SD大鼠脑脊液采集方法的改进
一种简单实用的实验动物中药脑脊液采集方法
一种简单实用的实验动物中药脑脊液采集方法
马伟;马锋;田建英
【期刊名称】《宁夏医科大学学报》
【年(卷),期】2007(029)004
【摘要】为探寻一种简单实用的实验动物中药脑脊液采集方法,以兔和大鼠为实验对象,以枕外隆凸为标志,于颈部正中作纵行切口,经枕骨大孔抽取中药脑脊液.结果,大耳白家兔50只,成功率88%,脑脊液量平均700μL;SD大鼠30只,成功率73%,脑脊液量平均76μL.表明经枕骨大孔抽取脑脊液是一种简单实用的实验动物脑中药脊液采集方法.
【总页数】2页(P436-437)
【作者】马伟;马锋;田建英
【作者单位】宁夏医学院人体解剖学教研室,银川,750004;宁夏医学院人体解剖学教研室,银川,750004;宁夏医学院人体解剖学教研室,银川,750004
【正文语种】中文
【中图分类】R322-33
【相关文献】
1.一种实用的采集兔脑脊液方法 [J], 李惠勉;李建章;姚淑芬
2.一种简单实用的脑脊液细胞学检查染色法及其临床应用 [J], 戚其学;项永谦;徐万鹏
3.脉冲信号的有效采集：一种有效而实用的脉冲信号采集方法 [J], 曾泽民
4.一种简单的实验动物编号标记方法试验筛选 [J], 黄小琼;郑玉连;曾育培;郑佳琳;
武昕;饶子亮;王诺;严家荣;邝少松
5.一种实用的数据快速采集方法 [J], 董育红;秦建敏;杨盘洪
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红藻氨酸致癫痫大鼠血清和脑脊液中S100B、CRP的动态变化
反应可能参与癫痫发生及癫痫所致的脑损伤。血清 和脑脊液 中 Ｓ０ Ｂ、 Ｒ １０ Ｃ Ｐ可用于检测这种 炎症反应和脑组 织损
关键词 ： 红藻氨酸 ； 癫痫 ；１０ Ｃ反应 蛋白 Ｓ０ Ｂ； 一
中 图分 类 号 ：７ ２ １ Ｒ ４ ． 文 献标 志码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０２２ ６ ２ １ ） ２０２ － １０ －６ Ｘ（０ ５ －０ ４０ １ ３
ｌ ｄ Ｃ Ｆ ｆ ｐｌ ｔ ａ ａｄｔ ｎｔ ａｐｏ ｈｔ ａ ｏ ｈ ｅ ｅ ｅｔ ｉ ｅ ｉ ｄｃ ｏ ｔ ｅｉ ｐｙ ｆ ｉ （ Ｓ ）ｏ ｉｐｉ ｒｔ， ｎ ｅ ｐ ｒ ｃ ｅｒｌ ｉ ｓｉ ｂｔｅｎｔ ｏｂｏｈ ｍｃｌｎ ｉ ｔ ｓ ｉ ｐｌ ｓ． ｕ ｅ ｅ ｃ ｓ ｈ ｏ ａ ｈ ｅ ｔｎ ｐ ｗ ｈ ｗ ｃ ａ ｉ ａ ｒｗ ｈ ｅ Ｍｅｈ ｄ ４ ｄ ｌｍ ｅＳ ｔ ｗ ｒ ｒｎｏ ｌ ｄ ｉｅ ｔ ｃｎ ｏ ｇ ｕ ｎ＝ ）ａｄｍ ｄ ｌ ｏｐ（ ４ ） ｃｏｄｎ ｔｏｓ ８ａｕｔ ａ Ｄｒ ｓ ｅｅ ａｄｍ ｙ ｉ ｄｄｉ ｏ ｏｔ ｌ ｒ ｐ（ ８ ｎ ｏ ｅ ｇ ｕ ｎ： ０ ．Ａ ｃｒｉｇ ｌ ａ ｖ ｎ ｒ ｏ ｒ ｔ ｔｅｔ ｅｗ ｅ ｔｗ ｒ ｉｅ ｆｒ ｈ ｃｅｓｏ ｍ ｄｌ ａｉｇ ｍ ｄｌ ｒｕ ａ ｉｄ ｄｉｔ ｆｅｇｏｐ ６ｈ １ ， ｏ ｈ ｍ ｈｎｒ ｓ ｅｅｋｌ ｄａ ｅ ｅｓ ｃｓ ｆ ｏｅ ｍ ｋｎ ， ｏｅ ｇ ｐｗ ｓ ｖ ｅ ｏｉ ｒｕ ｓ（ ， ２ｈ ｉ ａ ｌ ｔ ｔ ｕ ｏ ｄ ｉ ｎ ｖ ２ ， ２ｈａｄ１ｗ ．Ａ ｉ ａ ｍ ｄｌ ｆ ｐ ｅｓ ａ ｓ ｂｉ ｅ ｔ ｂ ｔ ｃｒｂｏｅｔｃｌ ｊｃｉ ｆ ａｎｃａｉ ４ｈ ７ ｎ ） ｎｍ ｏ ｅ ｏ ｉ ｐｙｗ ｓｅｔ ｌｈ ｄｉ ｒ ｓ ｙｉ ｒ ｅｅｒｖｎ ｉ ａ ｉ ｅｔ ｎｏ ｋｉｉ ｃ ｌ ｅｌ ａ ｓ ｎ ａ ｎ ａ ｒｕ ｒｎ ｏ ｄ
大鼠鞘内注射方式的改良与验证
大鼠鞘内注射方式的改良与验证【关键词】注射，脊髓；布比卡因；疾病模型，动物大鼠鞘内给药是在脊髓水平研究药物作用的重要手腕，因直接鞘内注射方式操作简单、干扰因素少，被愈来愈多的学者所利用。
传统的鞘内注射方式为Mestre法，它是以穿刺时显现甩尾动作为穿刺成功的标志[1],但笔者在进行动物实验进程中，发觉该判定标志存在争议，为此，笔者对鞘内注射方式进行改良（即New法），以回抽有脑脊液或注射后显现甩尾动作为穿刺成功标志，并验证其靠得住性。
1 材料与方式一样资料 SD大鼠60只，雌性，9～11周，体质量（320±）g （290～340）g，由中国科学院上海实验动物中心提供，动物合格证号SCXK(沪)2007005，随机均分为2组，别离按New法和Mestre法进行穿刺，鞘内注射％布比卡因。
盐酸布比卡因（上海复星朝辉药业公司）；异氟烷（意大利雅培公司）；25 μL微量进样器（上海高欣玻璃仪器厂）,针头剪短至 cm，针孔长径磨至<1 mm，蒸馏水洗净后高压灭菌备用。
方式 New法组大鼠在％异氟烷麻醉下[2],取伏坐位，以L5-6棘突间隙为穿刺点，维持穿刺点与大鼠背部最高点的垂直距离>3cm。
实验者左手探及髋结节，其水平位置即为大鼠的L5-6棘突间隙。
左手拇指和中指置于大鼠L5-6棘突间隙双侧，并向外绷紧皮肤。
以食指定位，右手持微量注射器从间隙垂直缓慢进针，显现甩尾动作时助手按压大鼠一侧颈静脉部位，注射器回抽有脑脊液后注药10 μL，注药时常又显现甩尾动作。
Mestre法组具体操作按文献[1]进行。
观看2组大鼠在注射布比卡因苏醒后双后肢的瘫痪情形：有无瘫痪、针刺反映及夹尾反射。
统计学处置数据应用统计学软件SPSS 进行处置。
2组计数资料比较应用χ2查验，P<为不同有统计学意义。
结果用New法进行鞘内注射，30只大鼠中有4只未显现穿刺成功的标志，即回抽无脑脊液或注药进程未显现甩尾动作。
《头穴透刺对脑出血大鼠脑水肿调控因素影响的相关研究》
《头穴透刺对脑出血大鼠脑水肿调控因素影响的相关研究》一、引言脑出血是一种常见的神经系统疾病，其发病原因多为高血压、动脉瘤等，对患者的生命健康造成严重威胁。
脑水肿是脑出血后的常见并发症，其发生机制复杂，治疗难度大。
近年来，头穴透刺作为一种中医治疗方法在脑水肿治疗中显示出一定的疗效。
本文通过研究头穴透刺对脑出血大鼠脑水肿的调控因素影响，旨在探讨头穴透刺在治疗脑水肿中的机制及其临床应用价值。
二、研究方法1. 实验动物与分组本实验选用成年SD大鼠，按照随机数表法分为假手术组、模型组、头穴透刺组和药物治疗组。
2. 模型制备与治疗方法模型组、头穴透刺组和药物治疗组采用自体血注入法制作脑出血模型，随后进行相应治疗。
头穴透刺组采用中医头穴透刺法进行治疗，药物治疗组给予脑水肿常规药物治疗。
假手术组仅进行手术操作不注入血液。
3. 检测指标与方法检测指标包括脑水肿程度、炎症因子水平、氧化应激指标、神经功能评分等。
采用MRI、ELISA、Western Blot等方法进行检测。
三、实验结果1. 脑水肿程度头穴透刺组和药物治疗组大鼠的脑水肿程度较模型组有明显改善，其中头穴透刺组的改善程度更为显著。
MRI结果显示，头穴透刺组脑水肿体积较模型组减小。
2. 炎症因子水平头穴透刺组大鼠的炎症因子水平较模型组明显降低，表明头穴透刺具有抗炎作用。
ELISA检测结果显示，头穴透刺组IL-1β、TNF-α等炎症因子水平降低。
3. 氧化应激指标头穴透刺组大鼠的氧化应激指标较模型组有所改善，表明头穴透刺具有抗氧化应激作用。
Western Blot检测结果显示，头穴透刺组MDA等氧化应激指标降低，而SOD等抗氧化酶活性升高。
4. 神经功能评分头穴透刺组大鼠的神经功能评分较模型组有所提高，表明头穴透刺能够改善大鼠的神经功能。
采用神经功能评分量表进行评估，头穴透刺组大鼠的运动、感觉和认知功能均有明显改善。
四、讨论本研究结果表明，头穴透刺对脑出血大鼠脑水肿的调控具有显著影响。
大鼠脑脊液抽取的新方法
图 1 大鼠固定示意图
收稿日期： 2011 － 06 － 28 * 基金项目： 国家自然科学基金（ No． 30870854） ； 北京市教委科技 创 新 平 台 项 目 （ PXM2011 _014226 _07 _000070 ） ； 北 京 市 优 秀 人 才 基 金 D
类（ 2011D005018000007） 资助 作者简介： 任长虹 （ 1974 － ） ，女，博士。研究方向： 神经生物学。E-mail： ren97hong2001@ yahoo． com． cn 通信作者： 吉训明 （ 1970 － ） ，男，主任医师。研究方向： 神经外科脑血管病的机制及治疗研究。E-mail： jixm70@ hotmail． com
櫴毷
第 29 卷 第 1 期 2012 年 2 月
櫴櫴櫴櫴櫴毷 技术·方法
实验动物科学 LABORATORY ANIMAL SCIENCE
Vol． 29 No． 1 February 2012
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櫴毷
大鼠脑脊液抽取的新方法*
任长虹1 高明清1，2 曹金强1，3 李 宁1 Kevin K． W． Wang4 吉训明1
大鼠固定后通过触摸找到枕骨嵴occipitalcrest如果是初学者为了明确具体位置可以在此处用记号笔标识大鼠头部固定后如果角度适中隐约可见枕骨嵴后有一肌肉间隙以枕骨嵴下mm处的肌肉间隙处为进针点用手触摸有三角形凹陷进针角度与身体平行即针与头部的角度约为135图2针尖坡面向上缓慢向前进针到小脑延髓池cisternamagna深度约为cm
脑脊液（ Cerebro-Spinal Fluid，CSF） 为无色透明 的液体，充 满 在 各 脑 室、蛛 网 膜 下 腔 和 脊 髓 中 央 管 内，由脑室中的脉 络 丛 产 生［1］。 若 中 枢 神 经 系 统 发 生 病 变 ，神 经 细 胞 代 谢 紊 乱 ，将 使 脑 脊 液 的 性 状 和 成 分发生改变。因此，大 鼠 脑 脊 液 常 被 用 于 脑 损 伤 机 制 、生 物 标 记 物 、药 物 治 疗 等 研 究 领 域 中 ，但 是 ，由 于 脑脊液提取过程复 杂，且 容 易 刺 穿 延 髓 致 使 大 鼠 死 亡，脑脊液提取的成 功 率 低 也 是 许 多 实 验 室 面 临 的 问题。因此，本文将 介 绍 一 种 简 便 易 行 的 大 鼠 脑 脊 液 的 提 取 方 法 ，为 大 鼠 脑 脊 液 的 相 关 研 究 提 供 参 考 。
大鼠鞘内注射方法的改进与验证
大鼠鞘内注射方法的改进与验证
陈烨;陈彦青;李德龙
【期刊名称】《福建医科大学学报》
【年(卷),期】2009(43)2
【摘要】大鼠鞘内给药是在脊髓水平研究药物作用的重要手段，因直接鞘内注射方法操作简单、干扰因素少，被越来越多的学者所使用。
传统的鞘内注射方法为Mestre法，它是以穿刺时出现甩尾动作为穿刺成功的标志，但笔者在进行动物实验过程中，发现该判断标志存在争议，为此，笔者对鞘内注射方法进行改进（即New法），以回抽有脑脊液或注射后出现甩尾动作为穿刺成功标志，并验证其可靠性。
【总页数】1页(P155)
【作者】陈烨;陈彦青;李德龙
【作者单位】福建医科大学,省立临床学院,福建省立医院,麻醉科,福州,350001;福建医科大学,省立临床学院,福建省立医院,麻醉科,福州,350001;福建医科大学,省立临床学院,福建省立医院,麻醉科,福州,350001
【正文语种】中文
【中图分类】R614.42;R971.2
【相关文献】
1.清醒大鼠鞘内注射模型的制备与验证 [J], 王怀泉;郑方;李文志
2.鞘内注射重组大鼠脂质运载蛋白-2对大鼠吗啡镇痛效能的影响 [J], 王芬;谢滔;
江姿潞;刘清珍;刘健;李伟彦
3.罗氏芬鞘内注射方法的改进 [J], 温鼎东;刘艳鸣;张春声
4.传统计算循环压耗方法局限性探讨及改进方法验证 [J], 杨英波;李君;申延晴;刘佩煊;王玉伟;郑以华
5.副溶血性弧菌分离鉴定方法的改进(Ⅱ)——方法验证 [J], 唐细良;周桂莲;刘宏道因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大鼠脑组织灌注固定方法的改进
大鼠脑组织灌注固定方法的改进卢文朋;栗世方【摘要】Objective Effective tissue perfusion fixation plays an important role in immunofluorescence experiments and other studies .The aim of this study was to modify the method for perfusion fixation of rat brain tissues and improve the efficiency of the procedure . Methods Conventional thoracotomy was modified by cutting the skin from the xiphoid along the mediventral line to the lower jaw to expose both sides of the thorax and then freeing the chest wall .The tip of the infusion needle was cut off and the needle in-serted into the left ventricle , pushed to the ascending aorta , and fixed there to prevent sliding .Perfusion and fixation began after tho-racic aortic occlusion.The regulatory valve was opened , followed by infusion of 0.9%physiological saline and cutting the right atrial appendage .When the perfusate became clear , the infusion tube was replaced , without removal of the needle , and fixed with4%paraformaldehyde .The fixation process was slowed down gradually till the neck became stiff , which indicated its completion . Results The head, neck and upper limbs were all fixed desirably by this method , which shortened the operation time , saved 4%paraformalde-hyde, and achieved satisfactory immunofluorescence results as compared with conventional procedures . Conclusion The modified method is simple , obviously improves the results of perfusion fixation of rat brain tissue , and therefore deserves to be popularized .%目的：免疫荧光等实验研究中良好的组织灌注固定效果对实验结果至关重要。
一种大鼠腰膨大背根神经节取材的改良方法
一种大鼠腰膨大背根神经节取材的改良方法为了获得高质量的大鼠神经节样本，本文提出了一种改良的取材方法。
通过对大鼠腰椎进行解剖，切除脊柱并暴露出神经节，使用显微镊子和显微注射器进行取材，避免了常规方法中可能出现的神经节损伤和污染，同时保证了样本的完整性和纯度。
本方法在研究神经退行性疾病等方面具有应用前景。
关键词：大鼠腰椎；神经节；取材；改良方法引言神经节是神经系统中重要的组成部分，其功能与神经元的生存和发展密切相关。
因此，研究神经节的结构和功能对于理解神经系统的发育和疾病具有重要意义。
大鼠是神经科学领域中常用的实验动物，其神经节样本的获取对于研究神经退行性疾病等具有重要意义。
然而，传统的取材方法存在一些问题，如神经节损伤、污染等，影响了样本的完整性和纯度。
因此，本文提出了一种改良的大鼠神经节取材方法，以期提高样本的质量和可靠性。
材料与方法1. 实验动物本研究使用雄性Sprague-Dawley大鼠，体重250-300g，由实验动物中心提供。
2. 取材工具显微镊子、显微注射器、手术刀、剪刀、镊子、无菌手套、无菌巾等。
3. 取材步骤3.1 麻醉和解剖将大鼠置于麻醉盒中，用异氟醚气体麻醉2-3分钟，待大鼠完全麻醉后，将其移至手术台上。
用无菌巾将大鼠的四肢固定，用手术刀在腰部进行皮肤切开，剪开腹肌，暴露出腰椎。
3.2 切除脊柱用剪刀将腰椎两侧的肌肉和韧带剪开，用镊子将椎弓切除，将脊柱暴露出来。
用剪刀将脊柱切开，切除椎体和椎间盘，暴露出神经节。
3.3 取材用显微镊子将神经节取出，放置在无菌PBS缓冲液中。
用显微注射器将PBS缓冲液注入神经节，使其膨胀，便于后续的分离和处理。
将取出的神经节进行离心，去除PBS缓冲液，即可得到纯净的神经节样本。
结果本方法成功地获得了大鼠腰膨大背根神经节样本，样本完整、纯净。
与传统的取材方法相比，本方法避免了神经节的损伤和污染，取材效率高，样本质量好。
讨论本文提出的大鼠神经节取材方法具有一定的优势。
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SD大鼠脑脊液采集方法的改进朱奕昕;叶冬青;李晓莉【摘要】目的探索一种最适合初学者的快速、方便和无血污染的SD 大鼠脑脊液收集方法.方法取雄性SD大鼠45只,分成三组:第一组,经肌肉穿刺延髓池抽取法,第二组,经皮直接穿刺延髓池抽取法,第三组,直视下经硬脊膜穿刺延髓池抽取法.结果第一组共有13只大鼠成功获得80~140 μL的脑脊液,2只采集到血性脑脊液,成功率为87.6%;第二组共成功抽取脑脊液7只,成功率为46.7%;第三组共成功抽取脑脊液5只,成功率为33.3%.结论经肌肉穿刺延髓池抽取脑脊液法是一种适合初学者的方便快捷、无污染的SD大鼠脑脊液采集技术.%Objective To explore a rapid, convenient and non-polluting method of collecting cerebrospinal fluid (CSF)in Sprague Dawley(SD)rats for beginners. Methods Forty-five SD rats were divided into three groups—group 1(collecting CSF through neck muscles), group 2(collecting CSF through skin directly), and group3(collecting CSF through endorhachis). Results The successful rate of the CSF collection in the group 1 was 86.7%, group 2 was 46.7%,and group 3 is 33.3%. Conclusions The modified collection method of CSF by cisterna puncture through neck muscles in SD rats is simple,convenient,efficient and non-polluting,and is especially suitable for beginners.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2018(028)004【总页数】3页(P113-115)【关键词】大鼠;脑脊液;采集技术【作者】朱奕昕;叶冬青;李晓莉【作者单位】东南大学附属中大医院神经内科,南京 210009;东南大学神经精神疾病研究所,南京 210009;东南大学附属中大医院神经内科,南京 210009;东南大学神经精神疾病研究所,南京 210009;东南大学附属中大医院神经内科,南京 210009;东南大学神经精神疾病研究所,南京 210009【正文语种】中文【中图分类】R-33脑脊液是动物实验研究中经常用到的标本，在脑损伤机制、生物标记物、药物治疗等研究领域有着不可替代的研究价值，但是由于鼠的脑室及蛛网膜下腔狭小，其内血管又很丰富，导致了脑脊液提取过程复杂，且容易刺穿延髓致使大鼠死亡，因此脑脊液采集的低成功率成了许多研究室面临的技术难题。
本研究通过文献复习，并在以往报道的脑脊液采集方法的基础上加以改进，为无脑脊液采集经验的初学者提供了一种准确、方便快速、无血污染的大鼠脑脊液收集技术。
1 材料和方法1.1 实验动物SPF级雄性SD大鼠45只，体重300～400 g，8～12周，由上海西普尔-必凯实验动物中心提供[SCXK(沪) 2013-2016]，饲养于东南大学医学院实验动物中心[SYXK(苏) 2013-0037]。
所有动物实验严格遵循美国“国家卫生研究所实验动物护理和使用指南”和“东南大学实验动物护理和使用指南”相关条例。
1.2 主要试剂与仪器脑立体定位仪(安徽正华生物仪器设备有限公司)，微量进样器(100 μL，上海光正医疗仪器有限公司)，水合氯醛(国药集团化学试剂有限公司)，手术器械(上海医疗器械有限公司)，冷冻离心机(CT15RE，Hitachi KoKi日本日立公司)。
1.3 实验方法1.3.1 动物分组45只大鼠随机分为三组，每组15只：第一组为经肌肉穿刺延髓池抽取法，第二组为经皮直接穿刺延髓池抽取法，第三组为直视下经硬脊膜穿刺延髓池抽取法。
1.3.2 脑脊液抽取方法7%水合氯醛腹腔麻醉大鼠。
动物麻醉后，将脑立体定位耳杆紧贴双耳分别插入两外耳道，固定耳杆于主框上，并使两侧耳杆读数相同。
将大鼠的上门齿钩住门齿杆，固定上颌。
将门齿杆升高，使大鼠头部与躯体约成135°(图1)。
于大鼠头枕部剪毛、消毒，沿后正中线切一纵行切口(约1.5～2 cm)。
根据分组，将动物进行以下操作：(1)经肌肉穿刺延髓池抽取法：打开皮肤后，会看见枕骨隆凸后有一倒三角形的肌肉间隙，用微量进样器的针尖部抵住三角形凹陷的底部沿后正中线下滑，至枕骨大孔后进针，针尖斜面向上，并与身体平行，即针与头部的角度约为135°(见图1 A～D)。
注意进针速度不宜过快。
当针尖透过黄韧带时，有明显的落空感，此时针尖即进入延髓池(深度约0.2 mm)，停止进针，左手固定针头部分不动，右手缓慢抽取脑脊液，此时应注意抽取速度一定要慢，否则容易出现血性脑脊液。
抽取后迅速退针，将脑脊液移入0.5 mL的EP管中，离心后于液氮或者干冰中速冻并移入-80℃冰箱保存。
(2)经皮直接穿刺延髓池抽取法[3-5]：动物按照上述步骤麻醉固定后，大鼠头枕部剪毛、消毒，用微量进样器直接经枕骨大孔进入延髓池缓慢抽取脑脊液；(3)直视下经硬脊膜穿刺延髓池抽取法[2-4]：动物按照上述步骤麻醉固定后，大鼠头枕部消毒、钝性分离枕部肌肉，暴露枕骨大孔后，微量进样器直接穿刺延髓池抽取脑脊液。
各组大鼠于脑脊液收集后，根据下一步实验需要进行其他组织取材。
注：图A～D：经肌肉穿刺延髓池抽取法大鼠固定及脑脊液采集方式。
图1 大鼠固定方法及脑脊液采集方法Note.A-D show the method of obtaining CSF through neck muscles.Fig.1 The method of fixing rats and collecting cerebrospinal fluid1.3.3 判断标准将收集到的脑脊液于20 min内，4℃、4500 r/min、10 min离心[1]，如果脑脊液为淡红色，表明是血性脑脊液并发生溶血，如果EP管底部有红色沉淀，表明是血性脑脊液，但未发生溶血。
出现血性脑脊液或未能采集到脑脊液判为采集失败。
1.4 统计学方法采用GraphPad Prism 6.01 软件处理数据。
使用χ2检验比较各种方法脑脊液采集成功率，以P < 0.05为差异有显著性。
2 结果在45只大鼠中，第一组(经肌肉穿刺延髓池抽取法)共成功抽取脑脊液13只，离心后呈清亮透明状，未出现红色沉淀现象，一般一只大鼠可抽取80～120 μL脑脊液，体重稍大的大鼠能抽取到120～140 μL脑脊液，成功率为86.7%，有2只出现了血性脑脊液，但离心后仍能获得80 μL以上的清亮脑脊液；第二组(经皮直接穿刺延髓池抽取法)共成功抽取脑脊液7只，成功率为46.7%，有5只出现了血性脑脊液，3只抽取脑脊液失败；第三组(直视下经硬脊膜穿刺延髓池抽取法)共成功抽取脑脊液5只，且抽取量在30～60 μL之间，成功率为33.3%，另外10只未能抽取到脑脊液。
χ2检验结果显示经肌肉穿刺延髓池抽取法其成功率明显优于另外两组脑脊液采取法，P=0.0093(见图2、表1)。
注： 1：经肌肉穿刺延髓池抽取法；2：经皮直接穿刺延髓池抽取法；3：直视下经硬脊膜穿刺延髓池抽取法。
图2 三组方法大鼠脑脊液采集成功率Note.Thesuccessful rate of collecting rat CSF in the group 1 (through neck muscles) is 86.7%, Group 2 (through skin directly) is 46.7%, and group 3 (through the endorhachis) is 33.3%.Fig.2 Successful collection rate of different methods for collecting CSF in the rats3 讨论由于脑脊液成分可以间接地反应脑组织中的情况，因此脑脊液中相关成分的分析是动物实验中经常用到的技术。
但是由于脑脊液采集方法和技术的限制，常常成为动物实验研究中的难题。
如何能在采集充足脑脊液的情况下避免血性污染成为脑脊液抽取的关键。
然而，在众多以往报道的脑脊液采集方法中，脑脊液抽取失败或血性脑脊液的出现往往是困扰研究人员的关键问题。
特别是对于初学者来说，如何能快速掌握一种快速有效的脑脊液采集方法成为制约后续研究的关键。
目前国内外报道的采集脑脊液的方法主要有以下几种：经皮直接穿刺延髓池抽取法[3-5]、直视下经硬脊膜穿刺延髓池抽取法[2-4]、直视下划破硬脊膜抽取法[3-4]等。
本研究小组在既往报道的基础上，将抽取方法做了调整，建立了更适合初学者的方法。
该方法与直接经皮直接抽取脑脊液的方法相比，微量进样器抽取的位置更容易掌握，减少了操作偏差。
该方法与打开皮肤和肌肉，直视状态下抽取脑脊液的方法相比，由于我们只是将皮肤剪开，避免伤及肌肉，从而减少了肌肉出血导致脑脊液污染的可能性。
同时对于初学者来说，由于不熟练而出现第一次进针未能顺利抽出脑脊液的情况时，由于肌肉的收缩和封闭功能，可以第二次或者第三次调整针头方向或者位置，避免了在直视状态下当第一次未能成功抽出脑脊液后，退针后脑脊液外流严重而不能再次抽取无污染样本的情况。
另外当动物需要继续饲养时，只打开皮肤经肌肉穿刺延髓池抽取脑脊液方法与打开皮肤和肌肉直视状态下抽取法相比，其具有创伤范围小，动物恢复快等显著优点。
本研究的不足之处是：由于本研究所用大鼠抽取脑脊液后均被处死取材，未探讨运用各种脑脊液采集方法后大鼠远期存活率，我们将在后期研究中补充该方面的研究。
综上所述，经过探索建立的打开皮肤经肌肉穿刺延髓池抽取脑脊液的方法具有简单、快捷、高效等优点，是一种较好的采集脑脊液的方法，尤其适用于无脑脊液采集经验的初学者。
表 1 各组大鼠脑脊液采集结果Tab.1 Results of collecting CSF in different groups分组Groups成功Successful失败Failure成功率Successfulrate经肌肉穿刺延髓池抽取法CollectionofCSFthroughtheneckmuscles13286.7%**经皮直接穿刺延髓池抽取法PercutaneouscollectionofCSF7846.7%直视下经硬脊膜穿刺延髓池抽取法CollectionofCSFthroughendorhachis51033.3%注：与另外两组比较比较，**P < 0.01。