浓缩血小板的制备白膜法、富浆法
血小板临床输注
半抗原机制：药物小分子与血小板膜蛋白结合，形成 新的抗原，刺激免疫系统产生抗体，从 而破坏血小板。
怀疑患者因应用药物而导致血小板减少症时，应准备相 应的药物。如果为液体剂型，可以直接使用。如果为固体剂 型，需要将其破碎、溶解于蒸馏水中。
血小板抗体检测在妇产科领域的应用
• 实验数据
血小板抗体检测在妇产科领域的应用
血小板抗体检测在妇产科领域的应用
血小板抗体检测在妇产科领域的应用
血小板抗体检测在妇产科领域的应用
• 实验结果
血小板抗体检测在妇产科领域的应用
处
区分HLA、HPA抗体
理 组
二磷酸氯喹可以破坏血小板膜上HLA抗原。
包被血小板后，处理组板条中加入2滴二磷酸氯喹；对照组 板条加入2滴生理盐水，37℃水浴30分钟，洗板三次，然后继续 检测
未处理孔 阳性 阳性 阳性 阴性 阴性
处理孔 阴性 阳性 弱阳性 阴性 阳性
抗体类型 HLA抗体 HPA抗体 HLA抗体（+ HPA抗体） 无相关抗体 重新实验，查明原因
PN
氯喹处理组 盐水对照组
邓晶、夏文杰、叶欣、徐秀章、邵媛、陈扬凯、丁浩强、罗广平、王嘉励（广州血 液中心临床
输血研究所）热带医学杂志 2012年11月第12卷第11期 • 文中观点：
通过收集22例临床上确诊为新生儿免疫性血小板减少症（NIT）的患儿为研究对象， 采用 ELISA 方法检测患儿及其父母的血小板相关抗体，应用 PCR-SSP法对患儿及父 母进行 HLA及HPA基因分型，根据相应的抗原进行抗体特异性分析。结果22例NIT患 儿中，14 例是由于同种免疫性因素引起的，其中 27.3％（6例)由 HLA抗体引起 ,13.6％（3例）由HPA抗体引起，22.7％（5例）由HLA＋HPA 抗体引起 ；9.1％（2 例）由于被动免疫性因素引起;27.3％（6例 ）由自身抗体引起 。其中,同种免疫性 抗体以抗 HLA-A2、19，抗-B40 及抗 HPA-3a多见。 • 结论： 在新生儿免疫性血小板减少症中，主要以父母血小板血型不合引起 新生儿同种免疫性血小板减少症为主，临床产前诊断预防和产后治疗具有重要意义。
白膜法少白细胞浓缩血小板的制备及质量分析
国Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ公司），Ｔｓｃｄ一２０１Ａ无菌导管接合器 （日本Ｔｅｒｕｍｏ公司），Ｘｈｌ—１Ｂ血小板恒温保存箱 （苏州医用仪器厂）。
１．２方法
１．２．１分离与合成：选择４００ ｍｌ采集时间在６ 内的新鲜全血，以２
５２０
ｈ
ｒ／ｍｉｎ离心１６ ｍｉｎ，温度
为２２℃，离心机采用升９降５模式。离心后，选择 血浆清亮透明的全血悬挂于全自动血细胞成分分 离机上，按已设定好的程序进行分离，分离好的白 膜层及血浆的量共约（７０±１０）ｍｌ。将自膜袋存放 于（２２±２）℃的血小板恒温保存箱待用。取各项检 验结果合格同型的白膜用无菌导管接合器进行汇 集，根据临床需要汇集４～８袋的白膜（４袋为５Ｕ， ８袋为１０Ｕ）。将合成的白膜以１
０００
ｒ／ｍｉｎ离心１４
７５５全自动血细胞分析仪（美国Ｂｅｃｋｍａｎ—ｃｏｕｌｔｅｒ 公司），Ｃｏｍｐｏｍａｔ Ｇ４全自动血液成分分离机（德
ｍｉｎ，温度为２２℃，离心机采用升９降５模式［纠。 １．２．２自细胞滤除：二次离心完毕后，取出血袋并
作者简介：党娥（１９８１一）．女．大学本科，从事血液成分制备工作．Ｅ—ｍｉＩ—ｄａｎｇｅ８ｌ１０８＠ｇｍｉｌ．ｃｏｍ．
ｍｔｉｏｍｌ
ｑｕａＩｉｔｙ ｒｅｇｕｉｒｅｍｅｎｔ ａｎｄ
１【ｅｙｗｏｒｄｓ：ｌｅｕｃｏｒｅｄｕｔｉｏｎ，ＰＩａｔｅｌｅｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ；ｂｕｆｆｙ
ｃｏａｔｓ
ｍｅｔｈｏｄ
血小板具有黏附、聚集、分泌及收缩血管等功 能，在止血和凝血过程中起重要作用。在血管破损 时它引起血栓形成而又溶解两方面作用，还参与血 管内皮细胞的修复，保持血管壁的完整性。输注血 小板对于血小板减少及功能异常引起的出血有较 好的临床效果。而浓缩血小板中血小板的数量和质 量对临床治疗十分重要，为了进一步提高浓缩血小 板的质量，我们对传统的方法［１３进行了改良，得到 了较为满意的结果。 １材料及方法 １．１材料血小板型白细胞过滤汇集袋由南京双 威生物医学科技有限公司提供，一次性采血四联袋 （含血小板保存袋）由山东威高医用高分子制品股 份有限公司提供，ＲＣ一１２ＢＰ离心机及Ｃｏｕｌｔｅｒ
两种不同方法制备浓缩血小板的比较
层略软 ， 与组织融合更 为紧密 ， 不易剥离 ， 也有利 于抗 原的保
存， 封存完好率 明显提 高 ， 间差异有统计 学意义 ； 绒沙 ２组 短 发布表面平 滑且 吸附蜡液量充 足， 一次浸蜡 可满足Байду номын сангаас５ ０个蜡块 使用 ， 封存好 的蜡膜还具 有均匀～致 、 厚薄适 中的优点 ， 蜡块
图 ３ 封 存 好 的蜡 块
用医技杂志 ２ １ ０ ２年 ４月第 １ ９卷第 ４期
Ｊｕ ｒｎ ａ ｆＰｒ ｃ ｉａ ｄｃｌ ｅｈ ｉ ｓ ｐ ！ １ ， ｌ ！ ． ｏ ｌｏ ａ ｔｃ ｌ Ｍｅ ｉ ｃｎｇ ｅ！ 五 Ｑ ２ ： ！ ａＴ 璺
— — — —
・
３ ９１ ・
１ 统计学处理 ： ． ３ 采用 检验 ， Ｐ ０ ５为差异有统计学意 以 ＜． ０
化学标记与原结果不同 。
本实验装置的采用 能很好地改善上述问题。石蜡包埋仪 是 病理科 的最 常用 设备 ， 台温度恒 定 （６ ６ 板 ６ ～ ８℃ ）蜡 量易 ，
控 ， 为安 全 环 保 。 装 置 的 金 属底 托 ， 热 性 能 良好 ， 使 沙 较 该 导 能
发布上 的蜡液一直处于溶解状态 ，多余 的蜡液也可通过底托 上 的小孑 排 出。组织蜡块 在恒 温板 台稍预热后涂抹的蜡膜表 Ｌ
义。 ２ 结 果
金属板上 ， 或用酒精 灯加 热镊 子烫涂 ， 分实验室还有用毛笔 部
蘸蜡涂抹封存 ， 但上 述方法都存在诸多 问题 。 烫涂法 因温度不 易控制 ， 致使蜡块变形 ， 织周 围的石蜡 同时融化后组织反而 组 突 出于蜡块 表面 ， 造成 组织干燥 、 霉变可 能 ， 温度 过高容易 且 灼伤组织 ， 镊子烫涂 的平 面不平整 ， 响归档外观 。镊子烫涂 影 与单纯涂抹法因蜡块与封存融 蜡的温度差异 ，蜡膜与组织粘 合不牢 固， 易剥 落 ， 本组传统法封存失败 率高达 １． ％， ５０ ０ 失败
不同方法制备的浓缩血小板表面CD62分子的表达
膜 进 行 轻 离 心 （ ０ ０ ｒｍｉ ， ｍｉ ， ２ ） 上 清 挤 入 １０ ／ ｎ ７ ｎ ２ ℃ ， 空袋 ， 制成浓缩血小 板 。 即 １ ７ 机 采 血 小 板 采 用 ＭＣ ． Ｐ单 采 机 收 集 浓 缩 ． Ｓ３
血小板 。
１１ 试剂 ．
藻 红 素 （ Ｅ） 记 抗 Ｃ ２ 抗 ； Ｅ 标 Ｐ 标 Ｄ６ 单 Ｐ
１ 材 料 与 方 法
浆、 白膜 层 分 别 挤 入不 同 的 卫 星袋 中 ， 将 红 细 胞 保 再 存 液 转 移 到 浓 缩 红 细 胞 中 制 成 晶 体 盐 红 细胞 悬 液 ， 然后 将 大 约 ２ ５～３ ｍｌ 浆 挤 入 白 膜 中 。将 白膜 置 ０ 血 于 血 小 板 保 存 装 置 中 振 荡 保 存 １ ５ ２ 然 后 将 白 ． ～ ｈ，
记 的 鼠 ＩＧ１Ｐ ａｍｉｇ ｎ公 司 ） ｇ （ｈｒ ｎｅ
１ ２ 仪 器 Ｊ６ 低 温 离 心 机 （ ｅｋ ｎ 公 司 ） ． －Ｍ Ｂ ｃ ｍａ ；
Ｍ Ｃ ．Ｐ 血 小 板 单 采 机 （ ｅ ｎ ｔ ｓＴｅｈ ｉ ｌ Ｓ３ Ｈａｍｏ ｅｌ ｃ ｎｃ 公 ｃ ａ
司 ） Ｅｐｃ ； ｉ ＸＬ流 式 细 胞 仪 （ ｏ ｌ ｒ 司 ） ｓ Ｃ ｕｔ 公 ｅ 。
浓缩血小板的制备白膜法、富浆法
手工分离浓缩血小板(PC)的制备Ⅰ.富含血小板血浆(PRP)法分离制备血小板法（富浆法）先将全血经轻离心，分离制备富含血小板血浆，之后将富含血小板血浆重离心，移去上层血浆，下层沉淀即为浓缩血小板。
在第二次重离心制备浓缩血小板前，可将第一次轻离心获得的富含血小板血浆进行白细胞过滤处理。
具体操作如下：1.采血2.轻离心成分分离制得红细胞、富含血小板血浆。
建议离心条件：温度：22℃±2℃，加速：9 r/min，减速：3 r/min，200ml袋离心力为478g，400ml袋离心力为850g，离心时间为8分钟。
（贺利氏离心机）轻离心,使红细胞（RBC）、白细胞（WBC）沉淀，上层血浆的大部分血小板（PLT）尚未沉淀，分离此血浆即为富含血小板血浆，约含全血中70%的PLT（根据调节离心机的离心力和时间有所不同）。
3.重离心富含血小板血浆。
第二次离心：温度：22℃±2℃，加速：9 r/min，减速：3 r/min，离心力2988g，离心时间为10分钟。
浓缩血小板1个单位留浆20－25ml，2个单位留浆30－45ml。
4.挤去上层贫血小板血浆, 再回部分贫血小板血浆置血小板内, 形成血小板悬液，静置1.5-2h；8h内制备必须完毕。
5.血小板悬液振荡保存，等待检测报告,不合格剔除。
6.根据需求选择合格血小板悬液进行汇集过滤。
7.开放式6h内输完。
8.密闭式振荡保存（无菌接驳，血小板贮存袋，细菌监测）。
富浆法的特点：PRP-PC质量不稳定，WBC残留量高，输洼安全性差，反复输注常会诱发血小板输注无效。
Ⅱ.白膜(BC)法分离制备血小板法全血首先经重离心后分离白膜层，将白膜层再经轻离心后，去除红细胞和白细胞，即得浓缩血小板。
具体操作如下：1.采血2.成分分离并制备白膜得少白红细胞（白细胞去除率约85 %）、血浆、白膜。
建议离心条件：温度：22℃±2℃，400ml袋离心力转速2515转/2100g，离心时间为14分钟。
浓缩血小板悬液的三种制备方法比较
浓缩血小板悬液的三种制备方法比较作者：杨世明张勇萍杨枨林费红毅【关键词】制备方法关键词:制备方法;检测比较;血小板悬液0引言浓缩血小板悬液（PC）在白血病、再障等血小板减少的出血及外科手术中均有显著的止血作用，而PC中血小板数量的多少和质量的高低又是影响临床输注效果的重要因素.为探讨PC的最佳制备方法和条件，我们对二次离心法、白膜回浆法和机器单采法三种方法制备的PC细胞参数进行了检测比较.1材料和方法1.1供血者选择按国家卫生部规定标准，对献血员进行体格检查和ALT，HAV，HBV，HCV，HIV及RPR等化验检测均合格，5d内未服阿斯匹林等影响血小板功能的药物，静脉血管良好，血小板计数在150×109・L-1以上者.1.2器材设备图门产LSG-04R型大容量低温离心机，超净台，分浆夹，F-800型血细胞分析仪（日本产），CPD保养液三联血袋，规格为400mL.1.3制备方法①二次离心法:采集全血400mL按文献［1］规程进行分离制备;②白膜回浆法:采集与受血者ABO血型相同的全血400mL，置低温离心机，在22℃以3500r・min-1离心10min，在超净台内分出血浆至1号袋，保留80～100mL血浆，白膜层分至2号袋，静置30～40min后，在22℃以1400r・min-1离心6min后，将白膜层以上部分分出约60mL呈浑浊状的血浆，即为白膜回浆法制备的1U浓缩血小板悬液;③机器单采法:由西安市中心血站制备.1.4检测方法及指标血小板、红细胞、白细胞计数，均用F-800型血细胞分析仪进行测定.血小板回收率=（PC中血小板数/制备前血小板总数）×100%;PC中血小板数=血小板计数/L÷1000×容量（mL）. 2结果用F-800型血细胞分析仪，对三种不同方法制备的浓缩血小板悬液细胞参数检测，结果见表1.表1三种方法制备浓缩血小板悬液的检测结果（略）3讨论二次离心法制备浓缩血小板悬液的优点是简单易行，缺点是PC中血小板数量少，而WBC含量较多.PC中混入过多的WBC不利于血小板的贮存，另外血小板的贮存质量也与制备过程中血小板的损伤程度有关.PC中混入过多的WBC可使患者产生白细胞凝集素或HLA抗体而影响输注效果，一般认为PC中WBC<106才能有效地防止同种免疫，本文二次离心法制备的PC中WBC计数达6.98×109・L-1，输注后仍有产生免疫的可能.机器单采法制备血小板的优点是能够获得高质量的血小板制品，可从单个供体采集到浓度高、纯度好、体积小、无聚集的8～10个单位的血小板制品［2］，但由于其设备昂贵，在基础医院目前还难以普及.近年来已采用白膜回浆法制备PC，该法的优点是简便易行，血小板获得量较多，制备过程中血小板损伤小，最终PC中混入的WBC数量较少，只要掌握好离心条件，克服制备过程中的各种影响因素，可得到符合质量控制标准的血小板数量，在无机器单采条件的单位可以使用白膜回浆法制备浓缩血小板制品，以便获得较为满意的输注效果.参考文献:［1］肖星甫.输血技术手册［M］.成都:四川科学技术出版社，1992:180-182.［2］何慧平.血细胞分离机采集血小板的初步探讨［J］.临床输血与检验，1999;1（2）:30-31.。
去白细胞混合浓缩血小板(LDPPCs)的制备及应用安全性分析
去白细胞混合浓缩血小板（LDPPCs）的制备及应用安全性分析目的：观察并分析去白细胞混合浓缩血小板（LDPPCs）的制备及其应用安全性。
方法：采用白膜法将浓缩血小板（PCs）制备出来后，将上清液转移至专用的血小板保存袋。
接着采用血小板用滤除白细胞过滤器进行直接过滤。
应用血小板的分布宽度（P-LCR）、平均体积（MPV）、白细胞与红细胞的残余量、血小板计数等指标对过滤前后血小板的质量变化进行评价。
并比较LDPPCs与细胞分离机分离出来的单采血小板之间的黏附率及PAC-1。
随机选取20例需要输注血小板的患者，分为对照组与实验组，对照组患者每次输注1个治疗量的单采血小板，实验组则每次输注1个治疗量的LDPPCs，对输注前、及术后24小时患者体内的血小板计数进行检测，并将血小板的回收率与CCI计算出来。
结果：血小板的P-LCR及pH值在混合前后相比，无明显差异，不具备无统计学意义（P>0.05），而血小板的容量与计数，MPV，红、白细胞残余量混合前后对比具有显著差异，具备统计学意义（P＜0.05）。
LDPPCs与单采血小板的黏附率与PAC-1均在正常范围内。
对照组与实验组患者输注前后的血小板计数、血小板回收率以及输后的CCI差异不明显（P>0.05）。
结论：应用白细胞过滤及无菌连接两种技术制备的LDPPCs，其各项质量指标均达到国家规定的标准，临床输注安全，疗效可靠，可作为单采血小板的有益补充。
标签：去白细胞；混合浓缩血小板；制备；安全性目前，我国在预防与治疗因血小板功能不良或数目减少造成的出血性疾病时，大多采用向患者输注血小板制剂的手段。
在利用全血制备手工的PCs时，由于1个治疗量需要输注多人份，而且混入了过多的白细胞，临床上正逐渐减少此种方法的使用[1]。
本文在应用白细胞过滤及无菌连接两种技术的基础上，去除多人份的PCs中的白细胞后，制备出了去白细胞混合浓缩血小板。
现将操作经过报道如下。
浅谈手工浓缩血小板的汇集滤白及深低温保存
浅谈手工浓缩血小板的汇集滤白及深低温保存摘要】目的：探讨血小板输注治疗各种原因因血小板减少或功能障碍引起出血。
方法：目前，临床应用的血小板主要有单采血小板和手工浓缩浓缩血小板，由于单采血小板的捐献不能满足临床需求，所以手工分离浓缩血小板已逐渐成为临床血小板供应的重要组成部分。
结果；利用普通无偿献血者捐献的全血手工分离浓缩血小板，可使全血中的血小板得到充分利用。
结论：本站采用血小板专用滤器以每14u为一个治疗量，制备汇集滤白混合血小板用于临床，取得了很好的临床效果【关键词】浓缩血小板深低温保存【中图分类号】R457 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2014）12-0072-01血小板输注是治疗各种原因因血小板减少或功能障碍引起出血的有效治疗手段。
目前，临床应用的血小板主要有单采血小板和手工浓缩浓缩血小板，由于单采血小板的捐献不能满足临床需求，所以手工分离浓缩血小板已逐渐成为临床血小板供应的重要组成部分，利用普通无偿献血者捐献的全血手工分离浓缩血小板，可使全血中的血小板得到充分利用，避免资源浪费，还可减少悬浮红细胞保存过程中白细胞-血小板微聚物的形成，降低受血者发生血管栓塞的危险，减少非溶血性反应的发生。
手工浓缩血小板多人份输注容易引起同种免疫反应而导致输注无效，其主要原因为HLA抗体引起，其次为HPA抗体，去除手工浓缩血小板中的白细胞就可减少输血反应和最大限度地避免同种免疫的发生。
我站采用血小板专用滤器以每14u为一个治疗量，制备汇集滤白混合血小板用于临床，同时制备冰冻汇集滤白混合血小板，储存备用，用于急诊和手术出血患者，取得了很好的临床效果，现将方法报告如下：1 材料与方法1.1材料采集于五联袋6小时内22±2℃保存的全血400ml；血小板汇集滤除白细胞输血器：南京双威生物医学科技有限公司提供；二甲基亚砜（DMSO）：广东新普公司提供。
1.2仪器设备 Cyrofuge6000i大容量冷冻离心机（德国）血小板保存箱；速冻冰箱；海尔 -80℃超低温冰箱；冰冻解冻箱；kjx-lA/CD-DR解冻箱（苏州医用仪器厂）血球计数仪；希斯美康XT-1800i血球计数仪(日本)1.3浓缩血小板的制备：采用富浆法。
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手工分离浓缩血小板(PC)的制备
Ⅰ.富含血小板血浆(PRP)法分离制备血小板法（富浆法）先将全血经轻离心，分离制备富含血小板血浆，之后将富含血小板血浆重离心，移去上层血浆，下层沉淀即为浓缩血小板。
在第二次重离心制备浓缩血小板前，可将第一次轻离心获得的富含血小板血浆进行白细胞过滤处理。
具体操作如下：
1.采血
2.轻离心成分分离制得红细胞、富含血小板血浆。
建议离心条件：温度：22℃±2℃，加速：9 r/min，减速：3 r/min，200ml袋离心力为478g，400ml袋离心力为850g，离心时间为8分钟。
（贺利氏离心机）
轻离心,使红细胞（RBC）、白细胞（WBC）沉淀，上层血浆的大部分血小板（PLT）尚未沉淀，分离此血浆即为富含血小板血浆，约含全血中70%的PLT（根据调节离心机的离心力和时间有所不同）。
3.重离心富含血小板血浆。
第二次离心：温度：22℃±2℃，加速：9 r/min，减速：3 r/min，离心力2988g，离心时间为10分钟。
浓缩血小板1个单位留浆20－25ml，2个单位留浆30－45ml。
4.挤去上层贫血小板血浆, 再回部分贫血小板血浆置血小板内, 形成血小板悬液，静置1.5-2h；8h内制备必须完毕。
5.血小板悬液振荡保存，等待检测报告,不合格剔除。
6.根据需求选择合格血小板悬液进行汇集过滤。
7.开放式6h内输完。
8.密闭式振荡保存（无菌接驳，血小板贮存袋，细菌监测）。
富浆法的特点：PRP-PC质量不稳定，WBC残留量高，输洼安全性差，反复输注常会诱发血小板输注无效。
Ⅱ.白膜(BC)法分离制备血小板法
全血首先经重离心后分离白膜层，将白膜层再经轻离心后，去除红细胞和白细胞，即得浓缩血小板。
具体操作如下：
1.采血
2.成分分离并制备白膜得少白红细胞（白细胞去除率约85 %）、血浆、白膜。
建议离心条件：温度：22℃±2℃，400ml袋离心力转速2515转/2100g，离心时间为14分钟。
3.分离白膜层，约含全血中90%的PLT，室温静置至少4h，可保存24h。
目视挑选白膜，发生了凝聚及白膜太薄者予以淘汰，不用于制备浓缩血小板。
4.白膜置于血小板保存箱过夜但不振荡，同时等待病毒等检测结果
5.等待血小板需求，根据需求选择合格白膜进行汇集血小板的制备。
将10-12单位（5-6袋）白膜混合，总重约500-580ml，充分混匀。
6.轻离心
离心条件：温度：22℃±2℃，400ml袋离心力转速800转/212g，
离心时间为10分钟。
注：装杯时汇集袋两侧夹硬纸板固定，使汇集袋平整。
7.分出上清液，即为汇集浓缩血小板，经血小板滤器过滤，得汇集少白细胞浓缩血小板。
8.血小板发放；细菌监测。
白膜法的特点：优点是血小板中白细胞残留量较低，输注安全性好，血小板膜表面CD62p的表达率显著降低，提高了总ATP水平和低渗性休克反应的能力。
缺点是血小板含量低。