扩增血液中的（）A．白细胞DNA B．病毒蛋白质 C．血浆抗体 D．病毒核酸答案：（1）氢，解旋，碱基互补配对原则。
（2）DNA分子中独特的双螺旋结构(或以模板DNA分子的一条链为模板进行半保留复制)微量DNA样品DNA互补链分离开为单链以单链为模板合成子代DNA循环重复复制过程中严格遵循碱基互补配对原则。
（3）1/16 。
（4） D9．(8分)下面甲图中DNA决定某一多肽链中的酪氨酸和丙氨酸过程示意图，乙图示样品 DNA经PCR技术(聚合酶链式反应)扩增，可以获取大量DNA克隆分子。
分析回答：(1)甲图中含有种核苷酸；丙氨酸的遗传密码子是。
该图表示了DNA中遗传信息的过程。
(2)有一种贫血症是血红蛋白分子的一条多肽链上，一个酪氨酸被一个苯丙氨酸所替代造成的。
此种贫血症的根本原因是，即发生了改变。
(3)乙图的“PCR”与人体内的DNA复制相比有何特殊之处? 。
(4)现在要通过“PCR”得到甲图中DNA片段的1024个克隆片段，则至少要向试管中加入个腺嘌呤脱氧核苷酸。
答案：(1)8 GCC 转录和翻译，(2)基因突变 DNA的碱基序列(或基因结构)(3)离体条件，需要高温，高温酶(答上两项即给分)(4)3069(2分)10、（8分）PCR技术是把某一DNA片段在体外酶的作用下，合成许许多多相同片段的一种方法，利用它能快速而特异的扩增任何要求的目的或DNA分子片段；电泳技术则是在外电场作用下，利用分子携带的净电荷不同，把待测分子的混合物放在一定的介质(如琼脂糖凝胶)中进行分离和分析的实验技术，利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质和作亲子法学鉴定。
下图中1~4是电泳装置及相应电泳结果。
请回答：（1）电泳与叶绿体色素分离采用的纸层析法比较，后者使用的介质是________。
电泳过程中分子的迁移速率除与本身所带净电荷的多少有关外，你认为还受什么因素影响(至少列出一种)？___________。
（2）PCR技术能把某一DNA片段进行扩增，是依据什么原理？________________。
（3）图3是把含有21个氨基酸的多肽进行水解，得到的氨基酸混合物进行电泳的结果，故可推知该多肽是由________种氨基酸构成的。
（4）图4通过提取某小孩和其母亲，以及待测定四位男性的DNA，分别由酶处理后，生成含有若干DNA 片段，并已进行扩增得到的混合物，然后进行电泳所得到的一组DNA指纹图谱，请分析：谁是该小孩真正生物学上的父亲？为什么？答案：（1）层析液分子的大小、形状；凝胶的种类、密度；电泳的电压大小（2）DNA的复制（3）6（4）F2是该小孩的生物学上的父亲因为C和F2两者之间的DNA指纹图谱完全相同11、（7分）PCR 技术是一项在短时间内可将DNA 分子迅速扩增的方法。
它的基本原理与细胞内DNA 分子的复制类似。
下面是PCR 的反应体系及反应条件，请据此回答：（1）请指出DNA 分子复制所需的条件是： 、 、 和 。
与细胞核中DNA 分子复 制相比， 95℃条件下变性30s 的目的是： 。
反应体系中的缓冲液相当于细胞中的 。
（2）如果有反应体系中加入模板DNA 分子100个，则经过30个循环后，DNA 分子的数量将达到 个。
答案（1）模板、原料、能量和酶； 模板DNA 分子的解旋； 核液；（2）100×230。
12、（7分）在2004年12月26日发生的印度洋地震海啸灾难中，死亡人数已达到15万，为了帮助辨别遇难者身份，我国政府派出了DNA 鉴定专家组到泰国为遇难遗体做法医病理检验。
下列是一组法医检验DNA 时常用到的生物技术或物质：（1）PCR 技术是把某一DNA 片段在体外酶的作用下，合成许多相同片段的一种方法，利用它能迅速而特异的扩增任何要求的目的基因或DNA 分子片段；（2）限制性内切酶能识别特定的DNA 序列并进行剪切，不同的限制性内切酶可以对不同的核酸序列进行剪切以选择目的基因或DNA 片段；（3）电泳技术则是在外电场作用下，利用分子携带电荷不同，把待测分子的混合物放在一定介质（如琼脂糖凝胶）中进行分离和分析的实验技术，利用它能分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质，也可用作亲子法学鉴定。
请阅读上述内容并回答下列问题：（1）PCR 技术能把某一DNA 片段进行扩增，是依据什么原理？ ；利用PCR 技术扩增DNA 片段时用到的“体外酶”通常是指什么酶？ 。
（2）电泳过程中分子的迁移率除与本身所带电荷的多少有关以外，你认为还受什么因素影响？（至少列出一种） 。
（3）如果将含有2条多肽链共48个氨基酸的蛋白质进行彻底的水解，然后再将得到的氨基酸混合物进行电泳，结果如下图1所示。
则可推知该蛋白质由 种氨基酸构成，该蛋白质水解时需要的水分子数是 。
M C F 1 F 2 F 3 F 4（M 代表母亲，C 代表儿子，F 1— F 4 代表待测四位男性）图1 图2 图3PCR 反应体系：50ul 缓冲液 5ul 脱氧核苷酸 1ul (2.5mM) 引物 A 0.5ul 引物 B 0.5ul Mg 2+ 4ul (2.0mM) DNA 聚合酶 0.5ul 模板DNA 1-2ul (100-200ng) 加去离子水补足至50 ul反应条件： 温度 时间预变性 94℃ 5min 变 性 95℃ 30sec 复 性 56-60℃ 30sec 延 伸 72℃ 30sec 30个循环后72℃延伸5-10min 保 温 4℃ 2h（4）由于每个人的DNA条带（经电泳后）分布图是独一无二的，因此“DNA指纹法”可帮助进行亲子鉴定或帮助司法部门进行案件侦破。
2024届高考一轮复习生物教案(新教材人教版鲁湘辽)：PCR技术拓展应用
解惑练4PCR技术拓展应用应用1：反向PCR测定未知DNA区域当DNA的某些序列已知，而需要扩增已知序列两端的未知序列时，可采用反向PCR技术。
原理：用限制性内切核酸酶切割该DNA，随后使用DNA连接酶将获得的酶切产物环化，这样就获得了已知序列两侧携带有未知序列的环状DNA分子。
以该已知序列为模板设计一对相反方向的特异性引物，该引物对已知序列反向，但对未知序列却是相向的，从而得以扩增出未知序列。
应用2：PCR定点突变技术该技术要使用四条引物。
其中引物2和3的突起处代表与模板链不能互补的突变位点，而这两条引物有部分碱基(包括突变位点)是可以互补的。
因此，分别利用引物1和2，引物3和4进行PCR后，得到的DNA片段可以通过引物2和3互补的碱基杂交在一起，再在DNA 聚合酶的作用下延伸，就能成为一条完整的DNA片段。
最后，用引物1和4进行扩增得到含有突变位点的DNA片段。
通过测序可以检验定点突变是否成功。
应用3：(实时)荧光定量PCR(RT－PCR)先从样本中提取RNA，RNA中可能有新冠病毒的RNA，同时也存在很多采样患者的组织和存在于采样部位的微生物的RNA。
通过逆转录酶将样本的RNA逆转录为cDNA，并进行PCR扩增，在PCR反应体系中，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。
探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；若反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针降解，报告基团与淬灭基团分离，发出荧光。
每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生。
荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数(Ct值)与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高，Ct值越小(如图)。
跟踪训练1．如图所示，在一段未知序列的突变体DNA片段中，插入了已知序列的T－DNA，要想对T－DNA两侧的未知序列进行测序，下列做法正确的是()A．用引物①和引物④直接进行PCR扩增之后再测序B．用引物②和引物③直接进行PCR扩增之后再测序C．用DNA连接酶连接成环状后，再用引物①④PCR扩增后测序D．用DNA连接酶连接成环状后，再用引物②③PCR扩增后测序答案 C解析直接选用引物①、④组合进行PCR，引物选择方向相反，无法完成扩增，A错误；用引物②和引物③可实现对已知的T－DNA序列进行扩增，但达不到预期目的，B、D错误；用DNA连接酶连接成环状后，用引物①④PCR扩增后测序，恰好可扩增出T－DNA两侧的未知序列，C正确。
高三生物二轮复习导学案PCR的应用
PCR的应用学案学习目标1、通过分析基因编辑技术的原理和过程，了解此技术在社会实践中的应用。
2、掌握PCR技术的原理和操作过程。
3、结合新冠病毒核酸检测，了解PCR技术在生产、生活中的应用。
教学过程1.导入今天我们要学习二轮复习的第五个高考热点——PCR的应用，在这之前我们先来回忆一下课本上有哪些地方用到了PCR技术？学生思考后回答：“利用PCR扩增目的基因，检测目的基因是否导入受体细胞，以及目的基因是否在受体细胞中转录出mRNA都用到了PCR 技术”。
也就是说，我们通常利用PCR技术来扩增目的基因。
但实际上。
现有的基因不一定就是满足人们的需要的目的基因，在大多数情况下我们都要人为的改造现有基因。
那有什么办法能够改造现有基因呢？例如，如果我需要把某基因的AT碱基对替换成CG 碱基对。
让它发生碱基对的替换，创造一个新基因。
这时候我们就可以用重叠延伸PCR或者大引物PCR。
如果想要拼接两个基因，也可以用重叠延伸PCR，那RT—PCR技术通常用在哪里呢？我们最熟悉的就是核酸检测。
除此之外，PCR技术还有反向PCR、巢式PCR等等，那么近几年高考试题中有关PCR的问题越来越多。
设问深度也明显提升。
但是这些通常以信息题的形式出现，并且他们均以常规PCR为基础。
所以今天大家只需要掌握两部分内容就可以攻克这类题目。
第一部分：掌握常规PCR的基本过程。
第二部分：掌握三道典型例题的解题思路，最终构建解题模型。
2.核心基础知识回顾学生观看一段PCR技术基本过程的视频，完成基础知识填空。
2.高考新情境应用一：重叠延伸PCR技术——PCR定点突变重叠延伸PCR技术其主要设计思路是用具有互补配对片段的引物(图中的引物2和3，突起处代表与模板链不能互补的突变位点)，分别进行PCR，获得有重叠链的两种DNA片段，再在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸获得想要的目的基因。
如某科研团队运用重叠延伸PCR技术在水蛭素基因中的特定位点引入特定突变，使水蛭素第47位的天冬酰胺(密码子为AAC、AAU)替换为赖氨酸(密码子为AAA、AAG)，从而提高水蛭素的抗凝血活性。
高中生物pcr反应教案
高中生物pcr反应教案一、教学目标：1. 了解PCR（聚合酶链式反应）的基本原理和操作步骤；2. 掌握PCR反应的实验原理和方法；3. 能够独立进行PCR实验，并获取实验数据；4. 能够分析PCR实验结果，初步了解PCR在生物学研究中的应用。
二、教学内容：1. PCR的基本原理；2. PCR实验的步骤和材料准备；3. PCR实验的操作方法；4. PCR实验结果的分析和解读。
三、教学步骤：1. 理论讲解（10分钟）：教师介绍PCR的基本原理和操作流程，讲解PCR是一种体外DNA复制技术，通过酶的作用使目标DNA片段在温度变化的条件下进行反复复制，并逐渐放大目标DNA片段的数量。
2. 实验操作（30分钟）：学生跟随教师的指导，依次操作PCR实验，包括样品提取、DNA模板制备、引物设计、反应混合、PCR仪设置等步骤。
3. 结果分析（15分钟）：学生观察PCR反应结果，记录放大出来的特定DNA片段，并应用相关知识对结果进行分析和解读，了解PCR在生物学研究中的应用和意义。
4. 思考讨论（5分钟）：教师与学生共同讨论PCR实验的意义和可能的应用领域，引导学生思考PCR技术在生物学研究中的重要性。
四、实验材料：1. 提取样品（如细胞、组织等）；2. PCR试剂盒；3. DNA模板；4. 引物（前/反引物）；5. PCR仪；6. 手套、移液管、PCR试管等实验器材。
五、实验注意事项：1. 实验操作需在无菌条件下进行；2. 严格按照PCR实验步骤操作，避免引物交叉污染；3. 实验过程中要确保PCR试管密封，防止反应混合物外泄；4. 实验结束后，按要求清理工作台和实验器材。
六、实验评价及延伸：1. 对学生的实验结果进行评价，看是否符合预期；2. 鼓励学生积极参与实验讨论，提出问题和观点；3. 可以引导学生进行一些相关延伸实验或文献阅读，深入了解PCR技术在生物学研究中的应用。
七、教学反思：1. 在教学过程中，及时调整教学方法和内容，满足学生的学习需求；2. 定期进行教学评价，了解学生对PCR实验的掌握程度，及时进行回顾和复习。
2025版高考生物一轮总复习选择性必修3情境拓展9PCR和基因编辑技术课件
(4)某种蛋白酶可高效降解羽毛中的角蛋白。科研人员将该蛋白酶基 因插入到CRISPR/Cas9质粒中获得重组质粒，随后将其导入到大肠杆菌 细胞，通过基因编辑把该蛋白酶基因插入到基因组DNA中，构建得到能 大量分泌该蛋白酶的工程菌。据图简述CRISPR/Cas9重组质粒在受体细 胞内，将该蛋白酶基因插入到基因组DNA的编辑过程：C_R__I_S_P_R_/_C_a_s_9_重__ 组__质___粒__在__受__体__细__胞__内__进__行__转__录__和__表__达__，___转__录__的__产__物__是__S_g_R_N__A_，__表___达__的_ 产__物___是__C_a_s_9_蛋__白__，__二__者__形__成__复__合__体__，___该__复__合__体__中__的__S_g_R_N__A_可__识___别__并__与_ 目__标__D__N_A__序__列__特__异__性__结__合__，__从__而__插__入__到__基__因__组__D_N__A_中_______。
ห้องสมุดไป่ตู้
解析：(1)基因工程所需的工具酶有限制酶和DNA连接酶，限制酶负 责切割，DNA连接酶负责连接，因此为构建CRISPR/Cas9重组质粒，需 对含有特定SgRNA编码序列的DNA进行酶切处理，然后将其插入到经相 同酶切处理过的质粒上，插入时所需要的酶是DNA连接酶。
(2)大肠杆菌是原核生物，属于微生物，将目的基因导入微生物细胞 之前需要用Ca2＋处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子 的生理状态。
CRISPR/Cas9基因编辑技术能对基因进行定点编辑，其原理是由一 条单链向导RNA(SgRNA)引导内切核酸酶Cas9到一个特定的基因位点进 行切割(如图)。
高考生物一轮复习PCR技术的应用导学案
微专题：PCR技术第2讲PCR技术的应用导学案一、回顾PCR的相关知识二、PCR技术的应用1、获取目的基因活动一：请画出第二次PCR的图像。
第二次PCR 第三次PCR2、定点诱变例1-1：常见的病毒疫苗有灭活疫苗、蛋白疫苗和重组疫苗等。
已知某甲流病毒的特异性蛋白N（具有抗原性）的cDNA编码序列（目的基因）如下图。
为了制备稳定性更好的N蛋白疫苗，可以通过对目的基因加以改造，使PCR扩增出的编码序列在图中标记处的GT改为AT,再通过基因工程技术获得大量稳定蛋白N。
定点诱变——重叠延伸PCR活动二：请画出PCR1、PCR2的过程。
例1-2：重叠延伸PCR技术利用在需要诱变的位置合成两个带有变异基因碱基的互补引物，然后分别与引物a和引物d做PCR，这样得到的两个PCR引物产物都带有变异基因，并且彼此重叠，再将重叠部位进行重组PCR就能得到诱变PCR产物如图1．请据图回答：①图1，PCR扩增DNA的过程中，引物a、b、c、d中，PCR1应选择图1中引物_____，大量扩增突变产物AD则应选择引物_____。
②重叠延伸PCR通过__________________实现定点突变。
PCR1和PCR2需要分别进行的原因是_____。
（备案）2、定量分析活动三：请带着问题看视频，完成相关练习。
（1）TaqMan探针依据什么序列设计？（2）每个DNA分子复制时结合几个TaqMan探针？（3）每增加一个DNA分子，释放几个荧光分子？例2：如图为RT-PCR过程，若每分子探针水解释放的R基因荧光强度为a，加入的目的基因为b个，请根据图示过程，使用数学公式表示反应体系中荧光信号强度（Rn）与扩增次数（n）之间的关系：。
课后练习：1．PCR技术是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，其最大的特点是能将微量的DNA大幅增加。
新冠病毒核酸定性检测原理：先以病毒RNA为模板利用__________酶合成cDNA，再通过PCR技术扩增相应的DNA片段，在PCR反应体系中，加入的荧光探针与模板DNA的某条链互补结合，探针完整时，报告荧光基团发射的荧光信号被淬灭荧光基团吸收。
2025人教版高考生物一轮复习课件 第十单元 专题突破10 综合PCR的基因工程问题
类型二 利用PCR技术鉴定目的基因的连接方式
基本模型
检测目的基因在受体细胞内是否稳定存在是基因工程操作的重要步骤， 可以借助载体上的标记基因、PCR技术和核酸分子杂交技术等方法鉴定 受体细胞中是否转入了目的基因。在实际操作中，PCR技术不仅可以精 准地鉴定受体细胞是否转入目的基因，还可以通过引物的巧妙设计鉴定 目的基因的连接方式。
典例突破
PCR过程中，根据已知的DNA序列合成两个引物，要注意模板链和 引物的方向是相反的，引物的核苷酸序列要能够和相应模板的核苷 酸序列发生碱基互补配对，环状DNA图中显示PCR过程是从已知 DNA序列的两端分别向相反方向形成子链，一个引物是与已知DNA 序列的第一条链的左端互补结合，向右侧方向延伸形成子链，该引 物是④，另一个引物是与已知DNA序列的第二条链的右端互补结合， 向左侧方向延伸形成子链，该引物是②。
类型三 利用PCR技术引导基因定点突变
基本模型
重叠延伸PCR技术是指在PCR技术的基础上，采用具有互补末端的引物， 使PCR产物形成了重叠链，通过重叠链的延伸，将不同来源的片段重叠 拼接起来的一项新技术。该技术在基因的定点突变、长片段基因的合成、 基因敲除以及目的基因的扩增等方面有着独特的应用。
典例突破
DNA分子。该阶段必须将引物1、2和 引物3、4置于不同反应系统中，这是因 为_引__物__2_和__3__中__存__在__互__补__配__对___片__段__，__ _置__于___同__一__反__应__系__统__时__会__结___合__而__失__去___ _作__用___。
典例突破
类型五 利用PCR技术快速检测病原体
基本模型
病原体检测是诊断和控制传染病的重要手段，为迅速而准确地确定病原 体的存在和种类，发展了许多快速检测方法。PCR技术是一种基于DNA 扩增原理的快速病原体检测方法，它能够在几小时内扩增和检测极小量 的病原体DNA，并且具备高度的特异性和敏感性。
【课件】高三生物一轮复习课件微专题——PCR技术
。
图2中4次PCR对引物的使用不完全相同，如PCR1选择引物
A和B，PCR2选引物C和D，请问PCR3和PCR4应分别如何
选择引物： 不使用引物、
引物A和D 。
（2）该技术生产出来的蛋白A应属于 蛋白质 工程。
图1
图2
引物
扩增 特异性
扩增 高效性
发夹结构
二聚体
关于Taq酶（热稳定DNA聚合酶）
（1）从水生栖热菌（生存环境温度可高达80℃)中分离出 来具有热稳定的DNA聚合酶。 （2）作用原理：将脱氧核苷酸连接到引物的3’端，形成 磷酸二酯键。 （3）真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2+激活， 因此PCR反应缓冲液中一般要加Mg2+。
关于PCR引物设计原则
PCR的首要任务就是引物设计。引物设 计的好坏，直接影响了PCR的结果。成 功的PCR反应既要高效，又要特异性扩 ①增引产物物长。度要适宜，通常为20-30个核苷酸
②引物GC含量要适宜，一般为45-55% ③退火温度要适宜 ④引物自身及引物之间不应存在互补序列
⑤引物5'端可以修饰，3'端不可修饰
3-5：不同循环次数的 PCR产物
6：清水
缺点：只能作定性分析，不能准确定量。易造成污染出现假阳性， 使其应用受到限制。
例题：利用PCR可以在体外进行DNA片段的扩增，下列有关“DNA片段 的扩增及电泳鉴定”实验的相关叙述，错误的是 A.PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高
B. 设计引物时需考虑引物的长度、碱基序列和GC含量
√C. Taq酶的浓度过低会引起非特异性扩增产物量的增多
D. 目标DNA的获得取决于引物在模板DNA上的结合位置
高三二轮复习生物：PCR技术1-重叠PCR技术课件(共19张PPT)
2024年可用课件
5
二.重叠PCR技术 2.重叠PCR技术的应用 （1）构建融合基因
5’
3’ 基因M
3’ 5’
3’
5’ 3’
5’
基因N
重叠PCR技术可以将基因M和基因N链接起来。其过程为：
设计 引物
PCR扩 增两端
回收两 端片段
两端片段 退火延伸
扩增全 长基因
2024年可用课件
6
二.重叠PCR技术 2.重叠PCR技术的应用 （1）构建融合基因
A D’5’ 3’
3’
5’A’D
D’与引物D互补配对 A’与引物A互补配对
5’ 3’
PCR扩增第二次
3’ 5’ 引物B
A D’5’ 3’ A’D 3’ 5’A’D
引物C 5’ 3’
2024年可用课件
10
二.重叠PCR技术
2.重叠PCR技术的应用
（1）构建融合基因
③回收两端片段 并进行
④两端片段退火延伸 1 3’ 2 5’
2024年可用课件
3
二.重叠PCR技术 1.重叠PCR技术的定义
重叠延伸PCR技术 (gene splicing by overlap extension PCR，SOE PCR)，是采用具有互补末端的引物，使 PCR 产物形成了重叠链，从而 在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸，将不同来源的扩增片段重叠拼 接起来的技术。
科普课：重叠PCR技术
2024年可用课件
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致敬：凯利·穆利斯
凯利·穆利斯（Kary Banks Mullis，1944年12月2019年8月7日），美国著名化学家，因发明高效复 制 DNA片段的“聚合酶链式反应（PCR）”方法而 获得1993年诺贝尔化学奖。
高三生物pcr技术复习试题
聚合酶链反应法（PCR法）:PCR技术可模拟细胞核内DNA复制的天然过程，可在3〜4h内使目的基因扩增上百万倍，达到肉眼可见的量，不需要放射性同位素标记就能分析、检测基因，大大提高了基因检测的灵敏度。
具体过程：首先，把DNA加热，使双链分开；然后将人工合成的一段单链核苷酸即DNA引物，黏附到DNA单股螺旋上；之后按照引物就能够复制出DNA来,重复放大50次后就可以制成10亿个基因。
在PCR放大过程中的关键是利用耐热DNA聚合酶使少量的DNA在短期内即能扩增数百万倍，便于分析、检测。
二、试题精练1、PCR技术是一种DNA的扩增技术。
在一定条件下，加入模板DNA DNA聚合酶、dATR dCTP dGTP dTTP可以实现DNA的扩增。
据此判断不合理的是A. dATP在DNA扩增中可以提供能量，同时作DNA合成的原料B. dTTP完全水解后产物有胸腺嘧啶、磷酸、核糖C. DNA扩增过程未加解旋酶，可以通过先适当加温的方法破坏氢键，使模板DNA解旋D. CTP水解脱去两个磷酸基后是组成R NA的基本单位之一2、多聚酶链式反应（PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。
PCR过程一般经历下述三十多次循环：95C 下使模板DNA变性、解链T 55 C下复性（引物与DNA模板链结合）72C下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。
下列有关PCF 过程的叙述中不正确的是：（）A. 变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现B•复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成C. 延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP四种核糖核苷酸D. PCR与细胞内DNA M制相比所需要酶的最适温度较高3、下列有关PCR技术的叙述，不正确的是：（）A. PCR技术经过变形、复性、延伸三个阶段B. PCR技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等C. PCR技术需在体内进行D. PCR技术是利用碱基互补配对的原则4、PCR技术扩增DNA需要的条件是（）①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸④DNA聚合酶等⑤mRNA ⑥核糖体A、①②③④B、②③④⑤C、①③④⑤D①②③⑥5、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸460个）放入PCF仪中扩增4代，那么，在PCR仪中放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数至少应是A. 640B. 8100C. 600D. 86406、对禽流感的确诊，先用PCR技术将标本基因大量扩增，然后利用基因探针，测知待测标本与探针核酸的碱基异同。
pcr复习教案
pcr复习教案教案标题：PCR复习教案教学目标：1. 理解PCR（聚合酶链反应）的原理和应用。
2. 掌握PCR实验的步骤和操作技巧。
3. 能够分析PCR结果并解释其意义。
教学准备：1. PowerPoint演示文稿或白板和马克笔。
2. 包含PCR实验步骤和相关原理的教材或教学资源。
3. PCR实验室设备和试剂。
教学步骤：引入（5分钟）：1. 引发学生对PCR的兴趣，可以通过提问或展示相关图片等方式。
2. 解释PCR的定义和作用，强调其在分子生物学和遗传学研究中的重要性。
主体（30分钟）：1. 解释PCR的原理：DNA的变性、引物的结合和扩增、DNA的合成。
2. 展示PCR实验步骤的流程图或文字说明，并逐步解释每个步骤的目的和操作技巧。
3. 强调PCR实验中的关键因素，如温度、引物的设计和优化、反应体系的准备等。
4. 演示PCR实验的操作过程，可使用视频或实际操作进行展示。
5. 引导学生进行PCR实验的模拟操作，提供必要的指导和帮助。
6. 分析PCR结果，讨论阳性和阴性控制以及目标序列的扩增情况。
7. 解释PCR结果的意义和应用，如基因检测、疾病诊断、DNA指纹鉴定等。
巩固（10分钟）：1. 进行小组或个人讨论，让学生总结PCR的关键步骤和注意事项。
2. 提出一些与PCR相关的问题，让学生回答并解释其原因。
3. 提供相关练习题，检验学生对PCR原理和应用的理解程度。
作业：布置相关阅读材料，要求学生进一步了解PCR的最新研究进展，并撰写一份关于PCR应用领域的小论文。
教学评估：1. 观察学生在课堂上的参与度和理解程度。
2. 检查学生对PCR实验步骤和操作技巧的掌握情况。
3. 评估学生对PCR结果的分析和解释能力。
4. 评阅学生的小论文，检查其对PCR应用领域的理解和表达能力。
教学扩展：1. 组织学生进行实际PCR实验，加深他们对PCR原理和操作的理解。
2. 邀请相关领域的专家进行讲座，分享PCR在实际应用中的经验和案例。